专利名称：神经生长因子产生抑制剂、以及配合有该神经生长因子产生抑制剂的皮肤外用剂、化妆品 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及神经生长因子产生抑制剂、以及配合有该神经生长因子产生抑制剂的皮肤外用剂、化妆品、医药部外品、瘙痒预防和治疗剂、以及特异性皮炎治疗剂。
背景技术：
瘙痒是仅在皮肤、粘膜、角膜等产生的特有感觉，被说明为“伴随抓挠欲望的不舒适感觉”。在近年来正在成为社会问题的特异性皮炎疾病、花粉病、食物过敏、荨麻疹等炎症性以及变态反应性的皮肤疾病中，这种称之为瘙痒的感觉是非常重要而且严重的症状之一。另外，伴随皮肤干燥的老年性皮肤瘙痒症或黄疸、伴随透析的瘙痒，在糖尿病或恶性肿瘤的并发症瘙痒也正在成为问题。
瘙痒是在皮肤的干燥或温度变化、汗、压迫、接触等物理刺激或致痒物质引起的化学刺激等各种刺激作用下，作为末梢性瘙痒或中枢性瘙痒被诱发的。作为内因性致痒物质，最重要的原因可能是目前临床上使用的仅为组胺拮抗剂，与H1受体相关。配合有对抗组胺的竞争拮抗物质例如顺丁烯二酸氯屈米通、苯海拉明及其类似物质的外用剂，正被用于治疗瘙痒。但问题是，具有这些抗组胺作用的外用剂存在副作用。
因此，提出了与着眼于安全性、配合有天然含有成分的皮肤外用剂相关的下述专利文献1之类的专利申请。该专利文献1公开有与含有竹提取成分的皮肤外用剂相关的发明，但在以往技术栏中也公开有利用冰片的肥大细胞膜稳定化能力的发明(日本特开平6-211713号)、利用放线菌培养液的炎症抑制作用的发明(日本特开平5-25053号)、利用含二十二碳六烯酸(DHA)或亚麻酸的油脂的抗变态反应性的发明(日本特开平2-29081号)等，据记载，这些天然存在的抗过敏剂的副作用少，但效果不够。
专利文献1日本特开2003-212786号公报但是，该专利文献1中的发明在组胺游离抑制试验或白三烯分泌抑制试验中也只不过显示瘙痒抑制效果。
另一方面，在近年来的研究中，被认为健康人皮肤中仅存在到表皮与真皮的边界部为止的瘙痒的传递纤维末梢(C纤维末梢)，在特异性皮炎的皮肤或干燥的皮肤中伸长到皮肤的表皮，该C纤维末梢的向表皮的伸长被指出可能就是老年性瘙痒症、特异性皮肤炎、干燥肌肤的剧烈瘙痒的产生原因之一。
关于这样的问题，例如在下述专利文献2的以往技术栏中有记载(说明书 ～ )。该专利文献2中的发明的特征在于，在抗变态反应组合物中含有野凤仙花的花瓣的提取物，但在明确如上所述的瘙痒机制的基础上，其不是解决瘙痒机制，所以发明的效果也不过是起到抗变态反应、抗过敏反应效果而已。
专利文献2日本特开2001-278796号公报综上所述，当前的现状是以抑制C纤维向皮肤表皮伸长为作用机制的瘙痒抑制剂尚未开发出来。
发明内容
本发明正是为了解决上述问题而提出的发明，其课题在于，提供具有抑制与C纤维向表皮的伸长密切相关的神经生长因子的产生的作用并同时具有高安全性的神经生长因子产生抑制剂、以及配合有该神经生长因子产生抑制剂的皮肤外用剂、化妆品、医药部外品、瘙痒预防和治疗剂以及特异性皮炎治疗剂。
本发明人等为了解决上述课题进行了潜心研究，结果发现，金虎尾种子提取物具有出色的神经生长因子产生抑制作用、特别是缓和、改善皮肤发生的炎症或瘙痒，同时对生物体为安全的，以至完成了本发明。
即，本发明为神经生长因子产生抑制剂、以及配合有该神经生长因子产生抑制剂的皮肤外用剂、化妆品、医药部外品、瘙痒预防和治疗剂以及特异性皮炎治疗剂，关于神经生长因子产生抑制剂的本发明的第一技术方案，其特征在于，神经生长因子产生抑制剂中含有金虎尾种子提取物。
