作为钙通道阻滞剂的4－苯基磺酰胺哌啶化合物的制作方法

专利名称：作为钙通道阻滞剂的4－苯基磺酰胺哌啶化合物的制作方法
发明
背景技术：
领域本发明属于药物化学领域。本发明涉及新的哌啶基化合物和以下发现这些化合物具有钙(Ca2+)通道阻滞剂的作用。特别地，本发明涉及用于鉴定这些化合物的高通量筛选分析法。
背景技术：
钙离子在许多细胞过程的调节中发挥基础作用。因此必须严格将它们的细胞内水平维持在严格的然而动态的控制之下(Davila，H.M.，Annalsof the New York Academy of Sciences，pp.102-117(1999))。电压门控性钙通道(VGCC)可以作为钙快速内流到细胞中的一种重要机制。钙通道是由成孔亚基(α1)以及一组辅助性或调节性亚基构成的异寡聚体蛋白质，所述成孔亚基本身能够在异源表达系统中形成功能性通道。已经根据它们的药理学和/或电生理学性质将钙通道分类。电压门控性钙通道被分类为三组(i)高电压-激活(HVA)的通道，其包括L-、N-、P-、和Q-型；(ii)中间(IVA)R-型通道；和(iii)低电压-激活(LVA)的T-型通道(Davila，同上)。电压门控性钙通道(VGCC)也称作电压依赖性钙通道(VDCC)或电压-敏感性钙通道(VSCC)。
电压-敏感性钙通道(VSCC)调节细胞内的钙浓度，钙浓度影响多种重要的神经元功能，如细胞兴奋性、神经递质释放、激素分泌、细胞内代谢、神经分泌活性和基因表达(Hu等人，Bioorganic & MedicinalChemistry 81203-1212(2000))。N-型通道主要发现于中枢和外周神经元中，其主要位于突触前神经末梢。这些通道调节由去极化诱发的递质从突触末端释放所需的钙流动。痛觉信号从外周向中枢神经系统(CNS)的传递是由位于脊髓中的N-型钙通道介导的(Song等人，J.Med.Chem.433474-3477(2000))。
这六种类型的钙通道(即，L、N、P、Q、R、和T)是在整个神经系统中表达的(Wallace，M.S.，The Clinical Journal of Pain 16580-585(2000))。N-型电压-敏感性钙通道存在于背角的表面层中，被认为通过中枢机制调节疼痛加工过程。阻断背角表面中的N-型钙通道可以调节膜的兴奋性并抑制神经递质的释放，导致疼痛减轻。基于动物模型，Wallace(同上)建议，N-型钙通道拮抗剂比钠通道拮抗剂具有更大的止痛效力。
N-型钙通道阻滞剂可用于神经保护和止痛。已经发现选择性N-型钙通道阻滞剂齐考诺肽在动物模型中具有止痛活性，在局部和全面缺血模型中具有神经保护活性(Song等人，同上)。已知的钙通道阻滞剂的实例包括氟桂利嗪、氟司必林、cilnipide、PD157767、SB-201823、SB-206284、NNC09-0026、和PD151307(Hu等人，同上)。
在多种试验和临床条件下，N-型通道的阻滞可以预防和/或减弱主观性疼痛以及原发和/或继发性痛觉过敏和异常性疼痛(Vanegas，H.等人，Pain 859-18(2000))。N-型电压门控性钙通道(VGCC)在突触介质如谷氨酸、乙酰胆碱、多巴胺、去甲肾上腺素、γ-氨基丁酸(GABA)和降钙素基因相关肽(CGRP)的释放中发挥主要作用。
对电压门控性L-型钙通道的抑制已经显示了对神经保护是有益的(Song等人，同上)。对心脏L-型钙通道的抑制可以导致低血压。据信，动脉压的快速和极大降低倾向于抵消L-型钙通道阻滞剂的神经保护作用。存在对N-型钙通道而不是L-型钙通道具有选择性的拮抗剂的需要，以避免潜在的低血压效应。
生理相关底物通过离子通道的移动可以通过多种物理、光学或化学技术来跟踪(Stein，W.D.，Transport and Diffusion Across Cell Membranes，1986，Academic Press，Orlando，Fla.)。离子通道调节剂的分析法包括电生理分析、使用微电极的细胞对细胞分析(Wu，C.-F.，Suzuki，N.，and Poo，M.M.J.Neurosci 3(9)1888-99(1983))，即，细胞内和膜片钳技术(Neher，E.和Sakmann，B.，Sci. Amer.26644-51(1992))，和放射性示踪离子技术。当放置电极时，膜片钳和全细胞电压钳、电流钳、和双电极电压钳技术需要高度的空间精确度。可以用膜片钳技术测量全细胞电流来进行功能分析。但是，每天的分析次数的处理量非常有限。
放射性示踪离子已经用于细胞制备物中通道控制的离子转位的生物化学和药理学研究中(Hosford，D.A.等人，Brain Res.516192-200(1990))。在该方法中，将细胞暴露于放射性示踪离子和活化配体中一段时间，然后洗涤该细胞，计数放射性含量。放射些同位素是众所周知的(Evans，E.A.，Muramtsu，M.Radiotracer Techniques and Applications，M.Dekker，NewYork(1977))，它们的应用允许高灵敏度地检测靶物质。但是，放射性同位素需要很多安全措施。因此，近些年来越来越多地使用替代性和更安全的非放射性标记剂。
使用荧光检测的光学方法适合替代膜片钳和放射性示踪技术。光学方法可以测量单细胞和多组细胞中离子流的整个过程。通过荧光技术检测运输的优点包括这些方法的高水平灵敏度、时间分辨率、对生物材料的要求适当、不具有放射性、和能够连续检测离子运输以获得动力学信息(Eidelman，O.等人，Biophys.Acta 988319-334(1989))。通过荧光检测运输的一般原理是基于与化合物移位有关的荧光性质具有区隔依赖性变化。
光学检测神经细胞中的电活动是使用电压-敏感性膜染料和光检测器阵列来完成的(Grinvald，A.，Annu.Rev.Neurosci. 8263-305(1985)；Loew，L.M.，and Simpson，L.L.，Biophys.J.34353-65(1981)；Grinvald，A.等人，Biophys.J.39301-08(1983)；和Grinvald，A.等人，Biophys.J.42195-98(1983))。已经开发了用于测量钙离子流动的光学方法(Scarpa，A.，Methods of Enzymology 56301(1979)，Academic Press，Orlando，Florida；Tsien，R.Y.，Biochemistry 192396(1980)；Grynkiewicz，G.等人，J.Biol Chem.2603440(1985))。钙离子的流动典型地使用钙-敏感性荧光染料如Fluo-3、Fluo-4、CalciumGreen等来检测。(Molecular ProbesInc.，Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals，7thed.，chapt 1，Eugene，Oregon)。
需要新的分析法，其能鉴定调节或阻滞钙离子通过电压门控性钙通道包括N-型钙通道运动的化合物。

发明内容
本发明涉及由以下式I表示的哌啶基化合物作为钙(Ca2+)通道阻滞剂的用途。特别地，已经发现，式I的化合物是选择性N-型钙通道阻滞剂。
本发明也涉及通过施用有效量的如本文所述的式I化合物，治疗、预防或改善在钙通道活性过度的哺乳动物中对阻滞所述通道有反应的疾病。特别地，本发明涉及通过施用有效量的如本文所述的式I化合物，治疗、预防或改善在N-型钙通道活性过度的哺乳动物中对阻滞所述通道有反应的疾病。
可用于本发明的众多化合物迄今为止都没有报道过。因此，本发明的一个方面涉及新的式I的哌啶基化合物。
本发明的另一个方面涉及新的式I的化合物作为N-型钙通道阻滞剂的用途。
本发明的一个方面涉及下文的新的式X的化合物，及其药物组合物，以及它们作为钙通道特别是N-型钙通道阻滞剂的用途。
本发明的进一步的方面是提供一种通过给需要治疗、预防或改善的哺乳动物施用有效量的式I化合物，来治疗、预防或改善中风、头部创伤、癫痫、疼痛(例如，急性疼痛，或慢性疼痛，其包括但不限于神经性疼痛和炎性痛)、偏头痛、心境障碍、精神分裂症、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、或帕金森病)、抑郁、焦虑、精神病、高血压、或心律失常的方法。
本发明的一个进一步的方面是提供一种用于治疗、预防或改善对阻滞钙离子通道特别是N-型钙离子通道有反应的疾病的药物组合物，所述药物组合物包含有效量的式I化合物，其与一种或多种药学可接受的载体相混合。
本发明的一个进一步的方面是提供3H或14C放射性标记的式I或X的化合物，和它们作为钙通道上其结合位点的放射性配体的用途。
本发明也涉及筛选化合物来鉴定钙(Ca2+)通道的调节剂或阻滞剂的高通量分析法。本发明的分析法优选用于筛选钙通道的阻滞剂。在一个实施方案中，本发明的分析法用于筛选阻滞N-型钙通道的化合物。本发明的分析法特别适用于鉴定结合处于失活状态的N-型钙通道的化合物。
本发明也涉及通过本文所述分析法鉴定的作为N-型钙通道的阻滞剂的新化合物的用途。
本发明进一步涉及通过施用有效量的用本文所述分析法鉴定的化合物，来治疗、预防或改善在钙通道活性过度的哺乳动物中对阻滞所述通道有反应的疾病。
本发明的另一个方面涉及通过本文所述分析法鉴定的作为N-型钙通道的化合物，及其药物组合物，以及所述药物组合物作为钙通道特别是N-型钙通道阻滞剂的用途。
本发明的一个进一步的方面是提供一种通过给需要治疗、预防或改善的哺乳动物施用有效量的用本文所述分析法鉴定为N-型钙通道阻滞剂的化合物，来治疗、预防或改善中风、头部创伤、癫痫、疼痛(如，急性疼痛，或慢性疼痛，其包括但不限于神经性疼痛和炎性痛)、偏头痛、心境障碍、精神分裂症、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、或帕金森病)、抑郁、焦虑、精神病、高血压、或心律失常的方法。
本发明的一个进一步的方面是提供一种用于治疗、预防或改善对阻滞N-型钙离子通道有反应的疾病的药物组合物，所述药物组合物包含有效量的用本文所述分析法鉴定为N-型钙通道阻滞剂的化合物，其与一种或多种药学可接受的载体相混合。
本发明的另一些实施方案和优点将会在以下描述中列出，并且可以从以下描述中导出，或者可以通过实施本发明而掌握。通过在附属权利要求书中所特别指出的要素以及组合，将可以实现和达到本发明的所述实施方案和优点。
应当理解，上文的简述和下文的详述都仅仅是示例性和解释性的，并不是如权利要求一样限制本发明。
发明详述本发明的一个方面是基于以下发现式I的哌啶基化合物可以作为Ca2+通道的阻滞剂起作用。基于该发现，式I的化合物被认为可用于治疗对阻滞钙离子通道有反应的疾病。在一个方面，已经发现式I的化合物选择性地阻滞N-型钙离子通道，因此，可用于治疗对阻滞N-型钙离子通道有反应的疾病。
用于本发明该方面的化合物是由式I表示的哌啶基化合物 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中
R1和R2分别独立地选自氢、烷基、卤代烷基、卤素、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、硝基、氨基、和羟基；R3选自烷基、烯基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、羟基烷基、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基烷基、3-四氢呋喃基烷基、烷基磺酰基氨基烷基、和氨基羰基烷基；Z选自Z1、Z2、Z3、和Z4，其中Z1是 Z2是 Z3是——CR8R9——(CH2)O——D——R14；和Z4是——SO2——R15；R4和R5分别独立地选自氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、烷基巯基、氨基烷基和苯基；或R4和R5与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，其中杂环的一个或多个碳原子任选地用NR16、O、或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基；R6是氢和R7选自氢；烷基；羟基烷基；烷氧基烷基；卤代烷基；氨基烷基；环烷基；任选用一个或两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苯基；任选用一个或多个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苄基；和苄氧基烷基；或R6和R7与它们所连接的碳原子一起形成C3-7环烷基；或R7是氢；R4是氢或C1-3烷基；并且R5和R6一起形成桥-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CHG1-CHG2-CH2-，其中G1和G2都是氢或与它们所连接的碳原子一起形成稠合的苯基；R8和R9都是氢或一起形成＝O；
R10、R11、R12和R13分别独立地选自氢、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基；R14选自任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的萘基；喹啉基；吡啶基；用苯基、苄基、苯氧基、或苄氧基取代的苯基，其中每个苯环任选用一个或两个独立地选自卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基和氰基的取代基取代；和烷基，优选正丙基。
R15是苯基或萘基，任一个任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基的取代基取代；A是O、CH2、或不存在(共价键)，和B是CH，条件是当A是O时，那么R8和R9都是氢；或A-B是CH＝C；D是C＝O、-CH＝CH-、或不存在(共价键)；m是0或1；
n是0、1、2、3、4、或5；和o是0、1、2、或3；条件是当Z是Z2，R3是烷基，R8和R9都是氢，A是CH2，B是CH并且n是1时，那么R10、R11、R12、或R13中至少一个不是氢。
在Z是Z1的式I化合物中，与-NR4R5基相连的碳可以是手性中心。因此，在该碳原子上构型可以是(R)或(S)，优选是(S)。
由于式I的化合物是钙(Ca2+)通道的阻滞剂，因此，通过使用这些化合物可以治疗很多由钙离子内流介导的疾病和病症。因此，本发明提供一种治疗、预防或改善中风、头部创伤、癫痫、疼痛(例如，慢性疼痛，神经性疼痛，炎性痛，或急性疼痛)、偏头痛、心境障碍、精神分裂症、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、或帕金森病)、抑郁、焦虑、精神病、高血压、或心律失常的方法。在每种情况中，这种治疗、预防或改善的方法需要给需要这种治疗、预防或改善的哺乳动物施用有效量的本发明的钙通道阻滞剂或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
在一个实施方案中，用于本发明的化合物是由式II代表的哌啶基化合物
或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1、R2、和Z如上述定义。
在本发明的一个方面，用于本发明的化合物是由式III代表的哌啶基化合物 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中Z如上述定义。
优选地，在式I和II的化合物中，R1和R2分别独立地选自氢、卤素、烷基、卤代烷基、氰基、烷氧基、卤代烷氧基、和硝基。更优选地，R1和R2分别独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、卤代(C1-6)烷基、氰基、C1-6烷氧基、卤代(C1-6)烷氧基、和硝基；并更优选地独立地选自氢、卤素、C1-3烷基、卤代(C1-3)烷基、氰基、C1-3烷氧基、卤代(C1-3)烷氧基、和硝基。有利地，R1和R2独立地是氢、甲基、乙基、氟、氯、三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、氰基、硝基、甲氧基或二氟甲氧基。更优选地，R1是氢并且R2是三氟甲基、或R1和R2都是氢。优选地，R2位于苯环的间位。
优选地，R3选自烷基、环烷基、环烷基烷基、3-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基烷基、烷氧基烷基、羟基烷基、烷基磺酰基氨基烷基和氨基羰基烷基；更优选地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、3-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基(C1-3)烷基、C3-6环烷基(C1-3)烷基、C1-3烷氧基(C1-6)烷基、羟基(C1-6)烷基、C1-3烷基磺酰基氨基(C1-3)烷基、和氨基羰基(C1-3)烷基。有利地，R3选自甲基、乙基、异戊基、异丁基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环丙基甲基、环丙基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、羟甲基、羟乙基、3-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基甲基、2-四氢呋喃基乙基、甲基磺酰胺基甲基、甲基磺酰胺基乙基、氨基羰基甲基、和氨基羰基乙基。更有利地，R3是环丙基、甲基、异丙基、或异丁基，特别是环丙基。
在式I-III的化合物中，R4和R5优选分别独立地选自氢、烷基、羟基烷基、和苯基；更优选独立地选自氢、C1-6烷基、羟基(C1-6)烷基、和苯基；更优选独立地选自氢、C1-3烷基、羟基(C1-3)烷基、和苯基；并且更优选独立地选自氢、甲基、乙基、羟甲基、羟乙基、和苯基；或者R4和R5与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，所述杂环选自噁唑烷基、异噁唑烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、六氢嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、和四氢吡啶基。有利地，R4和R5独立地选自氢、甲基或羟乙基，或R4和R5与它们所连的氮原子一起形成1-吡咯烷基、4-硫代吗啉基、哌嗪基、或4-甲基哌嗪基。
当R6是氢时，R7优选选自烷基；羟基烷基；环烷基；任选用一个或两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苄基；和苄氧基烷基。更优选地，R7选自直链C1-6烷基；支链C3-6烷基；羟基(C1-6)烷基；C3-6环烷基；任选用一个或两个独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、卤素、氰基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3)烷基氨基、羟基、硝基、卤代(C1-6)烷基、和C1-6烷氧基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、卤素、氰基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3)烷基氨基、羟基、硝基、卤代(C1-6)烷基、和C1-6烷氧基的取代基取代的苄基；和苄氧基(C1-3)烷基。有利地，R7是甲基；丙基；异丙基；丁基；叔丁基；仲丁基；异丁基；羟甲基；1-羟乙基；任选用一个或两个独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、卤素、氰基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、羟基、硝基、和三氟甲基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、卤素、氰基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、羟基、硝基、和三氟甲基的取代基取代的苄基；1-苄氧基乙基；环戊基；环己基；环戊基甲基；或环己基甲基。
在一个优选的方面，当R6是氢并且R7是烷基时，R4和R5一起形成如上所述的5-或6-元杂环，或R4和R5独立地是氢、烷基、或羟基烷基。
有用的化合物包括那些，其中R6和R7与它们所连的碳原子一起形成C3-6环烷基，优选环戊基或环己基。
有用的化合物包括那些，其中R7是氢，R4是氢、甲基或乙基，并且R5和R6一起形成桥-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CHG1-CHG2-CH2-，其中G1和G2都是氢或与它们所连的碳原子一起形成稠合的苯基。有利地，R5和R6一起形成-CH2-CH2-CH2-。
有用的化合物包括那些，其中当Z是Z2，A是CH2或不存在并且B是CH时，R8和R9都是氢。其他有用的化合物包括那些，其中当Z是Z2，A是CH2或不存在并且B是CH，或A-B是CH＝C时，R8和R9形成＝O。另外有用的化合物包括那些，其中Z是Z2，R8和R9都是氢并且A是O。
优选地，R10、R11、R12、和R13分别独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、卤代(C1-6)烷基、羟基、羟基(C1-6)烷基、氰基、氨基、氨基(C1-6)烷基、C1-3烷基氨基、和二(C1-3)烷基氨基。更优选地，R10、R11、R12、和R13分别独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、C1-3烷氧基、卤素、卤代(C1-3)烷基、氰基、氨基、氨基(C1-3)烷基、C1-3烷基氨基、和二(C1-3)烷基氨基。有利地，R10、R11、R12、和R13分别独立地选自氢、卤素、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、氰基、氨基、甲基氨基、和二甲基氨基，特别是卤素。优选地，R10和R12都是氢。优选地，R11和R13之一或两者都在它们各自苯环的对位。
优选地，R14选自任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的苯基；用苯基、苄基、苯氧基或苄氧基取代的苯基，其中每个苯环任选用一个或两个独立地选自卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、和氰基的取代基取代；萘基；喹啉基；和吡啶基。
有用的化合物包括那些，其中R14是任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的苯基；优选独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、氰基、烷基氨基、和二烷基氨基；更优选独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、卤代(C1-3)烷基、羟基、氰基、C1-3烷基氨基、和二(C1-3)烷基氨基。有利地，R14是任选用一个或两个独立地选自甲基、乙基、异丙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、氟、三氟甲基、甲基氨基、和二甲基氨基的取代基取代的苯基。
有用的化合物包括那些，其中R14是用苯基、苄基、苯氧基或苄氧基取代的苯基，优选在对位取代，其中任意取代基是非取代的或用卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代，优选被卤素取代。
有用的化合物也包括那些，其中R14是萘基、喹啉基或吡啶基，其中任意一个都是非取代的。
有用的化合物也包括那些，其中R8和R9一起形成＝O，o是0，D是-CH＝CH-并且R14是正丙基。
优选地，当R14是萘基；喹啉基；吡啶基；被任选被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代的苯基取代的苯基；被任选被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代的苄基取代的苯基；被任选被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代的苯氧基取代的苯基；或被任选被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代的苄氧基取代的苯基之一时，R8和R9都是氢。
优选地，R15是用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基的取代基取代的苯基。有用的化合物包括那些，其中R15是被C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、卤代(C1-3)烷基、氨基、C1-3烷基氨基或二(C1-3)烷基氨基取代的苯基；更优选被丙基、丁基、戊基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、氟、氯、三氟甲基、氨基、甲基氨基或二甲基氨基取代。有用的化合物也包括那些，其中R15是被氨基、烷基氨基或二烷基氨基取代的萘基；优选被氨基、C1-3烷基氨基或二(C1-3)烷基氨基取代；更优选被氨基、甲基氨基或二甲基氨基取代。
有用的化合物包括那些，其中R8和R9都是氢或一起形成＝O和D是不存在或-CH＝CH-。有用的化合物包括那些，其中R8和R9形成＝O并且D是C＝O。
优选地，n是0、1或2。
优选地，o是0、1或2。
本发明也涉及由式IV表示的哌啶基化合物 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1和R2分别独立地选自氢、烷基、卤代烷基、卤素、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、硝基、氨基、和羟基；R3选自烷基、烯基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、羟基烷基、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基烷基、3-四氢呋喃基烷基、烷基磺酰基氨基烷基、和氨基羰基烷基；R4和R5分别独立地选自氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、烷基巯基、氨基烷基和苯基；或R4和R5与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，其中杂环的一个或多个碳原子任选地用NR16、O、或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基；R6是氢并且R7独立地选自氢；烷基；羟基烷基；烷氧基烷基；卤代烷基；氨基烷基；环烷基；任选被一个两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苯基；任选被一个两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苄基；和苄氧基烷基；或
R6和R7与它们所连的碳原子一起形成C3-7环烷基；或R7是氢，R4是氢或C1-3烷基，并且R5和R6一起形成桥-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CHG1-CHG2-CH2-，其中G1和G2都是氢或与它们所连的碳原子一起形成稠合的苯基；并且m是0或1。
式I中R1-R7和m的优选值如上所述。在一个方面，落在在式IV范围内的优选的化合物包括由式V表示的那些 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1-R3如对式IV所述；R41和R51分别独立地选自氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、和氨基烷基；和R17和R18分别独立地选自氢、烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基。
优选地，R41和R51分别独立地选自氢、烷基、和羟基烷基；更优选独立地选自氢和烷基。有用的化合物包括那些，其中R41和R51都是氢，或R41是氢和R51是C1-3烷基，优选甲基。
优选地，R17和R18分别独立地选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、卤素、氰基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3)烷基氨基、羟基、硝基、卤代(C1-6)烷基、和C1-6烷氧基；更优选独立地选自氢、C1-4烷基、卤素、氰基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3)烷基氨基、羟基、硝基、卤代(C1-3)烷基、和C1-4烷氧基；更优选独立地选自氢、甲基、异丙基、叔丁基、氰基、氟、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、硝基、三氟甲基、甲氧基、异丙氧基、和叔丁氧基。有用的式V的化合物包括那些，其中R17和R18都是氢，或R17是氢和R18是甲基、叔丁基、氰基、氟、甲基氨基、二甲基氨基、三氟甲基或甲氧基，特别是氰基。
在一个方面，落在式IV范围内的优选的化合物包括由式VI表示的那些
或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1-R3和m如以上对式I的定义；R42和R52分别独立地选自氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、烷基巯基、和氨基烷基；R42和R52与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，其中杂环的一个或多个原子任选被NR16、O或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基；和R19和R20独立地是H或CH3。
R1-R3的优选值如上对式I所述。优选地，R42和R52分别独立地选自氢、烷基、和羟基烷基；更优选选自氢、C1-6烷基、和羟基(C1-6)烷基；更优选独立地选自氢、C1-3烷基、和羟基(C1-3)烷基；更优选独立地选自氢、甲基、乙基、羟甲基和羟乙基；或R42和R52与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，所述杂环选自噁唑烷基、异噁唑烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、六氢嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、和四氢吡啶基。有利地，R42和R52独立地是氢、甲基或羟乙基；或R42和R52与它们所连的氮原子一起形成1-吡咯烷基、4-硫代吗啉基、或4-甲基哌嗪基。
