与感染相关的哺乳动物基因的制作方法

专利名称：：与感染相关的哺乳动物基因的制作方法
技术领域：
：本发明涉及与感染相关的或以其它方式与一种或多种病原体例如病毒、细菌、真菌或寄生物的生命周期相关的核酸序列以及由这些序列编码的细胞蛋白质。本发明还涉及与感染相关的或以其它方式与病原体的
背景技术：
：病毒感染的常规治疗方法包括使用针对特定病毒来源的蛋白质例如HIV蛋白酶、反转录酶或重组(克隆)的免疫调节物(来自宿主)例如干扰素的药物。但是，现有方法存在一些局限和缺点，其中包括病毒的高突变率使抗病毒药物制剂失效。对于免疫调节物，效果有限、限制性的副作用、缺乏特异性均使得这些药剂的广泛应用受到局限。同时，采用现有抗病毒药物和免疫调节物的成功率也不尽如人意。本发明着眼于这样一些基因，它们是病毒复制所必需的基因，但在它们的一个或一对等位基因被破坏时对细胞存活并不产生致命的影响。其发生可伴随剂量效应，其中将一个等位基因敲除可赋予细胞病毒抗性表型。作为干预疗法的靶标，对这些细胞基因产物的抑制不太可能有很严重的毒副作用，所述细胞基因产物包括蛋白质、部分蛋白质(包括但不限于糖基化、脂质修饰物[十四烷基化等]的修饰酶)、脂质、转录元件和RNA调节分子，并且病毒突变也不太可能克服"阻断"而成功复制。通过处理病毒生长所必需的细胞基因，本发明相对于先前尝试的针对病毒感染的干预疗法有明显的改进。因此，通过提供抑制病毒感染所必需的细胞基因从而处理病毒的方法，本发明还提供了一种新的干预病毒感染的治疗方法。对这些细胞基因的抑制还可用于治疗其它病原体例如细菌、真菌和寄生物所致的感染。由于这些基因对细胞存活是非必需的，因此，这些治疗方法可用于受试者，且不会对受试者造成在使用先前方法时发现的那些严重的有害作用。
发明内容本发明提供了与感染相关的或以其它方式与一种或多种病原体例如病毒、细菌、真菌或寄生物的生命周期相关的核酸序列以及由这些序列编码的细胞蛋白质。本发明还提供了鉴定一种调节剂的方法，所述调节剂为与感染相关的或以其它方式与病原体的生命周期相关的核酸序列的调节剂以及由这些序列编码的细胞蛋白质的调节剂。还提供了与感染相关或以其它方式与病原体的生命周期相关的核酸序列的调节剂以及由这些序列编码的细胞蛋白质的调节剂。图1显示对1型呼肠孤病毒感染有抗性的克隆RIE-1细胞的表型特性的表征。(A)如前人所述[3]针对呼肠孤病毒抗原对细胞进行染色。如免疫组织化学检测所得，只有PI细胞含有呼肠孤病毒抗原(黑孔)。上方孔为来自针对呼肠孤病毒抗性所筛选的两组RIE-1突变型细胞系的克隆突变型RIE-1细胞。下方孔，PIRIE-1(左)以及未感染的野生型RIE-1(右)。(B)将在lml完全培养基中给养的呼肠孤病毒易感L细胞单层用来检测在由突变型细胞(上方两孔)、PIRIE-1细胞(左下孔)或未感染亲代RIE-1细胞(右下孔)获得的100ju1裂解物中是否存在病毒。请注意，仅有暴露于PIRIE-1细胞的裂解物中的L细胞单层在暴露一周内裂解(龙胆紫染色)。图2显示RIE-1突变型细胞抗呼肠孤病毒所致溶解性感染。各列包括未筛选的RIE-1细胞文库、RIE-1401C和代表性抗呼肠孤病毒的突变型细胞克隆。制备了一系列二倍稀释的呼肠孤病毒，最高滴度在最上行，M0I-1x104。在感染后3至7天的突变细胞中观察到对1型呼肠孤病毒感染的抗性。标注为"C"的最下行的细胞为未经感染的细胞，用作细胞成活力和增殖的对照。感染后4天用龙胆紫对细胞染色。澄清的孔表明病毒感染之后细胞死亡。图3表示呼肠孤病毒的生命周期模型以及基于本申请中通过插入诱变识别的细胞基因的功能所提出的检查点。病毒生命周期开始于(顶部，顺时针方向)病毒与细胞表面受体结合并被胞吞进入早期内体。然后这些内体与膜联蛋白-n(J朋W)结合[85]并与含有新合成的、来自高尔基体的溶酶体酶的膜联蛋白-n-相关嚢泡融合[86],它随后再与溶酶体融合。空泡IT-ATP酶将溶酶体酸化，使得酸依赖性蛋白酶能够消化病毒颗粒的外层衣壳并将其激活[87]。然后这些被激活的颗粒穿过溶酶体膜并开始mRNA的转录。当嚢泡携带其新合成的物质穿过高尔基体叠层时，高尔基体蛋白gm130(&^a力被认为可介导嚢泡停靠[88,89]。N-乙酰葡糖氨基转移酶I/)可启动细胞表面蛋白质(例如受体)的糖基化，并可能通过亲缘识别在帮助维持溶酶体酶的正确分类中起重要作用[90-94]。/^7r使得与来自高尔基体的溶酶体结合的酶来回穿梭[95]并将组织蛋白酶转移至溶酶体。Igf2过表达可改变igf2r结合物质向溶酶体的送递(ShengI，OrganEL，HaoC，Wells，KS，RuleyHE，RubinDH.2004.MutationsintheIGF-IIpathwaythatconferresistancetolyticreovirusinfection.BMCCellBiology,5:32(27August2004))。钙周期蛋白和oc-原肌球蛋白彼此特异性结合，并且已知钙周期蛋白可结合J/L^2[16，20]。因此，它们可能参与内体融合。A77W。特异性结合病毒信息来开始进行其优势翻译。加a/a/蛋白有助于具有伴倡功能的病毒蛋白的正确折叠[96]。但是，Ztoa/a/蛋白和^7"分别可在病毒运输或细胞凋亡中起其它作用。最终，在形成新的病毒体的结晶样阵列、出现细胞溶解并且病毒被释放时完成形态发生。由突变基因编码的很多细胞蛋白质对内体运输或溶酶体融合有着直接或间接作用，因此可在早期分解或将具有转录活性病毒体送递至合适细胞位置的过程中发挥作用。具体实施例方式通过参照下面对本发明优选的实施方案以及本文中的实施例所进行的详细描述，可更容易地理解本发明。在公开和描述本发明的化合物、组合物、物品、设备和/或方法前，应该理解的是，本发明并不限于特定的核酸、特定的多肽，或者具体的方法，因为它们理所当然地可有所改变。还应该理解的是，本文所使用的术语仅仅是为了描述具体的实施方案，无意于限定。除非上下文另外明确指明，说明书和随后的权利要求书中所使用的单数形式"一种"、"一个"和"该"包括复数指代形式。除非上下文另外明确指明，术语"或者"指所述备选元素中的单个元素或者两个或多个元素的组合。本文所使用的"包括"意思是"包含"。因此，"包括A或B"意思是"包含A、B或A和B"，且不排除其它元素。范围在本文中表示为从"约，，一个具体数值，和/或到"约"另一具体数值。这样表示范围时，另一实施方案则包括从一个具体数值和/或到另一具体数值。同样，当通过在前面使用"约"将数值表示为近似数时，应理解的是具体数值形成了另一实施方案。还应理解的是，每个范围的端点在与另一端点相关时以及独立于另一端点时都是有意义的。"任选的"或"任选地"意味着随后描述的事件或情况可能出现，也可能不出现，并且意味着该描述包括所述事件或情况出现的情形以及不出现的情形。例如，短语"任选在处理前获得"意味着可在处理前、也可处理后获得，或者根本不处理即获得。全文所使用的"受试者"意味着个体。优选地，所述受试者为哺乳动物例如灵长类，更优选为人类。术语"受试者"包括驯养动物例如猫、狗等，家畜(例如牛、马、猪、绵羊、山羊等)，实验动物(例如小鼠、兔、大鼠、沙土鼠、豚鼠等)以及禽类(例如鸡、火鸡、鸭、雉、家鸽、野鴒、鹨鹅、凤头鹨鵡、鹅等)。本发明的受试者还可包括但不限于鱼类、两栖类和爬行类。本发明提供了几种细胞基因，它们是病毒在细胞中生长所必需的，但并不是细胞存活所必需的。本文所使用的"细胞存活非必需的"细胞基因意味着这样一种基因，它的一个或一对等位基因被破坏后细胞还可存活至少一段时间，而这种破坏使得细胞中的病毒复制被减少或抑制。这种减少可用于预防或治疗用途或者用于研究。"病毒生长必需的"基因意味着该基因的基因产物，不管是蛋白质还是RNA，无论分泌与否，均以某种直接或间接方式成为病毒生长所必需的，因此，该基因产物(即功能上可用的基因产物)不存在时，至少一些含有病毒的细胞会死亡。全文所使用的"基因产物"为基因表达所得到的RNA或蛋白质。与病毒感染相关的这些细胞基因或宿主核酸序列可使用基因捕获方法鉴定。这些基因捕获方法在实施例以及美国专利6,448,000和6，777,177中得到阐述。美国专利6,448,000和6，777，177均通过援引全文纳入本文。例如，本文所阐述的宿主核酸序列可通过鉴定细胞中病毒生长所必需的、而细胞存活非必需的细胞基因的方法得到鉴定，所述方法包括(a)将编码缺乏功能性启动子的选择性标记基因的载体转入细胞培养物中，(b)筛选出表达标记基因的细胞，(c)用病毒感染细胞培养物，以及(d)从存活细胞中分离其中插入了标记基因的细胞基因，由此鉴定细胞中病毒生长所必需的、而细胞存活非必需的基因。宿主核酸序列还可通过鉴定细胞中病毒生长所必需的、而细胞存活非必需的细胞基因的方法得到鉴定，所述方法包括(a)将编码缺乏功能性启动子的选择性标记基因的载体转入在含血清培养基中的细胞培养物中，(b)筛选出表达标记基因的细胞，(c)将血清从培养基中除去，(d)用病毒感染细胞培养物，以及(e)从存活细胞中分离其中插入了标记基因的细胞基因，由此鉴定细胞中病毒生长所必需的、而细胞存活非必需的基因。对这些宿主序列及其编码的蛋白质进行鉴定，可鉴定出可被耙向而用于调节(例如减少基因表达和/或减小基因产物的活性，或者增加基因表达和/或增大基因产物的活性)和/或治疗性干预的序列。表1给出了与病毒感染相关的或以其它方式与病毒的生命周期相关的宿主核酸序列。例如，这些核酸及其编码的蛋白质可参与到病毒生命周期的全部阶段，包括但不限于病毒附着至细胞受体、病毒感染、病毒进入、内化、病毒分解、病毒复制、病毒序列的基因组整合、mRNA的翻译、病毒颗粒的组装、细胞裂解以及病毒脱离细胞。本文所使用的基因是在调节序列如启动子或操纵基因等的操控下编码多肽的核酸序列。该基因的编码序列为在合适调节序列的操控下转录并翻译成为多肽(体内、体外或原位)的部分。编码序列的边界可通过5，(氨基)端的起始密码子和3，(羧基)端的终止密码子确定。若欲使该编码序列在真核细胞中表达，则可在编码序列的3'加上多腺苷酸化信号和转录终止序列。转录和翻译控制序列包括但不限于提供的用于表达编码序列(例如在宿主细胞中表达)的DNA调节序列，例如启动子、增强子和终止子。多腺普酸化信号是示例性真核生物控制序列。启动子是能结合RNA聚合酶并能启动下游(3，方向)编码序列转录的调节区域。另外，基因可包括在分泌于或表达于细胞表面的蛋白质的编码序列起始处的信号序列。该序列可编码信号肽(在成熟多肽的N端)，它可指导宿主细胞转移多肽。表1(第2列)还提供了由表1所列基因编码的蛋白质。在几种情况下，用于捕获基因的基因捕获栽体破坏了两个基因，其中一个基因的破坏是由于载体占据了转录(transcribeoff)了负链的基因中的位置。这种事件的一个实例是相同栽体对编码aprataxin的基因和编码DnaJ(Hsp40)同系物亚家族A成员l的基因的破坏。表l还提供了所述基因在大鼠和人基因组(分别为第3列和第4列)染色体上的位置。因此，本发明鉴定了与病毒感染相关的基因的基因组基因座。通过鉴定基因及其在基因组中的位置，本发明提供了作为治疗例如抗病毒治疗、抗细菌治疗、抗真菌治疗和抗寄生物治疗等等的靶标的基因及其产物。表1还提供了大鼠mRNA序列的GeneBank编号(第5列)、人mRNA序列的GeneBank编号(第6列)以;5L^蛋白质序列的GeneBank编号(第7列)。本文提及的以GeneBank编号提供的核酸序列和蛋白质序列全部通过援引纳入本文。本领域的4支术人员应知晓本文所述以GeneBank编号提供的核苷酸序列可容易从美国国立医学图书馆的国立生物技术信息中心(http://www,ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgidb=nucleotide)获得。