在本发明中，“神经生长因子产生抑制剂中含有金虎尾种子提取物”是指除了含有仅由金虎尾种子提取物构成的物质之外，还含有金虎尾种子提取物以外的成分的情况。
另外，本发明的第二技术方案是配合有本发明的第一技术方案所述的神经生长因子产生抑制剂的皮肤外用剂，本发明的第三技术方案是配合有本发明的第一技术方案所述的神经生长因子产生抑制剂的化妆品，本发明的第四技术方案是配合有本发明的第一技术方案所述的神经生长因子产生抑制剂的医药部外品。
进而，本发明的第五技术方案是配合有本发明的第一技术方案所述的神经生长因子产生抑制剂的瘙痒预防和治疗剂，本发明的第六技术方案是配合有本发明的第一技术方案所述的神经生长因子产生抑制剂的特异性皮炎治疗剂。
如上所述，C纤维末梢被认为在健康人皮肤中仅存在到表皮与真皮的边界部为止，但在特异性皮炎等的皮肤或干燥的皮肤中已伸长到皮肤的表皮，该C纤维末梢向表皮的伸长被指出可能就是瘙痒的产生原因之一。接着，C纤维这样向表皮伸长被推测是由于神经生长因子NGF作用于C纤维末梢，因而通过使用本发明的神经生长因子产生抑制剂，可以抑制NGF的产生，这样，可以阻止C纤维末梢伸长到表皮。
如上所述，利用本发明，可以提供通过抑制与C纤维向表皮的伸长密切相关的神经生长因子NGF的产生而能够直接去除瘙痒的主要原因、并同时具有高安全性的神经生长因子产生抑制剂，以及配合有该神经生长因子产生抑制剂的皮肤外用剂、化妆品等。
图1是表示使用正常人皮肤成纤维细胞(NHDF)的神经生长因子产生抑制试验中，金虎尾种子提取物的浓度与NGF的游离量之间的相关关系的曲线图。
图2是表示对小鼠接触性皮炎的抑制效果的曲线图。
图3是表示使用了NC/Nga小鼠的瘙痒抑制效果的曲线图。
具体实施例方式
本发明中使用的提取物是指通过干燥金虎尾(Acerola、学名Malpighia emarginata DC)的种子，或不干燥而粉碎，然后在低温或室温～加热下，利用溶剂提取或使用索克斯累特回流提取器等提取器具提取得到的各种溶剂提取液、其稀释液、其浓缩液或其干燥粉末。
作为上述提取溶剂，例如可以使用水、甲醇、乙醇等低级1元醇、甘油、丙二醇、1，3-丁二醇等液态多元醇、含水醇类等1种或组合2种以上使用。作为优选的提取方法的例子，可以举出使用含水浓度20～80容量％的乙醇或1，3-丁二醇，在室温下进行1～5天的提取，然后过滤的方法。
对本发明的皮肤外用剂、化妆品等中金虎尾种子提取物的各神经生长因子产生抑制剂的配合量没有特别限定，干燥固体物质重量(含多种提取物时为其总计量)，以总量为基准，优选为0.0001～20.0重量％。这是因为，如果配合量不到0.0001重量％，则不能充分得到本发明的效果，另一方面，即使超过20.0重量％，也未见其增量带来的效果提高。从这个角度出发，更优选为0.0005～5.0重量％。
本发明的神经生长因子产生抑制剂可以作为皮肤外用剂，制成例如洗剂类、乳液类、霜剂类、软膏类、美容涂敷剂类、粉底类等剂型。在本发明的神经生长因子产生抑制剂中，对应形态可以适当配合色素、防腐剂、界面活性剂、香料、颜料等。
实施例以下对本发明的实施例进行说明。
(实施例1)本实施例是含有金虎尾种子提取物的神经生长因子产生抑制剂的实施例。向已粉碎的金虎尾种子80kg中加入140kg的1，3-丁二醇含量为30重量％的1，3-丁二醇水溶液，室温下搅拌一晚。全部离心分离处理之后，用0.22μm的过滤器过滤其上清，得到金虎尾种子提取物。干燥固体成分量为0.71重量％。
(试验例1)本试验例是使用正常人皮肤成纤维细胞(NHDF)的神经生长因子产生抑制试验。即，使用由上述实施例1的金虎尾种子提取物构成的神经生长因子产生抑制剂，进行NHDF神经生长因子产生抑制试验。