有用的式VI的化合物包括那些，其中R19或R20中的一个是CH3。其他有用的式VI的化合物包括那些，其中当R42和R52一起形成5-或6-元杂环时，R19和R20都是H。同时，有用的式VI的化合物包括那些，其中R42和R52都是氢，或R42是氢和R52是烷基，特别是甲基。优选地，在式VI的化合物中m是1。
用于本发明该方面的另一组化合物是由式VII表示的哌啶基化合物 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1-R3如前面对式I-III所定义；R8和R9都是氢或一起形成＝O；R10、R11、R12和R13分别独立地选自氢、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基；A是O、CH2、或不存在(共价键)，和B是CH，条件是当A是O时，那么R8和R9都是氢；或A-B是CH＝C；和n是0、1、2、3、4、或5。
在式VII中，R1-R3、R8-R13、A、B、和n的优选值是如上面对式I所述的那些。
进一步地，用于本发明的化合物是式VIII的哌啶基化合物 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1-R3、R8、R9、R14、D、和o如前面对式I所定义。在式VIII中，R1-R3、R8、R9、R14、D、和o的优选值是如上面对式I所述的那些。
可用于本发明的另外的化合物是式IX代表的哌啶基化合物
或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1-R3和R15如前面对式I所定义。在式IX中，R1-R3和R15的优选值是如上面对式I所述的那些。
也已经发现，具有式X结构的中间体具有钙通道阻滞活性。因此，本发明涉及如下的式X的化合物 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中
R1-R3如前面对式I所定义。在式X中，R1-R3的优选值是如上面对式I所述的那些。
可用于本发明的优选化合物的实例包括N-{1-[3-(4-氰基苯基)-2-甲基氨基丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-{1-[2-氨基-3-(4-氰基苯基)丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(2-氨基-3-间甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-{1-[2-氨基-3-(4-氟苯基)丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-3-苯基丙酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(2-氨基-3-邻甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-{1-[2-氨基-3-(4-叔丁基苯基)丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-3-邻甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-3-间甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[3-(4-氟苯基)-2-甲基氨基丙酰基]-哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；
N-环丙基-N-{1-[3-(4-叔丁基苯基)-2-甲基氨基-丙酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-硫代吗啉-4-基-己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-甲基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-吡咯烷-1-基己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-吗啉-4-基己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[3-(哌啶-1-基)己酰基]哌啶-4-基}3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(3-氨基-5-甲基己酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-甲基氨基-5-甲基己酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(3-氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-甲基氨基-4-甲基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-二甲基氨基-4-甲基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(2-氨基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-异丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-3[(2-羟乙基氨基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(2-氨基-2-环己基乙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(2-氨基-2-环己基乙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-二甲基氨基己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-2-苯基乙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；或N-异丁基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(2-氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-苯磺酰胺；N-(2-羟乙基)-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-4-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-2-氟苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-2-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基乙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-异戊基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-甲氧基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-二氟甲氧基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-氰基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-氯苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-硝基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-羟基-2-甲基氨基丙酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(1-氨基环戊烷-1-羰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(哌啶-2-酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基-苯磺酰胺；N-[1-(3-苄氧基-2-甲基氨基丙酰基)-哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(N-甲基吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(2-环己基-2-甲基氨基乙酰基)piperin-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基甲基-N-[1-(2-甲基氨基-4-甲基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-二甲基氨基苄基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；
N-环丙基-N-{1-[(3-三氟甲基-4-甲氧基)苯甲酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-二甲基氨基-3，3-二甲基丁酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；和N-环丙基-N-[1-(1-苯基氨基环己-1-酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
可用于本发明的其他示例性优选化合物包括(2S)N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-3-苯基丙酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-甲基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(3S)N-[1-(3-氨基-5-甲基己酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(3S)N-环丙基-N-[1-(3-甲基氨基-5-甲基己酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(3S)N-[1-(3-氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(3S)N-环丙基-N-[1-(3-甲基氨基-4-甲基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2R)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(2-二甲基氨基-4-甲基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2R)N-环丙基-N-[1-(2-二甲基氨基-4-甲基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(3-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(2-氨基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-异丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(2-氨基-2-环己基乙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2R)N-[1-(2-氨基-2-环己基乙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-2-苯基乙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-异丁基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；
(2R)N-[1-(2-氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-苯磺酰胺；(2S)N-(2-羟乙基)-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-4-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-2-氟苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-2-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-异戊基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-甲氧基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-二氟甲氧基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-氰基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-氯苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-甲基苯磺酰胺；
(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-硝基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(3-羟基-2-甲基氨基丙酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(1-氨基环戊烷-1-羰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(3-苄氧基-2-甲基氨基丙酰基)-哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(2-环己基-2-甲基氨基乙酰基)piperin-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基甲基-N-[1-(2-甲基氨基-4-甲基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环戊基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-N-(四氢呋喃-3-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺，和(2S)N-环丙基-N-[1-(2-二甲基氨基-3，3-二甲基丁酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-(2-甲氧基乙基)-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-N-(四氢呋喃-2-基)甲基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-氟苯磺酰胺；(2S)N-[1-(2-氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-苯磺酰胺；或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
可用于本发明的其他示例性化合物包括N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁基]哌啶-4-基}苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁基]哌啶-4-基}-3-氯苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁-3-烯酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁-3-烯酰基]哌啶-4-基}苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁酰基]哌啶-4-基}苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁酰基]哌啶-4-基}-3-氟苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2，2-二苯基乙基)哌啶-4-基]苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3，3-二苯基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁酰基]哌啶-4-基}-2-三氟甲基苯基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[2-二(4-氟苯基)甲氧基乙基]哌啶-4-基}苯磺酰胺；和N-环丙基-N-{1-[2-二(4-氟苯基)甲氧基乙基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
可用于本发明的其他示例性化合物包括N-环丙基-N-[1-(萘-2-基甲基)哌啶-4-基]苯-磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-苯基苄基)哌啶-4-基]苯-磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-异丙基苄基)哌啶-4-基]苯-磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-三氟甲基-4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-二甲基氨基苄基)piperin-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-叔丁基苄基)哌啶-4-基]苯-磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-三氟甲基-4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-甲基-4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-甲基-4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]-苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(3-吡啶基甲基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-喹啉基甲基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4-(4-氟苯基)-4-氧丁基]哌啶-4-基}苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[(3-三氟甲基-4-甲氧基)苯基-甲酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4-(4-氟苯基)-4-氧丁酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；
N-环丙基-N-{1-[4-(4-氟苯基)-4-氧丁酰基]哌啶-4-基}苯磺酰胺；N-[1-(4-苄氧基苄基)哌啶-4-基]-N-环丙基-苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[3-(4-二甲基氨基苯基)丙烯-2-基]哌啶-4-基}苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-二甲基氨基苄基)哌啶-4-基]苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[4-(4-氟苯氧基)苯甲酰基]}哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；和N-环丙基-N-[1-(4-二甲基氨基苯甲酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
可用于本发明的其他示例性化合物包括N-[1-(4-丁氧基苯磺酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-丙基苯磺酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(4-丁氧基苯磺酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-丙基苯磺酰基)哌啶-4-基]苯磺酰胺；和N-环丙基-N-[1-(5-二甲基氨基萘磺酰基)哌啶-4-基]苯磺酰胺，或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
有用的环烷基是C3-12环烷基。典型的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、和环辛基。
有用的卤素或卤素基团包括氟、氯、溴和碘。
有用的烷基包括直链和支链C1-10烷基，更优选C1-6烷基。典型的C1-10烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、3-戊基、己基和辛基。
有用的烯基是C2-6烯基，优选C2-4烯基。典型的C2-4烯基包括乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基和仲丁烯基。
有用的环烷基烷基包括被上述的任意环烷基取代的上述的任意C1-10烷基。
有用的卤代烷基包括被一个或多个氟、氯、溴或碘原子取代的C1-10烷基(例如，一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1，1-二氟乙基和三氯甲基)。
有用的羟基烷基包括被羟基取代的C1-10烷基(例如，羟甲基、羟乙基、羟丙基和羟丁基)。
有用的烷氧基包括被一个上述C1-10烷基取代的氧。
有用的卤代烷氧基包括被一个上述C1-10卤代烷基取代的氧(例如，氟甲氧基、二氟甲氧基、和三氟甲氧基)。
本文使用的术语″杂环的″和″杂环″是指饱和或者完全或部分不饱和的3-7元单环、或7-10元二环系统，其由碳原子和1到4个独立地选自O、N和S的杂原子组成，其中氮和硫原子任选可以被氧化，氮任选可以是四价的，并包括其中以上定义的任何杂环与苯环稠合的任意双环基团，并且其中如果所得化合物是稳定的，那么杂环可以在碳原子或氮原子上被取代。实例包括但不限于，吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、咪唑啉、吡唑烷、苯二氮卓等等。
有用的烷基氨基和二烷基氨基是-NHR21和-NR21R22，其中R21和R22是C1-10烷基。
有用的烷基磺酰基氨基烷基包括被烷基-SO2-NH-基团取代的上述任意C1-10烷基。
有用的氨基羰基烷基包括被氨基羰基即-C(O)NH2取代的上述任意C1-10烷基。
有用的烷基巯基(alkylthiol)包括被-SH取代的上述任意C1-10烷基。
氨基是-NH2。
此处公开的本发明也包含所公开化合物的前药。前药被认为是在体内释放活性母体药物的任意共价结合的载体。前药的例子包括以羟基烷基或氨基烷基作为取代基的式I-X的酯或酰胺，它们可以通过这些化合物与酸酐如琥珀酸酐反应来制备。
此处公开的本发明也包含所公开化合物的体内代谢产物。例如，这些产物可以来自于所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、酯化等等，这主要取决于酶催化过程。因此，本发明包括由下列方法产生的化合物，该方法包括将本发明的化合物与哺乳动物接触一段时间，以足以获得其代谢产物。这种产物典型地如下鉴定制备放射性标记的本发明化合物，将其作为母体以可检测剂量施用于动物如大鼠、小鼠、豚鼠、猴、或人，允许进行足够长的时间以发生代谢，和从尿、血液或其他生物样本中分离其转化产物。
此处所公开的本发明也包含同位素标记的所公开化合物，其具有一个或多个被不同原子质量或质量数的原子替换的原子。可以掺入到所公开化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、和36Cl。本发明的同位素标记的化合物可以通过本领域已知的方法来制备。
本发明也特别涉及3H和14C标记的式I或X的化合物，和它们作为钙通道上其结合位点的放射性配体的用途。例如，本发明的标记化合物的一个用途是表征特异性受体的结合。本发明的标记化合物的另一个用途是替代评价结构-活性关系的动物试验。在竞争性分析中以固定浓度的式I或X的标记化合物以及逐渐增加浓度的测试化合物进行受体分析。式I或X的氚标记化合物可以通过将氚引入式I或X的化合物中来制备，例如通过用氚催化脱卤。这种方法包括在合适催化剂如Pd/C存在下、在碱存在或不存在下、将式I或X化合物的适当卤素-取代前体与氚气反应。制备氚标记化合物的其他适当的方法可以参见Filer，Isotopes in thePhysical and Biomedical Sciences，Vol.1，Labeled Compounds(PartA)，Chapter 6(1987)。14C-标记的化合物可以通过使用具有14C的起始物质来制备。
此处所公开的一些化合物可以包含一个或多个不对称中心，因此，可以产生对映体、非对映体、和其他立体异构形式。本发明包含所有这些可能的形式，以及它们的外消旋和拆分形式及其混合物。单个对映体可以根据本领域普通技术人员公知的方法来分离。当本文所述的化合物包含烯族双键或其他几何不对称中心时，除非另有说明，它们包含E和Z几何异构体。所有的互变异构体也都包含在本发明中。
本文使用的术语“立体异构体”是仅仅原子在空间定向上不同的个体分子的所有异构体的统称。它包括对映体和具有一个以上互相非镜像的手性中心的化合物的异构体(非对映体)。
术语″手性中心″表示与4个不同基团连接的碳原子。
术语″对映体″和″对映异构体″表示不能在其镜像上重叠的分子，因此是光学活性的，其中对映体在一个方向旋转偏振光的平面，而其镜像在相反方向旋转偏振光的平面。
术语″消旋体″表示涉及等份的对映体的混合物，并且该混合物是非光学活性的。
术语″拆分″表示分离或浓缩或去除一个分子的两种对映异构体形式的其中一种。
术语“一个”(“一种”)(″a″和″an″)涵盖一个或多个(一种或多种)。
此处所公开的本发明也包含所公开化合物的所有非毒性药学可接受的盐。药学可接受的加成盐的例子包括无机酸和有机酸加成盐。药学可接受的盐包括但不限于，金属盐如钠盐、钾盐、铯盐等等；碱土金属如钙盐、镁盐等等；有机铵盐如三乙铵盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇铵盐、三乙醇铵盐、二环己基铵盐、N，N’-二苄基乙二胺盐等等；无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等等；有机酸盐如柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、扁桃酸盐、乙酸盐、二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、甲酸盐等等；磺酸盐如甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等等；和氨基酸盐如精氨酸盐、天冬酰胺酸盐、谷氨酸盐等等。
如下形成酸加成盐将本发明的特定哌啶基化合物的溶液与药学可接受的非毒性酸的溶液混合，所述非毒性酸如盐酸、延胡索酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸、草酸、二氯乙酸等等。如下形成碱性盐将本发明的哌啶基化合物的溶液与药学可接受的非毒性碱如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化胆碱、碳酸钠等等的溶液混合。
本发明也涉及在患有对阻滞钙通道特别是选择性阻滞N-型钙通道有反应的疾病的患者中治疗所述疾病的方法，所述方法包括给该动物施用有效量的用任意的式I-X定义所表示的哌啶基化合物。
本发明也涉及钙动员分析法，其可以用于鉴定能调节或阻滞钙通道的化合物。在一个方面，本文所述的分析法用于鉴定阻滞电压门控性钙通道特别是N-型钙通道的化合物。在另一个方面，本文所述的分析法用于预测一种化合物是否能与处于失活状态的N-型钙通道结合。
在一个方面，已经发现用本文所述的分析法鉴定的化合物选择性地阻滞N-型钙通道，因此，可以用于治疗对选择性阻滞N-型钙通道有反应的疾病。因此，本发明提供一种鉴定用于治疗、预防或改善中风、头部创伤、癫痫、疼痛(例如，急性疼痛，或慢性疼痛，其包括但不限于神经性疼痛和炎疼痛)、偏头痛、心境障碍、精神分裂症、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、或帕金森病)、抑郁、焦虑、精神病、高血压、或心律失常的化合物的方法。在每种情况中，可以给需要这种治疗、预防或改善的动物施用有效量的用本文所述分析法鉴定的化合物。
此处所公开的本发明也包含所鉴定化合物的所有非毒性药学可接受的盐。
本发明也涉及在患有对阻滞钙通道特别是选择性阻滞N-型钙通道有反应的疾病的患者中治疗所述疾病的方法，所述方法包括给该动物施用有效量的用本发明分析法鉴定的化合物或该鉴定化合物的药学可接受的盐。
慢性疼痛包括但不限于，炎性痛、术后痛、癌痛、与转移癌有关的骨关节炎痛、三叉神经痛、急性疱疹和疱疹后神经痛、糖尿病性神经病变、灼痛、臂丛撕裂、枕神经痛、反射交感神经营养不良、纤维肌痛、痛风、幻肢痛、烧伤痛、和其他形式的神经痛、神经性和特发性疼痛综合征。在每种情况中，本发明的方法都要求给需要这种治疗的动物施用有效量的本发明的钙通道阻滞剂、或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