同样，本文所述蛋白质序列可容易从美国国立医学图书馆的国立生物技术信息中心(http://www,ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgidb=protein)获得。本文提及的以GeneBank编号提供的核酸序列和蛋白质序列可通过援引将其全部内容纳入本文。表1还提供了插入基因捕获载体后获得的大鼠基因部分序列的GeneBank编号(第9列)。简而言之，通过形成基因捕获文库可以分离这些基因，基因捕获文库可通过以下方法形成用反转录病毒基因捕获载体感染细胞，然后选出其中发生基因捕获事件的细胞(即其中插入了载体，藉此插入没有启动子的标记基因，由此细胞启动子启动标记基因的转录，即插入至功能基因)。然后，使用特异性针对反转录病毒基因捕获载体的探针可将其中插入反转录病毒基因捕获载体的基因从集落中分离。因此，通过这种方法分离得到的核酸为分离的基因部分。然后，通过序列比较和其它生物信息学方法，将这些部分用于识别每个基因的完整序列。还提供了大鼠基因和人基因(分别为第10列和第11列)的Entrez基因编号。以表l所列Entrez基因编号提供的信息也通过援引将其全部内容纳入本文。本领域的技术人员可容易地从美国国立医学图书馆的国立生物技术信息中心(http://www,ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgidb=gene)获得该信息。通过进入Entrez基因系统，本领域的技术人员可容易获得表1所列每个基因的其它信息，例如基因的基因组位置、基因编码蛋白质的性质概述、基因的同系物信息以及多个参比序列例如每种基因的基因组序列、mRNA序列和蛋白质序列等。因此，除了表l中以GeneBank编号所列出的序列外，本领域的技术人员还可容易通过获取以Entrez基因编号提供的每种基因的其它信息来获得其它序列例如基因组序列、mRNA序列和蛋白质序列。因此，可以从本文所阐述的Entrez基因编号容易地获得的所有信息也通过援引将其全部内容纳入本文。表2提供了根据基因在细胞中的作用对表1所述多种基因的分类。调节序列(如转录因子)的几个实例提供于表2(例如Brd2、Brd3、Ctcf、E2f2、Gtf2el、Hnrpl、Hoxcl3、Hp卜bp74、Id3、Znf207和Zfp7)。因此，这些转录因子可控制多基因途径。在某些情况下，转录因子的破坏对病毒生长有着直接影响。其它一些情况下，转录因子的破坏可通过影响受其调控的一种或多种基因的转录或翻译来影响病毒生长。因此，本发明还提供了受控于表1和表2所述转录因子的基因以作为治疗例如抗病毒治疗、抗细菌治疗、抗寄生物治疗和抗真菌治疗的靶标。表2还提供了参与其它途径例如膜泡运输、遍在蛋白化、细胞凋亡、代谢等的基因的实例。因此，本申请还提供了这些途径中的其它基因作为治疗性干预(治疗方法)的耙标，所述其它基因在表2所述这些途径的基因上游或下游。例如，产生与遍在蛋白化途径中的上游或下游UbelC相互作用的基因产物的基因被认为是针对细胞内病原体的治疗靶标。例如，它可为调控Ubelc表达的或与Ubelc结合的另一种蛋白质的表达的转录因子。这些实例仅为示例性的，因为这可应用至本文所述全部基因以及这些基因所参与的细胞途径。提及表1中的一种或多种基因时，所述基因包括可起表1所列基因或核酸作用的来自任何生物的任何基因、核酸、cDNA或RNA。提及表1中的一种或多种蛋白质时，所述蛋白质包括可起表1所列蛋白质作用的来自任何生物的任何蛋白质或其片段。例如，术语ANXA1(膜联蛋白1)包括可起ANXA1基因或ANXA1核酸作用的来自任何生物的任何ANXA1基因、核酸、cDNA或RNA。术语ANXA1还包括可起ANXA1蛋白质作用的来自任何生物的任何蛋白质。本文所使用的术语"核酸"指单链或多链分子，它可为DNA或RNA或其任意组合，包括这些核酸的修饰物在内。核酸可代表编码链或其互补链，或其任意组合。核酸序列可与本文所讨论的任何部分的天然存在序列相同，或者包含编码与存在于天然存在序列中的相同氨基酸的备选密码子。还可对这些核酸的典型结构进行修饰。所述修饰包括但不限于核酸曱基化，用硫(产生硫代磷酸脱氧核苷酸)、硒(产生硒代磷酸脱氧核苦酸(phosphorsele謹tedeoxynucleotide))或甲基(产生膦酸曱酯脱氧核苷酸)取代磷酸盐残基的非桥连氧，AT富含区域的AT含量减少，或者表达系统利用非偏好密码子的用法替换为表达系统利用偏好密码子的用法。核酸可直接克隆至合适的载体内，或者如若需要，可对核酸进行修饰以促进随后的克隆步骤。这种修饰步骤是常规的，其中的一个实例是将含有限制酶切位点的寡核苷酸接头加至核酸末端。常规方法叙述于Sambrookefa7.(2001)670"//7#-JZa6or"o/y胞/7朋7(3rded.)Vol.l-3，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborPress,NY，(Sambrook)。只要获得核酸序列，则可通过本领域所熟知的技术在任何特定氨基酸位置修饰或改变编码特定氨基酸的序列。例如，可设计PCR引物，该引物跨越一个或多个氨基酸位置并且可将任一氨基酸置换为另一氨基酸。或者，本领域的技术人员可通过点突变技术在具体核酸序列的任何位点引入特定突变。常规方法叙述于Smith,M."Invitromutagenesis"J/w.Wer.6"e/.，19:423-462(1985)和Zoller，MJ."Newmolecularbiologymethodsforproteinengineering"6krr.5Yrw".A.o/.，1:605-610(1991),这两篇文献就其方法全文纳入本文。这些技术可用来在不改变其编码的氨基酸序列的前提下改变编码序列。本文考虑到的序列包括保留了具有起与病毒感染相关的细胞核酸或蛋白质作用的能力的全长野生型(或天然)序列以及等位基因变体、变体、片段、同系物或融合序列。在某些实例中，蛋白或核酸序列与表1所述天然序列具有至少70%的序列同一性，例如具有至少75%、80%、85%、90%、95%或98%的序列同一性。在其它一些实施例中，与病毒感染相关的核酸序列具有可与表1所述序列杂交并保持表1所述序列的活性的序列。例如，本发明考虑到了与表1所述ANXA1核酸序列(例如GeneBank编号为丽_000700的核酸序列)杂交并编码保留ANXA1活性的蛋白质的核酸。这类序列包括表1所述基因的基因组序列。上述ANXA1的实例仅为示例性的，而不应将这些实例限定为ANXA1,因为这些实例可应用至表l所列每种核酸和蛋白质。除非另外指明，任何提及的核酸分子包括核酸的反向互补分子。除本文要求为单链的(例如ssRNA分子)情况以外，仅书写表示为单链的任何核酸包括相应双链核酸的两条链。例如，表示的dsDNA的正链还包括该dsDNA的互补负链。另外，所提及的编码特定蛋白质或其片段的核酸分子包括有义链及其反向互补链。还考虑了表1以及整个说明书中所述的核酸片段。这些片段可用作引物和探针来扩增或检测表1所述任何核酸或基因。产生具体严格程度的杂交条件可根据杂交方法的性质以及杂交核酸序列的组成和长度有所变化。一般而言，杂交温度以及杂交緩冲液的离子强度(如Na+浓度)将决定杂交的严格性。关于获得具体严格程度的杂交条件的计算方法叙述于Sambrook"a/，(1989)MolecularCloning,secondedition,ColdSpringHarborLaboratory,Plainview，NY(第9和ll章)。下面为一系列示例性而非限制性的杂交条件极高严格度(检测具有90%同一性的序列)杂交5xSSC,651C,16小时洗涤两次2xSSC,室温(RT)，每次15分钟洗涤两次0.5xSSC，65°C，每次20分钟高严格度(检测具有80°/或更高同一性的序列)杂交5x-6xSSC,65°C-70*C,16-20小时洗涤两次2xSSC,RT，每次5-20分钟洗涤两次IxSSC，55X:-70。C，每次30分钟低严格度(检测同一性高于50%的序列)杂交6xSSC,RT至55X:，16-20小时洗涤至少两次2x-3xSSC，RT至55X:,每次20-30分4中。还提供了一种载体，它包含本发明的核酸。该栽体可指导本文所描述的任何蛋白质或多肽在体内或体外的合成。考虑了该载体具有指导和调节插入核酸转录的必需功能元件。这些功能元件包括但不限于启动子、启动子上游或下游区域如可调节启动子转录活性的增强子、复制起点、有助于克隆与启动子相邻的插入物的合适限制性酶切位点、用来筛选含有载体的细胞或含有插入物的载体的抗生素抗性基因或其它标记、RNA剪接点、转录终止区域或可用来帮助插入基因或杂合基因表达的任何其它区域。(通常参见Sambrook"a/.)。载体例如可为质粒。载体可含有具有潮霉素抗性、氨节青霉素抗性、艮他霉素抗性、新霉素抗性的基因或其它适合用作筛选标记的基因或表型，或者具有甲氨蝶呤抗性用以基因扩增的基因或表型。本领域普通技术人员已知有很多其它大肠埃希杆菌(f"力eWc力/a表达载体可用于表达核酸插入物。其它适用的微生物宿主包括芽胞杆菌例如枯草芽孢杆菌(勘^///^^;6"7")以及其它肠杆菌科例如沙门氏菌种、沙雷氏菌种以及各种假单胞菌种。也可制备这些原核宿主中的表达载体，这些载体通常含有与宿主细胞相容的表达调控序列(如复制起点)。另外，可存在任何数目的多种熟知启动子，例如乳糖启动子系统、色氨酸(Trp)启动子系统、p-内酰胺酶启动子系统或来自入噬菌体的启动子系统。启动子通常可控制表达，任选与操纵基因序列一起控制表达，并且具有核糖体结合位点序列，用来例如启动和完成转录和翻译。如若必要，可通过在5，端插入Met密码子并使其与下游核酸序列插入物共同构成一个框架来提供氨基末端甲硫氨酸。另外，可使用标准寡核苷酸突变法除去核酸插入物的羧基末端延伸部分。此外，还可制备核酸修饰物来提高氨基末端的同质性。另外可采用酵母表达。本发明提供了编码本发明多肽的核酸，其中核酸可由酵母细胞表达。更具体而言，核酸可由毕赤酵母(户/c力/a/ws&r/y)或酉良酒酵母(义cere"i/ae)表达。包括例如酉良酒酵母(i^ccAaro/z^cescereF2V2'ae)和毕赤酵母在内的酵母表达系统有几点优点。首先，有证据表明由酵母分泌系统产生的蛋白质可呈现正确的二辟u键配对。其次，使用酵母表达系统可进行高效大规模生产。酿酒酵母前体oc交酉己因子原前导区(pre-pro-alphamatingfactorleaderregion,由#尸"-/基因编码)可用来指导从酵母中分泌蛋白质(Brake,etal.)。前体oc交配因子原的前导区具有信号肽和前区段(pro-segment),所述前区段包括由r^7基因编码的酵母蛋白酶的识别序列，该酵母蛋白酶可在Lys-Arg二肽切割信号序列的氯基端切割前体蛋白质。核酸编码序列可与前体oc交配因子原前导区融合成同一框架。该构建体受控于较强的转录启动子，例如醇脱氢酶I启动子、醇氧化酶I启动子、糖酵解启动子或半乳糖利用途径的启动子。核酸编码序列之后是翻译终止密码子，翻译终止密码子之后是转录终止信号。或者，核酸编码序列可融合至另一蛋白质编码序列例如Sj26或P-半乳糖普酶，用于帮助通过亲和色谱法对融合蛋白进行纯化。用来分离融合蛋白组分的蛋白酶切割位点的插入可应用到用于在酵母中表达的构建体。在杆状病毒系统中还可实现重组蛋白质的高效表达和翻译后糖基化。哺乳动物细胞可使得蛋白质在有利于重要的翻译后修饰的环境中表达，所述重要的翻译后修饰例如为折叠和半胱氨酸配对、复杂碳水化合物结构的引入以及活性蛋白质的分泌。用于在哺乳动物细胞中表达活性蛋白质的载体的特征在于在较强的病毒启动子和多腺苷酸化信号之间插入了蛋白质编码序列。载体可含有具有潮霉素抗性、艮他霉素或G418抗性的基因或其它适合用作筛选标记的基因或表型，或者具有甲氨蝶呤抗性用以基因扩增的基因或表型。