正常人皮肤成纤维细胞(NHDF)在含10％胎牛血清(56℃，处理30分钟)的Dulbecco’s MEM培养基(Sigma制)中37℃、5％CO2下培养。将NHDF混悬于含10％胎牛血清(56℃，处理30分钟)的Dulbecco’sMEM培养基中，使其成为105cells/ml，将该悬浮液分批注入到24孔微孔板(IWAKI制)中，且每孔1ml。
在培养24小时之后，吸引上清并除去，分批注入预先配制的含0.2容量％、0.1容量％、0.05容量％或0.025容量％的金虎尾种子提取物的含10％胎牛血清(56℃，处理30分钟，ICN制)的Dulbecco’s MEM培养基(Sigma制)450μl。培养30分钟之后，加入含100ng/ml的人白介素1α/10％胎牛血清(56℃，处理30分钟)的Dulbecco’s MEM培养基(Sigma制)溶液50μl，进一步培养24小时。回收培养上清，用NGF EmaxImmunoassay kit(Promega制)测定培养上清中的神经生长因子浓度。测定的N＝4，用平均值和标准差表示。其结果见图1。
从图1可知，未添加金虎尾种子提取物的成纤维细胞的培养上清中神经生长因子的游离量(神经生长因子浓度)为14.69pg/ml，与此相对，就添加了金虎尾种子提取物时的培养上清中的神经生长因子浓度而言，在添加0.025容量％时为8.58pg/ml，在添加0.05容量％时为5.87pg/ml，在添加0.1容量％时为1.09pg/ml，在添加0.2容量％时为1.86pg/ml。
(试验例2)本试验例是对小鼠接触性皮炎的抑制效果的试验。从SLC株式会社购入7周龄的BALB/c系雄性小鼠，在室温23±3℃、湿度55±15％、明暗周期12小时(明期7:00～19:00)的条件下饲养。设定致敏30分钟后给予金虎尾种子提取物(N＝5)组。在当日剃毛的小鼠的腹部皮肤涂布5％苦基氯—乙醇溶液0.15ml，实施致敏处置。在第5天后，向左侧耳廓皮肤的双面涂布20μl的1％苦基氯—丙酮∶橄榄油(4∶1)溶液，激发过敏反应。
激发过敏反应30分钟之后，向小鼠耳廓部给予用50容量％乙醇溶液配制的5容量％金虎尾种子提取物溶液50μl。作为对照组，同样给予50μl的用50容量％乙醇溶液配制的1.5容量％1，3-丁二醇溶液。在过敏反应激发前和其24小时后，用micrometer(MITUTOYO)测定左侧耳廓的厚度，根据耳廓浮肿率求得耳廓浮肿抑制率。各组间的显著性检验用t-检验进行。试验结果见图2。
从图2可知，相对于对象组的耳廓浮肿率为67.8±20.9％，金虎尾种子提取物给药组的耳廓浮肿率为39.0±15.4％(p＝0.035)。通过给予金虎尾种子提取物，显著抑制耳廓浮肿。上述试验用作特异性皮炎和花粉症的筛查。
(试验例3)本试验例是使用了NC/Nga小鼠的瘙痒抑制试验。NC/Nga小鼠是常规使用级别的动物，是特异性皮炎自然发病的特异性皮炎模型小鼠，伴随特异炎症诱发瘙痒。从日本チヤ一ルズ·リバ一株式会社购入10只4周龄的NC/Nga系雄性小鼠，在室温23±3℃、湿度55±15％、明暗周期12小时(明期7:00～19:00)的条件下饲养。每笼养5只小鼠，预备饲养后，将特异性皮炎发病的动物每组5只用于以下试验。设定为连续5天给予金虎尾种子提取物组(N＝5)。
用理发推子和电剃须刀对小鼠背部剃毛，将用50容量％乙醇溶液配制的5容量％金虎尾提取物溶液150μl涂布给药，每天2次、1周连续5次。作为对照组，同样给予150μl的用50容量％乙醇溶液配制的1.5容量％1，3-丁二醇溶液。试验结束时，测定每只小鼠的20分钟抓挠次数。测定值用平均值和标准差表示。各组间的显著性检验用t-检验进行，5％以下的显著水平为有意义。