慢性躯体痛一般是由对组织损伤如神经陷入、手术操作、癌症或关节炎的炎性反应引起的(Brower，Nature Biotechnology 2000；18387-391)。尽管当前用NSAID来治疗许多类型的炎性痛，但对于改善治疗仍然有较大的空间。
炎症过程是一种对组织损伤或存在外部物质发生反应而激活的一系列复杂的生化和细胞事件(Levine，Inflammatory Pain，InTextbook ofPain，Wall和Melzackeds.，3rded.，1994)。炎症经常发生在受损组织或外部物质的部位，并促进组织修复和愈合过程。炎症的重要标志包括红斑(发红)、发热、水肿(肿胀)、疼痛和功能缺失(同上)。患炎症痛的大部分患者不会连续经历疼痛，但当挪动或触摸炎症部位时会感到疼痛增强。炎性痛包括但不限于骨关节炎和类风湿性关节炎。
慢性神经性疼痛是一种病因未知的外源性疾病状态。在慢性神经性疼痛中，疼痛可以是由多种病因介导的。这种类型的疼痛通常是由于外周或中枢神经组织的损伤引起的。该综合征包括与脊髓损伤有关的疼痛、多发性硬化症、疱疹后神经痛、三叉神经痛、幻痛、灼痛和反射交感神经营养不良和下腰痛。慢性神经性疼痛不同于急性疼痛，在急性疼痛中患者遭受了异常的疼痛感觉，该痛觉可以描述为自发性疼痛、连续浅表灼痛和/或深度疼痛(aching pain)。该疼痛可以是由热-、冷-、和机械-痛觉过敏或由热-、冷-、和机械-异常性疼痛诱发的。
神经性疼痛可以是由外周感觉神经的损伤或感染而导致的。它包括但不限于，来源于外周神经损伤、疱疹病毒感染、糖尿病、灼痛、网状组织撕裂、神经瘤、肢体切断、和脉管炎的疼痛。神经性疼痛也可以是由来源于慢性酒精中毒、人免疫缺陷病毒感染、甲状腺功能减退、尿毒症、或维生素缺乏的神经损害导致的。中风(脊髓或脑)和脊髓损伤也可以诱导神经性疼痛。与癌症有关的神经性疼痛是由于肿瘤生长压迫临近神经、脑或脊髓导致的。此外，癌症治疗，包括化学和放射疗法也可以导致神经损伤。神经性疼痛包括但不限于由神经损伤导致的疼痛，例如糖尿病患者所患的疼痛。
化合物的合成根据所公开的内容，可以使用本领域已知的方法来制备本发明的化合物。例如其中Z是Z1的式I化合物可以如方案1所示来制备方案1 其中R是氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基、氨基烷基、环烷基、任选取代的苯基、任选取代的苄基、或苄氧基烷基并且R′是氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、氨基烷基或苯基。
例如，用盐酸N-乙基-二甲基氨基丙基碳二亚胺(EDCI)(1.0等当量)将N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(1.0等当量)、BOC-氨基酸(1.0等当量)、和1-羟基苯并三唑水合物(0.5-1.0等当量)在合适溶剂如DMF中的混合物在室温下处理约8小时。然后用EtOAc稀释反应混合物，用水和盐水洗涤。浓缩有机层，并用柱(硅胶，EtOAc/己烷)纯化，得到受BOC保护的物质，将其在室温下用HCl溶液(4N，在1，4-二噁烷中)处理，得到HCl-盐形式的期望产物。
其中Z是Z1的式I化合物也可以如方案2所示来制备
方案2 其中R是氢、烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基、氨基烷基、环烷基、任选取代的苯基、任选取代的苄基、或苄氧基烷基，和R″是氢，或R和R″与它们所连的碳原子一起形成C3-7环烷基。
例如，将胺A(1等当量)和氨基酸尾B(1等当量)溶解于4mL二甲基甲酰胺中，然后向该混合物中加入盐酸1-[3-(二甲基甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺(1等当量)和1-羟基苯并三唑水合物(1等当量)。混合物震荡过夜，然后用20mL乙酸乙酯稀释，并分别用15mL的10％HCl水溶液、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。用20mL乙酸乙酯将合并的水层萃取2次，在硫酸钠上干燥合并的有机层。减压除去溶剂，纯化该物质，例如使用combiflash纯化系统。用过量4M HCl二噁烷溶液处理来使纯净物质脱保护，得到化合物C。在氮气氛中将化合物C与4分子筛一起溶解于甲醇中。向其中加入低聚甲醛(1等当量)和乙酸(催化量)，并将反应混合物搅拌30分钟。然后向混合物中加入氰基硼氢化钠(2等当量)，并将反应混合物搅拌过夜。如果此时没有看到反应，可以加入另外部分的低聚甲醛和氰基硼氢化钠。一天以后，用20mL乙酸乙酯稀释反应混合物，并用20mL1M氢氧化钠停止反应。用乙酸乙酯萃取水层3次，用硫酸钠干燥合并的有机层。用过量的4M HCl二噁烷溶液处理该物质，得到HCl盐。在用醚/己烷弄碎后，干燥该物质，得到化合物D的HCl盐。
其中Z是Z1的式I化合物的另一种制备方法如方案3所示
方案3 方案3的方法与方案1所述的方法类似，区别在于起始氨基酸是β-氨基酸，而不是α-氨基酸。
如方案4所示，可以用胺和α，β-不饱和酰胺的迈克尔加成反应来合成其中Z是Z1并且m是1的式I化合物方案4 其中R是氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、氨基烷基、或苯基，或RN-是5-或6-元杂环，其中一个或多个碳原子任选被NR16、O或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基。
例如，将N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺(250mg，0.56mmol)和伯胺或仲胺(2mL)一起在密封Reacti-vial容器中在130℃加热3天。在冰中冷却该容器，然后在Speed-Vac中蒸发以真空干燥。残留物可以在快速硅胶上进行色谱来得到迈克尔加成物。
其中Z是Z2并且R8和R9一起形成＝O的式I化合物可以如方案5所示来制备方案5 因此，在氮气氛中将胺和羧酸加入到干THF中。向该混合物中加入HOBT、EDCI、和三乙胺，并将混合物在室温下搅拌过夜。所得到的混合物在乙酸乙酯和1.0M氯化钠之间分配。分离有机层，干燥并浓缩，得到粗产物，其可以通过己烷/醚结晶来纯化。
其中Z是Z2并且R8和R9都是氢的式I化合物可以如方案6所示来制备方案6 其中Z是Z3并且R8和R9都是氢的式I化合物可以如方案7所示来制备方案7
将胺，即所述哌啶基化合物溶解于DMF中，并加入三乙胺，然后加入卤化物R′CH2X，其中R′是任选取代的苯基。反应混合物在80℃下搅拌12小时，蒸发溶剂。残留物可以用快速色谱纯化，得到期望产物。当不能获得适当的苯甲基卤化物时，可以如下使用相应的醛R′C(O)将三乙酰氧基硼氢化钠(1.4等当量)加入到胺和醛的二氯乙烷溶液中。反应混合物在室温下搅拌12小时。在此之后，倒出溶液，并用快速色谱纯化，得到期望产物。
其中Z是Z3并且R8和R9一起形成＝O的式I化合物可以用与方案5类似的方法来合成。
其中Z是Z4的式I化合物可以方案8所示来制备方案8 例如，取0.5mmol磺酰胺和约0.5mmol的适当磺酰氯溶解于5mLDCM中，并与通过注射器加入的1.5等当量DIEA(0.134mL)合并。混合物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩。可以用硅胶柱以0％到20％EtOAc的己烷溶液梯度来纯化所得到的产物，从洗脱液中浓缩纯净物。
在上述反应中使用的起始胺类化合物可以例如，如实施例3来制备，或者它们可以商业获得，例如从Lancaster。
式X的化合物可以例如，如实施例19所示来制备。
化合物测试通过对钙通道阻滞活性的钙动员和/或电生理学分析来评价本发明的化合物。本发明的一个方面是发现了本文所述的化合物是选择性N-型钙通道阻滞剂。基于上述发现，这些化合物被认为可用于治疗、预防或改善偏头痛、癫痫、心境障碍、精神分裂症、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、或帕金森病)、精神病、抑郁、焦虑、高血压、或心律失常。同时也预期本发明的化合物可以有效地治疗、预防或改善疼痛，如急性疼痛、神经性疼痛、炎性痛、手术疼痛、或慢性疼痛。
更特别地，本发明涉及作为钙通道阻滞剂的式I-X的化合物。根据本发明，具有优选的N-型钙通道阻滞性质的这些化合物在本文所述的钙动员和/或电生理学分析中显示约100μM或更小的IC50。优选地，本发明的化合物显示10μM或更小的IC50。更优选地，本发明的化合物显示约1.0μM或更小的IC50。可以通过下列的钙动员和/或电生理学分析来测试本发明化合物的N-型和L-型Ca2+通道阻滞活性。
在一个实施方案中，用于本发明的化合物是在本文所述钙动员和/或电生理学分析中相对于L-型钙通道显示对N-型钙通道选择性的式I-X任一个代表的那些化合物。本文所用术语″相对于L-型钙通道对N-型钙通道的选择性″是指本发明的化合物对L-型通道阻滞活性的IC50与该化合物对N-型通道阻滞活性的IC50的比率大于1，即LTCC IC50/NTCCIC50＞1。优选地，本发明的化合物显示LTCC IC50/NTCC IC50比率是约2或更大。更优选地，本发明的化合物显示LTCC IC50/NTCC IC50比率是约30或更大。有利地，本发明的化合物显示LTCC IC50/NTCC IC50比率是约100或更大。
钙动员分析本发明提供一种测量活细胞中N-型钙通道的功能活性的方法，这是通过用钙敏感性分析来测量N-型钙通道的活性。本发明的分析法提供用于检测钙流动(流入或流出)的方便的光学方法。可以直接通过检测细胞中钙流动来测量和观察N-型钙通道的活性。
进一步地，本发明提供一种鉴定调节N-型钙通道活性的化合物的分析法。在一个方面，本文所述的分析法提供一种鉴定阻滞N-型钙通道活性的化合物的方法。在另一个方面，本文所述的分析法用于预测调节或阻滞N-型钙通道的化合物是否与处于失活状态的N-型钙通道相结合。
“通道调节剂”是一种直接或间接调节离子通过离子通道迁移的化合物。所述化合物可以通过直接闭塞孔，通过结合并阻止孔开放，通过结合并促进孔开放，或通过影响离子通道开放的时间和频率来发挥它的作用。
“通道阻滞剂”是直接或间接抑制离子通过离子通道迁移的化合物。所述化合物可以通过直接闭塞孔，通过结合并阻止孔开放，或通过影响离子通道开放的时间和频率来发挥它的作用。
本发明的分析法测量细胞中的钙动员。这样，本发明的分析法可以用于鉴定具有N-型钙通道调节或阻滞活性的化合物。通过用本文所述的钙敏感性分析法测量和观察N-型钙通道的功能活性，可以观察N-型钙通道调节剂或阻滞剂的作用。特别地，可以使用本文所述的分析法来测试化合物调节或阻滞N-型钙通道的能力。所述分析法也能预测所述阻滞剂或调节剂化合物能否与处于失活状态的N-型钙通道相结合。
电压门控性钙通道作为膜电位的函数而开放，使得开放的概率随膜电位而增加。电压门控性钙通道作为膜电位的函数而失活、关闭或失敏，使得失活的概率随着膜电位的降低或细胞去极化而增加。与电压门控性钙通道结合的化合物通常会显示状态依赖性，使得化合物的结合亲合性根据通道状态而改变。膜电位的控制可以允许操作通道处于不同状态以促进候选阻滞化合物的结合，这种控制典型地是通过电压-钳电生理学方法来实现的。本发明的分析法能够用光学方法确定状态依赖性化合物与N-型钙通道的相互作用。
分析法概述本发明包括检测和鉴定作为靶N-型钙通道的潜在调节剂或阻滞剂的化合物的分析法。本发明的分析法也可以预测所述化合物是否能与处于失活状态的N-型钙通道相结合。
本发明的分析法是在维持在一种或多种化合物存在条件下的细胞上进行的，其中所述一种或多种化合物特异性地阻滞N-型钙通道以外的外源性表达的钙通道的活性，例如L-型钙通道、P-型钙通道、Q-型钙通道、R-型钙通道、和T-型钙通道。特异性阻滞L-、P-、Q-、R-或T-型钙通道的化合物包括硝苯地平、尼莫地平、维拉帕米、地尔硫卓、尼卡地平、lercanipidine、依福地平、拉西地平、米贝拉地尔、和尼群地平、ω-agatoxin-TK、Pb2+、SNX-482、依福地平的R(-)-异构体以及本领域已知的其他化合物。
在本发明的分析法中，以两步法来使用细胞去极化。首先，在阻滞N-型钙通道以外的内源性表达钙通道的化合物存在下降低细胞的膜电位。当细胞处于去极化状态时将其与该化合物一起培养会增加该化合物与通道结合的效力，这将进而增强该化合物的阻滞活性。其次，在候选化合物存在下降低膜电位。如果候选化合物与处于失活状态的N-型钙通道结合，当细胞处于去极化状态时将候选化合物与细胞一起培养会增加候选化合物与N-型钙通道结合的效力，进而增强候选化合物对N-型钙通道活性的调节或阻滞作用。如果候选化合物不与处于失活状态的N-型钙通道相结合，当细胞处于去极化状态时将候选化合物与细胞一起培养将不增加候选化合物与N-型钙通道结合的效力，进而也不增强候选化合物对N-型钙通道活性的阻滞作用。因此，本发明的分析法可以预测候选化合物是否能与处于失活状态的N-型钙通道相结合。
本发明的分析法提供一种鉴定调节N-型钙通道活性的化合物的方法。该方法包括下列步骤(a)将表达N-型钙通道的细胞与钙敏感性指示剂一起培养一段时间，使得指示剂掺入细胞中；(b)将细胞去极化；(c)将去极化的细胞与候选的调节化合物一起培养，同时将细胞维持在适合引起钙离子通过通道流动的溶液中；(d)在候选的调节化合物存在下测量钙敏感性指示剂的信号；和
(e)将候选的调节化合物存在下钙敏感性指示剂的信号与标准值进行比较。
本发明的分析法涉及培养测试混合物，其包括表达N-型通道的细胞、可检测(产生信号)的钙敏感性试剂、钾离子、和阻滞在细胞中表达的其他电压门控性钙通道活性的化合物。然后加入候选的N-型钙通道活性调节或阻滞化合物。在加入候选化合物之前和之后测量钙敏感性试剂的光信号。该分析法在适于发生N-型钙通道活性的条件下进行。用适当的装置测量钙敏感性试剂的光信号改变。信号的增强或减弱指示钙离子通过N-型钙通道的迁移。信号增强或减弱的变化，指示钙离子通过N-型钙通道迁移的幅度发生变化，从而指示候选化合物的调节活性。
本发明的分析法涉及培养测试混合物，其包括表达靶N-型钙通道的细胞、可检测(产生信号)的钙敏感性试剂(例如，Fluo-3、Fluo-4、Calciumgreen、和其他)、阻滞内源性表达的电压门控性钙通道如L-型钙通道活性的化合物(例如，硝苯地平、尼群地平及其他)、足以使细胞去极化的钾离子浓度(10-150mM)、和候选的N-型钙通道活性阻滞剂。该分析法是在适于发生N-型钙通道活性的条件下进行的，并且在整个分析中，细胞维持在一定化合物存在的条件下，其中该化合物阻滞N-型钙通道以外的内源性表达的其他电压门控性钙通道的活性。
在加入候选的钙通道调节或阻滞化合物之前和之后测量钙敏感性试剂的光信号。测量钙敏感性试剂光信号的变化。信号的增强或减弱指示钙离子通过N-型钙通道的迁移。信号增强或减弱的变化，指示对钙离子通过N-型钙通道迁移的调节或阻滞。
本发明的钙动员分析的一个实施方案是用表达N-型钙通道的完整细胞来实施的，并包括下列步骤1)在适当条件下生长表达N-型钙通道的细胞；2)使细胞接触或向其加载产生信号的钙敏感性试剂，例如Fluo-3或Fluo-4；3)在适当条件下处理细胞(例如，洗涤或添加细胞外猝灭剂)以除去细胞外的过量钙敏感性试剂；4)测量可检测信号作为基线测量；5)使细胞与候选的N-型钙通道调节或阻滞化合物接触；和6)检测任何信号，其中上述每一步骤进行时，细胞都维持在L-型钙通道阻滞剂存在的条件下，其中所述阻滞剂例如，硝苯地平、尼莫地平、维拉帕米、地尔硫卓、尼卡地平、lercanipidine、依福地平、拉西地平、米贝拉地尔或尼群地平等等，并且其中当添加各种L-型钙通道阻滞剂化合物、候选的N-型钙通道调节或阻滞化合物时细胞维持在去极化状态。
通过在添加候选的钙通道阻滞化合物之前和之后测量试验混合物中的基线信号，来确定钙敏感性试剂所产生信号的变化。
典型地，通过直接用电极进行电刺激或者通过用包含会导致膜电位改变特别是去极化的离子组合物的溶液，使电压门控性通道失活。在包含导致膜电位改变的特定离子组合物(如高外部钾)的溶液中培养可以驱动电压门控性离子通道至失活状态。
本发明的分析法包括在包含导致膜电位改变的特定离子组合物的溶液中培养细胞，其中所述离子组合物的选择基于该方法中使用的离子通道的类型。选择适当的离子组合物在本领域一般技术的范围内。
选择用于本发明分析法的离子组合物可以包括用于使膜去极化的活化试剂(例如，离子载体、缬氨霉素、高细胞外钾等)。
在本发明分析法中选用于细胞膜去极化的离子组合物溶液包括一定浓度的钾盐，以使得在包含细胞的孔中钾离子的最终浓度范围是约10-150mM(例如，90mM KCl)。
本发明的分析法利用内源性表达N-型钙通道的细胞。本发明的分析法也利用内源性表达钾通道的细胞。示例性的细胞包括N18神经母细胞瘤细胞、AtT-20小鼠神经内分泌细胞、A7r5大鼠胸主动脉细胞、SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞、PC12嗜铬细胞瘤细胞、ScGT1-1神经元细胞、HN2神经元细胞、F11神经母细胞瘤细胞、L6大鼠肌肉细胞、NG108-15神经母细胞瘤胶质瘤杂交细胞、SCLC神经内分泌源的小细胞肺癌、NT2-N人畸胎癌细胞、大鼠肾上腺球状带细胞、大鼠胰脏β细胞、INS-1细胞、SN56神经元细胞、SKNSH神经母细胞瘤细胞、和IMR32人神经母细胞瘤细胞。
细胞可以在溶液中或在固相载体上生长。细胞可以是贴壁或非贴壁的。固相载体包括玻璃或塑料培养皿、具有单室或多室的板，如多孔板。
尽管可以在单孔或多孔板中使用在分析中能发出可检测荧光信号的任意数量的细胞，但还是选择在每个孔中植入的细胞的数量，使得在进行分析时细胞接近汇合但未生长过度，以使得信号的信号/背景比提高。
本发明的钙敏感试剂的一个实施方案是荧光化合物。可以使用基本上任意的可以加载到细胞中的钙敏感性荧光化合物。优选地，选择所述化合物来检测低浓度的钙离子。这些荧光化合物可以在钙离子存在下显示荧光的减弱或增强。
合适类型的钙敏感性荧光试剂包括Fluo3、Fluo4、Fluo5、CalciumGreen、Calcium Orange、Calcium Yellow、Oregon Green、Fura-2、Fura-4、Fura-5、Fura-6、Fura-FF、Fura Red、indo-1、indo-5、BTC(MolecularProbes，Eugene，OR)、和FLIPR Calcium 3免洗染料(Molecular Devices，Sunnyvale CA)。钙敏感性荧光试剂可以是亲水或疏水的。
通过将细胞与包含可透过膜的染料衍生物的溶液接触，将钙敏感性荧光试剂加载到细胞质中。但是，当使用更疏水性的指示剂时可以辅助加载过程。因此，荧光指示剂是已知的并可获得其疏水性乙酰氧甲酯，它比未修饰染料更容易透过细胞膜。当乙酰氧甲酯形式的染料进入细胞中时，通过细胞浆中酯酶除去酯基，从而使染料限于胞质溶胶中。
通过检测荧光信号的装置测量钙敏感性试剂的荧光。可以使用的装置的实例包括荧光成像板阅读器(FLIPR)(Molecular Devices Corp.，Sunnyvale，Calif.)、流式细胞仪、荧光计和荧光显微镜。
如果细胞在具有单或多室的固相载体上生长，可以同时在一个或多个室中测量或检测分析中的荧光信号。因此，可以一次向一个或多个室中加入候选的调节或阻滞化合物。
本领域普通技术人员将会理解，可以进行本文所述分析法的对照试验，来辅助对候选N-型钙通道调节剂或阻断剂的作用的分析，或提供可以比较N-型钙通道活性变化的标准值。可以使用以下进行对照试验(1)维持在本发明分析法相同条件下的不表达N-型钙通道的细胞；(2)维持在相同条件下的细胞，但没有候选的N-型钙通道调节或阻滞化合物；和/或(3)处于本发明方法相同条件下的细胞，但使用已知的N-型钙通道阻滞剂。
下面是本发明分析法的更详细的实例。
钙动员和电生理分析方案细胞维持和分化。除非另有说明，细胞培养试剂购自LifeTechnologies of Rockville，MD。IMR32细胞(American Type CultureCollection，ATCC，Manassas，VA)常规培养在由含10％胎牛血清(FBS，Hyclone，Logan，UT)、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、和1xMEM非必需氨基酸的最低基本培养基组成的生长培养基中。用下列的分化培养基使瓶中80-90％汇合的细胞分化生长培养基加二丁酰基环AMP(Sigma，St.Louis，MO)和2.5μM溴脱氧尿苷(Sigma)。通过每2-3天更换分化培养基使细胞分化8天。
A7r5(ATCC)细胞维持和常规培养在A7r5生长培养基中，所述培养基由含10％FBS、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、4mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠和0.15％碳酸氢钠的Dulbecco’s改良伊格尔培养基组成。用下列的分化培养基使瓶中80-90％汇合的细胞分化A7r5生长培养基加二丁酰基环AMP(Sigma)。通过每2-3天更换分化培养基使细胞分化8天。
N-型钙通道的FLIPR钙动员分析。在进行该分析前一天，用1xCellStripper处理分化的IMR32细胞，并以200,000细胞/孔植入到聚-D-赖氨酸包被的96-孔透明底黑色板(Becton Dichinson，Franklin Lakes，NJ)上。在分析当天，用IMR32缓冲液(127mM NaCl，1mM KCl，2mMMgCl2，700μM NaH2PO4，5mM CaCl2，5mM NaHCO3，8mM HEPES，10mM葡萄糖，pH7.4)洗涤该细胞板，然后用KCl预刺激，并如下加载添加0.05mL稀释在含20μM尼群地平(Sigma)的IMR32缓冲液中的每种受试化合物、0.1mL溶解在IMR32缓冲液的KCl、以及Fluo-4(最终浓度3μM，Molecular Probes，Eugene，OR)。受试化合物最终浓度范围是约846pM到约17μM，最终的尼群地平浓度是5μM，最终的KCl浓度是90mM。1小时后，用在含尼群地平的IMR32缓冲液(不含KCl或Fluo-4)中的0.05mL每种受试化合物洗涤细胞2次，然后更换为在含尼群地平的IMR32缓冲液中的0.1mL每种受试化合物。然后把板转移到荧光成像板阅读仪(FLIPR96，Molecular Devices，Inc.，Sunnyvale，CA)上进行分析。FLIPR测量基础Fluo-4荧光315秒(即5分15秒)，然后加入溶解在IMR32缓冲液中的0.1mL KCl激动剂，再测量荧光45秒。在FLIPR读数后，细胞上的最终受试化合物浓度范围为约846pM到约17μM，尼群地平的最终浓度是5μM，KCl的最终浓度是90mM。在整个时程中收集数据，并用Excel、Graph Pad Prism(version 3.02，GraphPad，SanDiego，CA)或Activity Base(version 5.1，IDBS，Parsippany，NJ)软件分析。
L-型钙通道的FLIPR钙动员分析。在进行该分析前一天，用胰蛋白酶处理分化的A7r5细胞，然后从汇合的T150cm2培养瓶中按1∶1稀释植入到96-孔透明底黑色板(Becton Dickinson，Franklin Lakes，NJ)上。在分析当天，用A7r5洗涤缓冲液(127mM NaCl，2mM MgCl2，700μMNaH2PO4，5mM CaCl2，5mM NaHCO3，8mM HEPES，10mM葡萄糖，pH7.4)洗涤该板，然后加载0.1mL含Fluo-4(最终浓度3μM，Molecular Probes，Eugene，OR)的A7r5洗涤缓冲液。1小时后，用0.1mLA7r5洗涤缓冲液洗涤细胞，并悬于0.05mL由A7r5洗涤缓冲液和50μM缬氨霉素(Sigma)的A7r5分析缓冲液中。然后将板转移到FLIPR96上进行分析。FLIPR测量基础Fluo-4荧光15秒，然后加入0.05mL的每种受试化合物，各种化合物稀释于A7r5分析缓冲液中，最终浓度范围是约846pM到约17μM。然后测量Fluo-4荧光5分钟，然后向细胞加入溶解在A7r5分析缓冲液中的0.1mL KCl激动剂以得到最终浓度90mM的KCl，再测量荧光45秒。在整个时程中收集数据，并用Excel、Graph PadPrism或Activity Base软件分析。
N-和L-型钙通道亚基开放读码框cDNA的克隆。通过PCR扩增克隆编码大鼠N-或L-型钙通道亚基的5种cDNA以在异源系统中重构功能性通道。它们是alpha1b(α1b)、beta1(β1)、beta3(β3)、alpha2delta(α2δ)、和alpha1c(α1c)亚基cDNA。alpha1b亚基cDNA已经描述于Dubel等人，Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A 895058-5062(1992)中。beta1亚基cDNA已经描述于PragneH等人，FEBS Lett.291253-258(1991)中。beta3亚基cDNA已经描述于Castellano等人，J.Biol.Chem.26812359-12366(1993)中。alpha2delta亚基cDNA已经描述于Kim等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.893251-3255(1992)中。alpha1c亚基cDNA已经描述于Koch等人，J.Biol.Chem.26517786-17791(1990)中。
将包含全部α1b开放读码框(ORF)的7.0kb cDNA进行PCR扩增，其包含2个重叠的cDNA片段，即2.7kb 5’片段和4.4kb 3’片段。5’片段用引物1(SEQ ID NO1，表1)和2(SEQ ID NO2，表1)从大鼠脑cDNA中扩增，3’片段用引物3(SEQ ID NO3，表1)和4(SEQ ID NO4，表1)从大鼠脊髓cDNA扩增。通过在共有限制酶切位点连接将2个片段连接在一起，形成完整的7.0kb cDNA。该ORF编码根据Lin等人(Neuron18153-166(1997))命名法通过称为“+A ΔSFMG ΔET”的选择性剪接产生的蛋白质异型体(isoform)。在两条链上通过冗余覆盖对完整cDNA进行测序。然后用Gateway系统(Invitrogen)通过同源重组将该cDNA插入到哺乳动物表达载体pcDNA6.2DEST(Invitrogen，CarlsbadCA)中。
通过PCR扩增从大鼠脊髓cDNA(β1)或脑cDNA(β3，α2δ)中克隆编码β1亚基的1.8kb cDNA，编码beta3亚基的1.45kb cDNA和编码alpha2delta亚基的3.3kb cDNA。使用引物5(SEQ ID NO5，表1)和6(SEQ ID NO6，表1)用于β1 cDNA扩增；使用引物7(SEQ ID NO7，表1)和8(SEQ ID NO8，表1)用于β3 cDNA扩增；使用引物9(SEQ IDNO9，表1)和10(SEQ ID NO10，表1)用于α2δcDNA扩增。亚克隆PCR产物并在两条链上完全测序。将与参照序列(β1NM_017346；β3NM_012828；α2δM86621)和基因的GenBank大鼠基因组DNA序列匹配的克隆重组到哺乳动物表达载体pcDNA3.2DEST(β1，β3)或pcDNA3.1-Zeo(α2δ)中，所述载体已经用Gateway载体接头试剂盒(Invitrogen)修饰成与Gateway重组系统相容的载体。通过测序产生重组的区域证实正确的重组。对于β3表达载体，通过用抗大鼠β3亚基的兔多克隆抗血清(USA Biological)对转染的HEK293细胞裂解物进行Western印迹分析，来证实正确的蛋白质表达。
通过PCR扩增从大鼠心脏cDNA中用引物11(SEQ ID NO11，表1)和12(SEQ ID NO12，表1)克隆编码L-型钙通道α1c亚基的6.5kbcDNA。亚克隆PCR片段，并在两条链上完全测序以证实其一致性。将与共有参照序列M59786和大鼠基因组DNA序列匹配的克隆重组到哺乳动物表达载体pcDNA6.2DEST中。测定重组区域周围的序列以证实准确地重组到表达载体中。
表1

N-型重组细胞系的开发。分2阶段制备表达N-型钙通道的HEK-293细胞。如下创建阶段1。按照制造商说明用Lipofectamine Plus试剂(Invitrogen)将大鼠α1b和β3 cDNA表达构建体(每种2.5μg)共转染到人胚肾(HEK-293)细胞中。24小时后，以有限稀释将细胞分到多个96孔板的选择培养基中，其中所述选择培养基含20μg/mL杀稻瘟菌素和500μg/mL遗传霉素，并在37℃、5％CO2、95％湿度下培养3周。培养每孔含≤1个克隆的板，直至单克隆阳性的孔汇合。然后将单个克隆以阵列分到目标96-孔板的栏中，并部分分到6-孔板中以维持培养。用IMR32缓冲液将阵列板洗涤1次，用含Fluo-4(最终浓度3μM，MolecularProbes)的0.1mL IMR32缓冲液加载细胞1小时。然后用0.1mL IMR32缓冲液洗涤2次，并更换为0.1mL IMR32缓冲液。然后将板转移到FLIPR96上进行分析。FLIPR测量基础Fluo-4荧光315秒，然后加入溶解在IMR32缓冲液中的0.1mL KCl激动剂，再测量荧光45秒。KCl的最终浓度是90mM。在整个时程中收集数据，并用Excel、Graph PadPrism或Activity Base软件分析。扩增具有最大信噪比、对传代次数有最佳稳定性反应和对PDL预涂板(Becton Dickinson)有最佳贴壁性的克隆，表征，并用于阶段2的细胞系开发。
如下进行阶段2的N-型细胞系开发。按照制造商说明用Lipofectamine Plus试剂(Invitrogen)将大鼠α2δ cDNA表达构建体(每种5μg)转染到阶段1的N-型克隆细胞系中。24小时后，以有限稀释将细胞分到多个96孔板的选择培养基中，其中所述选择培养基含20μg/mL杀稻瘟菌素、500μg/mL遗传霉素和250μg/mL zeocin，并在37℃、5％CO2、95％湿度中培养3周。根据与阶段1细胞系所述相同的步骤和方法，培养并处理每孔含≤1个克隆的板。扩增具有最大信噪比、对传代次数有最佳稳定性反应和对PDL预涂板(Becton Dickinson)有最佳贴壁性的克隆，表征，并如下所述测试电生理学中最佳电流大小、N-型药理学、N-型特征性电流-电压关系和动力学。