可使用曱氨喋呤抗性编码载体将嵌合蛋白质编码序列引入中国仓鼠卵巢(CH0)细胞系，或者使用合适的选择标记将其引入其它细胞系。转化细胞中是否存在栽体DNA可通过Southern印迹分析进行确证。对应插入物编码序列的RNA的产生可通过Northern印迹分析进行确证。本领域中已经开发了《艮多能分泌完整人蛋白质的其它合适的宿主细胞系，这些宿主细胞系包括CH0细胞系、Hela细胞、骨髓瘤细胞系、Jurkat细胞等。这些细胞的表达栽体可包括表达调控序列如复制起点、启动子、增强子等，以及必需的信息加工位点如核糖体结合位点、RM剪接位点、多腺苷酸化位点等，以及转录终止子序列。优选的表达调控序列为来源于免疫球蛋白基因、SV40、腺病毒、牛乳头状瘤病毒等的启动子。本文所述表达载体还包括受控于诱导型启动子如四环素诱导型启动子或糖皮质激素诱导型启动子等的本发明核酸。本发明的核酸还可受控于组织特异性启动子，以促进核酸在特定细胞、组织或器官中表达。还考虑了任何可调节的启动子如金属硫蛋白启动子、热休克启动子和其它可调节的启动子，其中很多实例为本领域熟知。另夕卜，还使用了Cre-loxP诱导性系统以及F1p重组酶诱导性启动子系统，两者均为本领域已知。还可使用在哺乳动物细胞中表达基因或核酸的其它载体，它们与所开发的用于表达人Y干扰素、组织纤维蛋白溶酶原激活剂、凝固因子Vffl、乙型肝炎病毒表面抗原、蛋白酶Nexinl和嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白的载体相似。另外，载体可包括可用于在哺乳动物细胞(如C0S-7)中表达插入核酸的CMV启动子序列和多腺苷酸化信号。昆虫细胞也可表达哺乳动物蛋白质。用杆状病毒载体在昆虫细胞中产生的重组蛋白质会经历翻译后修饰，该修饰与野生型蛋白质的修饰相似。简而言之，用于在昆虫细胞中表达活性蛋白质的杆状病毒载体的特征在于在多角体蛋白(主要包含体蛋白(occlusionprotein))编码基因的苜蓿4艮紋夜蛾核型多角体病毒(JWogra/7力/cacahVor/z/canuclearpolyhedrosisvirus,AcNPV)启动子下游插入了蛋白质编码序列。用病毒和质粒DNA的混合物转染培养后的昆虫细胞例如草地贪夜蛾(5^^/7""/>收//7"^)细胞系，然后将病毒子代涂板。多角体蛋白基因的缺失或插入失活可导致产生包含体阴性病毒，该病毒形成的喧斑显著不同于野生型包含体阳性病毒所形成的噬斑。这些特征性喧斑形态学使得可对重组病毒进行目测筛选，在所述重组病毒中，AcNPV基因已由所选择的杂合基因所替换。本发明还提供了含有所考虑的核酸的载体，所述载体在适于表达该核酸的宿主中。宿主细胞可为原核细胞，包括例如细菌细胞。更具体而言，细菌细胞可为大肠埃希氏菌细胞。或者，细胞可为真核细胞，包括例如中国仓鼠卵巢(CH0)细胞、C0S-7细胞、HELA细胞、禽类细胞、骨髓瘤细胞、毕赤酵母细胞或昆虫细胞。例如使用曱氨喋呤抗性编码载体，可以将本文所述任何多肽的编码序列引入中国仓鼠卵巢(CH0)细胞系，或者使用合适的筛选标记将其引入其它细胞系。转化细胞中是否存在载体DNA可通过Southern印迹分析进行确证。对应插入物编码序列的RNA的产生可通过Northern印迹分析进行确证。已经开发了很多其它合适的宿主细胞系，这些宿主细胞系包括骨髓瘤细胞系、成纤维细胞系和多种肿瘤细胞系例如黑素瘤细胞系。用于这些细胞的表达载体可包含表达调控序列例如复制起点、启动子、增强子，以及必需的信息加工位点如核糖体结合位点、RNA剪接位点、多腺苷酸化位点，以及转录终止序列。优选的表达调控序列为来源于免疫球蛋白基因、SV40、腺病毒、牛乳头状瘤病毒等的启动子。含有目的核酸区段的载体可通过已知方法转入宿主细胞，这些方法4艮据细胞宿主的类型有所变化。例如，氯化钩转化方法通常用于原核细胞，而磷酸钙、DEAE葡聚糖、脂转染胺试剂或脂转染试剂介导的转染、电穿孔或任何现在已知或待将来鉴定的方法可用于其它真核细胞宿主。多肽本发明提供了分离的多肽，包括表l中以GeneBank编号述及的多肽或蛋白质序列。本发明还提供了这些多肽的片段，例如膜联蛋白Al蛋白质的片段、膜联蛋白A2蛋白质的片段、膜联蛋白A3蛋白质的片段等。这些片段的长度足以用作抗原肽，以形成抗体。本发明还考虑到表1所述蛋白质的功能性片段，该片段具有该蛋白质的至少一种活性，例如为病毒感染所必需的、但并非细胞存活所必需的活性。本领域的技术人员应知晓表1所述多肽具有其它性质。例如，ABCA4为ATP结合盒转运体超家族的成员。因此，本领域的技术人员可对ABCA4片段用作ATP结合盒转运体的能力进行评估。若具有ATP结合盒转运体活性，则本领域的技术人员便可获知ABCA4为ABCA4的功能片段。表1所列多肽的片段及变体与其各自的GeneBank编号所列的氨基酸序列相比可包括一个或多个保守氨基酸残基。"分离的多肽，，或"纯化的多肽"指基本不含有在自然环境中或在培养条件下通常伴随该多肽的物质的多肽。本发明的多肽例如可通过从可获得的自然来源(例如哺乳动物细胞)来提取获得，通过表达编码多肽的重组核酸获得(例如在细胞或不含细胞的翻译系统中)，或者通过化学合成多肽获得。另外，可通过切割全长多肽来获得多肽。多肽为天然存在的较大多肽的片段时，分离的多肽比天然存在的全长多肽短，并且不包括该天然存在的全长多肽，其中分离的多肽是天然存在的全长多肽的片段。使用任何一种本领域普通技术人员已知的多肽化学合成技术可制备本发明多肽，这些多肽化学合成技术包括溶液法和固相法。生产本发明多肽的一种方法是通过蛋白质化学技术将两个或多个肽或多肽连接在一起。例如，可使用现有的实验室设备并应用Fmoc(9-药甲氧羰基)或Boc(叔丁氧羰基)化学(AppliedBiosystem，Inc.,FosterCity,CA)可化学合成肽或多肽。本领域的技术人员可容易理解对应于本发明抗体的肽或多肽可通过例如标准化学反应合成。例如，可合成肽或多肽，且不将其从其合成树脂上切割下来；可合成抗体的其它片段，但随后从树脂上切割下来，由此暴露其它片段上被官能性封闭的末端基团。通过肽缩合反应，这两个片段可通过肽鍵分别在羧基和氨基末端共价连接起来形成抗体或其片段(GrantGA(1992)SyntheticP印tides:AUserGuide.W.H.FreemanandCo"N-Y.(1992);BodanskyMandTrostB.，Ed.(1993)PrinciplesofPeptideSynthesis.Springer-VerlagInc.,NY)。或者，肽或多肽可按如上所述在体内独立合成。可以在分离后将这例如，^"用克隆的或合成的一肽区段的酶连接而使相对较短"肽片段连接起来生成较大的肽片段、多肽或整个蛋白质结构域(AbrahmsenLetal.，Biochemistry,30:4151(1991))。或者，可用合成肽的天然化学连接从较短的肽片段合成构建较大的肽或多肽。本方法由两步化学反应组成(Dawsonetal.SyntlxesisofProteinsbyNativeChemicalLigation.Science,266:776-779(1994))。第一步为未保护的合成肽-ct-硫酯与另一含有氨基端Cys残基的未保护的肽区段进行化学选择性反应，获得硫酯键连接的中间体作为初始共价产物。若不改变反应条件，该中间体会自发进行快速的分子内反应，并在连接位点形成天然的肽键。这种天然化学连接方法在蛋白质分子的总体合成中的应用可通过制备人白细胞介素8(IL-8)得以阐述(BaggioliniMetal.(1992)FEBSLett.307:97—101;Clark—LewisIetal，J.Biol.Chem.，269:16075(1994);Clark-LewisIetal"Biochemistry,30:3128(1991);RajarathnamKetal.，Biochemistry33:6623-30(1994))。或者，可化学连接未保护的肽区段，此时由于化学连接导致肽区段之间形成的键为非天然(非肽鍵(Schnolzer，Metal.Science,256:221(1992))。该技术已被用来合成的蛋白质结构域的类似物以及大量相对较纯的具有生物学活性蛋白质(deLisleMiltonRCetal.，TechniquesinProteinChemistryIV.AcademicPress,NewYork,pp.257—267(1992))。本发明多肽还可通过包括例如重组技术在内的其它方法制备得到。合适的克隆和测序技术的实例以及足以指导本领域的技术人员完成多种克隆实验的教导可见于Sambrooketal.(2001)MolecularCloning-ALaboratoryManual(3rded.)Vol.1-3，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborPress,NY，(Sambrook)。本发明还提供了一种多肽或该多肽序列的片段，所述多肽含有与表1中以GeneBank编号给出的多肽序列有至少约70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。应理解的是，正如本文所述，使用的术语"同源性，，和"同一性"含义是相同的，都指的是相似性。因此，例如如果在提及两个非天然序列时使用词语"同源性"，则应理解的是这不一定表示这两个序列之间有进化关系，而应着眼于其核酸序列之间的相似性或相关性。为了测量序列相似性，可将很多用于测定两种进化相关的分子同源性的方法常规地应用至任何两种或两种以上核酸或蛋白质，而不用考虑它们是否进化相关。总而言之，应理解的是，确定本文所公开的核酸和多肽的任何已知变体和衍生物或可能出现的变体和衍生物的一种方法是通过确定变体和衍生物与特定已知序列之间的同源性而进行的。总的说来，本文所公开的核酸和多肽的变体一般与所述序列或天然序列具有至少约70°/。、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同源性。本领域的技术人员可容易理解如何确定两种多肽或核酸的同源性。例如，可在对两个序列进行比对而使同源性水平最高之后，计算得出同源性。计算同源性的另一种方法可通过公开的算法进行。用于比较的最佳比对可通过SmithandWatermanAdv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源'性算法进4亍，通过NeedlemanandWunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)的同源比对算法进行，通过PearsonandLipman，Pro"Natl.Acad.SciU.S.A.85:2444(1988)的相似性检索方法进行，通过这些算法的计算机执行(WisconsinGeneticsSoftwarePackage中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.，Madison,WI;国立生物4支术信息中心提供的TatusovaandMaddenFEMSMicrobiol.Lett.174:247-250(1999)的BLAST算法(http://www,ncbi.nlm.nih.gov/blast/bl2seq/bl2.html))进行或通过审查进行。相同类型的核酸的同源性可通过例如Zuker，M.Science244:48-52:1989，Jaegeretal.Proc.Natl.Acad.SciUSA86:7706-7710，1989，Jaegeretal.MethodsEnzymol.183:281-306，1989所公开的算法获得，这些文献至少将其与核酸比对相关的内容通过援引纳入本文。