试验结果见图3。在试验结束时的20分钟抓挠次数的测定中，对照组为309±92次，金虎尾种子提取物给药组为158±79次，可见抓挠次数显著降低。
(配方例1)本配方例是作为化妆品的一个例子的霜剂配方例，其组分如下所述。
组分配合比(重量％)鲸蜡醇 2.5％鲨烯10.0％白蜡1.0％三辛酸甘油酯5.0％肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 15.0％生育酚乙酸酯0.1％1，3-丁二醇 7.0％甘油一硬脂酸酯 3.0％POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0％山梨糖醇酐一硬脂酸酯2.0％金虎尾种子提取物0.1％浓甘油 5.0％对羟基苯甲酸丁酯0.1％对羟基苯甲酸乙酯0.2％净化水 余量在上述配合成分中，加热溶解鲸蜡醇、鲨烯、白蜡、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯之后，加入三辛酸甘油酯、生育酚乙酸酯、甘油一硬脂酸酯、POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯(界面活性剂)、山梨糖醇酐一硬脂酸酯，调整为70℃，使其均一地分散·溶解，得到油性凝胶。接着，在规定浓度净化水中溶解金虎尾种子提取物、1，3-丁二醇、浓甘油、对羟基苯甲酸丁酯(防腐剂)、对羟基苯甲酸乙酯(防腐剂)，调整为70℃之后，向油性凝胶中边充分搅拌边缓慢添加。用匀浆器均一混合之后，脱气、过滤之后，冷却到30℃，得到霜剂。
(配方例2)本配方例也是霜剂的配方例，除了作为神经生长因子产生抑制剂的金虎尾种子提取物的配合量多于上述配方例1以外，与配方例1的组成相同。其组成如下所述。霜剂的配制与上述配方例1同样地进行。
组分 配合比(重量％)鲸蜡醇2.5％
鲨烯10.0％白蜡1.0％三辛酸甘油酯5.0％肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 15.0％生育酚乙酸酯0.1％1，3-丁二醇 7.0％甘油一硬脂酸酯 3.0％POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0％山梨糖醇酐一硬脂酸酯2.0％金虎尾种子提取物0.5％浓甘油 5.0％对羟基苯甲酸丁酯0.1％对羟基苯甲酸乙酯0.2％净化水 余量(配方例3)本配方例也是霜剂的配方例，除了作为神经生长因子产生抑制剂的金虎尾种子提取物的配合量多于上述配方例1、2以外，与配方例1、2组成相同。其组成如下所述。霜剂的配制与上述配方例1同样地进行。
组分配合比(重量％)鲸蜡醇 2.5％鲨烯10.0％白蜡1.0％三辛酸甘油酯5.0％肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 15.0％生育酚乙酸酯0.1％1，3-丁二醇 7.0％甘油一硬脂酸酯 3.0％POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0％山梨糖醇酐一硬脂酸酯2.0％金虎尾种子提取物1.0％