N-型电生理学。为进行电生理学记录，以约104细胞/皿的密度将表达α1b、β3和α2δ亚基的细胞植入到35-mm Petri培养皿中并保持在培养箱中高达3天用于随后的纪录。为了记录，将培养皿置于倒置显微镜(Nikon，Eclipse E600，日本)的工作台上，并用浸浴溶液覆盖，其中所述浸浴溶液包含BaCl2(11mM)、MgCl2(1.5mM)、HEPES(10mM)、TEA氯化物(120mM)、葡萄糖(10mM)，并用KOH调节pH至7.4。在室温(22-24℃)下用常规膜片钳技术(Hamill等人，Pfluegers Arch.39185-100(1981))进行全细胞电压钳记录。从WPI、厚壁硼硅酸盐玻璃(WPI，Sarasota，FL)中拉出膜片钳吸管。用Axopatch 200A放大器(Axon Instruments，Union City，CA)记录电流，并扣除漏电流(P/4)、低通滤波(1kHz，4-极Bessel)、数字化(间隔20-50-μs)，并用Digidata 1200B接口和Pclamp8.0/Clampex软件(Axon Instruments，Union City，CA)保存。用内溶液反向填充吸管，所述内溶液包含CsCl(110mM)、MgCl2(3mM)、EGTA(3mM)、HEPES(40mM)、Mg-ATP(4mM)、Na2GTP(0.5mM)，并用CsOH调节pH至7.2。吸管阻抗范围是2至3兆欧，并通过内置电子电路补偿75-80％。
引发电流，通过每10秒从保持电位-90mV跃升至0mV维持20毫秒。在-90mV膜电压时，有一定比例的通道处于失活状态。因此，与阻滞剂接触将涉及与静息和失活的通道相互作用。该方案被用作第一层级筛选。为了分离抑制的两种组分(静息部分的表观解离常数Kr和失活状态部分的Ki)，用双脉冲方案来收集稳态失活曲线。以10mV步骤增加的3秒长去极化前脉冲，随后是到0mV的10毫秒测试脉冲。
用DMSO制备每种测试化合物的储备溶液。用浸浴溶液连续稀释到期望浓度，在最终溶液中DMSO浓度是0.1％。用放置在距离细胞～1mm的平面多管阵列移液器通过重力流施加药物。
用Origin软件(5.0版，Microcal)完成所有的曲线拟合。用希尔方程进行浓度-反应曲线的拟合，并确定IC50值。用Boltzman方程进行失活曲线的拟合，得到半数失活电压V0.5、斜率p和最后所有通道处于静息状态时在最大负电压时的电流强度。用这些参数来计算表观解离常数Kr＝((Ab/Ac)/(1-(Ab/Ac))*[b])，其中[b]是药物浓度，Ac是在对照条件下的最大测试电流强度，Ab是存在阻滞剂时的最大测试电流强度；Ki＝[b]/((exp(-(dx/p))*(1+([b]/Kr))-1)，其中dx是存在或不含药物时半数失活电压V0.5之间的差值，p是斜率。
体内药理学可以用在小鼠中任意的多种抗惊厥试验，包括最大电击发作试验(MES)，在静脉、口服或腹腔注射后试验本发明化合物的体内抗惊厥活性。在体重15-20g的雄性NSA小鼠和体重200-225g的Sprague-Dawley大鼠中，用Ugo Basile ECT装置(Model 7801)施加电流(小鼠50mA，60脉冲/秒，脉冲宽度0.8毫秒，持续时间1秒，D.C.；大鼠99mA，125脉冲/秒，脉冲宽度0.8毫秒，持续时间2秒，D.C.)来诱导最大电击发作。通过握持其背部表面的松垂皮肤限制小鼠，并将盐水涂布的角膜电极轻轻靠在两个角膜上。允许大鼠在试验台上自由移动，并使用耳夹电极。施加电流并在持续观察动物30秒的时间以观察强直性后肢伸肌反应的出现。强直性发作定义为后肢从身体平面伸展超过90度。以量化方法处理结果。
可以在如Hunskaar，S.，O.B.Fasmer，和K.Hole，J.Neurosci.Methods 1469-76(1985)所述的福尔马林模型中试验这些化合物的抗痛觉(antinociceptive)活性。在所有试验中可以使用雄性Swiss Webster NIH小鼠(20-30g；Harlan，San Diego，CA)。在试验当天撤去食物。将小鼠放置于有机玻璃罐中至少1小时，以适应环境。在适应环境之后，将小鼠称重，以静脉或口服施用任一种感兴趣化合物或适当体积的载体(10％Tween-80)作为对照。静脉给药后15分钟和口服给药后30分钟，用福尔马林(20μL 5％甲醛的盐水溶液)注射到小鼠的右后爪的背面。将小鼠转移到有机玻璃罐中，并监测舔或咬噬注射爪所花的时间量。在注射福尔马林后持续1小时，以5分钟间隔期记录舔或咬噬的时间。在亮周期中以盲法完成所有试验。在0-5分钟之间舔/咬噬作为测量福尔马林反应的早期阶段，从15-50分钟测量晚期阶段。用单因素方差分析(ANOVA)来分析载体和药物处理组之间的差异。P值＜0.05认为是显著的。如果这些化合物在阻滞早期和第二阶段福尔马林诱导舔爪活动中都具有活性，则认为它们对于治疗急性或慢性疼痛是有效的。
可以用周围神经病变的Chung模型(Kim和Chung，Pain 50355-363(1992))来测试化合物治疗慢性疼痛(即抗异常性疼痛和抗痛觉过敏活性)的潜力。用氟烷(在70％空气和30％氧气的混合物中占1-3％)麻醉重量为200-225g的雄性Sprague-Dawley大鼠，在麻醉期间用恒温毯控制它们的体温。然后在L5和L6水平上制作2-cm的背部中线切口，椎旁肌群向两侧收缩。然后暴露、分离并用6-0或7-0缝合丝线紧密结扎L5和L6脊神经。在暴露的对侧L5和L6脊神经上进行假手术，而不结扎，作为阴性对照。
触觉性异常性疼痛可以在动物中测量对非有害性机械刺激的敏感性，以评价触觉性异常性疼痛。将大鼠转移到升高的具有金属网底部的试验笼中，让其适应新环境5到10分钟。将一系列vonFrey单纤维施加于后爪的跖面来确定动物的退缩阈值。所使用的第一纤维具有9.1gms的屈服重量(buckling weight)(.96log值)，将其施加多达5次以观察是否引起退缩反应。如果动物具有退缩反应，那么该系列中紧接着最轻的纤维可以施加多达5次来确定其是否也能引起反应。随后用更轻的纤维重复该操作，直至没有反应，记录引起反应的最轻纤维的身份。如果动物对于初始的9.1gms细丝没有退缩反应，然后可以使用重量增加的纤维，直至纤维引起反应，并记录该纤维的身份。对于每个动物，在每个时间点进行3次测量以确定退缩阈值的平均值。可以在给药前和给药后1、2、4和24小时进行试验。
机械性痛觉过敏可以用爪压试验在动物中测量对有害性机械刺激的敏感性，以评价机械性痛觉过敏。如Stein(Biochemistry & Behavior 31451-455(1988))所述，在大鼠中，用痛觉测量仪(algesymeter)(Model7200，购自Ugo Basile of Italy)测量以g计的对有害性机械刺激反应的后爪退缩阈值(“PWT”)。将大鼠爪置于小平台上，以分级方式施加重量，直至最大250g。以爪完全退缩时的重量作为终点。每只大鼠在每个时间点测定一次PWT。可以仅在受损伤的爪上，或者在受损伤或非损伤的爪上都测定PWT。在手术前试验大鼠，以确定基线、或正常PWT。在手术后2到3周、给药前和给药后不同时间(例如，1、3、5和24小时)再试验大鼠。给药后PWT的增加表明测试化合物降低了机械性痛觉过敏。
药物组合物尽管本发明化合物可以以不含其他任何组分的纯化学品形式施用于哺乳动物，但优选所述化合物是作为药物组合物的一部分来施用，其中所述药物组合物包含所述化合物和适当的药学可接受载体的组合。这种载体可以选自药学可接受的赋形剂和辅剂。
在本发明范围内的组合物包括本发明化合物与药学可接受的载体联合的所有组合物。在一个优选的实施方案中，存在于组合物中的所述化合物的量可以有效实现期望治疗目的。尽管个体需要可以变化，确定每种化合物的有效量的最佳范围是在本领域技术的范围内。典型地，所述化合物可以施用于哺乳动物如人，以每天每kg哺乳动物体重约0.0025到约1500mg的口服剂量、或相当量的其药学可接受盐，来治疗特定疾病。施用于哺乳动物的本发明化合物的有用的口服剂量是每kg哺乳动物体重约0.0025到约50mg，或相当量的其药学可接受盐。对于肌内注射，剂量典型地是口服剂量的约一半。
单位口服剂量可以包含约0.01到约50mg，优选约0.1到约10mg的所述化合物。该单位剂量可以作为一个或多个片剂每天施用一次或多次，每个片剂分别包含约0.01到约50mg的所述化合物，或相当量的其药学可接受的盐或溶剂化物。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物可以口服施用，并配制成片剂、糖衣剂、胶囊或口服液体制剂。
作为替代，本发明的药物组合物可以经直肠施用，并配制成栓剂。
作为替代，本发明的药物组合物可以经注射施用。
本发明的药物组合物可以包含约0.01到99％重量，优选约0.25到75％重量的活性化合物。
本发明的药物组合物可以施用给可以体验本发明化合物的有益作用的任何动物。尽管本发明并不限于这些，但这些动物中最重要的是哺乳动物，如人和伴侣动物。
本发明的药物组合物可以通过能达到预定目的的任何方式来施用。例如，可以通过胃肠外、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、透皮、或口腔含化途径来施用。作为替代，或同时地，可以通过口服途径来施用。施用剂量和施用途径可以不同，这取决于特定对象的环境，并考虑多种因素，如对象的年龄、健康、和体重，待治疗的病况或疾病，联合治疗的类型—如果有，治疗频率和期望作用的性质。
本发明的药物组合物优选由本身已知的方法来制造，例如，通过常规混合、造粒、制糖衣剂、溶解、或冻干操作。因此，口服的药物组合物的活的，可以通过将活性化合物与固体赋形剂组合，任选地弄碎所得混合物，如果期望或必要还可以添加合适的辅剂，此后加工混合物颗粒，以得到片剂或糖衣剂核心。
合适的赋形剂包括填充剂如糖(例如，乳糖、蔗糖、甘露醇、或山梨糖醇)、纤维素制品、磷酸钙类(例如，磷酸三钙或磷酸氢钙)，以及粘合剂如淀粉糊(例如，使用玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、或马铃薯淀粉)、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果期望，可以加入一种或多种崩解剂，例如上述的淀粉以及羧甲基-淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或者海藻酸或其盐，如海藻酸钠。
辅剂典型地是流动调节剂和润滑剂，例如硅胶、滑石、硬脂酸或其盐(例如硬脂酸镁或硬脂酸钙)、和聚乙二醇。糖衣剂核心具有对胃液有抵抗力的合适包衣。为此目的，可以使用浓缩糖溶液，其可以任选地包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备对胃液有抵抗力的包衣，可以使用合适的纤维素制品如邻苯二甲酸乙酰纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素的溶液。可以向片剂或糖衣剂包衣中加入染料或颜料，例如，用于识别或为了表征活性化合物剂量的组合。
可以口服使用的其他药物制剂的实例包括由明胶制备的推入配合胶囊，或者由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇制备的软、密封胶囊。推入配合胶囊可以包含颗粒形式的化合物，所述化合物可以与填充剂如乳糖，粘合剂如淀粉，和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁，和任选地稳定剂相混合。在软胶囊中，活性化合物优选溶解或分散在合适液体中，如脂肪油或液体石蜡中。此外，可以加入稳定剂。
用于直肠给药的可能药物制剂包括，例如，栓剂，其由一种或多种活性化合物与栓剂基质的组合组成。合适的栓剂基质包括天然或合成甘油三酯、和石蜡烃等。也可以使用明胶直肠胶囊，其由活性化合物与基质材料的组合组成，所述基质材料例如，液体甘油三酯、聚乙二醇或石蜡烃。
用于胃肠外施用的合适制剂包括水溶形式活性化合物的水溶液，例如水溶性盐、碱性溶液、或酸性溶液。作为替代，活性化合物的混悬液可以制备成油性悬液。用于这种悬液的合适的亲脂性溶剂或载体可以包括脂肪油(例如芝麻油)、合成的脂肪酸酯(例如油酸乙酯)、甘油三酯、或聚乙二醇如聚乙二醇-400(PEG-400)。水悬液可以包含一种或多种增加混悬液粘度的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇、和/或葡聚糖。混悬液可以任选地包含稳定剂。
本发明的化合物、组合物和方法的下列实施例是说明性的，而不是限制性的。在临床治疗中经常遇到的和根据本公开内容对本领域技术人员显而易见的、对多种条件和参数的合适改进和适应都在本发明的精神和范围内。
实施例实施例1(2S)N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺延胡索酸盐(4)
a)4-(3-三氟甲基苯磺酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1)取4-氨基-N-叔丁氧基羰基哌啶(4.55g，22.72mmol)和三乙胺(4.7mL，94.7mmol)溶解于干燥的二氯甲烷(50mL)中。加入3-三氟甲基苯磺酰氯(3.64mL，22.72mmol)，将混合物搅拌12小时。真空除去溶剂，残留物在冰冷的1M盐酸(500mL)和醚(500mL)之间分配，分离有机相，干燥(MgSO4)和真空蒸发溶剂至干燥，得到呈白色固体的标题化合物1(9g，100％)。LC100％。MSm/z＝438.1(M+Na)。
b)N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺(2)搅拌下取4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1)(9.0g，22.04mmol)溶解于三氟乙酸(20mL)中，将混合物在室温下搅拌4小时。用水(300mL)稀释该混合物，并用醚(300mL)萃取，然后弃掉醚。用碳酸钾小心地将水相碱化到pH 10，用乙酸乙酯(2×300mL)萃取，干燥(MgSO4)，真空蒸发溶剂至干燥，得到呈白色固体的标题化合物2(6.3g，93％)。LC87％。MS；m/z＝309.2(M+H)。
c)(2S)甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]-丁基}氨基甲酸叔丁酯(3)取N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺(2)(6.3g，20.4mmol)，1-羟基苯并三唑(3.32g，24.52mmol)，盐酸N-乙基-二甲基氨基丙基碳二亚胺(EDCI)(4.7g，24.52mmol)，和N-BOC-N-甲基亮氨酸(5.5g，22.44mmol)悬浮于干燥四氢呋喃(100mL)中。向该悬液中加入三乙胺(TEA)(8.5ml，61.2mmol)，混合物搅拌过夜。将混合物倾倒入1M氢氧化钠溶液(300mL)，并用乙酸乙酯(2×300mL)萃取，干燥(MgSO4)，真空蒸发溶剂至干燥，得到灰白色固体。用醚(100mL)弄碎该固体得到呈白色固体的标题化合物3(收率10.35g，95％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ(旋转异构体的2∶1混合物)8.15(1H，s)，8.07(1H，d，J＝12Hz)，7.85(1H，d，J＝12Hz)，7.66(1H，m)，5.05-3.8(4H，m)，3.55(1H，m)，3.20-2.90(1H，m)，2.65(2s，3H)，2.90-2.57(1H，m)，1.74(2H，m)，1.70-1.10(15H，m)，0.90(6H，d，J＝15Hz)。LC100％。MSm/z＝558.3(M+Na)。
d)(2S)N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺延胡索酸盐(4)取甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]-丁基}-氨基甲酸叔丁酯(3)(1.0g，1.87mmol)溶解于三氟乙酸(5mL)中，混合物在室温下搅拌3小时。用水(100mL)稀释该混合物，并用醚(2×100mL)萃取，然后弃掉醚。用碳酸钾将水相碱化到pH10，用二氯甲烷(2×100ml)萃取，干燥(MgSO4)，真空蒸发溶剂至干燥，得到无色泡沫(679mg，1.56mmol)。将该泡沫溶解于醚(25ml)中，向混合物中加入含延胡索酸(181mg，1.56mmol)的甲醇(2mL)。过滤该混合物，真空干燥产物，得到呈白色固体的标题化合物(680mg，66％)。LC98.1％。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 8.18(1H，s)，8.10(1H，d，J＝6.8Hz)，7.86(1H，t，J＝6.8Hz)，7.70(1H，m)，6.75(2H，s)，4.40-4.20(1H，m)，4.17-4.03(1H，m)，3.43-2.75(4H，m)，2.55和2.45(2s，3H)，1.95-1.37(7H，m)，0.96(6H，m)。MS(e/z)513(M+H+)。
实施例2实施例1的磺酰胺(3)的烷基化条件方法A方案9 取甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)-哌啶-1-羰基]丁基}氨基甲酸叔丁酯(3)(1.0g，1.87mmol)，和三苯基膦(0.59g，2.24mmol)溶解于干燥的四氢呋喃(10mL)中。向混合物中加入醇ROH(2.24mmol)，然后加入偶氮二甲酸二异丙基酯(0.44mL，2.24mmol)，混合物在50℃搅拌24小时。真空除去溶剂，残留物在快速硅胶上进行色谱并用己烷∶乙酸乙酯(3∶1)洗脱，得到呈无色胶状的BOC保护的产物。将该物质溶解于三氟乙酸(6mL)，并微热到约50℃持续5分钟。将混合物在水(50mL)和醚(50mL)之间分配，分离水相。用碳酸钾将水相碱化到pH10，用乙酸乙酯(2×50ml)萃取，干燥(MgSO4)，真空蒸发溶剂至干燥，得到胶状物。该胶状物在快速硅胶上进行色谱并用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(200∶40∶4)洗脱，得到呈无色胶状的游离碱。将其溶解于乙酸乙酯(5ml)中，并向该混合物中加入含延胡索酸(1mol当量)的甲醇(1mL)。真空蒸发溶剂至干燥，用醚弄碎残留物得到呈白色固体的延胡索酸盐。
方法B方案10 在氩气下向在干燥DMF(5mL)中分散在矿物油中的氢化钠95％的悬液中一次性全部加入甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]丁基}氨基甲酸叔丁酯(3)(0.93mmol)，混合物在70℃下搅拌2小时。向混合物中加入烷基溴化物RBr(1.12mmol)，反应混合物加热到100℃持续48小时。用甲醇(5mL)使反应混合物停止反应，真空蒸发溶剂至干燥。用三氟乙酸(4mL)处理残留物并搅拌4小时。将混合物在醚(50mL)和1M盐酸(50mL)之间分配，分离水相。用碳酸钾碱化水相至pH10，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，干燥(MgSO4)和真空蒸发溶剂至干燥。残留物在快速硅胶上进行色谱并用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(250∶40∶4)洗脱得到游离碱。将该碱溶解于二氯甲烷(5mL)并向混合物中加入含氯化氢的二噁烷4M(1mL)。真空蒸发混合物至干燥，用醚(20mL)弄碎该混合物，得到呈白色固体的盐酸盐。
作为替代，如下制备延胡索酸盐。取所述游离碱溶解于醚(20mL)中，加入含延胡索酸(1mol当量)的甲醇(1-2mL)中。真空蒸发溶剂至干燥，用醚(5-10mL)弄碎该混合物，得到呈白色固体的延胡索酸盐。通过上述方法制备下列的化合物a)(2S)N-甲基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺延胡索酸盐(5)通过方法B，用碘甲烷将甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]丁基}氨基甲酸叔丁酯(3)(0.5g，0.93mmol)烷基化。用方法B将游离碱(300mg)转化成延胡索酸盐，得到呈白色固体的化合物(5)(305mg，59％)。LC100％。MSm/z＝450.2，451.2(M+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(旋转异构体的1∶1混合物)8.09(1H，s)，8.02(1H，m)，7.86(1H，d，J＝7.5Hz)，7.72(1H，t，J＝7.5Hz)，7.6-6.9(2H，bs，CO2H)，6.77(2H，s)，4.75(1H，d，J＝13Hz)，4.06(1H，m)，4.96(1H，d，J＝13Hz)，3.62-3.75(1H，m)，3.10(1H，m)，2.78(3H，s)，2.55(1H，m)，2.40，2.32(3H，2s)，1.85-1.30(7H，m)，0.92(6H，m)。
b)(2S)N-异丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺延胡索酸盐(6)用方法A、Mitsunobu条件用异丙醇将甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]丁基}-氨基甲酸叔丁酯(3)(1.0g，1.87mmol)烷基化。将产物进行色谱(己烷∶乙酸乙酯4∶1)，TLC(SiO2，乙酸乙酯∶己烷1∶4，Rf＝0.14)。用三氟乙酸(6ml)在50℃处理纯化后产物5分钟。用条件A处理混合物，并用快速色谱乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(250∶40∶4)纯化，得到泡沫状的游离碱(123mg)。将其转化成延胡索酸盐(条件A)得到呈白色固体的标题化合物(6)(120mg，10％)。LC100％。MS(m/z)478.2，479.2(M+H)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.18(1H，d，J＝7.5Hz)，8.06(2H，m)，7.87(1H，t，J＝7.5Hz)，6.52(2H，s)，4.48(1H，m)，3.96(1H，d，J＝13Hz)，3.92-3.60(4H，m)，3.15(1H，m)，2.65(1H，m)，2.28和2.20(3H，2s)，2.05-1.85(2H，m)，1.80-1.55(3H，m)，1.35(2H，m)，1.12(6H，m)，0.86(6H，m)。TLC(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇∶氨水250∶40∶4)Rf＝0.12紫外检测。
类似地，制备(2S)N-异丁基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC80.9％。MS(m/z)492.3，493.4(M+H+)，494.2(M+2H+)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ 8.16(1H，m)，8.13(1H，m)，8.00(1H，d，J＝7.2Hz)，7.84(1H，m)，4.42(1H，m)，3.92(2H，m)，3.22(1H，m)，3.06(2H，m)，2.67(4H，m)，2.00(1H，m)，1.69(8H，m)，0.99(12H，m)。
c)(2S)N-环丙基甲基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺延胡索酸盐(7)通过方法B，用环丙基甲基溴将甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]丁基}-氨基甲酸叔丁酯(3)(0.5g，0.93mmol)烷基化。用三氟乙酸处理产物，并根据方法B处理。快速色谱(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇∶氨水250∶20∶2)得到呈无色胶状的游离碱(88mg)。将该胶转化为延胡索酸盐，得到呈白色固体的标题化合物(7)(80mg，14％)。TLC(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇∶氨水，250∶40∶4)Rf＝0.31(UV检测和碘铂酸钾)。LC100％。MS(m/z)490.2，491.2(M+H)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.20(1H，d，J＝7Hz)，8.12(1H，s)，8.07(1H，d，J＝7Hz)，7.85(1H，t，J＝7Hz)，6.56(2H，s)，4.45(1H，m)，4.00-3.05(5H，m)，2.65(2H，m)，2.30和2.22(3H，2s)，1.73-1.48(5H，m)，1.35(2H，m)，0.95(1H，m)，0.85(6H，m)，0.45(2H，m)，0.25(2H，m)。
d)(2S)N-环戊基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺延胡索酸盐(8)用方法A、Mitsunobu条件用环戊醇将甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]丁基}-氨基甲酸叔丁酯(3)(1.0g，1.87mmol)烷基化。用己烷∶乙酸乙酯(3∶1)将产物进行色谱得到BOC保护的物质(150mg)。在40℃用三氟乙酸(4mL)处理该物质20分钟。用方法A的条件处理反应混合物，然后用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(200∶40∶4)进行色谱得到游离碱(106mg)。将该碱转化为延胡索酸盐得到呈白色固体的标题化合物(8)(100mg，18％)。LC100％。MS(m/z)504.3，505.4(M+H)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.16(1H，d，J＝7.5Hz)，8.07(2H，m)，7.86(1H，t，J＝7.5Hz)，6.57(2H，s)，4.45(1H，m)，4.08-3.86(4H，m)，3.57(1H，m)，3.15(1H，m)，2.67(1H，m)，2.36和2.30(3H，2s)，1.95(2H，m)，1.75-1.35(14H，m)，0.90(6H，m)。
e)(2S)N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-N-(四氢呋喃-3-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺延胡索酸盐(9)用方法A、Mitsunobu条件，用3-羟基-四氢呋喃将甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]丁基}-氨基甲酸叔丁酯(3)(1.0g，1.87mmol)烷基化。用己烷∶乙酸乙酯(2∶1)将反应混合物进行色谱得到受BOC保护的物质(75mg)，TLC SiO2(己烷∶乙酸乙酯2∶1，Rf＝0.31)，UV检测。在40℃用三氟乙酸(4mL)搅拌该物质20分钟。处理该混合物并进行色谱(方法A)，得到游离碱(46mg)。将该碱转化为延胡索酸盐得到呈白色固体的标题化合物(9)(48mg，8％)。LC100％。MS506.2，507.3(M+H)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.17(1H，d，J＝7.5Hz)，8.08(2H，m)，7.87(1H，t，J＝7.5Hz)，6.53(2H，s)，4.45(2H，m)，3.93(2H，m)，3.78-3.50(6H，m)，2.38和2.30(3H，2s)，2.13-1.83(4H，m)，1.80-1.57(3H，m)，1.33(2H，m)，1.88(6H，m)。
f)(2S)2-[[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-(3-三氟甲基苯磺酰基)氨基]乙酰胺盐酸盐(10)用方法B的条件，用2-溴乙酰胺将甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]丁基}氨基甲酸叔丁酯(3)(1.0g，1.87mmol)烷基化。用三氟乙酸除去BOC保护基，产物在快速硅胶上进行色谱并用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(250∶40∶4)洗脱得到游离碱。将该碱转化为盐酸盐得到呈白色固体的标题化合物(10)(170mg，30％)。TLC(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇∶氨水，250∶40∶4)Rf＝0.22；UV检测，Dragendorff’s试剂。LC100％。MS(m/z)493.2，494.2(M+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的混合物)δ9.6-8.9(2H，bs)，8.32(1H，s)，8.22(1H，d，J＝8.8Hz)，7.85(1H，d，J＝8.8Hz)，7.70(1H，t，J＝8.8Hz)，7.30(1H，bs)，6.90(1H，bs)，4.60(1H，bd，J＝13Hz)，4.25(3H，m)，4.05-3.8(2H，m)，3.06(1H，t，J＝13Hz)，2.75(3H，s)，2.53(1H，t，J＝13Hz)，2.20(1H，m)，1.95-1.65(6H，m)，0.93(6H，m)。
g)(2S)N-(2-羟乙基)-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺盐酸盐(11)用方法B的条件，用2-溴乙醇将甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基苯磺酰基氨基)-哌啶-1-羰基]丁基}氨基甲酸叔丁酯(3)(1.0g，1.87mmol)烷基化。用三氟乙酸除去BOC保护基，产物在快速硅胶上进行色谱并用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(250∶40∶4)洗脱得到游离碱。将该碱转化为盐酸盐，得到呈白色固体的标题化合物(11)(65mg，11％)。TLC(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇∶氨水，250∶40∶4)Rf＝0.26；UV检测；Dragendorff’s试剂。LC100％。MS(m/z)480.2(M+H)，502.2(M+Na)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的混合物)δ9.90(1H，bs)，9.35(1H，bs)，8.13(1H，s)，8.06(1H，d，J＝9.0Hz)，7.84(1H，d，J＝9.0Hz)，7.70(1H，t，J＝9.0Hz)，4.61(1H，m)，4.10-3.70(6H，m)，3.45(2H，m)，3.30-3.05(2H，m)，2.75-2.40(7H，m)，1.95-1.45(6H，m)，0.97(6H，m)。