应理解的是，通常可使用任何一种方法，并且在某些情况下这些不同方法得到的结果有所不同，但是本领域的技术人员可以理解若用这其中的至少一种方法获得了同一性，则称该序列具有所述同一性。例如，本文所使用的与另一序列具有具体百分比同源性的所述序列是指具有由上述一种或多种计算方法计算得到的所述同源性的序列。例如，如果使用Zuker计算方法计算得到第一序列与第二序列具有80%的同源性，则即便使用任何其它计算方法计算得到第一序列与第二序列没有80%的同源性，第一序列与第二序列也具有本文所述的80%的同源性。作为另一实例，如果使用Zuker计算方法和Pearson和Lipman计算方法计算得到第一序列与第二序列具有80%的同源性，那么即便使用Smith和Wateman计算方法、Needleman和Wunsch计算方法、Jaeger计算方法或任何其它计算方法计算得到第一序列与第二序列没有80%的同源性，第一序列与第二序列也具有本文所述的80%的同源性。作为又一实例，如果使用每种计算方法计算得到第一序列和第二序列具有80%的同源性，则第一序列与第二序列具有本文所述的80%的同源性(尽管实际上，不同的计算方法通常会计算得到不同的同源性百分比)。本发明还提供了将表l中以GeneBank编号形式述及的多肽进行一个或多个保守氨基酸置换的多肽。这些保守置换即为将天然存在的氨基酸置换为具有相似性质的氨基酸。这种保守置换并不改变多肽的功能。例如，保守置换可依据下表进行表l:氨基酸置换<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>因此，应理解的是，如若需要，可对编码本发明多肽的核酸和/或本发明多肽的氨基酸序列进行修饰和改变，并仍能获得具有相似特征或其它所需特征的多肽。这种改变可在天然分离物中进行，或者可利用位点特异性诱变通过合成引入，所述通过位点特异性诱变引入的方法例如错配聚合酶链反应(PCR)为本领域所熟知。例如，多肽中的某些氨基酸可被置换成其它氨基酸，而不会显著丧失功能活性。因此考虑了可对本发明多肽的氨基酸序列(或其核酸序列)作出多种改变，而不显著丧失生物效用或活性，并且这种效用或活性还可能得到提高。因此，很清楚的多肽序列通过^因工程得到的变化形式。、:通过提供与病i感染相关的基因的基因组位置，本发明还提供了这些基因的任何变体序列的基因组位置。因此，基于本文提供的信息，对于本领域的技术人员而言，鉴定申请人所鉴定的基因组位置并对其测序以及鉴定本文所述基因的变体序列是常规的。对于本领域的技术人员而言，利用比较工具和生物信息技术来鉴定来自其它物种的序列也是常规的，所述来自其它物种的序列是本文所述基因的同系物并且也是感染所必需、但并非为细胞存活所必需的。抗体本发明还提供了特异性结合表1所述基因产物、多肽、蛋白质及其片段的抗体。本发明抗体可为多克隆抗体或单克隆抗体。本发明抗体选择性结合多肽。"选择性结合"或"特异性结合，，指的是测定抗原是否存在的抗体结合反应(在本文中是指测定在一群异源蛋白质中和其它生物制品中是否存在表l所述多肽或其抗原性片段的反应)。因此，在特定的免疫分析条件下，所述具体抗体优先结合特定的肽，而不是以显著的量结合样本中其它蛋白质。优选地，选择性结合包括大约或大于1.5倍分析背景的结合，小于1.5倍分析背景的结合为不存在显著结合。本发明还考虑到了与表1所述蛋白质的天然相互作用因子或配体竟争性结合的抗体。换而言之，本发明提供了干扰表1所述蛋白质和其结合伴侣之间的相互作用的抗体。例如本发明抗体可与某种蛋白质竟争细胞上的结合位点(如受体)，或者该抗体可与某种蛋白质竟争结合另一种蛋白质或生物分子，例如受表1所述转录因子转录调控的核酸。与抗原相比，抗体任选具有拮抗作用或激动作用。优选地，抗体可在体内或离体时结合多肽。任选地，本发明抗体用可检测部分进4于标记。例如，可检测部分可选自荧光部分、酶联部分、生物素部分和放射标记部分。抗体可用于诸如诊断、筛选或成像等技术或方法中。抗独特型抗体和亲和成熟抗体也被认为是本发明的一部分。本文所使用的术语"抗体或其片段"包括具有两种或多种抗原或表位特异性的嵌合抗体和杂合抗体，以及包括杂合片段在内的片段例如F(ab，)2、Fab，、Fab等。因此提供了保留了与其特异性抗原进行结合的能力的抗体片段。这类抗体和片段可由本领域已知的技术制备，并可根据实施例所述方法和生产抗体和筛选抗体的特异性和活性的一般方法对抗体的特异性和活性进行筛选(参见HarlowandLane.Antibodies,ALaboratoryManual.ColdSpringHarborPublications,NewYork,(1988))。"抗体及其片段"的含义还包括例如美国专利4,704,692所述的抗体片段和抗原结合蛋白的缀合物(单链抗体)，所述文献的内容通过援引纳入本文。任选地，抗体在其它物种中形成并为了给人施用而被"人源化"。在本发明的一个实施方案中，"人源化，，抗体为由种系突变体动物产生的人类抗体形式的抗体。非人类(如鼠类)抗体的人源化形式为嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv、Fab、Fab，、F(ab，)2或抗体的其它抗原结合子序列)，它们含有最少的来源于非人类免疫球蛋白的序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体CDR的残基被来自人以外物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或兔CDR的、具有所需特异性、亲和力和容纳力的残基替换。在一个实施方案中，本发明提供了抗体的人源化形式，包含特异性结合表1所述蛋白质的单克隆抗体的至少一个、两个、三个、四个或最高至全部CDR。在某些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基由相应的除人外的残基所替换。人源化抗体还可包括既不存在于受体抗体中也不存在于引进的CDR或框架序列中的残基。一般而言，人源化抗体包括基本上所有的可变域，或者包括至少一个可变域，一般包括两个可变域，其中所有的或基本上所有的CDR区域对应非人类免疫球蛋白的CDR区域，并且所有的或基本上所有的FR区域为人免疫球蛋白共有序列的FR区域。人源化抗体最好还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，一般为人免疫球蛋白的恒定区(Jonesetal.，Nature,321:522-525(1986);Riechmannetal.,Nature,332:323-327(1988);andPresta，Curr.Op.Struct.Biol，2:593-596(1992))。人源化非人类抗体的方法为本领域所熟知。一般而言，人源化抗体具有从非人类来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人类氨基酸残基通常指"引进"的残基，它通常来自"引进"的可变域。依照Winter和他的同事的方法(Jonesetal.，Nature,321:522-525(1986);Riechmannetal.，Nature,332:323-327(1988);Verhoeyenetal攀，Science,239:1534-1536(1988))，通过将啮齿类CDR或CDR序列置换为相应的人抗体的序列，可基本完成人源化。因此，这种"人源化"抗体为嵌合抗体(美国专利4,816,567),其中基本上不到一个完整的人可变域由来自非人类物种的相应序列所替换。实际上，人源化抗体一般为人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被来自啮齿类抗体的类似位点的残基所置换。药剂的鉴定一种鉴定抗病毒药剂的方法包括a)将所述药剂给予含有表1所列细胞基因的细胞，b)检测由细胞基因产生的基因产物的水平和/或活性，该基因产物和/或基因产物活性的减少或消失表明该化合物具有抗病毒活性。本发明还提供了一种鉴定抗病毒药剂的方法，包括a)将所述药剂给予含有表1所列细胞基因的细胞，b)使细胞和病毒接触；c)检测病毒感染的水平；并d)将病毒感染水平与表1中基因的表达水平或表1中基因编码的蛋白质的活性相关联，病毒感染的减轻或消失与基因表达和/或活性的减少或消失相关就表明所述药剂为抗病毒药剂。例如，药剂可干扰基因表达和/或基因的蛋白质或多肽产物的活性。在本发明的方法中，本发明测试化合物或抗病毒药剂可在细胞与病毒接触之前或之后或在细胞与病毒接触的同时送递。上述方法可用来鉴定在经病原体感染之后具有减轻感染、预防感染或提高细胞存活的活性的任何药剂。因此，在本发明的方法中，细胞与病毒接触的步骤可替换为细胞与任何感染性病原体接触。感染包括引入感染物，例如非重组病毒、重组病毒、质粒、细菌、朊病毒、真核微生物或能感染宿主例如细胞培养物的细胞或受试者的细胞等的其它物质。这种感染可为体外的、离体的或体内的。用于本文所述方法的测试化合物可包括但不限于化学品、小分子、药物、蛋白质、cDM、抗体、morpholinos、三链螺旋分子、siRM、shRM、反义RNA、核酶或任何其它已知的或今后将被鉴定的、会干扰本文所述细胞基因的表达和/或功能的化合物。测试化合物还可调节本文所述细胞基因的基因产物的活性。小干扰RNA(siRNA)为双链RNA，它可诱导序列特异性转录后基因沉默，由此减少甚或抑制基因表达。在一些实例中，siRNA分子长约19-23个核苷酸，例如至少有21个核苷酸，例如至少有23个核苦酸。在一个实例中，siRNA可触发siRNA和靶RNA之间序列同一性区域的同源RNA分子如mRNA的特异性降解。例如，W002/44321//^开了在乾mRNA与3，突出端威基配对时能序列特异性降解靶mRNA的siRNA。dsRNA加工的方向决定了所产生的siRNA核酸内切酶复合物所切割的是有义靶RNA还是反义把RNA。因此，例如通过使基因例如表l所述一个或多个基因沉默，可将siRNA用于调节转录。siRNA的作用已在来自包括果蝇("r^o^A/h)、线虫e/egaz^)、昆虫、蛙、植物、真菌、小鼠和人在内的多种生物体的细胞中得到证实(例如WO02/44321;Gitlinetal"Nature418:430-4，2002;Caplenetal.，Pro"Natl.Acad.Sci98:9742—9747，2001和Elbashiretal.，Nature411:494-8，2001)。在某些实例中，设计针对某些乾基因的siRNA以验证针对相同核酸序列所使用的基因捕获的结果。采用序列分析工具，本领域的技术人员可设计siRNA来特异性打靶表1所述任何基因来减少基因表达。抑制表1所述任何基因的基因表达或使其沉默的siRNA可从AmbionInc.2130WoodwardAustin,TX78744-1832USA获得。只要提供编码序列的GeneBank编号或基因的Entrez基因编号，就可以容易地获得由Ambion7>司合成的siRNA，大鼠和人编码序列的GeneBank编号或Entrez基因编号均已在表l中提供。本文还提供了可用来减少表1所列基因的基因表达的序列的实例。特别地，表3提供了表1所列基因的有义RNA序列和反义RM序列。因此，表3所述任何有义或反义序列可单独使用或与其它序列一起使用，以抑制基因表达。这些序列可包含3，TT突出端和/或其它可有效克隆和表达siRNA序列的序列。这些序列可通过分析表3所列基因的可译框架获得。因此，表3提供了所分析的每种基因的名称、基因的mRM的GeneBank编号、mRNA的长度、mRNA的0RF区域和每种基因的基因座编号。