浓甘油 5.0％对羟基苯甲酸丁酯0.1％对羟基苯甲酸乙酯0.2％净化水 余量(试验例4)在本试验例4中，对上述配方例1～3的霜剂进行瘙痒抑制试验。试验方法如下所述。以主诉伴随干燥而有皮肤瘙痒的女性受试者(25岁～45岁)25人为对象，分别1天2次、连续3个月涂布配方例1～3的霜剂。评价用回答为不感觉皮肤瘙痒的人数。另一方面，霜剂基质的组成与上述配方例1～3相同，将没有配合金虎尾种子提取物的下面组成的霜剂作为比较例1，进行相同的试验。
(比较例1)组分配合比(重量％)鲸蜡醇 2.5％鲨烯10.0％白蜡1.0％三辛酸甘油酯5.0％肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 15.0％生育酚乙酸酯0.1％1，3-丁二醇 7.0％甘油一硬脂酸酯 3.0％POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0％山梨糖醇酐一硬脂酸酯2.0％浓甘油 5.0％对羟基苯甲酸丁酯0.1％对羟基苯甲酸乙酯0.2％净化水 余量试验结果见表1。
从表1可知，配方例1中，回答为不感觉皮肤瘙痒的人数与比较例1相同，但配方例2中，该人数约为比较例1的1.5倍，进而，配方例3约为2倍以上。
(试验例5)本试验例为由紫外线引起的炎症抑制试验。使用上述配方例1～3的霜剂，进行对炎症的改善效果的试验。另一方面，作为阳性对照，将配合作为抗炎症剂药物一的吲哚美辛的药品消炎痛霜剂(インテバンクリ一ム)(住友制药制)作为比较例2使用。
从SLC株式会社购入4周龄的Hartley系豚鼠，在室温23±3℃、湿度55±15％、明暗周期12小时(明期7:00～19:00)的条件下饲养。用理发推子和电剃须刀对豚鼠背部剃毛，对剃毛部位(2cm×2cm)使用上述配方例1～3和比较例1、2的样品，连续使用3天，照射紫外线。使用色差计测定紫外线照射部位的皮肤颜色。皮肤红斑用以比较例1的情况为100进行比较算出的a*值表示。
试验结果见表2。
从表2可知，配方例1中a*值与比较例1相比稍微减少，配方例2中a*值与比较例1相比减少约20％左右，进而配方例3减少到约一半。其中，不及比较例2的减少率。但是，比较例2的吲哚美辛的副作用已被公知，在安全性方面，配方例1～3比比较例2更出色。
产业上的可利用性本发明的神经生长因子产生抑制剂，可以广泛应用于全部皮肤外用剂、化妆品、医药部外品等，另外，从用途的方面来看，可以广泛应用于特异性皮炎治疗剂、瘙痒预防和治疗剂、具有改善由变态反应引起的皮肤粗糙的作用的组合物等。
权利要求
1.一种神经生长因子产生抑制剂，其特征在于，含有金虎尾种子提取物。
2.一种皮肤外用剂，其特征在于，配合有权利要求1所述的神经生长因子产生抑制剂。
3.一种化妆品，其特征在于，配合有权利要求1所述的神经生长因子产生抑制剂。
4.一种医药部外品，其特征在于，配合有权利要求1所述的神经生长因子产生抑制剂。
5.一种瘙痒预防和治疗剂，其特征在于，配合有权利要求1所述的神经生长因子产生抑制剂。
6.一种特异性皮炎治疗剂，其特征在于，配合有权利要求1所述的神经生长因子产生抑制剂。
全文摘要
本发明提供具有抑制与C纤维向表皮的伸长密切相关的神经生长因子的产生的作用并同时具有高安全性的神经生长因子产生抑制剂、以及配合有该神经生长因子产生抑制剂的皮肤外用剂、化妆品、医药部外品、瘙痒预防和治疗剂以及特异性皮炎治疗剂，它们的特征在于，神经生长因子产生抑制剂中含有金虎尾种子提取物。
文档编号A61P43/00GK101035551SQ20058003394
公开日2007年9月12日 申请日期2005年10月14日 优先权日2004年10月19日
发明者殿垣内浩, 仲尾次浩一, 酒井薰, 滨田和彦, 永峰贤一 申请人:碧雅诗株式会社, 株式会社日冷生物科学