h)(2S)N-(2-甲磺酰基氨基乙基)-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺延胡索酸盐)(12)用方法B的条件，用N-(2-溴乙基)-甲磺酰胺将甲基-{3-甲基-1-[4-(3-三氟甲基-苯磺酰基氨基)哌啶-1-羰基]丁基}氨基甲酸叔丁酯(3)(1.0g，1.87mmol)烷基化。用三氟乙酸除去BOC保护基，产物在快速硅胶上进行色谱并用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(250∶40∶4)洗脱得到游离碱。将该碱转化为延胡索酸盐得到呈白色固体的标题化合物(12)(190mg，30％)。TLC(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇∶氨水，250∶40∶4)Rf＝031；UV检测；Dragendorff’s试剂。LC100％。MS(m/z)557.3，558.3(M+H)，579.2(M+Na)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)(旋转异构体的混合物)δ8.22(1H，d，J＝10Hz)，8.15(1H，s)，8.10(1H，d，J＝10Hz)，7.89(1H，t，J＝10Hz)，7.24(1H，m)，6.55(2H，s)，4.44(1H，d，J＝12Hz)，4.02-3.75(6H，m)，2.91(3H，s)，2.70-2.55(2H，m)，2.25(3H，2s)，1.75-1.28(7H，m)，0.86(6H，m)。
实施例3N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(14) a)N-(1-苄基哌啶-4-基)-N-环丙基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(13)取N-苄基-4-环丙基氨基哌啶(5.0g，21.71mmol)和三乙胺(3.6mL，26.05mmol)溶解于二氯甲烷(DCM，100mL)。加入3-三氟甲基苯磺酰氯(3.47mL，21.71mmol)，反应混合物搅拌过夜。然后将混合物倾倒入碳酸钾溶液(200mL)中，用醚(2×200mL)萃取，干燥(MgSO4)，和真空浓缩，得到呈黄色胶状的粗产物，其通过在硅胶(己烷/EtOAc，2∶1)上进行柱色谱来纯化。得到呈淡黄色胶状的标题化合物13(9g，95％收率)。Rf＝0.42(UV检测)。
b)N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(14)取N-(1-苄基哌啶-4-基)-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(13)(9.0g，20.52mmol)溶解于乙醇(100mL)中。向混合物中加入水(10mL)，然后加入甲酸铵(12.94g，205.20mmol)和10％钯/碳(1.0g)。在回流下加热混合物2小时。冷却混合物并通过硅藻土过滤。真空浓缩滤液，得到无色残留物，然后在乙酸乙酯(250mL)和碳酸钾溶液(250mL)之间分配。分离有机相，干燥(MgSO4)，浓缩得到白色固体，用己烷(100mL)弄碎得到呈白色固体的期望产物14(6.0g，84％收率)。LC100％。1H NMR(CDCl3)δ8.15(1H，s)，8.07(1H，d，J＝7.9Hz)，7.85(1H，d，J＝7.9Hz)，7.69(1H，t，J＝7.9Hz)，3.95(1H，tt，J＝8.0，3.8Hz)，3.10(2H，dd，J＝12.2，3.8Hz)，2.62(2H，dt，J＝10.0，2.2Hz)，1.98(1H，m)，1.83(2H，dq，J＝12.2，4.1Hz)，1.62-1.50(4H，m)，1.00(2H，m)，0.78(2H，m)。MSm/z＝349.2，350.2(M+H)。TLC(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇∶氨水，250∶10∶1)Rf＝0.30。
实施例4N-环丙基-N-[1-(萘-2-基甲基)哌啶-4-基]-苯磺酰胺(15)
取N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺(56mg，0.2mmol)溶解于DMF(2.5ml)中，并加入三乙胺(75μL，54mg，0.54mmol)，然后加入2-溴甲基-萘(88mg，0.4mmol)。反应混合物在80℃下搅拌12小时，然后蒸发溶剂。通过快速色谱纯化产物，得到12.8mg期望产物N-环丙基-N-[1-(萘-2-基甲基)-哌啶-4-基]苯磺酰胺(15)。1H NMR(CDCl3)δ8.06-7.71(m，7H)，7.61-7.44(m，5H)，3.94-3.84(m，1H)，3.68(S，2H)，3.01-2.94(m，2H)，2.18-1.94(m，5H)，1.58-1.49(m，2H)，1.02-0.96(m，2H)，0.81-0.74(m，2H)。MS(EI)m/z 421(M+H+)。
实施例5N-环丙基-N-[1-(4-苯基苄基)哌啶-4-基]-苯磺酰胺(16) 取N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺(56mg，0.2mmol)溶解于DMF(2.5ml)中，并加入三乙胺(75μL，54mg，0.54mmol)，然后加入4-氯甲基-联苯(81mg，0.4mmol)。反应混合物在80℃下搅拌12小时，然后蒸发溶剂。通过快速色谱纯化产物，得到16.4mg期望产物N-环丙基-N-[1-(4-苯基苄基)哌啶-4-基]苯磺酰胺(16)。1H NMR(CDCl3)δ7.92-7.85(m，1H)，7.63-7.31(m，9H)，7.30-7.25(m，4H)，3.93-3.83(m，1H)，3.54(s，2H)，3.00-2.89(m，2H)，2.14-1.89(m，5H)，1.66-1.49(m，2H+H2O)，1.04-0.97(m，2H)，0.81-0.72(m，2H)。LC98％。MS(EI)m/z 447(M+H+)。
实施例6N-环丙基-N-[1-(4-异丙基苄基)哌啶-4-基]-苯磺酰胺(17) 取N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺(100mg，0.36mmol)溶解于DMF(2.5mL)中，并加入三乙胺(75μL，54mg，0.54mmol)，然后加入1-溴甲基-4-异丙基苯(83.5mg，0.39mmol)。反应混合物在80℃下搅拌12小时，然后蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物，得到29mg呈黄色油状的标题化合物17。1H NMR(CDCl3)δ7.88-7.83(m，2H)，7.59-7.47(m，3H)，7.21-7.14(m，4H)，3.89-3.78(m，1H)，3.45(s，2H)，2.95-2.88(m，3H)，2.03-1.84(m，5H)，1.51-1.44(m，m，2H)，1.23(d，6H，J＝7.01Hz)，1.01-0.93(m，2H)，0.79-0.69(m，2H)。LC100％。MS(EI)m/z 413(M+H+)。
类似地，从N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺和1-溴甲基-4-二甲基氨基苯来制备N-环丙基-N-[1-(4-二甲基氨基苄基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺。
同样，从N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺和1-溴甲基-4-叔丁基苯来制备N-环丙基-N-[1-(4-叔丁基苄基)哌啶-4-基]-苯磺酰胺。LC100％，MSm/z＝427.2，428.3(M+H+)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(2H，m)，7.56(1H，m)，7.50(2H，m)，7.32(2H，d，J＝8.4Hz)，7.19(2H，d，J＝8.4Hz)，3.85(1H，m)，3.44(2H，s)，2.89(1H，s)，2.87(1H，s)，1.97(5H，m)，1.59(4H，s)，1.49(1H，s)，1.47(1H，s)，1.32(9H，s)，0.97(2H，m)，0.75(2H，m)。
实施例7N-环丙基-N-[1-(3-三氟甲基-4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(18) 取N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺(200mg，0.57mmol)溶解于DMF(4mL)中，并加入三乙胺(200μL，1.43mmol)，然后加入4-溴甲基-1-甲氧基-2-三氟甲基-苯(154mg，0.57mmol)。反应混合物在80℃下搅拌12小时，然后蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物，得到244mg呈黄色固体的标题化合物18。1H NMR(CDCl3)68.14-8.11(m，1H)，8.07-8.03(m，1H)，7.86-7.80(m，1H)，7.70-7.64(m，1H)，7.50-7.47(m，1H)，7.42-7.37(m，1H)，6.96-6.91(m，1H)，3.93-3.79(m，4H)，3.42(s，2H)，2.91-2.80(m，2H)，2.03-1.85(m，m，5H)，1.53-1.44(m，2H)，1.02-0.96(m，2H)，0.83-0.76(m，2H)。LC100％。MS(EI)m/z 537(M+H+)。
类似地，由N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺制备N-环丙基-N-[1-(3-三氟甲基-4-甲氧基苄基)-哌啶-4-基]苯磺酰胺。LC98％。MSm/z＝469.2，470.1(M+H+)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.86(2H，m)，7.57(1H，m)，7.49(3H，m)，7.39(1H，d，J＝8.4Hz)，6.93(1H，d，J＝8.4Hz)，3.89(3H，s)，3.84(1H，m)，3.42(2H，s)，2.84(1H，s)，2.82(1H，s)，1.95(5H，m)，1.59(2H，s)，1.51(1H，s)，1.48(1H，s)，0.97(2H，m)，0.75(2H，m)。
根据上述方法，由4-溴甲基-1-甲氧基-2-甲基苯制备N-环丙基-N-[1-(3-甲基-4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC99.6％。MSm/z＝483.1，484.2(M+H+)，485.1(M+2H+)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.12(1H，s)，8.04 1H，d，J＝7.6Hz)，7.82(1H，d，J＝6.8Hz)，7.66(1H，m)，7.05(2H，m)，6.75(1H，m)，3.83(1H，m)，3.81 3H，m)，3.39(2H，s)，2.88(2H，m)，2.20(3H，s)，1.96(5H，m)，1.57(2H，s)，1.49(2H，s)，0.98(2H，m)，0.78(2H，m)。
根据上述方法，由4-溴甲基-1-甲氧基-2-甲基苯和N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺来制备N-环丙基-N-[1-(3-甲基-4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝415.2，416.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.82(2H，d，J＝8.0Hz)，7.60(1H，m)，7.52(2H，m)，7.29(1H，m)，7.21(1H，s)，6.85(1H，d，J＝8.8Hz)，4.13(2H，s)，4.05(1H，s)，3.85(3H，s)，3.54(2H，m)，2.63(4H，m)，2.22(3H，s)，1.75(3H，m)，0.93(2H，m)，0.86(2H，m)。
实施例8N-环丙基-N-[1-(3-吡啶基甲基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(19) 向N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(150mg，0.43mmol)和吡啶-3-甲醛(46mg，0.43mmol)的二氯乙烷溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(128mg，0.60mmol，1.4当量)。反应混合物在室温下搅拌12小时。在此之后，倒出溶液，并通过快速色谱纯化，得到呈黄色油状的标题化合物19。1H NMR(CDCl3)δ8.55-8.48(m，2H)，8.15-8.11(m，1H)，8.08-8.02(m，1H)，7.87-7.81(m，1H)，7.71-7.59(m，1H)，7.25-7.20(m，1H)，3.92-3.81(m，1H)，3.48(s，2H)，2.91-2.81(m，2H)，2.10-1.87(m，5H)，1.56-1.45(m，2H)，1.01-0.94(m，m，2H)，0.82-0.74(m，2H)。LC100％。MS(EI)m/z 440(M+H+)。
类似地，由喹啉-4-甲醛来制备N-环丙基-N-[1-(4-喹啉基甲基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝490.2，491.1(M+H+)，492.1 M+2H+)。1H NMR(400MHz，CDCl3)68.85(1H，d，J＝4Hz)，8.13(3H，m)，8.06(1H，d，J＝7.6Hz)，7.83(1H，d，J＝7.2Hz)，7.70(2H，m)，7.56(1H，m)，7.41(1H，d，J＝4Hz)，3.90(3H，m)，2.97(1H，s)，2.94(1H，s)，2.17(2H，t，J＝11Hz)，1.98(3H，m)，1.56(4H，m)，0.98(2H，m)，0.80(2H，m)。
实施例9N-环丙基-N-[1-(4-甲氧基苄基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(20) 取N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(150mg，0.43mmol)溶解于DMF(3mL)中并加入三乙胺(150μL，1.07mmol，2.5当量)，然后加入1-氯甲基-4-甲氧基苯(58mg，0.43mmol)。反应混合物在80℃下搅拌12小时，然后蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物，得到244mg呈黄色油状的标题化合物201H NMR(CDCl3)δ8.15-8.10(m，1H)，8.07-8.01(m，1H)，7.85-7.80(m，1H)，7.67-7.62(m，1H)，7.23-7.15(m，2H)，6.87-6.82(m，2H)，3.91-3.76(m，4H)，3.42(s，2H)，2.93-2.88(m，2H)，2.03-1.87(m，5H)，1.52-1.43(m，2H)，1.01-0.94(m，2H)，0.81-0.73(m，2H)。LC100％。MS(EI)m/z469(M+H+)。
实施例10(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(21) 在氩气中和室温下，在15分钟里向在二氯甲烷(20mL)中的N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺(1.0g，2.9mmol)、BOC-L-Meleu-OH(0.72g，2.9mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(HOBt，50mg，0.37mmol)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP，20mg，0.16mmol)的混合物中加入1，3-二异丙基碳二亚胺(DIC，0.44mL，2.9mmol)。反应混合物在室温下振荡8小时。冷却反应混合物至0℃，过滤除去固体。用NaOH水溶液(2N，15mL)洗涤有机层。真空除去溶剂，通过柱(硅胶，EtOAc/己烷3/7)纯化残留物得到呈粘性无色油状的中间体(1-{4-[环丙基-(3-三氟甲基-苯磺酰基)氨基]哌啶-1-羰基}-3-甲基丁基)甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.3g，78％)。在0℃用三氟乙酸(1.5mL)处理该粘性油的二氯甲烷(10mL)液2.5小时，然后真空除去溶剂。将残留物溶解于二氯甲烷(20mL)，用2N NaOH溶液中和，用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤，真空浓缩得到作为游离碱的期望产物(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基-苯磺酰胺(21)(无色油状，0.9g，90％)。
将该游离碱溶解于1，4-二噁烷中，然后用HCl(4N在1，4-二噁烷中，1.5mL)处理。用乙醚(20mL)弄碎所得混合物，过滤收集沉淀物。用乙醚(2×5mL)洗涤，并真空干燥12小时，得到呈HCl-盐形式的期望产物(白色固体，0.9g，93％)。1H NMR(HCl-盐，CD3OD)δ8.21(d，1H，J＝8.1Hz)，8.19(s，1H)，8.04(d，1H，J＝8.3Hz)，7.87(dd，1H，J＝7.9 & 8.0Hz)，4.61-4.64(m，1H)，4.44-4.49(m，1H)，4.16-4.24(m，1H)，3.92-3.98(m，1H)，3.22-3.28(m，1H)，2.72-2.8(m，1H)，2.68(s，1.7H，NHCH3)，2.72(s，1.3H，NHCH3)，1.64-2.12(m，8H)，1.02-1.08(m，6H)，0.92-0.94(m，2H)，0.78-0.82(m，2H)。MS(e/z)476(m+1)。
类似地，用BOC-D-Meleu-OH作为起始物质制备(2R)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝476(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ8.14(bs，1H)，8.06(bd，1H，J＝8.11Hz)，7.85(bt，1H，J＝8.33Hz)，7.71(bt，1H，J＝7.67Hz)，4.82-4.72(m，1H)，4.17-3.94(m，2H)，3.34-3.37(m，1H)，3.14-2.98(m，1H)，2.62-2.47(m，1H)，2.28(d，3H，J＝10.08Hz)，2.01-1.94(m，1H)，1.90-1.71(m，4H)，1.48-1.19(m，2H)，1.01-0.70(m，10H)。
根据上述方法，用N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-二氟甲氧基苯磺酰胺作为起始物质制备(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-二氟甲氧基苯磺酰胺，其中所述起始物质可以根据实施例3所述的方法来制备。LC100％。MSm/z＝474(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ7.76-7.71(m，1H)，7.67-7.64(m，1H)，7.59-7.54(m，1H)，7.40-7.35(m，1H)，6.61(t，1H，J＝7.8Hz)，4.79-4.71(m，1H)，4.15-3.92(m，2)，3.46-3.37(m，1H)，3.15-2.96(m，1H)，2.63-2.47(m，1H)，2.29(d，3H，J＝10.74Hz)，2.03-1.94(m，2H)，1.88-1.69(m，4H)，1.67-1.56(m，1H)，1.48-1.19(m，2H)，1.04-0.84(m，8H+H2O)，0.82-0.70(m，m，2H)。
根据上述方法制备下列的化合物(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-2-氟-5-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝494(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ8.29-8.22(m，1H)，7.92-7.83(m，1H)，7.39-7.33(m，1H)，4.87-4.75(m，1H)，4.33-4.21(m，1H)，4.10-3.95(m，1H)，3.61-3.44(m，1H)，3.22-3.03(m，1H)，2.71-2.55(m，1H)，2.51-2.24(m，6H)，2.23-2.11(m，1H)，2.07-1.69(m，5H)，1.54-1.22(m，2H)，1.01-0.64(m，10H+H2O)；(2S)N-[1-(2-氨基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝448(M+H+)。1H NMR(CD3OD)δ8.24-8.16(m，2H)，8.06-8.00(m，1H)，7.90-7.84(m，1H)，4.66-4.54(m，1H)，4.46-4.36(m，1H)，4.25-4.09(m，1H)，3.99-3.88(m，1H)，3.28-3.16(m，1H)，2.80-2.68(m，1H)，2.14-2.02(m，1H)，2.02-1.59(m，6H)，1.55-1.35(m，2H)，1.06-0.97(m，3H)，0.96-0.87(m，2H)，0.84-0.74(m，2H)；(2S)N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝462(M+H+)。1H NMR(CD3OD)δ8.24-8.16(m，2H)，8.07-8.01(m，1H)，7.91-7.84(m，1H)，4.68-4.58(m，1H)，4.49-4.38(m，1H)，4.24-4.12(m，1H)，4.00-3.90(m，1H)，3.30-3.18(m，1H)，2.87-2.70(m，1H)，2.66(d，3H，J＝11.4Hz)，2.14-2.04(m，1H)，2.02-1.60(m，6H)，1.56-1.28(m，2H)，1.07-0.96(m，3H)，0.96-0.89(m，2H)，0.84-0.76(m，2H)；(2S)N-[1-(2-氨基-3-二甲基丁酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝462(M+H+)。1H NMR(CD3OD)δ8.23-8.14(m，2H)，8.05-7.99(m，1H)，7.90-7.83(m，1H)，4.71-4.61(m，1H)，4.33-4.24(m 1H)，4.22-4.09(m，1H)，3.27-3.11(m，2H)，2.81-2.64(m，1H)，2.11-2.02(m，1H)，2.01-1.78(m，2H)，1.77-1.61(m，2H)，1.16-1.04(m，9H)，0.99-0.86(m，2H)，0.84-0.77(m，2H)；(2S)N-[1-(2-氨基-2-环己基乙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝488.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.40(2H，m)，8.19(1H，m)，7.87(1H，t，J＝7.5Hz)，4.61(1H，d，J＝11.5Hz)，4.23(1H，m)，4.17(1H，m)，3.22(1H，m)，2.75(1H，q，J＝11.5Hz)，2.11(1H，m)，1.61-1.98(10H，m)，1.03-1.39(5H，m)，0.92(2H，m)，0.79(2H，m)；(2R)N-[1-(2-氨基-2-环己基乙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝488.1，489.1(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.20(2H，m)，7.99(1H，d，J＝12Hz)，7.87(1H，t，J＝7.5Hz)，4.62(1H，d，J＝7.5Hz)，4.28(1H，m)，4.18(1H，m)，3.98(1H，m)，3.19(1H，m)，2.76(1H，m)，2.06(1H，m)，1.75(10H，m)，1.21(5H，m)，0.92(2H，m)，0.80(2H，m)；和(2S)N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-2-苯基乙酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝496.2，497.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.07(3H，m)，7.82(1H，m)，7.53(5H，m)，5.44(1H，m)，4.63(1H，d，J＝7.5Hz)，4.02(1H，m)，3.82(1H，m)，3.12(1H，m)，2.67(4H，m)，1.73(4H，m)，0.58(5H，m)。
实施例11(2S)N-环丙基-N-[1-(3-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(22) N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(100mg，0.29mmol)、BOC-L-MeIle-OH(70g，0.29mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(HOBt，39mg，0.29mmol)、盐酸1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI，55mg，0.29mmol)、和DMF(5mL)的混合物在室温下振荡2小时。将反应混合物倾倒入20mL乙酸乙酯中，用5mL 2N HCl溶液、饱和NaHCO3(20mL)、水(10mL)、和盐水(10mL)洗涤。真空浓缩有机相，并用柱(硅胶，EtOAc/己烷1/1)纯化，得到呈无色油状的中间体(1-{4-[环丙基-(3-三氟甲基苯磺酰基)氨基]-哌啶-1-羰基}-2-甲基丁基)甲基氨基甲酸叔丁酯。
将该中间体溶解于1，4-二噁烷(3mL)中，然后在室温下用HCl溶液(4N，在1，4-二噁烷中，2mL)处理4小时。用乙醚(20mL)弄碎反应混合物，过滤收集沉淀物，用乙醚(2×5mL)洗涤，并真空干燥12小时，得到呈HCl-盐形式的期望物质(2S)N-环丙基-N-[1-(3-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(22)(白色固体，80mg，收率54％)。1HNMR(HCl-盐，CD3OD)δ8.22(d，1H，J＝7.7Hz)，8.17(s，1H)，8.04(d，1H，J＝8.1Hz)，7.87(dd，1H，J＝7.7 & 8.3Hz)，4.62-4.68(m，1H)，4.3-4.38(m，1H)，4.14-4.22(m，1H)，3.94-4.02(m，1H)，3.22-3.29(m，1H)，2.74-2.82(m，1H)，2.65(s，1.7H，NHCH3)，2.62(s，1.3H，NHCH3)，1.6-2.1(m，7H)，0.98-1.2(m，7H)，0.88-0.94(m，2H)，0.78-0.82(m，2H)。LC100％。MS(e/z)476(m+1)。
实施例12N-[1-(2-氨基-3-间甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(23)取N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(400mg，1.15mmol)、2-叔丁氧基羰基氨基-3-间甲苯基-丙酸(334mg，1.2mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(HOBt，50mg，0.37mmol)、盐酸1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI，218mg，1.15mmol)、和DMF(5mL)的混合物在室温下振荡8小时。将反应混合物倾倒入20mL乙酸乙酯中，用5mL的2NHCl溶液、饱和NaHCO3(20mL)、水(10mL)、和盐水(10mL)洗涤。真空浓缩有机层，并通过柱(硅胶，EtOAc/己烷1/1)纯化得到呈无色油状的中间体[2-{4-[环丙基-(3-三氟甲基苯磺酰基)-氨基]哌啶-1-基}-1-(3-甲基苄基)-2-氧-乙基]氨基甲酸叔丁酯(600mg，收率85％)。
将该中间体溶解于1，4-二噁烷(5mL)中，然后在室温下用HCl溶液(4N，在1，4-二噁烷中，2mL)处理4小时。用乙醚(20mL)弄碎反应混合物，过滤收集沉淀物，用乙醚(2×5mL)洗涤，并真空干燥12小时，得到呈HCl-盐形式的标题化合物23(白色固体，400mg，收率70％)。LC98％。1HNMR(DMSO d6)δ8.31(bs，3H)，8.12(m，2H)，8.06(s，1H)，7.89(m，1H)，7.11(cm，4H)，4.58(m，1H)，4.40(m，1H)，3.91(m，1H)，3.07(m，1H)，2.88(m，1.5H)，2.36(m，0.5H)，2.26(d，3H)，1.79-1.99(m，1H)，1.43-1.71(m，2.5H)，1.28(m，1H)，0.92(d，0.5H)，0.74(d，4H)，0.15(q，0.5H)。MS(e/z)510(m+1)。