每种基因的基因座编号与表l所列Entrez基因编号相同。表3还提供了基因可译框架中的序列的起始位点，所述基因可通it^3所述有义RNA序列和/或反义RNA序列对其进行打靶。把序列的起始位点在名称栏和起点栏标出。名称栏还提供了每个把序列的GeneBank编号标识符。因此，很清楚的是，表3中具有名称NM_000350_siRM_458的行表明有义序列和反义序列对应GeneBank编号NM_000350,耙序列的起始位点为458。例如，ABCA4基因耙序列开始于458位。因此，含有SEQIDNO:1的序列和/或含有SEQIDNO:2的序列为可用来耙向ABCA4并减少ABCA4基因表达的两个序列。同样，含有SEQIDNO:3的序列和/或含有SEQIDNO:4的序列可用来靶向ABCA4表达。这些实例并非意在限制，而是属于表3所述每一个有义和反义RNA序列的一部分。包含本文所述有义和反义RNA序列的序列可用来抑制任何细胞(真核细胞或原核细胞)、动物或任何其它生物中的基因表达。这些序列可克隆至载体中并在体外、离体或体内条件下用来减少基因表达。shRM(短发夹RM)为DM分子，它可被克隆至表达载体来表达用于RNAi干扰研究的siRNA(19-21个核苷酸的RNA双链)。shRNA具有如下结构特征长约19-29个核苷酸、来源于耙基因的短核苷酸序列，其后为约4-15个核苷酸的短间隔物(即环)以及约19-29个核苷酸的序列，所述19-29个核苷酸的序列为起始靶序列的反向互补序列。例如，表3所述任何基因的有义siRNA序列均可用来设计shRNA。作为一个实例，C10orf3(SEQIDN0:292)的有义RM序列可用来设计具有示例性接头序列(CGAA)的shRNA。如下所示，有义序列通过接头(CGAA)与反义序列连接而形成顶链(topstrand)。顶链和底链(bottomstrand)退火形成可克隆至恰当表达载体的双链寡核苷酸。该双链寡核苷酸具有如下所示有助于克隆的核苷酸突出端。这些序列可克隆至栽体并离体、体外或体内应用以减少基因表达。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>因此，表3所述任何有义序列可用接头使其与相应的反义序列连接起来形成shRNA的顶链。底链是顶链的反向互补序列。将表3所述序列中的"U"由"T"置换从而形成DNA链。然后将顶链和底链退火形成双链shRNA。如上所述，顶链和底链具有突出端或其它有助于克隆至表达载体序列。核酶是能催化特异性切割RNA的具有酶活性的RNA分子。核酶的作用机制包括核酶分子特异性杂交至互补的靶RNA和随后进行核酸内切。使用核酶来降低或抑制RNA表达的方法为本领域已知(例如参见Kashani-Sabet，JInvestig.Dermatol.Symp.Proc,7:76-78，2002)。通常，术语"反义"指由于一定程度的序列互补性而能与RNA序列(如mRNA)的一部分杂交的核酸分子。本文所公开的反义核酸可以是双链或单链寡核苷酸，RNA或DNA或其修饰物或衍生物，可直接将它给予细胞(例如通过将反义分子给予受试者)，或者通过外源引入序列的转录在细胞内产生(例如通过给予受试者含有受控于启动子的反义分子的栽体)。反义核酸为多核苦酸，例如为至少长6个核苷酸、至少长10个核苷酸、至少长15个核苷酸、至少长20个核苷酸、至少长100个核苷酸、至少长200个核苷酸的核酸分子，例如为6至100个核苷酸的核酸分子。然而反义分子也可以长得多。在具体的实例中，核苷酸在一个或多个碱基部分、糖基部分或磷酸盐骨架(或其组合)上被修饰，并可包括其它附加的基团例如肽或有助于跨细胞膜(Letsingeretal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1989，86:6553-6;Lemaitreetal，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1987，84:648-52;WO88/09810)或者血脑屏障(WO89/10134)转运的药剂、杂交触发切割剂(Kroletal，BioTechniques1988,6:958-76)或插入试剂(Zon，Pharm.Res.5:539-49，1988)。经修饰的碱基部分的实例包括但不限于5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5-羧曱基氨曱基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨曱基尿嘧啶、二氢尿嘧咬、P-D-半乳糖基Q核苷(galactosylqueosine)、肌苦、N~6-异戊基腺嘌呤(sopentenyladenine)、1-曱基鸟嘌呤、1-曱基肌苷、2，2-二曱基鸟噪呤、2-曱基腺噪呤、2-曱基鸟噪呤、3-曱基胞嘧咬、5-曱基胞嘧啶、N6-腺噤呤、7-甲基鸟噤呤、5-曱基氨甲基尿嘧啶、甲氧氨曱基-2-硫尿嘧咬、0—D-甘露糖基Q核苷(mannosylqueosine)、5，一曱氧基羧曱基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-曱硫基-N6-异戊基腺嘌呤、尿嘧啶-5-羟基乙酸、假尿嘧啶、Q核苷(queosine)、2-巯基胞嘧咬、5-曱基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧咬-5-羟基乙酸曱酯、尿嘧啶-S-羟基乙酸、5-曱基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶和2，6-二氨基嘌呤。经修饰的糖基部分的实例包括但不限于阿拉伯糖、2-氟阿拉伯糖、木糖和己糖，或者磷酸盐骨架的修饰组分例如硫代磷酸酯(phosphorothioate)、二辟u>R磷酸酯、氨基石危辨酸酯(phosphoramidothioate)、^1*^酉旨、二ll，^酉旨(phosphordiamidate)、磷酸曱酯、烷基磷酸三酯、或formacetal或其类似物。在一个具体实例中，反义分子为a-异头寡核苷酸。a-异头寡核苷酸与互补RNA形成特异性双链杂合体，与通常的P单位不同，其中的链彼此平行(Gautieretal，Nucl.AcidsRes.15:6625-41，1987)。寡核苷酸可与另一分子例如肽、杂交触发交联剂、转运剂或杂交触发切割剂缀合。寡核苷酸可包括可增强宿主细胞摄入分子的寻靶部分。寻靶部分可为特异性结合分子，例如识别存在于宿主细胞表面的分子的抗体或其片段。在一个具体实例中，识别本文所述核酸的反义分子包括催化性RNA或核酶(例如参见WO90/11364;WO95/06764;和Sarveretal.，Science247:1222-5，1990)。反义分子与金属复合物如三联吡咬铜(n)的缀合物描述于Bashkinetal.(ApplBiochemBiotechnol.54:43-56，1995),该缀合物能介导mRNA水解。在一个实例中，反义核苷酸为2，-0-曱基核糖核苷酸(Inoueetal，Nucl.AcidsRes.15:6131-48，1987)或嵌合的RNA-DNA类似物(Inoueetal，FEBSLett,215:327-30，1987)。使用这些方法鉴定的抗病毒药剂可用于离体、体外或体内抑制细胞中的病毒感染。本发明的方法中，可使用可被病毒或其它病原体例如细菌、寄生物或真菌等感染的任何细胞。细胞可为原核细胞或真核细胞，例如来自昆虫、鱼、曱壳动物、哺乳动物、鸟、爬行动物、酵母或细菌如大肠埃希氏菌的细胞。细胞可为生物体的一部分或为细胞培养物例如哺乳动物细胞的培养物或细菌培养物的一部分。本发明的病毒包括所有RNA病毒(包括负链RNA病毒、正链RNA病毒、双链RNA病毒和反转录病毒)和DNA病毒。病毒的实例包括但不限于HIV(包括HIV-1和HIV-2)、微小病毒、乳头瘤病毒、麻療病毒、纤丝病毒(filovirus)(例如Marburg)、SARS(严重急性呼吸道综合征)病毒、汉坦病毒、流感病毒(如A型、B型和C型流感病毒)、A至G型肝炎病毒、杯状病毒、星状病毒、轮状病毒、冠状病毒(例如人呼吸道冠状病毒)、微小RNA病毒(例如人鼻病毒和肠道病毒)、埃博拉病毒、人疱渗病毒(例如HSV-l-9，包括带状疱渗病毒、Epstein-Barr病毒和人巨细胞病毒)、口蹄疫病毒、人腺病毒、腺伴随病毒、天花病毒(痘渗病毒)、牛痘病毒(cowpox)、猴痘病毒、痘苗病毒(vaccinia)、脊髓灰质炎病毒、病毒性脑膜炎病毒和汉坦病毒。对于动物，病毒包括但不限于任一上述人病毒的相应动物病毒、禽流感病毒(例如毒林H5N1、H5N2、H7N1、H7N7和H9N2)和动物反转录病毒例如猿猴免疫缺陷病毒、禽免疫缺陷病毒、假牛痘病毒、牛免疫缺陷病毒、猫免疫缺陷病毒、马传染性贫血病病毒、羊关节炎脑炎病毒和绵羊髓鞘脱落病毒。本发明方法还可用于评价细菌感染和鉴定抗细菌药剂。具体而言，可以使用相同的方法，只是将细胞与病毒接触替换为将细胞与细菌接触。因此，本发明提供了一种鉴定抗细菌药剂的方法，包括a)将药剂给予含有表1所列细胞基因的细胞，b)检测由细胞基因产生的基因产物的水平和/或活性，基因产物和/或基因产物活性的减少或消失表明化合物具有抗细菌活性。本发明还提供了一种鉴定抗细菌药剂的方法，包括a)将药剂给予含有表1所列细胞基因的细胞，b)使细胞与细菌相接触，c)检测细菌感染的水平；并d)将细菌感染水平与表1中基因的表达水平或表1中基因编码的蛋白质的活性相关联，细菌感染的减轻或消失与基因表达和/或活性的减少或消失相关则表明药剂为抗菌剂。细菌的实例包括但不限于下列细菌利斯特菌属(""eWa&/7.>0、结核分枝杆菌(妙co6a"er/咖立克次氏体(W/de〃s/a(全部型))、埃里希氏体(Wr/Zc力/a)、衣原体(CAr/a边A/a)。可由本发明方法靶向的细菌的其它实例包括结核分枝杆菌(#.^/6ei"cw/M/i)、牛分枝杆菌(#.6or")、牛分枝杆菌BCG菌林、BCG亚抹、鸟分枝杆菌(yKar/u迈)、胞内分枝杆菌(#./""ace//"",),非洲分枝杆菌3/>/"/7咖)、堪萨斯分枝杆菌(7Kh/ws//)、瘰疬分枝杆菌(〃鹏W/咖)、溃疡分枝杆菌y/cera/^)、鸟分枝杆菌副结核亚种aF/"迈5^6s/7ec/e51/7ar"w6ercw/c^/s)、星状诺卡氏菌(a"ero/des)、其它诺卡氏菌种、侵肺军团菌(Ze^7o/e7/a//6咖0/7力//3)、其它军团菌种、伤寒沙门氏菌(5^/迈0/e7"Ot7力/)、其它沙门氏菌种、志贺氏菌种、鼠疫耶尔森氏菌(7em'//a/e^2's)、溶血巴斯德氏菌(力ae巡0/7〃ca)、多杀巴斯德氏菌(/><3<s^ei/re//a迈w"oc/Va)、其它巴斯德氏菌种、大叶性肺炎》文线杆菌(Jc〃/70&c/7/mj3/ewro/7/e咖o/z/ae)、单核细胞增生利斯特氏菌(Z/"eWa巡o/70cj^oge/es)、伊氏利斯特氏菌(Z/sfer7a/ra/7oW/)、5危产布鲁氏菌(^T/ce/7aa6or&s)、其它布鲁氏菌种、反刍类考德里氏体(Co肌^'ar〃/z//a/7f/〃/z7)、肺炎衣原体(C力/a巡ydya/w7ez7巡o"/ae)、>^、目艮衣原体(C6/a迈W/afrac力o迈"2.s)、鹨鵡热衣原体(C力/a迈yd/a/7"'"ac/)、伯氏考克斯氏体(6w7e"7)、其它立克次氏体种、埃里希氏体(f力/7/c力/a)种、金黄色葡萄球菌(5^a/7Ar/ococci/5"ai/rews)、表皮葡萄球菌(5Ya/74r/ococciAye/72V/e/^/d/51)、酉良腺链球菌(5^re/^ococcw51/^oge/7ey)、无乳链球菌(y^re/^ococc^aga/ac〃ae)、炭疽芽孢杆菌(勘c///^a/7^rac/s)、大肠埃希氏菌(^c力er/c力/aco//)、霍乱弧菌(c力o/erae)、弯曲杆菌属(Ca迈/7y/o6a"er)种、脑膜炎奈瑟氏球菌(Ais/se,Wa迈6/7//^/〃7//《)、淋病奈瑟氏球菌(vVe/serri'ago/orr力ea)、铜绿假单胞菌(/^ewdo迈o/7asaei7/^7/c^a)、其它假单胞菌属(/^ei/^/o迈o/735")种、流感嗜血菌(^eM/7力/7ws//7/7we/zae)、杜氏嗜血菌(^ae迈o/力/7^^/cre//)、其它嗜血菌属(^ffo////^)种、破伤风梭菌(67ay"/fZ/M其它梭菌属("os"2V/w迈)种、小肠结肠炎耶尔森氏菌(/er57/z/ae/7/ero//〃'ca)和其它耶尔森氏菌属种。