类似地制备下列化合物N-{1-[2-氨基-3-(4-氟苯基)丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝514.2，515.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.17(6H，m)，7.91(1H，t，J＝7.5Hz)，7.23(4H，m)，4.64(1H，m)，4.38(1H，m)，4.02(1H，m)，3.73(1H，m)，2.95(3H，m)，1.19-1.98(4.5H，m)，0.77(4.5H，m)；N-[1-(2-氨基-3-邻甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝589.2，590.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.15(6H，m)，7.91(1H，t，J＝7.5Hz)，7.15(4H，m)，4.62(1H，m)，4.38(1H，m)，4.00(1H，m)，3.69(1H，m)，2.95(3H，m)，2.19(3H，m)，1.10-2.01(4.5H，m)，0.76(4H，m)，0.56(0.5H，m)；和N-{1-[2-氨基-3-(4-叔丁基苯基)丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝552.3，553.3(M+H+)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(6H，m)，7.90(1H，m)，7.32(2H，m)，7.19(1H，d，J＝7.5 Hz)，7.10(1H，d，J＝7.5Hz)，4.61(1H，m)，4.43(1H，m)，3.89-4.01(1H，m)，3.62(1H，m)，2.92(3H，m)，1.54-2.02(3H，m)，1.15(11H，m)，0.75(4H，m)。
实施例13N-{1-[2-氨基-3-(4-氰基苯基)丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(24)取N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(400mg，1.15mmol)、2-叔丁氧基羰基氨基-3-(4-氰基苯基)丙酸(320mg，1.2mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(HOBt，50mg，0.37mmol)、盐酸1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI，218mg，1.15mmol)、和DMF(5mL)的混合物在室温下振荡8小时。然后将反应混合物倾倒入20mL乙酸乙酯中，用5mL2N HCl溶液、饱和NaHCO3(20mL)、水(10mL)、和盐水(10mL)洗涤。真空浓缩有机层，并通过柱(硅胶，EtOAc/己烷1/1)纯化得到呈无色油状的中间体(1-(4-氰基苄基)-2-{4-[环丙基-(3-三氟甲基苯磺酰基)氨基]哌啶-1-基}-2-氧-乙基)氨基甲酸叔丁酯。
将该中间体溶解于1，4-二噁烷(5mL)中，然后在室温下用HCl溶液(4N，在1，4-二噁烷中，2mL)处理4小时。用乙醚(20mL)弄碎反应混合物，过滤收集沉淀物，用乙醚(2×5mL)洗涤，并真空干燥12小时，得到呈HCl-盐形式的标题化合物24(白色固体，400mg，收率67％)。1H NMR(HCl-盐，DMSO-d6)δ8.28-8.36(br，3H，NH2.HCl)，8.18(dd，J＝8.1 & 8.7Hz)，8.13(d，1H，J＝8.3Hz)，8.11(s，1H)，7.92(dd，1H，J＝7.8 & 7.9Hz)，7.83(d，1H，J＝8.3Hz)，7.81(d，1H，J＝8.3Hz)，7.46(d，1H，J＝8.1Hz)，7.41(d，1H，J＝8.3Hz)，4.68-4.76(m，1H)，4.34-4.39(m，1H)，4.02-4.08(m，1H)，3.74-3.78(m，1H)，2.98-3.18(m，2.5H)，2.56-2.66(m，2H)，1.96-1.99(m，0.5H)，1.25-1.86(m，4H)，0.73-0.83(m，4H)。LC100％。MS(e/z)521(m+1)。
实施例14(2S)N-环丙基-N-[1-(2-二甲基氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(25) 取(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(见实施例10，323mg，0.7mmol)、甲醇(4mL)、低聚甲醛(50mg，1.0mmol)、NaBH3(CN)(132mg，2mmol)、和乙酸(0.01mL)在室温下振荡20小时。真空除去溶剂。将残留物溶解于二氯甲烷(15mL)中，并用饱和的K2CO3(5mL)水溶液处理。分离有机层，用盐水洗涤，真空浓缩，通过柱(硅胶，EtOAc/己烷3/7)纯化得到呈白色固体的标题化合物(2S)N-环丙基-N-[1-(2-二甲基氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基-苯磺酰胺(30mg，收率10％)。1H NMR(CDCl3)δ8.14(s，1H)，8.08(d，1H，J＝7.9Hz)，7.87(d，1H，J＝7.7Hz)，7.7(dd，1H，J＝7.7 & 8.1Hz)，4.7-4.76(m，1H)，4.18-4.24(m，1H)，4.06-4.12(m，1H)，3.34-3.4(m，1H)，2.94-3.06(m，1H)，2.44-2.54(m，1H)，2.26(br，6H)，1.35-1.98(m，8H)，0.94-1.02(m，2H)，0.86-0.95(m，6H)，0.74-0.78(m，2H)。LC100％。MS(e/z)，490(m+1)。
类似地，从(2R)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(见实施例10)来制备(2R)N-环丙基-N-[1-(2-二甲基氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝490.2，491.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.13(1H，s)，8.06(1H，d，J＝7.7Hz)，7.86(1H，d，J＝7.9Hz)，7.69(1H，t，J＝7.9Hz)，4.77-4.68(1H，m)，4.23(1H，m)，4.09(1H，m)，3.36(1H，m)，3.08-2.92(1H，m)，2.57-2.43(1H，m)，2.25(6H，s)，1.95(2H，m)，1.77(3H，m)，1.60(1H，m)，1.45(1H，m)，1.39-1.23(1H，m)，1.01-0.81(8H，m)，0.74(2H，m)。
实施例15(2S)N-{1-[3-(4-氰基苯基)-2-甲基氨基丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(26) 在室温下用NaH(67mg，60％矿物油，1.8mmol)将N-{1-[2-氨基-3-(4-氰基苯基)丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(见实施例13，300mg，0.58mmol)、MeI(830mg，5.9mmol)、和DMF(5mL)的混合物处理20小时。用乙酸乙酯(20mL)稀释反应混合物，并用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤。蒸发有机层，用柱(硅胶，EtOAc/己烷1/1)纯化残留物得到呈游离碱形式的标题化合物N-{1-[3-(4-氰基苯基)-2-甲基氨基-丙酰基]哌啶-4-基}-N-环丙基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(26)，将其溶解于1，4-二噁烷(4mL)中，并用HCl溶液(4N，在1，4-二噁烷中，1mL)处理。用乙醚(10mL)弄碎所得混合物，过滤收集沉淀物，用乙醚(2×5mL)洗涤，并真空干燥12小时，得到呈HCl-盐形式的标题化合物26(白色固体，0.2g，收率65％)。1H NMR(HCl-盐，CD3OD)δ8.12-8.19(m，2H)，8.03(d，1H，J＝9.2Hz)，7.86(dd，1H，J＝7.7 & 7.8Hz)，7.77(dd，2H，J＝4.3 & 8.1Hz)，7.49(dd，2H，J＝1.9 & 8.3Hz)，4.76-4.79(m，1H)，4.52-4.59(m，1H)，3.96-4.06(m，1H)，3.6-3.7(m，1H)，3.34-3.38(m，1H)，3.06-3.14(m，2H)，2.68-2.72(m，3H，NCH3)，2.34-2.65(m，2H)，1.52-2.02(m，4H)，0.62-0.92(m，4H)。LC100％。MS(e/z)535(m+1)。
类似地制备下列化合物N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-3-邻甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝524.3，525.3(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.11(2H，m)，8.00(1H，m)，7.83(1H，m)，7.28-7.11(2H，m)，7.09-6.96(2H，m)，4.68(1H，m)，4.59-4.49(1H，m)，3.93(1H，m)，3.68-3.49(1H，m)，3.21(1H，m)，2.94(1H，m)，2.72-2.58(4H，m)，2.51-2.07(4H，m)，2.03-1.73(2H，m)，1.65-1.39(2H，m)，1.27-0.40(5H，m)；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-3-间甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝524.3，525.3(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.07(2H，m)，7.97(1H，m)，7.81(1H，m)，7.26-7.05(4H，m)，4.66-4.49(2H，m)，3.91-3.76(1H，m)，3.40-3.20(2H，m)，3.12-2.88(2H，m)，2.73(3H，d)，2.64-2.54(1H，t)，2.34-2.28(3H，s)，2.00-1.91(1H，m)，1.82-1.64(2H，m)，1.61-1.31(2H，m)，1.10-1.01(1H，m)，0.87-0.65(4H，m)；N-环丙基-N-{1-[3-(4-氟苯基)-2-甲基氨基丙酰基]-哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝528.2，529.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.09(2H，m)，7.98(1H，d，J＝7.5Hz)，7.81(1H，t，J＝7.9Hz)，7.28(1H，m)，7.20(1H，m)，7.80(2H，m)，4.69-4.63(1H，m)，4.53(1H，d)，4.02-3.88(1H，m)，3.67-3.52(1H，m)，3.28-2.93(3H，m)，2.71-2.57(4H，m)，2.55-2.23(1H，m)，2.03-1.73(2H，m)，1.65-1.41(2H，m)，1.33-0.51(5H，m)；N-环丙基-N-{1-[3-(4-叔丁基苯基)-2-甲基氨基-丙酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝566.2，567.3(M+H+)。1HNMR(400MHz，MeOD)δ8.10(2H，m)，8.00(1H，d)，7.82(1H，t)，7.40(2H，m)，7.23(1H，d)，7.13(1H，d)，4.60-4.40(2H，m)，3.97-3.72(1H，m)，3.46(1H，t)，3.09(1H，m)，3.01-2.31(6H，m)，2.01-1.87(1H，m)，1.78-1.57(2H，m)，1.57-0.57(16H，m)；和(2S)N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-3-苯基丙酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝510(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ8.12(1H，s)，8.09(1H，d)，7.98(1H，d)，7.82(1H，m)，7.36(2H，m)，7.21(2H，m)，7.15(1H，t)，4.69(1H，t)，4.53(1H，d)，3.92(1H，m)，3.60(2H，d)，3.33(1H，d)，2.99(1H，m)，2.68(3H，d)，2.30(1H，m)，2.02(1H，m)，1.86(1H，m)，1.64(2H，m)，1.21(1H，m)，0.78(4H，m)，0.60(1H，m)。
实施例16N-[1-(4-丁氧基苯磺酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基苯磺酰胺(27)
取143mg(0.513mmol)的N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺(购自Lancaster)和128mg(0.513mmol)的4-丁氧基苯磺酰氯(购自MatrixScientific)分别溶解于5mL二氯甲烷(DCM)中，然后合并。通过注射器向该混合物中加入1.5当量的二异丙基乙胺(DIEA)(0.134mL)。混合物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩。通过硅胶柱和在己烷中的0％到20％EtOAc梯度洗脱来纯化所得产物27，浓缩该纯净物(收率24％，白色固体)。1H NMR(CDCl3)δ7.813-7.783(m，2H)，7.673-7.636(m，2H)，7.597-7.553(m，1H)，7.520-7.475(m，2H)，7.011-6.974(m，2H)，4.053-4.020(t，2H)，3.821-3.721(m，3H)，2.266-2.200(t，2H)，2.033-1.902(m，3H)，1.843-1.779(m，2H)，1.601-1.470(m，4H)，1.015-0.978(t，3H)，0.935-0.896(m，2H)，0.761-0.712(m，2H)。LC100％。MS(e/z)494(M+H+)。
实施例17N-环丙基-N-[1-(4-丙基苯磺酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(28)
取150mg(0.434mmol)的N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺(购自Lancaster)和95mg(0.434mmol)的4-丙基苯磺酰氯(购自MatrixScientific)分别溶解于10mL的DCM中，然后合并。通过注射器向该混合物中加入1.5当量的DIEA(0.113mL)。混合物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩。通过硅胶柱和在己烷中的0％到20％EtOAc梯度洗脱来纯化所得产物28，并浓缩该纯净物(收率11％，白色固体)。1H NMR(CDCl3)δ8.053(s，1H)，8.003-7.982(d，1H)，7.852-7.832(d，1H)，7.686-7.630(m，3H)，7.366-7.340(d，2H)，3.868-3.764(m，3H)，2.699-2.660(t，2H)，2.313-2.246(t，2H)，2.071-1.900(m，3H)，1.738-1.587(m，4H)，0.991-0.954(t，3H)，0.936-0.896(m，2H)，0.789-0.739(m，2H)。LC100％。MS(e/z)532(M+H+)。
类似地，从N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺来制备N-环丙基-N-[1-(4-丙基苯磺酰基)哌啶-4-基]苯磺酰胺。同样，根据上述方法，从N-环丙基-N-哌啶-4-基-苯磺酰胺和5-二甲基氨基萘磺酰氯开始制备N-环丙基-N-[1-(5-二甲基氨基萘磺酰基)哌啶-4-基]苯磺酰胺。
实施例18N-[1-(4-丁氧基苯磺酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(29) 取150mg(0.434mmol)的N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺(购自Lancaster)和108mg(0.434mmol)的4-丁氧基苯磺酰氯(购自Matrix Scientific)分别溶解于10mL的DCM中，然后合并。通过注射器向该混合物中加入1.5当量的DIEA(0.113mL)。混合物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩。通过硅胶柱和在己烷中的0％到20％EtOAc梯度洗脱来纯化所得产物29，并浓缩该纯净物(收率25％，白色固体)。1HNMR(CDCl3)δ8.058(s，1H)，8.003-7.983(d，1H)，7.851-7.831(d，1H)，7.688-7.641(m，3H)，7.017-6.980(m，2H)，4.055-4.022(t，2H)，3.843-3.746(m，3H)，2.286-2.226(t，2H)，2.068-1.901(m，3H)，1.843-1.773(m，2H)，1.6151-1.470(m，4H)，1.014-0.976(t，3H)，0.944-0.903(m，2H)，0.793-0.744(m，2H)。LC100％。MS(e/z)562(M+H+)。
实施例19N-环丙基-N-{1-[3-(4-甲基哌嗪基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(31)N-环丙基-N-{1-[3-(哌啶-1-基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(32) a)N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(30)在氮气氛中取N-环丙基-N-(哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(6.0g，17.22mmol)和2-己酸(1.79g，17.22mmol)加入到干燥的THF(100mL)中。向该混合物中加入HOBT(2.79g，20.66mmol)和EDCI(3.69g，20.66mmol)，和三乙胺(7.2mL，51.66mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。将所得混合物在EtOAc和1.0M氯化钠(250mL)之间分配。分离有机层，干燥(MgSO4)，浓缩得到呈胶状的粗产物，通过己烷/醚(2∶1)结晶得到呈白色固体的期望化合物30(7.58g，100％收率)。LC100％。MSm/z＝445.2(M+H)，467.3(M+Na)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的1∶1混合物)δ8.14(1H，s)，8.07(1H，d，J＝7.5Hz)，7.88(1H，d，J＝7.5Hz)，7.70(1H，t，J＝7.5Hz)，6.86(1H，dt，J＝15.0，6.0Hz)，6.32(1H，d，J＝15.0Hz)，4.75(1H，bd，J＝10.7Hz)，4.10(2H，m)，3.06(1H，bt，J＝13.0Hz)，2.56(1H，bt，J＝13.0Hz)，2.20(2H，q，J＝8.9Hz)，1.95(1H，m)，1.90-1.45(7H，m)，1.05-0.85(5H，m)，0.75(2H，m)。
b)N-环丙基-N-{1-[3-(4-甲基哌嗪基)己酰基]-哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(31)取N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(30)(250mg，0.56mmol)和N-甲基哌嗪(1.80g，18mmol)在螺口小瓶中混合在一起，并在金属块上加热至130℃持续3天。冷却该混合物，并真空蒸发，在硅胶(EtOAc/MeOH/NH2OH，100∶10∶1)上通过柱色谱纯化残留物，得到呈白色固体的标题化合物31(120mg，39％收率)。1H NMR(CDCl3)δ8.14(S，1H)，8.06(d，1H)，7.87(d，1H)，7.71(t，1H)，4.71(d，1H)，4.09(t，1H)，3.95(d，1H)，3.07(m，2H)，2.51(m，9H)，2.25(m，3H)，2.16(m，1H)，1.95(m，1H)，1.73(m，4H)，1.35(m，5H)，0.99(m，1H)，0.80(m，6H)。LC100％。MS(M+H+)545。
根据上述方法，N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(30)与哌啶反应，得到呈白色固体的N-环丙基-N-{1-[3-(哌啶-1-基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(32)。1H NMR(CDCl3)δ8.15(S，1H)，8.06(d，1H)，7.87(d，1H)，7.71(t，1H)，4.71(d，1H)，4.09(m，1H)，3.95(d，1H)，3.02(m，2H)，2.39(m，6H)，2.15(m，1H)，1.96(m，1H)，1.80(m，3H)，1.40(m，11H)，0.96(m，1H)，0.80(m，6H)。LC100％。MS(M+H+)530。
实施例20N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)-丁-3-烯酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(33)
根据实施例19步骤a所述的合成N-环丙基-N-(2-己烯酰)哌嗪-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(30)的方法，将N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺和4，4-双(4-氟苯基)-丁-3-烯酸反应，来制备N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)-丁-3-烯酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(33)。1H NMR(CDCl3)δ 8.12(s，1H)，8.03(d，1H)，7.86(d，1H)，7.71(t，1H)，7.15(m，6H)，6.96(m，2H)，6.21(t，1H)，4.68(m，1H)，4.02(m，1H)，3.61(m，1H)，3.15(d，2H)，2.93(m，1H)，2.51(m，1H)，1.93(m，1H)，1.69(m，2H)，1.25(m，1H)，0.90(m，5H)。LC100％。MS(M+H+)605。
类似地，制备下列化合物由N-环丙基-N-(哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺和4-(4-氟苯基)-4-氧-丁酸制备N-环丙基-N-{1-[4-(4-氟苯基)-4-氧丁酰基]-哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝527(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ8.14(1H，s)，8.04(3H，m)，7.87(1H，d)，7.70(1H，t)，7.12(2H，t)，4.68(1H，d)，4.09(2H，m)，3.30(2H，m)，3.09(1H，t)，2.77(2H，m)，2.53(1H，t)，1.85(5H，m)，0.92(2H，m)，0.75(2H，m)；由N-环丙基-N-(哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺和3，3-二苯基丙酸制备N-环丙基-N-[1-(3，3-二苯基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝557(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ8.11(1H，s)，8.02(1H，d)，7.84(1H，d)，7.70(1H，t)，7.23(10H，m)，4.64(2H，m)，3.98(1H，m)，3.85(1H，d)，3.00(2H，m)，2.82(1H，t)，2.37(1H，t)，1.86(1H，m)，1.60(4H，m)，0.91(1H，m)，0.72(3H，m)；由N-环丙基-N-(哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺和4，4-双(4-氟苯基)丁酸制备N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝607(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ8.12(1H，s)，8.04(1H，d)，7.86(1H，d)，7.69(1H，t)，7.16(4H，dd)，6.98(4H，dd)，4.71(1H，d)，3.98(1H，d)，3.80(1H，t)，3.68(1H，d)，2.91(1H，t)，2.50(1H，t)，2.33(2H，m)，2.21(2H，m)，1,93(1H，m)，1.75(4H，m)，0.91(4H，m)；由N-环丙基-N-(哌啶-4-基)-2-三氟甲基苯磺酰胺和4，4-双(4-氟苯基)丁酸制备N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁酰基]哌啶-4-基}-2-三氟甲基苯磺酰胺，其中4，4-双(4-氟苯基)丁酸可以根据Sindelar等人(Collection ofCzechoslovak Chemical Communications 38(12)3879-3901(1973))所述来制备。LC100％。MSm/z＝607(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ8.29(1H，d)，7.88(1H，d)，7.72(2H，m)，7.18(4H，dd)，6.98(4H，dd)，4.76(1H，d)，4.25(1H，m)，3.95(1H，m)，3.72(1H，d)，3.00(1H，t)，2.55(1H，t)，2.30(5H，m)，1,84(4H，m)，0.61(2H，m)，0.49(1H，m)，0.36(1H，m)；和由N-环丙基-N-(哌啶-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺和3-三氟甲基-4-甲氧基苯酮制备N-环丙基-N-{1-[(3-三氟甲基-4-甲氧基)苯甲酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝551(M+H+)。1H NMR(CDCl3)δ8.15(1H，s)，8.07(1H，d)，7.86(1H，d)，7.69(2H，m)，7.58(1H，d)，7.02(1H，d)，4.13(1H，m)，4.08(3H，s)，2.98(2H，m)，1.98(4H，m)，1.65(3H，m)，0.94(2H，t)，0.80(2H，t)。
实施例21N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(34) N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(34)如下制备，将N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基苯磺酰胺(110.6mg，0.318mmol)溶解于10mL的DMF中，然后加入三乙胺(48.3mg，0.477mmol)和双(4-氟苯基)丁基氯(98.2mg，0.350mmol)。反应混合物在85℃下搅拌过夜，通过硅胶柱色谱(己烷/EtOAc，7∶3)纯化粗化合物，得到呈黄色粘性固体的标题化合物34。1H NMR(CDCl3)δ8.12(s，1H)，8.04(d，1H)，7.84(d，1H)，7.61(t，1H)，7.13(dd，4H)，6.94 t，4H)，3.84 t，2H)，2.85(d，2H)，2.30(t，2H)，1,92(m，7H)，1.48(m，2H)，1.37(m，2H)，0.96(m，2H)，0.75(m，2H)。LC100％。MS(M+H+)593。
类似地，制备N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁基]-哌啶-4-基}苯磺酰胺。LC100％。MSm/z＝525.3，526.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.1(1H，br)，7.81-7.84(2H，m)，7.59-7.63(1H，m)，7.5-7.54(2H，m)，7.12-7.16(4H，m)，6.95-6.99(4H，m)，4.08-4.14(1H，m)，3.86-3.89(1H，m)，3.48-3.52(2H，m)，2.92-2.96(2H，m)，2.57-2.74(4H，m)，1.95-2.05(3H，m)，1.7-1.8(4H，m)，0.9-0.95(4H，m)。