已发现的对一种细菌有效的抗菌剂对其它细菌特别是来自同一科的细菌也可能有效。因此，可使用本发明的方法对针对某种细菌鉴定得到的抗菌剂就其针对其它细菌的抗菌活性进行测试。本发明的方法还可用于评价寄生物感染或鉴定抗寄生物药剂。具体而言，可使用相同的方法，只是将细胞与病毒接触替换为将细胞与寄生物接触。因此，本发明提供了一种鉴定抗寄生物药剂的方法，包括a)将所述药剂给予含有表1所列细胞基因的细胞，b)检测由细胞基因产生的基因产物的水平和/或活性，基因产物和/或基因产物活性的减少或消失可表明化合物具有抗寄生物活性。本发明还提供了一种鉴定抗寄生物药剂的方法，包括a)将药剂给予含有表1所列细胞基因的细胞，b)使细胞与寄生物相接触，c)检测寄生物感染的水平；并d)将寄生物感染水平与表l中基因的表达水平或表1中基因编码的蛋白质的活性相关联，寄生物感染的减轻或消失与基因表达和/或活性的减少或消失相关就表明所述药剂为抗寄生物药剂。寄生物的实例包括但不限于下列寄生物隐孢子虫属(6Vj7^0577CLr/^/y边)、症原、虫(/7as迈od/wfl)(声斤有种)、美洲锥虫(Americantrypanosomes)(克氏锥虫，Tcruzi)。另夕卜,本发明方'法中考虑到的原生动物和真菌属种的实例包括但不限于镰状疟原虫(/7<3《/2<^//咖/"a/"'/7ar咖)、其它痴原虫属(/7as迈od/咖)种、鼠弓形体(roro/7/as鹏《0/7^///)、卡氏肺嚢虫(/fee咖oc7"/scaW/7//)，克氏锥虫(r/y/7a/7c^o迈ac_n/z/)、其它锥虫属(fi7"/7a/iaso/na/)种、；f土氏利什曼原虫(Ze/sA/oa/^/a^fo/ora/7/)、其它利氏曼原虫属(Ze/s力zzw/7/a)种、环形泰勒虫(7力e/7eWaai7/i/7a")、其它泰勒虫属(7e//er/a)种、柔嫩艾美耳球虫(f2'迈eWa^力e/h)、其它艾美耳球虫属种(f/边e/7as/ec/es)、荚膜组织胞浆菌(^/Wo/77as迈aca/W7//afwz/)、新型隐球菌(Ciy/7&coccw51/7eo/or迈a/s)、皮炎芽生菌(A/a5^o迈yce51^r鹏〃〃d/y)、粗球孢子菌(Cocc/V/o油〃/鹏/〃5")、巴西副球孢子菌(户a/^cocc/d/02Ves6/*<357/7<3/757^)、马尔尼菲青霉(戶e//c/"/咖迈ar/7e,/"e/)和念珠菌属种(Ca/^//^2577ec/es)。已发现的对一种寄生物有效的抗寄生物药剂对其它寄生物特别是来自同一科的寄生物也可能有效。因此，可使用本发明的方法对针对一种寄生物鉴定得到的抗寄生物药剂就其针对其它寄生物的抗寄生物活性进4亍测试。在上述方法中，在将含有表1所列细胞基因的细胞与药剂接触后，就可将感染水平与基因表达和/或活性水平相关联，由此与基因表达和/或活性的减少或消失相关的感染的减弱或消失就表明了该药剂可有效对抗病原体。这些方法可用来评价药剂对细菌感染的影响、抗病毒感染作用、抗真菌感染作用、抗寄生物感染作用等。例如，可在给予抑制表1所述基因的表达的siRNA后，测量细胞中的病毒感染水平。若病毒感染减轻，则siRNA为有效的抗病毒药剂。病毒感染的水平可通过测量抗原或与具体病毒感染相关的其它产物(例如针对HIV感染的p24)进行评价。若给予针对表1所述基因的siRM后，p24的水平降低，则靶向该基因的siRNA为针对HIV的有效抗病毒药剂。病毒感染的水平还可通过实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析进行测量(参见例如Payungpornetal."Singlestepmultiplexreal—timeRT-PCRforH5N1influenzaAvirusdetection."JVirolMethods.Sep22，2005;Undoltetla."Useofreal-timereversetranscriptasepolymerasechainreactionassayandcellculturemethodsfordetectionofswineinfluenzaAviruses"AmJVetRes.2005Jan;66(1):119-24)。同样，给予化学品、小分子、药物、蛋白质、cDNA、抗体、morpholino、反义RM、核酶或任何其它化合物后，细胞内的病毒感染水平还可使用上述方法以及本领域已知的方法进行测量。若病毒感染减轻，则该化学品、小分子、药物、蛋白质、cDNA、抗体、morpholino、反义RNA、核酶或任何其它化合物是有效的抗病毒药剂。其它类型的感染如细菌感染、真菌感染和寄生物感染的水平可用类似的方法来测量。已发现的对一种病毒有效的抗病毒药剂对其它病毒特别是来至同一科的病毒也可能是有效的。然而，还考虑到了已发现的对HIV有效的药剂也对流感病毒或禽流感病毒或任何其它病毒也可能是有效的。因此，可使用本发明的方法对针对一种病毒鉴定得到的抗病毒药剂就其针对其它病毒的抗病毒活性进行测试。通过任何标准方法例如通过用特异性针对该蛋白质的抗体进行检测可测量基因产物的水平。可将本文所述核酸及其片段可用作引物，并通过常规扩增技术来扩增核M列例如表1所述基因之一的基因转录物。例如，使用自细胞分离得到的RNA，通过RT-PCR对基因转录物的表达进行定量。各种PCR技术为本领域的技术人员所熟知。对PCR技术的综述，可参见White(1997)和名为"PCRMethodsandApplications"(1991，ColdSpringHarborLaboratoryPress)的出版物，就扩增方法通过援引将其全文纳入本文。在这其中的每种PCR方法中，将有待扩增的核酸序列的任一侧PCR引物与dNTP和热稳定聚合酶例如Taq聚合酶、Pfu聚合酶或Vent聚合酶一起加至恰当制备的核酸样本中。将样本中的核酸变性，随后PCR引物特异地杂交至样本中的互补核酸序列。使杂交的引物延伸。然后开始另一个变性、杂交和延伸的循环。多次重复该循环以产生在引物位置之间含有核酸序列的扩增片段。PCR在一些专利中已有进一步的描述，这些专利包括美国专利4,683,195、4，683，202和4，965，188。上述每篇出版物均就PCR方法通过援引将其全文纳入本文。本领域的技术人员应知道如何设计和合成可扩增表1所述任意核酸序列或其片段的引物。扩增反应中可含有检测标记。合适的标记包括荧光团如异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明、德克萨斯红、藻红蛋白、别藻蓝蛋白、6-氛基荧光素(6-FAM)、2，，7，-二曱氧基-4，，5，-二氯-6-羧基荧光素(J0E)、6-^-X-罗丹明(R0X),6-羧基-2，，4，，7，，4，7-六氯荧光素(HEX)、5-羧基荧光素(5-FAM)或N，N，N，，N，-四曱基-6-羧基罗丹明(TAMRA);放射性标记如32P、35S、4等。标记可为两级系统，其中扩增得到的DNA与具有例如抗生物素蛋白、特异性抗体等高亲和结合伴侣的生物素、半抗原等缀合，其中结合伴侣与检测标记缀合。标记可与一种或两种引物缀合。或者，对扩增中所使用的核苷酸混合物进行标记，以此将标记引入扩增产物中。样本核酸例如扩增得到的片段可由本领域已知的多种方法之一进行分析。核酸可通过双脱氧法或其它方法进行测序。还可使用通过Southern印迹、点印迹等进行的序列杂交来测定序列是否存在。本发明的基因和核酸还可用于多核苷酸阵列中。多核苷酸阵列提供了一种高通量技术，这种高通量技术可分析单个样本中大量的多核普酸序列。例如，该技术可用于鉴定与对照样本相比表1所述核酸表达有所减少的样本。该技术还可用于测定表1所述核酸表达减少的效果。通过这种方式，本领域的技术人员可鉴定出表1所述核酸表达减少后得到上调或下调的基因。同样，本领域的技术人员可鉴定出表1所述核酸表达增加后得到上调或下调的基因。通过这种方式，可鉴定出作为治疗耙标的其它基因，所述治疗例如抗病毒治疗、抗细菌治疗、抗寄生物治疗或抗真菌治疗。为制备阵列，可将单链多核苷酸探针点样至二维矩阵或阵列形式的基质上。每个单链多核苷酸探针可包括选自表1以GeneBank编号形式述及的核苷酸序列的至少6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25或30或更多个连续核苷酸。阵列还可为含有表1所述一种或多种基因的不同多态等位基因的探针的微阵列。若一个受试者群体中存在一个核酸序列的两种或多种形式则就存在多态性。例如，多态核酸可为其中最常见等位基因频率为99%或少于99%的核酸。不同的等位基因可根据核酸序列中的差异进行鉴定，在多于1%的群体中(这是定义多态性时通常接受的频率)出现的遗传变异对于某些应用而言是有用的多态性。等位基因频率(特定类型群体中所有等位基因核酸的比例)可通过对群体中等位基因的直接计数或估计数目以及群体中等位基因的类型来确定。多态性以及测定等位基因频率的方法叙述于Hartl，D.L.andClark，A.G"PrinciplesofPopulationGenetics,ThirdEdition(SinauerAssociates,Inc.,SunderlandMassachusetts,1997)，特别是第一章和第二章。这些微阵列可用于检测来自受试者的样本中的多态性等位基因。这些等位基因可表明受试者对病毒感染是更易感还是对病毒感染不易感。例如，由于本发明表明表1所述任何基因的破坏都可导致病毒感染减轻，因此这种微阵列可用于检测使得基因表达减少和/或基因产物的活性减弱的表1所述基因的多态形式，由此鉴定对病毒感染不易感的受试者。基质可为多核苷酸探针可附着其上的任何基质，包括但不限于玻璃、硝酸纤维素、硅和尼龙。多核苷酸探针可通过共价键或通过非特异性相互作用如疏水性相互作用结合到基质上。构建阵列的技术以及使用这些阵列的方法描述于EPNo.0799897、PCTNo.W097/29212、PCTNo.W097/27317、EPNo.0785280、PCTNo.W097/02357、U.S.Pat.No.5，593，839、5，578，832、EPNo.0728520、U.S.Pat.No.5，599,695、EPNo.0721016、U.S.Pat.No.5，556，752、PCTNo.W095/22058和U.S.Pat.No.5，631，734。还可使用可商购的多核苷酸阵列例如AffymetrixGeneChip.TM.。使用GeneChip.TM来检测基因表达描述于例如Lockhartetal.，NatureBiotechnology14:1675(1996);Cheeetal.，Science274:610(1996);Haciaetal.，NatureGenetics14:441，1996;和Kozaletal"NatureMedicine2:753，1996。可将基因产物的水平与未与化合物接触的对照细胞中的基因产物的水平相比较。可将基因产物的水平与加入化合物前相同细胞中的基因产物的水平相比较。活性或功能可通过任何标准方法测量，所述任何标准方法例如测量底物转化成产物的酶分析或者测量蛋白质与核酸结合的结合分析。另外，基因的调控区域可功能性连接至报告基因，并就对报告基因的抑制作用对化合物进行筛选。这种调控区域可与基因组序列分离，并可通过任何观察到的呈现物种的调控区域特征的特征，以及可通过它们与基因编码区的起始密码子的关系得到鉴定。本文所使用的报告基因编码报告蛋白质。报告蛋白质为表达时可被特异性检测的任何蛋白质。报告蛋白质可用于检测或定量表达序列的表达情况。很多报告蛋白质为本领域的技术人员已知。这些报告蛋白质包括但不限于产生特异性可检测产物的P-半乳糖苷酶、萦光素酶和碱性磷酸酶。还可使用荧光报告蛋白质例如绿色荧光蛋白(GFP)、蓝绿色荧光蛋白(CFP)、红色荧光蛋白(RFP)和黄色荧光蛋白(YFP)。病毒感染还可通过以细胞为基础的分析进行测量。简而言之，用所需病原体感染细胞(20000至2500000个)，然后连续培养3-7天。可以在用病原体感染之前、期间或之后将抗病毒药剂施用至细胞。给予的病毒和药剂的量可由本领域的技术人员确定。在某些实例中，可给予几种不同剂量的潜在治疗剂来确定最佳剂量范围。转染之后进行分析来测定不同药剂引起的细胞对感染的抗性。例如，若分析病毒感染，病毒抗原是否存在可通过使用特异性针对病毒蛋白质的抗体并随后检测该抗体来进行测量。在一个实例中，特异性结合病毒蛋白质的抗体被例如可检测标记如荧光团标记。在另一实例中，抗体可通过使用含有标记的二抗检测。然后使用例如显微镜、流式细胞术和ELISA检测是否存在结合抗体。或者，另外，细胞经历病毒感染后存活的能力可例如通过进行细胞活力分析例如台盼蓝排除试验测定。细胞中的表1所列蛋白质的量可通过本领域对细胞中的蛋白质进行定量的标准方法，以及现在已知的或随后将被开发用来对细胞中的蛋白质或由细胞产生的蛋白质进行定量的任何其它方法测定，所述标准方法例如Western印迹、ELISA、ELISPOT、免疫沉淀、免疫焚光(例如FACS)、免疫组织化学、免疫细胞化学等。细胞中的表1所列核酸的量可通过本领域用于对细胞中的核酸进行定量的标准方法测定，以及通过现在已知的或随后将被开发用来对细胞中的核酸进行定量的任何其它方法测定，所述标准方法例如为原位杂交、定量PCR、RT-PCR、Taqman分析、Northern印迹、ELISPOT、点印迹等。可在动物模型中对抗病毒药剂预防或减轻病毒例如HIV、Ebola、A型流感病毒、SARS、天花病毒等感染的能力进行评价。几种用于病毒感染的动物模型为本领域已知。例如，小鼠HIV模型公开于Suttonetal.(Res.InitiatTreat.Action,8:22-4，2003)和Pi織setal.(AIDSRes.Hum.Retroviruses19:901-8，2003);Ebola感染的豚鼠模型乂^开于Parrenetal.(J.Virol.76:6408—12，2002)和Xuetal.(Nat.Med.4:37-42，1998);流感感染的食蟹猴(尸a"/c"/ar")模型乂>开于Kuikenetal.(Vet.Pathol.40:304-10，2003)。这些动物模型还可用来测试药剂緩解与病毒感染相关症状的能力。另外，这些动物模型可用来测定对受试动物的ld5q和ED5q,并且这些数据可用来确定潜在药剂在体内的效力。动物模型还可用来评价抗细菌药剂、抗真菌药剂和抗寄生物药剂。如若需要，任何物种的动物包括但不限于鸟、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猪、小型猪(micro-pig)、山羊以及除人外的灵长类例如狒狒、猴和猩猩可用来形成病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生物感染的动物模型。例如，对于病毒感染模型，可用所需病毒在有或没有抗病毒药剂存在下对合适的动物接种。给予的病毒和药剂的量可由本领域的技术人员确定。在某些实施例中，可将几种不同剂量的潜在治疗剂(例如抗病毒药剂)给予不同测试受试者来鉴定最佳剂量范围。治疗剂可在病毒感染之前、期间或之后给予。治疗之后，就恰当的病毒感染的发展情况和与之相关的症状对动物进行观察。若药剂存在时，恰当的病毒感染的发展有所减緩或者与之相关的症状有所緩解，则可提供证据表明该药剂为可用来减轻甚或抑制受试者体内病毒感染的治疗剂。本发明还提供了一种制备减轻感染的化合物的方法，包括a)合成化合物；b)将化合物给予含有表1所述细胞基因的细胞；c)将细胞与感染性病原体相接触；c)检测感染水平；d)将感染水平与表l中基因的表达水平或表1中基因编码的蛋白质的活性相关联，感染的减轻或消失与基因表达和/或活性的减少或消失相关就表明制备得到了减轻感染的化合物。还提供了一种制备减轻感染的化合物的方法，包括a)将化合物给予含表1所述细胞基因的细胞，b)将细胞与感染病原体相接触；c)检测感染水平；d)将感染水平与表l中基因的表达水平或表l中基因编码的蛋白质的活性相关联，感染的减轻或消失与基因表达和/或活性的减少或消失相关就表明化合物为减轻感染的化合物；以及e)将化合物置于可药用载体内。减轻感染的化合物可为抗病毒化合物、抗细菌化合物、抗真菌化合物或抗寄生物化合物或任何减轻感染物感染的化合物。转基因细胞和非人类哺乳动物包括重组和基因敲除动物在内的转基因动物模型可用本文所述宿主核酸产生。示例性非人类转基因哺乳动物包括但不限于小鼠、兔、大鼠、鸡、牛和猪。本发明提供了这样一种转基因非人类哺乳动物，它具有表l所列一种或多种基因的基因敲除，并且对病原体例如病毒、细菌、真菌和寄生物感染的敏感性降低。这种基因敲除动物可用来减少病毒从动物到人的传播。在本发明的转基因动物中，表1所述一种或多种基因的一个或两个等位基因可被敲除。"敏感性降低"表示，与表l中基因的一个或两个等位基因没有被基因敲除或功能性缺失的动物相比，动物不易被感染或动物所经历的病原体感染有所减轻。动物不必对病原体具有完全的抗性。例如，与表1所述基因没有功能性缺失的动物相比较，动物对病原体感染的敏感性可降4氐10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%或其间任何百分比。另外，感染减轻或感染敏感性降低包括减少进入、复制、发病、插入、溶解或病毒或其它病原体进入细胞或受试者的复制过程中的其它步骤，或它们的组合。因此，本发明提供了一种功能性缺失了表1所述一种或多种基因的非人类转基因哺乳动物，其中哺乳动物对病原体如病毒、细菌、寄生物或真菌感染的敏感性降低。功能性缺失为突变、部分或完全缺失、插入或对基因序列进行的其它改变，这些功能性缺失抑制基因产物的产生或使得基因产物功能不完全或丧失功能。用于基因敲除或功能性缺失目的基因的序列的表达可受到恰当启动子序列的调节。例如，组成型启动子可用来确保动物不表达功能性缺失基因。相反，诱导型启动子可用于在转基因动物表达或不表达目的基因时进行调控。示例性诱导型启动子包括组织特异性启动子和对特定刺激物(如光、氧、化学品浓度等，如四环素诱导型启动子)做出反应或不做出反应的启动子。例如，具有被破坏的表1所述基因的转基因小鼠或其它转基因动物可在暴露于不同病原体期间被检查。从比较数据可对病原体的生命周期有所了解。另外，可制备不进行基因敲除时会对感染(例如流感)敏感的基因敲除动物(如猪)来对抗感染，这归功于基因的破坏。若转基因动物中基因的破坏使得对抗感染的抗性增加，则可繁殖这些转基因动物来建立不易感染的动物群。转基因动物包括制备和使用转基因动物的方法描述于多个专利和公布文本中，例如W001/43540、W002/19811、U.S.Pub.No:2001-0044937和2002—0066117以及U.S.Pat.No:5，859，308、6，281，408和6，376,743,以及文中引用的参考文献。本发明的转基因动物还包括例如通过采用SIRIUS-Cre系统产生的条件基因敲减的动物，所述SIRIUS-Cre系统可将特异性敲减基因的siRNA、组织特异性表达的Cre-loxP和诱导表达的四环素-on结合起来。这些动物可通过在四环素控制的条件下用含有组织特异性重组酶和目的基因的特异性SiRNA的两个亲本品系进行交配产生。参见ChangWa/."UsingsiRMTechniquetoGenerateTransgenicAnimalswithSpatiotemporalandConditionalGeneKnockdown."AmericanJournalofPathology165:1535-1541(2004)，就条件性基因敲减动物的产生，通过援引将其全文纳入本文。本发明还提供了含有有所改变或被破坏的表1所列基因的细胞，这些细胞对病原体感染有抗性。这些细胞可为体外、离体或体内的细胞，并且其一个或两个等位基因可发生变化。因此这类细胞包括对HIV感染、Ebola感染、禽流感、A型流感病毒或本文所描述的任何其它病原体包括细菌、寄生物和真菌的敏感性有所降低的细胞。就感染抗性进行筛选本文还提供了就感染抗性对受试宿主进行筛选的方法，所述方法通过表征宿主核酸的核苷酸序列或宿主多肽的氨基酸序列(例如表1所示的核苷酸序列或氨基酸序列)而进行。例如，可分离受试者的ANXA1核酸，对其测序并与ANXA1的野生型序列进行比较。受试者ANXA1核酸与野生型ANXA1序列之间的相似性越大，则该受试者对感染就越敏感，而受试者ANXA1核酸与野生型ANXA1序列之间的相似性越小，则该受试者对感染的抵抗力就越强。这种筛选可针对任何物种中的表1所述任何宿主核酸或宿主多肽的氨基酸序列进行。对群体遗传特征的评价可提供关于该群体对病毒感染的敏感性或抗性的信息。例如，在特定人群例如特定城市或地理位置的人群中等位基因的多态性分析可表明该群体对感染的易感程度。与表1所列野生型序列基本相似的等位基因百分比越高，就表明该群体对感染越敏感，而与表1所述野生型序列基本不同的大量多态性等位基因表明该群体对感染的抵抗力更强。这种信息可用于对例如关于对易感群体进行接种作出公共卫生决定。本发明还提供了一种就表1所列基因的变体形式对细胞进行筛选的方法。变体可为具有使得基因产物的量或活性发生变化的功能性缺失、突变或基因发生改变的基因。可将这些含有表1所列基因的变体形式的细胞与病原体相接触，来测定含有表1所列基因的天然存在的变体的细胞是否在其感染抗性方面有所不同。例如，可就表1所列基因的变体形式对动物例如鸡等的细胞进行筛选。若发现有天然存在的变体，并且在其基因组中具有基因变体形式的鸡不易感染，则可选择性繁殖这些鸡来建立具有感染抗性的鸡群。通过^^用这些方法，可建立对抗禽流感的鸡群。同样，可就表1所列基因的变体形式对其它动物进行筛选。若发现有天然存在的变体，并且在其基因组中具有基因变体形式的动物不易感染，则可选择性繁殖这些动物来建立具有感染抗性的群体。这些动物包括但不限于猫、狗、家畜(例如牛、马、猪、绵羊、山羊等)、实验动物(例如小鼠、兔、大鼠、沙土鼠、豚鼠等)和禽类(例如鸡群、鹅群、火鸡群、鸭群、雉群、家鴒群、野鴒群等)。因此，本申请提供了具有表1所列基因的天然存在变体的动物群，所述天然存在变体可使得对病毒感染敏感性降低，由此提供对不易感染病毒的动物群。同样，若发现有天然存在的变体，并且在其基因组中具有基因变体形式的动物对细菌、寄生物或真菌感染不易感，则可选择性繁殖这些动物来建立对细菌、寄生物或真菌具有感染抗性的群体。抑制感染的方法
技术领域：