实施例22N-环丙基-N-{1-[2-双(4-氟苯基)甲氧基乙基]哌啶-4-基}苯磺酰胺(37)N-环丙基-N-{1-[2-双(4-氟苯基)甲氧基乙基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(38) a)1-[双(4-氟苯基)甲氧基]-2-氯乙烷(35)取2-氯乙醇(2.7g，34mmol)、硫酸(0.8g，8mmol)和5mL甲苯温热到40℃，并用4，4’-二氟二苯甲醇(5g，23mmol)的甲苯溶液处理。所得溶液加热到85℃。3小时后冷却反应混合物，用甲苯稀释，用饱和NaHCO3和水洗涤几次，在Na2SO4上干燥并蒸发。不经进一步纯化将粗产物35直接用于下一步骤。
b)1-[双(4-氟苯基)甲氧基]-2-碘乙烷(36)1-[双(4-氟苯基)甲氧基]-2-氯乙烷(35)(888mg，3mmol)溶解于5mL的甲乙酮中，加入碘化钠(1.3g，8.4mmol)。将混合物在80℃加热过夜。LC/MS表明有80％发生转化。滤去固体，浓缩滤液。不经进一步纯化将粗产物36直接用于下一步骤。
c)N-环丙基-N-{1-[2-双(4-氟苯基)甲氧基乙基]-哌啶-4-基}苯磺酰胺(37)取1-[双(4-氟苯基)甲氧基]-2-碘乙烷(36)(393mg，1.05mmol)溶解于3mL甲乙酮中，向该混合物中加入N-环丙基-N-(4-哌啶基)苯磺酰胺(200mg，0.71mmol)和K2CO3(294mg，2.2mmol)。将混合物在80℃加热过夜。向混合物中加入水，用EtOAc萃取产物。经Na2SO4干燥有机层并蒸发。通过用CH2Cl2和CH2Cl2/EtOAc(4∶1)洗脱经硅胶柱纯化粗产物，得到呈褐色油状的标题化合物371H NMR(CDCl3)δ7.878-7.849(d，2H)，7.600-7.557(m，1H)，7.535-7.490(m，2H)，7.282-7.231(m，4H)，7.029-6.970(m，4H)，5.300(s，1H)，3.870-3.790(m，1H)，3.536-3.506(t，2H)，2.928-2.899(d，2H)，2.642-2.612(t，2H)，2.109-2.053(t，2H)，2.000-1.868(m，3H)，1.523-1.492(d，2H)，0.980-0.940(m，2H)，0.760-0.712(m，2H)。LC98％。MS(e/z)527(M+H+)。
N-环丙基-N-{1-[2-双(4-氟苯基)甲氧基乙基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(38)取1-[双(4-氟苯基)-甲氧基]-2-碘乙烷(36)(294mg，0.79mmol)溶解于5mL甲乙酮中，向该混合物中加入N-环丙基-N-(4-哌啶基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺(200mg，0.57mmol)和K2CO3(157mg，1.1mmol)。将混合物在80℃加热过夜。向混合物中加入水，用EtOAc萃取产物。用Na2SO4干燥有机层并蒸发。通过用CH2Cl2和CH2Cl2/EtOAc(4∶1)洗脱经硅胶柱纯化粗产物，得到呈黄色油状的标题化合物38。1H NMR(CDCl3)δ8.127(s，1H)，8.061-8.042(d，1H)，7.856-7.833(d，1H)，7.694-7.655(t，1H)，7.282-7.233(m，4H)，7.035-6.972(m，4H)，5.302(s，1H)，3.882-3.806(t，1H)，3.551-3.491(t，2H)，2.965-2.887(d，2H)，2.670-2.605(t，2H)，2.127-2.064(t，2H)，1.986-1.939(m，3H)，1.531-1.493(d，2H)，0.992-0.952(m，2H)，0.794-0.760(m，2H)。LC100％。MS(e/z)596(M+H+)。
实施例23N-环丙基-N-{1-[2-双(4-氟苯基)甲氧基乙基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(38)a)1-[二(4-氟苯基)甲氧基]-2-氯乙烷(35)取2-氯乙醇(2.3mL，34mmol)、甲苯(5mL)、和硫酸(0.44mL，8.2mmol)的混合物温热到40℃，并用4，4’-二氟二苯甲醇(5.0g，22.7mmol)的甲苯溶液处理。所得溶液加热到85℃，并搅拌3小时。在反应回到环境温度后，用甲苯稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用水洗涤，经硫酸钠干燥。蒸发溶剂得到6.07g(95％收率)的黄色油状产物。
b)N-环丙基-N-{1-[2-二(4-氟苯基)甲氧基乙基]-哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(38)取1-[双(4-氟苯基)甲氧基]-2-氯乙烷(3.0g，10.7mmol)，碘化钠(4.3g，28.9mmol)、和MEK(20mL)的混合物加热到80℃持续24小时。在反应回到环境温度后过滤。向小份的滤液(0.78mmol)中加入碳酸钾(294mg，2.13mmol)和N-环丙基-N-(哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(0.71mmol)。混合物在80℃加热16小时。在TLC表明反应完成后，向反应混合物中加入水和EtOAc。分离各相，用EtOAc萃取水相2次。用水洗涤合并的有机萃取物，再用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。然后如实施例22所述用硅胶色谱进行纯化。
实施例24N-环丙基-N-{1-[4-(4-氟苯基)-4-氧丁基]哌啶-4-基}苯磺酰胺(39) 如下制备N-环丙基-N-{1-[4-(4-氟苯基)-4-氧丁基]哌啶-4-基}苯磺酰胺(39)。取在DMF中的N-环丙基-N-(4-哌啶基)苯磺酰胺(100mg，0.36mmol)、4-氯4′-氟苯丙甲酮(79mg，0.39mmol)和TEA(54mg，0.54mmol)的混合物在70℃加热36小时。除去溶剂，在硅胶柱上纯化粗产物，先用CH2Cl2洗脱，然后用EtOAc和10％MeOH/EtOAc洗脱，得到呈橙色油状的标题化合物39。1H NMR(CDCl3)δ8.006-7.956(m，2H)，7.868-7.844(d，2H)，7.599-7.556(m，1H)，7.535-7.490(m，2H)，7.147-7.089(t，2H)，3.855-3.773(m，1H)，2.950-2.871(m，4H)，2.421-2.330(t，2H)，2.020-1.772(m，7H)，1.518-1.454(d，2H)，0.950-0.910(m，2H)，0.730-0.682(m，2H)。LC98％。MS(e/z)446(M+H+)。
实施例25N-环丙基-N-{1-[3-(2-羟乙基氨基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(40)
将N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌嗪-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺(250mg，0.56mmol)和2-氨基乙醇(2mL)在螺口小瓶中混合在一起，并在金属块上加热至130℃持续3天。真空蒸发已冷却的混合物，残留物通过硅胶柱色谱(EtOAc/MeOH/NH2OH，100∶10∶1)纯化，得到标题化合物40(95mg)。1H NMR(CDCl3)δ8.21(d，J＝7.9Hz，1H)，8.12(d，J＝8.5Hz，1H)，8.10(br s，1H)，7.91(dd，J＝7.76，7.78Hz，1H)，4.43(d，J＝13.0Hz，1H)，4.10(m，1H)，3.90(d，J＝12.1Hz，1H)，3.55(m，2H)，3.25(m，1H)，3.05(m，1H)，2.86(m，2H)，2.60(m，3H)，2.00(m，1H)，1.82-1.21(m，8H)，0.85(m，5H)，0.75(m，2H)。LC100％。MS506.2(M+1)。
实施例26N-环丙基-N-[1-(3-硫代吗啉-4-基-己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(41)如下制备N-环丙基-N-[1-(3-硫代吗啉-4-基-己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(41)。N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺(30)(250mg，0.56mmol)和硫代吗啉(2mL)一起在密封反应瓶(React-vial)中在130℃加热3天。在冰中冷却该瓶，然后在Speed-Vac中真空蒸发冷却后的混合物至干燥。残留物经快速硅胶色谱用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱，得到呈白色固体的标题化合物41(110mg，36％)。LC100％。MSm/z＝548.3，549.3(M+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的1∶1混合物)δ 8.15(1H，s)，8.06(1H，d，J＝7.5Hz)，7.88(1H，d，J＝7.5Hz)，7.70(1H，t，J＝7.5Hz)，4.73(1H，d，J＝17.7Hz)，4.10(1H，m)，3.95(1H，d，J＝17.7Hz)，3.05(2H，m)，2.84(2H，m)，2.74(2H，m)，2.67-2.43(6H，m)，2.15(1H，m)，1.96(1H，m)，1.75(3H，m)，1.52-1.22(4H，m)，0.98(1H，m)，0.93-0.70(6H，m)。
实施例27N-环丙基-N-[1-(3-吗啉-4-基-己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(42)如下制备N-环丙基-N-[1-(3-吗啉-4-基-己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(42)。如以上实施例26所述，将N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(30)(250mg，0.56mmol)和吗啉(2mL)反应。残留物经快速硅胶色谱用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(100∶10∶1)洗脱得到呈白色固体的标题化合物42(120mg，40％)。LC100％。MSm/z＝532.3，533.3(M+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的1∶1混合物)δ8.15(1H，s)，8.07(1H，d，J＝7.5Hz)，7.88(1H，d，J＝7.5Hz)，7.70(1H，t，J＝7.5Hz)，4.75(1H，d，J＝15Hz)，4.10(1H，m)，3.96(1H，d，J＝15Hz)，3.70(4H，m)，3.09(2H，m)，2.64-2.44(6H，m)，2.20(1H，dd，J＝8.8Hz)，1.99(1H，m)，1.50-1.25(4H，m)，1.02-0.70(7H，m)。
实施例28N-环丙基-N-[1-(3-吡咯烷-1-基己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(43)如下制备N-环丙基-N-[1-(3-吡咯烷-1-基己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(43)。如以上实施例26所述，将N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺(30)(250mg，0.56mmol)和吡咯烷(2mL)反应。残留物经快速硅胶色谱用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(100∶10∶1)洗脱，得到呈白色固体的标题化合物43(140mg，48％)。LC98.9％。m/z＝516.3，517.3(M+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的1∶1混合物)δ8.14(1H，s)，8.05(1H，d，J＝7.5Hz)，7.86(1H，d，J＝7.5Hz)，7.70(1H，t，J＝7.5Hz)，4.75(1H，d，J＝15Hz)，4.10(1H，m)，3.97(1H，d，J＝15Hz)，3.05(2H，m)，2.65-2.45(6H，m)，2.35(1H，m)，1.96(1H，m)，1.85-1.30(16H，m)，0.98(1H，m)，0.92-0.70(6H，m)。
实施例29N-环丙基-N-[1-(3-二甲基氨基己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(44)取N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺(30)(250mg，0.56mmol)和二甲胺的甲醇(2M，3mL)溶液一起在密封反应瓶中在120℃加热24小时。蒸发冷却后的溶液，真空干燥残留物，进行快速硅胶色谱并用乙酸乙酯(3x柱长)洗脱，然后用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(100∶10∶1)洗脱，得到呈白色固体的标题化合物44(150mg，34％)。TLC(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇∶氨水，100∶10∶1)Rf＝0.15(UV检测，Dragendorff’s试剂)。LC100％。MSm/z＝490.3，491.2(M+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的1∶1混合物)δ8.14(1H，s)，8.07(1H，d，J＝8Hz)，7.88(1H，d，J＝8Hz)，7.70(1H，t，J＝8Hz)，4.74(1H，d，J＝12Hz)，4.07(1H，m)，3.95(1H，d，J＝12Hz)，3.05(2H，m)，2.50(2H，m)，2.24(6H，s)，2.15(1H，2d)，1.96(1H，m)，1.86-1.69(3H，m)，1.58-1.24(6H，m)，0.98(1H，m)，0.90(3H，t，J＝8Hz)，0.87-0.75(3H，m)。
实施例30(3S)N-[1-(3-氨基-5-甲基己酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(46) a)(3S)1-{4-[环丙基-(3-三氟甲基苯磺酰基)-氨基]哌啶-1-乙酰基}-3-甲基丁基氨基甲酸叔丁酯(45)在室温下向N-环丙基-N-(哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(0.287mmol，100mg)的DMF(5mL)溶液中加入HOBt(0.287mmol，39mg)、EDCI(0.287mmol，55mg)和BOC-L-b-高亮氨酸(0.287mmol，70mg)。所得混合物在室温下保持振荡过夜。然后加入EtOAc(20mL)，并用10％HCl(20mL)、饱和NaHCO3(20mL)和水(10mL)洗涤该混合物。经Na2SO4干燥有机层，浓缩至干燥。用硅胶柱和在己烷中的25％到100％EtOAc梯度洗脱来纯化粗产物，得到(3S)1-{4-[环丙基-(3-三氟甲基苯磺酰基)氨基]哌啶-1-乙酰基}-3-甲基丁基氨基甲酸叔丁酯(45)。
b)(3S)N-[1-(3-氨基-5-甲基己酰基)-哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(46)取上述化合物45在室温下溶解于4N HCl中3小时。然后蒸发混合物至干燥以得到粗产物，用硅胶柱和在己烷中的30％EtOAc梯度洗脱来纯化，得到标题化合物46(45mg)。1H NMR(CDCl3)δ8.21(d，J＝8.1Hz，1H)，8.18(br s，1H)，8.04(d，J＝8.1Hz，1H)，7.87(dd，J＝7.84，7.86Hz，1H)，4.63(m，1H)，4.15(m，1H)，3.95(d，J＝12.8Hz，1H)，3.59(m，1H)，3.23(m，1H)，2.86(dt，J＝3.4，17.4Hz，1H)，2.60(m，2H)，2.07-1.51(m，8H)，1.00(m，6H)，0.93(m，2H)，0.80(m，2H)。LC100％。MS476.2(M+1)。
类似地，制备下列化合物(3S)N-[1-(3-氨基-4-甲基戊酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝462.3，463.3(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)δ8.21(1H，d，J＝8.1Hz)，8.17(1H，s)，8.03(1H，d，J＝7.9Hz)，7.87(1H，dd，J＝7.7，7.9Hz)，4.63-4.66(1H，m)，4.11-4.18(1H，m)，3.96-4.03(1H，m)，3.38-3.45(1H，m)，3.11-3.17(1H，m)，2.82-2.9(1H，m)，2.54-2.68(m，2H)，1.65-2.05(6H，m)，1.03-1.07(6H，m)，0.91-0.94(2H，m)，0.79-0.81(2H，m)。
实施例31(3S)N-环丙基-N-[1-(5-甲基-3-甲基氨基-己酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(47) 室温下向实施例30制备的化合物46(0.325mmol，150mg)的甲醇(5mL)溶液中加入低聚甲醛(0.813mmol，25mg)、Na(OAc)3BH和催化量的HOAc。所得混合物在室温下保持振荡过夜。然后向混合物中加入EtOAc(20mL)，用饱和NaHCO3和水洗涤。经Na2SO4干燥有机层并浓缩至干燥。用硅胶柱和在DCM中的0％到50％MeOH梯度洗脱来纯化粗产物，得到标题化合物47。1H NMR(CDCl3)δ8.21(d，J＝8.1Hz，1H)，8.18(br s，1H)，8.04(d，J＝8.1Hz，1H)，7.87(dd，J＝7.84，7.86Hz，1H)，4.63(m，1H)，4.15(m，1H)，3.95(m，1H)，3.52(m，1H)，3.23(m，1H)，2.90-2.55(m，3H)，2.70(d，J＝5.4Hz，3H)，2.07-1.54(m，8H)，1.00(m，6H)，0.92(m，2H)，0.80(m，2H)。LC100％。MS490.2(M+1)。
类似地，制备下列化合物(3S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-3-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝476.2，477.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)δ8.21(1H，d，J＝7.7Hz)，8.17(1H，s)，8.03(1H，d，J＝7.9Hz)，7.87(1H，dd，J＝7.8，7.9Hz)，4.61-4.65(1H，m)，4.11-4.18(1H，m)，3.99-4.04(1H，m)，3.36-3.43(1H，m)，3.12-3.19(1H，m)，2.82-2.9(1H，m)，2.75(1.5H，s)，2.73(1.5H，s)，2.64-2.69(m，2H)，2.16-2.21(1H，m)，2.06-2.09(1H，m)，1.61-1.95(4H，m)，1.02-1.09(6H，m)，0.92-0.94(2H，m)，0.79-0.83(2H，m)。
实施例32N-环丙基-N-{1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(31)如下制备N-环丙基-N-{1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(31)。如以上实施例26所述，将N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺(30)(250mg，0.56mmol)和N-甲基-哌嗪(2mL)反应。残留物经快速硅胶色谱并用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(100∶10∶1)洗脱，得到呈白色固体的标题化合物31(120mg，40％)。LC100％。MSm/z＝545.3，546.3(M+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的1∶1混合物)δ8.14(1H，s)，8.07(1H，d，J＝7.5Hz)，7.88(1H，d，J＝7.5Hz)，7.70(1H，t，J＝7.5Hz)，4.74(1H，d，J＝13Hz)，4.09(1H，t，J＝13Hz)，3.95(1H，d，J＝13Hz)，3.08(2H，m)，2.67-2.33(9H，m)，2.26(3H，s)，2.15(1H，dd，J＝8.8Hz)，1.96(1H，m)，1.85-1.65(3H，m)，1.52-1.22(4H，m)，0.98(1H，m)，0.98-0.70(6H，m)。
实施例33N-环丙基-N-{1-[3-(2-羟乙基氨基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(40)如下制备N-环丙基-N-{1-[3-(2-羟乙基氨基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(40)。如以上实施例26所述，将N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺(250mg，0.56mmol)和乙醇胺(2mL)反应。冷却反应混合物并将其在醚(100mL)和1M氢氧化钠溶液(100mL)之间分配。分离有机相，干燥(MgSO4)，并真空蒸发溶剂至干燥，得到无色胶状物。残留物经快速硅胶色谱并用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(100∶10∶1)洗脱，得到游离碱40(100mg)。将其转化为呈白色固体的延胡索酸盐(95mg，27％)。LC100％。MSm/z＝506.2，507.3，508.2(M+H)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)(旋转异构体的1∶1混合物)δ8.22(1H，d，J＝7.5Hz)，8.13(2H，m)，7.92(1H，t，J＝7.5Hz)，6.47(1H，s)，4.43(1H，d，J＝13.3Hz)，4.10(1H，t，J＝13.3Hz)，3.88(1H，d，J＝13.3Hz)，3.55(2H，m)，3.25(1H，m)，3.05(1H，t，J＝13.3Hz)，2.85(2H，m)，2.70-2.50(3H，m)，1.96(1H，m)，1.80-1.20(8H，m)，0.88-0.65(7H，m)。
实施例34N-环丙基-N-{1-[3-(哌啶-1-基)己酰基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺(32)如下制备N-环丙基-N-{1-[3-(哌啶-1-基)己酰基]哌啶-4-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺(32)。如以上实施例26所述，将N-环丙基-N-(1-己-2-烯酰基-哌啶-4-基)-3-三氟甲基-苯磺酰胺(30)(250mg，0.56mmol)和哌啶(2mL)反应。残留物经快速硅胶色谱并用乙酸乙酯∶甲醇∶氨水(100∶10∶1)洗脱，得到呈白色固体的标题化合物32(100mg，34％)。LC100％。MSm/z＝530.3，531.3，532.3(M+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)(旋转异构体的1∶1混合物)δ8.13(1H，s)，8.06(1H，d，J＝7.5Hz)，7.86(1H，d，J＝7.5Hz)，7.70(1H，t，J＝7.5Hz)，4.75(1H，d，J＝15Hz)，4.09(1H，m)，3.97(1H，d，J＝15Hz)，3.10-2.92(2H，m)，2.65-2.35(6H，m)，2.15(1H，m)，1.95(1H，m)，1.90-1.70(3H，m)，1.65-1.20(11H，m)，0.95(1H，m)，0.92-0.70(6H，m)。
实施例35N-[1-(1-氨基环戊烷-1-羰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺(48)
将N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(14)(0.400g，1.15mmol)吸收到10mL干燥DMF中。向该混合物中加入HOBt(0.154g，1.15mmol)、EDCI(0.218g，1.15mmol)、和1-叔丁氧基羰基氨基环戊烷-1-羧酸(0.263g，1.15mmol)。混合物在室温下搅拌16小时。减压浓缩反应混合物至干燥，粗物质经快速硅胶色谱并用25％乙酸乙酯/己烷洗脱。浓缩合并的产物部分至干燥，在40mL的乙酸乙酯/浓HCl(19∶1)中将纯净的受BOC-保护的物质脱保护。除去溶剂得到白色固体物质。用乙醚弄碎该物质，并真空过滤，得到期望的HCl-盐形式的磺酰胺(48)。LC97％。MS(e/z)460(M+H+)。盐的1H NMR(CD3OD)δ8.02(m，2H)，7.83(d，1H，J＝7.86Hz)，7.66(t，1H，J＝7.86Hz)，4.01(m，2.5H)，2.80(bs，1.5H)，2.11(m，2H)，1.7-2.0(m，10H)，1.51(m，2H)，0.60(m，2H)，0.50(m，2H)。
类似地，制备N-环丙基-N-[1-(1-苯基氨基环己-1-酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝550.2，551.2(M+H+)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.07(1H，s)，7.98(1H，d，J＝7.5Hz)，7.84(1H，d，J＝7.7Hz)，7.66(1H，dd，J＝7.8 & 7.9Hz)，7.08-7.12(2H，m)，6.64-6.68(1H，m)，6.52-6.55(2H，m)，5.04-5.14(1H，m)，4.84-4.92(1H，m)，3.92-3.98(2H，m)，2.82-2.9(1H，m)，2.42-2.48(1H，m)，1.82-2.14(4H，m)，1.62-1.68(2H，m)，1.26-1.44(6H，m)，0.48-0.78(4H，m)。
实施例36N-环丙基-N-[1-(N-甲基吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺(49) 将N-环丙基-N-哌啶-4-基-3-三氟甲基-苯磺酰胺(14)(0.400g，1.15mmol)吸收到10mL干燥DMF中。向该混合物中加入HOBt(0.154g，1.15mmol)、EDCI(0.218g，1.15mmol)、和N-甲基脯氨酸(0.148g，1.15mmol)。混合物在室温下搅拌16小时。减压浓缩反应混合物至干燥，粗物质经快速硅胶色谱并用25％乙酸乙酯/己烷洗脱。浓缩合并的产物部分至干燥，吸收到20mL MeOH中。向该混合物中加入1.1当量的延胡索酸。除去溶剂并用乙醚弄碎剩余物质。在真空过滤后，得到期望的延胡索酸盐形式的产物(49)。LC98％。MS(e/z)460(M+H+)。盐的1H NMR(DMSO-d6)δ8.20(m，1H)，8.12(m，2H)，7.90(t，1H，J＝7.82Hz)，4.40(m，1H)，4.10(m，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，1.5H)，2.40(s，1.5H)，2.31(d，3H)，2.05(m，1H)，1.99(m，1H)，1.66(m，5H)，1.50(m，2H)，0.75(m，4H)。
类似地，制备下列化合物N-环丙基-N-[1-(1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝508.3，509.3(M+H+)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.7(1H，br)，9.4(1H，br)，8.22-8.25(1H，m)，8.12-8.16(2H，m)，7.9-7.94(1H，m)，7.22-7.28(4H，m)，4.72-4.82(1H，m)，4.42-4.44(1H，m)，4.16-4.32(3H，m)，3.9-3.94(1H，m)，3.15-3.22(2H，m)，2.86-2.96(1H，m)，2.74-2.8(1H，m)，1.98-2.04(1H，m)，1.48-1.82(4H，m)，0.74-0.86(4H，m)。
N-环丙基-N-[1-(哌啶-2-酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺LC100％。MSm/z＝460.2，461.2(M+H+)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.164(2H，t)，7.998(1H，d，J＝6.8Hz)，7.837(1H，t)，4.536(1H，d)，4.327-4.218(1H，m)，4.181-4.087(1H，m)，3.861(1H，d)，3.452(1H，d)，3.178(1H，t)，3.016(1H，t)，2.691(1H，t)，2.125-1.995(2H，m)，1.995-1.760(4H，m)，1.756-1.493(6H，m)，0.891(2H，s)，0.770(2H，s)。
实施例37当在对N-型钙通道阻滞活性的钙动员和/或电生理分析中试验时，本发明所述的化合物显示约0.09μM到约10μM的IC50值，这在以上第0200段的标题为“N-型钙通道的FLIPR钙动员分析”中(说明书第57页)进行了详细描述。所述一些化合物也在对L-型钙通道阻滞活性的钙动员和/或电生理分析中进行了试验，这在以上第0201段的标题为“L-型钙通道的FLIPR钙动员分析”中(说明书第58页)进行了详细描述。它们显示的IC50值约0.45μM到约＞20μM。代表性的值如表2所示。
表2在钙动员和/或电生理体外分析后对受试化合物作为N-型钙通道(NTCC)阻滞剂和L-型钙通道(LTCC)阻滞剂的评价


上面对本发明进行了完整的描述，本领域普通技术人员应当理解，可以在条件、组成和其他参数的宽和等效的范围内实现相同目的，而不影响本发明的范围或其任何实施方案。
通过考虑本说明书和权利要求书以及实施此处公开的发明，本发明的其他实施方案对于本领域技术人员将是显而易见的。应当知道，说明书和实施例都被认为仅仅是示例性的，本发明的真实范围和精神由以下权利要求所示。
将本文引用的全部权利和出版物都通过参考以它们的整体引入本文。
序列表<110>欧洲凯尔特公司<120>作为钙通道阻滞剂的4-苯基磺酰胺哌啶化合物<130>E8492<150>US 60/618,419<151>2004-10-14<150>US 60/694,972<151>2005-06-30<160>12<170>PatentIn version 3.3<210>1<211>22<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>1caccatggtc cgcttcgggg ac22<210>2<211>19<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>2ccgttcagtg gcctcctcc19<210>3<211>23<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>3ctagcaccag tgatcctggt ctg 23<210>4<211>20<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>4agtgcgttgt gagcgcagta 20<210>5<211>21
<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>5caccatggtc cagaagagcg g 21<210>6<211>21<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>6tctcagcgga tgtagacgcc t 21<210>7<211>22<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>7caccatgtat gacgactcct ac 22<210>8<211>23<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>8ggtggtcagt agctgtcctt agg 23<210>9<211>21<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>9caccatggct gctggctgcc t 21<210>10<211>25<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>10agagggtcac catagatagt gtctg25
<210>11<211>22<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>11caccatgatt cgggccttcg ct22<210>12<211>25<212>DNA<213>人工的<220>
<223>引物<400>12agcctgcgga ctacaggttg ctgac 2权利要求
1.具有式I的化合物 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1和R2分别独立地选自氢、烷基、卤代烷基、卤素、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、硝基、氨基、和羟基；R3选自烷基、烯基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、羟基烷基、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基烷基、3-四氢呋喃基烷基、烷基磺酰基氨基烷基、和氨基羰基烷基；Z选自Z1、Z2、Z3、和Z4，其中Z1是 Z2是 Z3是—CR8R9—(CH2)O—D—R14；和Z4是—SO2—R15；R4和R5分别独立地选自氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、烷基巯基、氨基烷基和苯基；或R4和R5与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，其中杂环的一个或多个碳原子任选地用NR16、O、或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基；R6是氢和R7选自；氢；烷基；羟基烷基；烷氧基烷基；卤代烷基；氨基烷基；环烷基；任选用一个或两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苄基；和苄氧基烷基；或R6和R7与它们所连的碳原子一起形成C3-7环烷基；或R7是氢；R4是氢或C1-3烷基；并且R5和R6一起形成桥-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CHG1-CHG2-CH2-，其中G1和G2都是氢或与它们所连的碳原子一起形成稠合的苯基；R8和R9都是氢或一起形成＝O；R10、R11、R12和R13分别独立地选自氢、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基；R14选自任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的萘基；喹啉基；吡啶基；用苯基、苄基、苯氧基、或苄氧基取代的苯基，其中每个苯环任选地用一个或两个独立地选自卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基和氰基的取代基取代；和烷基；R15是苯基或萘基，其中任一个任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基的取代基取代；A是O、CH2、或不存在，和B是CH，条件是当A是O时，那么R8和R9都是氢；或A-B是CH＝C；D是C＝O、-CH＝CH-、或不存在；m是0或1；n是0、1、2、3、4、或5；和o是0、1、2、或3；条件是当Z是Z2，R3是烷基，R8和R9都是氢，A是CH2，B是CH并且n是1时，那么R10、R11、R12、或R13中至少一个不是氢。
2.具有式I的化合物 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R1和R2分别独立地选自氢、烷基、卤代烷基、卤素、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、硝基、氨基、和羟基；R3选自烷基、烯基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、羟基烷基、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基烷基、3-四氢呋喃基烷基、烷基磺酰基氨基烷基、和氨基羰基烷基；Z选自Z1、Z2、Z3、和Z4，其中Z1是 Z2是 Z3是—CR8R9—(CH2)O—D—R14；和Z4是—SO2—R15；R4和R5分别独立地选自氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、烷基巯基、氨基烷基和苯基；或R4和R5与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，其中杂环的一个或多个碳原子任选地用NR16、O、或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基；R6是氢和R7选自；氢；烷基；羟基烷基；烷氧基烷基；卤代烷基；氨基烷基；环烷基；任选用一个或两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基的取代基取代的苄基；和苄氧基烷基；或R6和R7与它们所连的碳原子一起形成C3-7环烷基；或R7是氢；R4是氢或C1-3烷基；并且R5和R6一起形成桥-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CHG1-CHG2-CH2-，其中G1和G2都是氢或与它们所连的碳原子一起形成稠合的苯基；R8和R9都是氢或一起形成＝O；R10、R11、R12和R13分别独立地选自氢、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基；R14选自任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的萘基；喹啉基；吡啶基；和用苯基、苄基、苯氧基、或苄氧基取代的苯基，其中每个苯环任选用一个或两个独立地选自卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基和氰基的取代基取代；R15是苯基或萘基，其中任一个任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基的取代基取代；A是O、CH2、或不存在，和B是CH，条件是当A是O时，那么R8和R9都是氢；或A-B是CH＝C；D是C＝O、-CH＝CH-、或不存在；m是0或1；n是0、1、2、3、4、或5；和o是0、1、2、或3；条件是当Z是Z2，R3是烷基，R8和R9都是氢，A是CH2，B是CH并且n是1时，那么R10、R11、R12、或R13中至少一个不是氢。
3.权利要求1或2的化合物，其中R3选自甲基、乙基、异戊基、异丁基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环丙基甲基、环丙基乙基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、羟甲基、羟乙基、3-四氢呋喃基、2-四氢呋喃基甲基、2-四氢呋喃基乙基、甲基磺酰胺基甲基、甲基磺酰胺基乙基、氨基羰基甲基、和氨基羰基乙基，优选是环丙基、甲基、异丙基、或异丁基。
4.权利要求1、2或3的化合物，其中R3是环丙基，具有式II 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
5.权利要求1至4的化合物，其中R1和R2分别独立地选自氢、卤素、烷基、卤代烷基、氰基、烷氧基、卤代烷氧基、和硝基，并优选选自氢、甲基、乙基、氟、氯、三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、氰基、硝基、甲氧基和二氟甲氧基。
6.权利要求1至5的化合物，其中R1是氢并且R2是三氟甲基，或R1和R2都是氢。
7.权利要求1至6的化合物，其中R2在苯环的间位，并优选具有式III 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
8.权利要求1至7的化合物，其中Z＝Z1，具有式IV 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
9.权利要求8的化合物，其中R4和R5分别独立地选自氢、烷基、羟基烷基、和苯基，优选分别独立地选自氢、甲基、乙基、羟甲基、羟乙基、和苯基，更优选分别独立地选自氢、甲基、和羟乙基。
10.权利要求8的化合物，其中R4和R5与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，其中杂环的一个或多个碳原子任选地用NR16、O、或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基，并且其优选地选自噁唑烷基、异噁唑烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、六氢嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、和四氢吡啶基，更优选地形成1-吡咯烷基、4-硫代吗啉基、哌嗪基、或4-甲基哌嗪基。
11.权利要求8至10的化合物，其中R6是氢并且R7是甲基；丙基；异丙基；丁基；叔丁基；仲丁基；异丁基；羟甲基；1-羟乙基；任选用一个或两个独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、卤素、氰基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、羟基、硝基、和三氟甲基的取代基取代的苯基；任选用一个或两个独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、卤素、氰基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、羟基、硝基、和三氟甲基的取代基取代的苄基；1-苄氧基乙基；环戊基；环己基；环戊基甲基；或环己基甲基。
12.权利要求8至11的化合物，其中R6是氢，R7是烷基，和R4和R5独立地是氢、烷基、或羟基烷基，或R4和R5与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，其中杂环的一个或多个碳原子任选地用NR16、O、或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基。
13.权利要求8至10的化合物，其中R6和R7一起形成环戊基或环己基。
14.权利要求8的化合物，其中R7是氢，R4是氢或C1-3烷基，和R5和R6一起形成桥-CH2-CH2-CH2-或-CH2-CHG1-CHG2-CH2-，其中G1和G2都是氢或与它们所连的碳原子一起形成稠合的苯基，优选其中R5和R6一起形成-CH2-CH2-CH2-。
15.权利要求8至14的化合物，其中与-NR4R5连接的碳原子的构型是(S)。
16.权利要求1至8的化合物，具有式V 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R41和R51分别独立地选自氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、和氨基烷基；和R17和R18分别独立地选自氢、烷基、环烷基、卤素、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羟基、硝基、卤代烷基、和烷氧基。
17.权利要求16的化合物，其中R41和R51分别独立地选自氢、烷基、和羟基烷基，优选独立地是氢或烷基。
18.权利要求17的化合物，其中R41和R51都是氢，或R41是氢和R51是C1-3烷基。
19.权利要求16至18的化合物，其中R17和R18分别独立地选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、卤素、氰基、氨基、C1-3烷基氨基、二(C1-3)烷基氨基、羟基、硝基、卤代(C1-6)烷基、和C1-6烷氧基，优选独立地选自氢、甲基、异丙基、叔丁基、氰基、氟、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、硝基、三氟甲基、甲氧基、异丙氧基、和叔丁氧基。
20.权利要求19的化合物，其中R17和R18都是氢，或R17是氢并且R18是甲基、叔丁基、氰基、氟、甲基氨基、二甲基氨基、三氟甲基、或甲氧基。
21.权利要求1至8的化合物，具有式VI 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R42和R52分别独立地选自氢、烷基、烯基、羟基烷基、卤代烷基、烷基巯基、和氨基烷基；或R42和R52与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，其中杂环的一个或多个碳原子任选地用NR16、O、或S替换，其中R16是氢或C1-3烷基；和R19和R20独立地是H或CH3。
22.权利要求21的化合物，其中R42和R52分别独立地选自氢、甲基、乙基、羟甲基、和羟乙基。
23.权利要求21的化合物，其中R42和R52与它们所连的氮原子一起形成5-或6-元杂环，所述杂环选自噁唑烷基、异噁唑烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、六氢嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、和四氢吡啶基。
24.权利要求21的化合物，其中R42和R52独立地是氢、甲基或羟乙基；或R42和R52与它们所连的氮原子一起形成1-吡咯烷基、4-硫代吗啉基、或4-甲基哌嗪基。
25.权利要求21、23或24的化合物，其中当R42和R52一起形成5-或6-元杂环时R19和R20都是H。
26.权利要求21的化合物，其中R42和R52都是氢，或R42是氢并且R52是烷基。
27.权利要求21至26的化合物，其中m是1。
28.权利要求1至7的化合物，其中Z＝Z2，具有式VII 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
29.权利要求28的化合物，其中R8和R9都是氢，A是CH2或不存在，并且B是CH。
30.权利要求28的化合物，其中R8和R9一起形成＝O，A是CH2或不存在并且B是CH，或A-B是CH＝C。
31.权利要求28的化合物，其中R8和R9都是氢，并且A是O。
32.权利要求28至31的化合物，其中n是0、1或2。
33.权利要求28至32的化合物，其中R10、R11、R12、和R13分别独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、卤代(C1-6)烷基、羟基、羟基(C1-6)烷基、氰基、氨基、氨基(C1-6)烷基、C1-3烷基氨基、和二(C1-3)烷基氨基，优选独立地选自氢、卤素、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、氰基、氨基、甲基氨基、和二甲基氨基。
34.权利要求28至33的化合物，其中R10和R12都是氢。
35.权利要求28至34的化合物，其中R11和R13都位于苯环的对位。
36.权利要求1至7的化合物，其中Z＝Z3，具有式VIII 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
37.权利要求36的化合物，其中R14选自任选用一个或两个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、氨基、氨基烷基、烷基氨基、和二烷基氨基的取代基取代的苯基，所述取代基优选独立地选自甲基、乙基、异丙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、氟、三氟甲基、甲基氨基、和二甲基氨基；用苯基、苄基、苯氧基或苄氧基取代的苯基，其中每个苯环任选用一个或两个选自卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、和氰基的取代基取代；萘基；喹啉基；和吡啶基，并优选用苯基、苄基、苯氧基或苄氧基取代，其中任意所述取代基是未取代的或被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代，优选其中所述苯基在对位被取代。
38.权利要求36的化合物，其中R14是萘基、喹啉基或吡啶基，其中任一个都是未取代的。
39.权利要求36至38的化合物，其中当R14是以下之一时，R8和R9都是氢萘基；喹啉基；吡啶基；被任选被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代的苯基取代的苯基；被任选被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代的苄基取代的苯基；被任选被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代的苯氧基取代的苯基；或被任选被卤素、卤代烷基、烷基、烷氧基、羟基、氨基、或氰基取代的苄氧基取代的苯基。
40.权利要求36至38的化合物，其中R8和R9一起形成＝O。
41.权利要求36至40的化合物，其中R8和R9都是氢或一起形成＝O，并且D不存在或是-CH＝CH-。
42.权利要求36至38、40和41的化合物，其中R8和R9一起形成＝O并且D是C＝O。
43.权利要求36至42的化合物，其中o是0或1。
44.权利要求1至7的化合物，其中Z＝Z4，具有式IX 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
45.权利要求44的化合物，其中R15是苯基或萘基，其中任一个被一个或多个独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、氨基、烷基氨基和二烷基氨基的取代基取代，优选被丙基、丁基、戊基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、氟、氯、三氟甲基、氨基、甲基氨基或二甲基氨基取代。
46.权利要求44的化合物，其中R15是被氨基、烷基氨基或二烷基氨基取代的萘基，并优选被氨基、甲基氨基或二甲基氨基取代。
47.权利要求1和3至7的化合物，其中Z＝Z3，R8和R9一起形成＝O，o是0，D是-CH＝CH-并且R14是正丙基，具有式X 或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
48.权利要求1的化合物，其中所述化合物是N-环丙基-N-{1-[4，4-双(4-氟苯基)丁酰基]哌啶-4-基}-3-氟苯磺酰胺；(2S)N-异丁基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-异戊基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-甲氧基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-N-(四氢呋喃-2-基)甲基-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-二氟甲氧基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-氰基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-氯苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-甲基苯磺酰胺；(2S)N-甲基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-硝基苯磺酰胺；(2S)N-(2-羟乙基)-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环丙基甲基-N-[1-(2-甲基氨基-4-甲基-戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-环戊基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基-戊酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-异丙基-N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)-哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；(2S)N-[1-(4-甲基-2-甲基氨基戊酰基)哌啶-4-基]-N-(四氢呋喃-3-基)-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(4-喹啉基甲基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基-苯磺酰胺；N-环丙基-N-{1-[2-双(4-氟苯基)甲氧基乙基]哌啶-4-基}-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-[1-(1-氨基环戊烷-1-羰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(N-甲基吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；N-环丙基-N-[1-(2-甲基氨基-3-邻甲苯基丙酰基)哌啶-4-基]-3-三氟甲基苯磺酰胺；或(2R)N-[1-(2-氨基-2-环己基乙酰基)哌啶-4-基]-N-环丙基-3-三氟甲基苯磺酰胺，或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物。
49.一种药物组合物，其包含权利要求1-48任一项的化合物和药学可接受的载体。
50.一种在患有对阻滞钙通道有反应的疾病的哺乳动物中治疗、预防或改善所述疾病的方法，包括给需要这种治疗、预防或改善的哺乳动物施用有效量的权利要求1至48所述的式I化合物。
51.权利要求50的方法，其中治疗、预防或改善对阻滞N-型钙通道有反应的疾病。
52.一种在哺乳动物中治疗、预防或改善中风、头部创伤、癫痫、疼痛、偏头痛、心境障碍、精神分裂症、神经退行性疾病、抑郁、焦虑、精神病、高血压、或心律失常的方法，包括给需要这种治疗、预防或改善的哺乳动物施用有效量的权利要求1至48所述的式I化合物。
53.权利要求52的方法，其中所述方法用于治疗、预防或改善选自慢性疼痛、神经性疼痛、急性疼痛、和手术疼痛的疼痛。
54.权利要求1至48所述的式I化合物在制备治疗、预防或改善哺乳动物中中风、头部创伤、癫痫、疼痛、偏头痛、心境障碍、精神分裂症、神经退行性疾病、抑郁、焦虑、精神病、高血压、或心律失常的药物中的用途。
55.权利要求1至48所述的式I化合物在制备治疗、预防或改善选自慢性疼痛、神经性疼痛、急性疼痛、和手术疼痛的疼痛的药物中的用途。
56.权利要求1至48所要求保护的具有式I的化合物，其中该化合物是3H或14C放射性标记的。
57.一种鉴定调节N-型钙通道活性的化合物的方法，包括(a)将表达N-型钙通道的细胞与钙敏感性指示剂一起培养一段时间，该时间足以使指示剂掺入细胞中；(b)将细胞去极化；(c)将去极化的细胞与候选的调节化合物一起培养，同时将细胞维持在适合导致钙离子通过所述通道流动的溶液中；(d)在候选的调节化合物存在下测量钙敏感性指示剂的信号；和(e)将候选的调节化合物存在下钙敏感性指示剂的信号与标准值进行比较。
58.权利要求57的方法，其中钙敏感性指示剂指示钙离子通过N-型钙通道的流动，并且与标准值相比，在候选的调节化合物存在下钙敏感性指示剂的变化指示所述候选化合物通过改变钙离子通过N-型钙通道的流动而调节N-型钙通道的活性。
59.权利要求57或58的方法，其中细胞内源性表达钾通道。
60.权利要求57至59的方法，进一步包括在将细胞与所述候选的调节化合物一起培养之前，将细胞与有效阻滞N-型钙通道以外的内源性表达的钙通道活性的化合物一起培养，其中所述有效阻滞N-型钙通道以外的内源性表达的钙通道活性的化合物优选地选自L-型钙通道阻滞剂；P-型钙通道阻滞剂；Q-型钙通道阻滞剂；R-型钙通道阻滞剂；和T-型钙通道阻滞剂；或者它们的混合物，并且更优选地选自硝苯地平、尼莫地平、维拉帕米、地尔硫卓、尼卡地平、lercanipidine、依福地平、拉西地平、米贝拉地尔、尼群地平、ω-agatoxin-TK、Pb2+、SNX-482、和依福地平的R(-)-异构体、或其混合物。
61.权利要求57至60的方法，其中通过将细胞在包含90mM钾的溶液中培养使细胞去极化。
62.权利要求57至61的方法，其中所述标准值是不与候选的调节化合物一起培养的基本相同细胞中钙敏感性指示剂的信号，或在与候选的调节化合物一起培养的但不表达N-型钙通道的细胞中钙敏感性指示剂的信号。
63.权利要求57至62的方法，其中与标准值相比，在候选的调节化合物存在下钙离子流动的变化指示对N-型钙通道活性调节的定量量度。
64.权利要求57至63的方法，其中所述细胞表达内源性N-型钙通道。
65.权利要求57至64的方法，其中所述细胞选自N18神经母细胞瘤细胞、AtT-20小鼠神经内分泌细胞、A7r5大鼠胸主动脉细胞、SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞、PC12嗜铬细胞瘤细胞、ScGT1-1神经元细胞、HN2神经元细胞、F11神经母细胞瘤细胞、L6大鼠肌肉细胞、NG108-15神经母细胞瘤胶质瘤杂交细胞、SCLC神经内分泌源的小细胞肺癌、NT2-N人畸胎癌细胞、大鼠肾上腺球状带细胞、大鼠胰脏β细胞、INS-1细胞、SN56神经元细胞、SKNSH神经母细胞瘤细胞、和IMR32人神经母细胞瘤细胞，优选IMR32人神经母细胞瘤细胞。
66.权利要求57至65的方法，其中通过荧光计、流式细胞仪、荧光显微镜或荧光成像板阅读器进行所述测量，优选通过荧光成像板阅读器。
67.权利要求57至66的方法，其中所述钙敏感性指示剂选自Fluo3、Fluo4、Fluo5、Calcium Green、Calcium Orange、Calcium Yellow、OregonGreen、Fura-2、Fura-4、Fura-5、Fura-6、Fura-FF、Fura Red、indo-1、indo-5、BTC、和FLIPR钙免洗染料、或其混合物，并且其中所述钙敏感性指示剂优选是乙酰氧甲酯形式。
68.权利要求57至67的方法，其中所述细胞维持在具有单室的培养容器中或具有单隔室阵列的隔开的培养容器中，其中优选一次将候选化合物加到一个以上的室中，并且其中所述测量优选一次在一个以上的室中进行。
69.通过权利要求57至68的方法鉴定的化合物。
全文摘要
本发明涉及式I的哌啶基化合物或其药学可接受的盐、前药或溶剂化物，其中R
文档编号A61P29/00GK101044116SQ200580034946
公开日2007年9月26日 申请日期2005年10月14日 优先权日2004年10月14日
发明者埃尔弗里达·R·本亚明, 陈正明, 沙德有, 莱基·塔费塞, 萨缪尔·F·维克托里, 约翰·W·F·怀特黑德, 周晓明 申请人:欧洲凯尔特公司