：本发明还提供了一种抑制细胞中的感染的方法，包括抑制表1所列基因或基因产物的表达或活性。如全文所述，感染可为病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生物感染等等。抑制可出现在体外、离体或体内的细胞中。表1的一种或多种基因的表达可被抑制。同样，表1所列一种或多种基因产物的活性也可被抑制。对表达的抑制或减少不必是完全的，因为这可从表达略有降低到表达完全消失。例如，与其中表1所列基因表达未被抑制的对照细胞相比较，表达可被抑制约5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80°/、90%、95%、99%、100%或其间任何百分比。同样，对基因产物的活性的抑制或降低不必是完全的，因为这可从基因产物的活性略有降低到活性完全消失。例如，与其中表1所述基因产物的活性未被抑制的对照细胞相比较，基因产物的活性可被抑制约5%、10%、20°/。、30°/、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、100%或其间4壬何百分比。反义寡核苷酸、RNAi分子、核酶和siRNA分子可用来干扰表达和/或降低基因产物的活性。小分子、药物、抗体、蛋白质和化学品也可用来抑制表达和/或基因产物的活性。可以减少表1所述基因的表达和/或基因产物的活性的反义寡核苷酸、RNAi分子、核酶、siRNA、小分子、化学品、抗体蛋白质、cDNA和任何其它现已知的或今后将会被鉴定的化合物均可单独使用，或与其它治疗剂例如抗病毒化合物、抗细菌药剂、抗真菌剂、抗寄生物药剂、抗炎剂、抗癌剂等一起^^用。抗病毒化合物的实例包括但不限于用于治疗流感及其相关症状的金刚烷胺、金刚乙胺、扎那米韦和奥塞米韦(达菲)。用于治疗HIV的抗病毒化合物包括双汰芝⑧(拉米夫定-齐多夫定)、佳息患@(茚地那韦)、Emtriv^(恩曲他滨)、Epivi^(拉米夫定)、沙查那韦软凝胶剂@(沙奩那韦-sg)、Hivid⑧(扎西他滨)、Invirase⑧(沙查那韦-hg)、Kaletra⑧(洛匹那韦-利托那韦)、LexivaTM(福沙那韦)、诺韦@(利托那韦)、Retrovi产(齐多夫定)、3118"^@(依法韦仑)、惠妥滋EC⑧(去羟肌苷)、惠妥滋@(去羟肌苷)、￥1]:^印1@(奈非那韦)、维乐命⑧(奈韦拉平)、赛瑞特⑧(司他夫定)、赛进⑧(阿巴卡韦)、Fuzeor^(恩夫韦地)、Rescriptor(地拉韦啶)、Reyataz②(阿扎那韦)、三协唯@(阿巴卡韦-拉米夫定-齐多夫定)、Viread(替诺福韦延胡索酸双异丙酰氧基曱酯)和Agenerase(安泼那韦)。其它用于治疗Ebola和其它纤丝病毒的抗病毒化合物包括利巴韦林和蓝藻菌病毒素-N(cyanovirin-N，CV-N)。对于疱渗病毒的治疗可用舒维疗⑧(阿昔洛韦)。抗细菌药剂包括但不限于抗生素(例如青霉素和氨节青霉素)、磺胺药物和叶酸类似物、内酰胺、氨基糖苷类、四环素、大环内酯、林可酰胺、链阳性菌素、氟喹诺酮类、利福平、莫匹罗星、环丝氨酸、氨基环多醇和噁唑烷酮类。抗真菌药剂包括但不限于两性霉素、制霉菌素、特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、酮康唑、灰黄菌素。抗寄生物药剂包括但不限于驱肠虫药、驱线虫药、驱扁虫药(antiplatyhelminticagent)、抗原生动物药、杀阿米巴药、抗痴药、抗毛滴虫药、aoccidiostats和杀锥虫药。本发明提供了一种减轻或抑制受试者感染的方法，包括给予受试者一定量抑制表l的基因或基因产物的表达或活性的组合物。如全文所述，感染可来自任何病原体，例如病毒、细菌、真菌或寄生物。对感染的减轻或抑制不必是完全的，因为这可从感染略微减轻到感染完全消除。例如，在本文所述方法中，感染可减轻10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%或其间的任何百分比。这种减轻可导致感染引起症状的緩解至感染彻底消除。但是，对于减轻或抑制受试者的感染，只要有效地减轻感染相关症状或有效地使得受试者对感染不易感就可以了，并不一定要使感染彻底消除。全文所使用的预防感染指的是抑制感染的发展。在提及治疗时，它是指緩解与感染相关的疾病或病理状态的征候或症状，例如抑制或减轻病毒感染，而并不需要完全緩解症状或感染。本发明还提供了一种减轻或抑制受试者感染的方法，包括离体条件下在所选定的来自受试者的细胞中，将表1所列基因突变成不能产生该基因的功能性基因产物的突变基因，或将表1所列基因突变成产生的该基因的功能性基因产物的量有所降低的突变基因，然后替换受试者体内的细胞，由此减轻受试者体内的细胞感染。任何可被病毒或其它病原体例如细菌、真菌或寄生物感染的细胞均在本发明考虑范围之内。宿主细胞可为原核细胞或真核细胞如来自昆虫、甲壳动物、哺乳动物、鸟、爬行动物、酵母或细菌如大肠埃希氏菌等的细胞。示例性宿主细胞包括但不限于哺乳动物的B淋巴细胞、造血细胞、胚胎干细胞、胚胎生殖镨系细胞、多能干细胞和全能干细胞。例如，易感染或遭受了感染的受试者可用治疗有效量的反义寡核苷酸、RNAi分子、核酶或siRNA分子(或它们的组合)治疗。反义寡核苷酸、RNAi分子、核酶或siRM分子起效(观察到病毒感染水平降低，或者病毒感染相关症状减轻)后，例如24-48小时后，可就病毒感染相关症状对受试者进行监控。同样，其它药剂例如可与表l的宿主蛋白质相互作用的抗体、多肽、小分子或其它药物也可用于减轻病毒感染。这种相互作用可以是直接的，例如与宿主蛋白质相结合，也可为间接的，例如与和表1所述宿主蛋白质相互作用的蛋白质相结合或对其进行调节。抗体、多肽、小分子或其它药物起效(观察到病毒感染水平降低，或者病毒感染相关症状减轻)后，例如24-48小时后，可就病毒感染相关症状对受试者进行监控。还可给予受试者治疗有效量的其它药剂例如肽和有机分子或无机分子。本文所/>开的治疗方法还可以预防方式用于例如抑制或预防感染例如病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生物感染。在已表明治疗方法可用于治疗或预防病变的情况下需要这种给药。在已知的或疑似的正发展为感染相关病症中，需要这种预防应用。在某些情况下，某些基因由于本发明方法的反转录病毒的插入而受到破坏，会导致基因产物的过表达，并且这种过表达抑制了病毒复制。例如，一旦破坏了含有CTCF的序列的基因组基因座，就会导致IGF2的过表达，由此减少病毒复制。因此，本发明提供了一种通过使可减少病毒复制的基因过表达来减少或抑制病毒复制的方法。本发明方法还提供了一种增加基因表达的方法，所述基因的过表达可通过破坏一种基因或抑制一种基因的基因产物来减少病毒复制，由此可增加基因表达，而该基因的过表达使病毒复制减少。例如，可抑制CTCF来增加IGF2的表达。这对任何已被发现的可增加另一种基因的表达的基因而言是相似的，并且这会使得病毒复制减少。一旦发现某种基因被破坏就会导致另一种基因的过表达，则该过表达基因可直接被调节，即通过该过表达基因直接调节，或者也可间接被调节，即通过最初被破坏的基因(或其基因产物)或通过另一种与过表达基因相关的基因(或其基因产物)间接调节。因此，本发明提供了一种鉴定出可增加基因的表达和/或基因产物的活性的药剂的方法，包括将细胞与药剂相接触并测量基因表达和/或基因产物的活性的增加。本发明还提供了一种鉴定通过基因的过表达和/或基因产物活性的增加来减轻或抑制感染的药剂的方法，包括将药剂给予细胞，使细胞与病原体相接触，并将基因表达和/或该基因产物活性的增加与感染水平相关联，这样与感染减轻相伴随的基因表达和/或基因产物活性的增加可表明药剂是通过基因的过表达和/或基因产物的活性增加来抑制病原体感染。例如，本领域的技术人员可给予可引起IGF2过表达的化合物。该化合物可与IGF2基因、IGF2mRNA、IGF2蛋白质或其片段相互作用。人IGF2基因及其相关序列的信息可参见Entrez基因编号3481。该化合物还可CTCF基因、CTCFmRNA、CTCF蛋白质或其片段相互作用来增加IGF2表达。该化合物还可与参与IGF2途径的其它基因、mRNA或蛋白质相互作用，使得IGF2表达增加。因此，若基因X的破坏引起基因Y的过表达，则过表达的基因(Y)可被直接调节，即通过过表达的基因(Y)直接调节，也可被间接调节，即通过最初被破坏的基因(X)(或其基因产物)或通过另一种与过表达基因(Y)相关的基因(或其基因产物)间接调节。例如，本领域的技术人员可给予可引起Y过表达的化合物。该化合物可与Y基因、YmMA或Y蛋白质相互作用。该化合物还可与X基因、XmRNA或X蛋白质相互作用来增加Y表达。该化合物还可与参与Y基因途径(即基因Y参与的细胞途径)的其它基因、mRNA或蛋白质相互作用，使得Y表达提高。药物组合物和给药方式已知有多种用于给予本文公开的治疗剂的送递系统，这些送递系统包括以脂质体、微粒、微嚢形式的胶嚢化、由重组细胞表达、受体介导的胞吞作用(WuandWu，J.Biol.Chem.1987,262:4429-32)以及将治疗核酸构建为反转录病毒载体或其它载体的一部分。引入方法包括但不限于粘膜、局部、真皮内、肌内、腹膜内、阴道、直肠、静脉内、皮下、鼻内和口服途径。化合物可通过任何便利途径例如通过输注或推注注射、通过上皮或粘膜被覆层(例如口腔粘膜、直肠、阴道或肠粘膜等)吸收给药，并且可与其它具有生物活性的药剂一起给药。给药可为全身给药或局部给药。药物组合物可例如通过局部施用或局部注射而局部送递至需要治疗的区域。公开的药物组合物可包括单独的治疗有效量的RM、DNA、反义分子、核酶、siRNA、分子、药物、蛋白质、抗体或其它治疗剂，或者还可包括和可药用载体一起的上述物质。另外，药物组合物或治疗方法可与其它治疗方法例如其它抗病毒药剂、抗细菌药剂、抗真菌药剂和抗寄生物药剂一起(例如之前、期间或之后)给予或进行。送递系统本文所使用的可药用载体是常规的。Remington'sPharmaceuticalSciences,byMartin,MackPublishingCo.，Easton，PA，15thEdition(1975)中描述了适用于本文公开的治疗剂的药物送递的组合物和制剂。通常，载体的性质要根据所采用的给药方式而定。例如，胃肠外制剂通常包括可注射的流体，所述流体包括药学和生理学上可接受的、作为载体的流体例如水、生理盐水、平衡盐溶液、葡萄糖水溶液、麻油、丙三醇、乙醇、或它们的组合等。载体和组合物可为无菌的，并且制剂与给药方式相适应。除了生物学上中性的载体外，待给药的药物组合物可含有少量的无毒辅助性物质例如润湿剂或乳化剂、防腐剂和pH緩冲剂等，例如醋酸钠或脱水山梨醇单月桂酸酯。组合物可为液体溶液、悬浮剂、乳剂、片剂、丸剂、胶嚢、緩释制剂或粉剂。对于固体组合物(例如粉剂、丸剂、片剂或胶嚢形式)而言，常规无毒固体载体可包括例如药用级甘露醇、乳糖、淀粉、糖精钠、纤维素、碳酸镁或硬脂酸镁。组合物可用常规粘合剂和栽体如甘油三酯制备成栓剂。本领域的技术人员应知晓，所公开的包括药剂在内的实施方案可由常规药用载体、佐剂和抗衡离子制备得到。有效减轻或抑制感染的治疗剂的量取决于病原体的性质及其引起的病变或病症，并且可用标准的临床技术确定。因此，这些量会随病毒、细菌、真菌、寄生物或其它病原体的类型发生变化。另外，可采用体外分析来确定最佳剂量范围。制剂中采用的精确剂量还取决于给药途径和疾病或病变的严重程度，并应该根据技术人员的判断和每名受试者的情况确定。有效剂量可从来源于体外测试系统或动物模型测试系统的剂量-反应曲线推知。本公开还提供了药包或药盒，它包括一个或多个装有药物组合物的一种或多种成分的容器。任选地，该容器还配有一份公告，该公告的形式是由管理药物或生物产品的制造、使用或销售的政府部门所规定的形式，该公告表明该药物组合物得到了人类用药的制造、使用或销售的管理部门的批准。还可包括组合物的使用说明。在采用核酸例如反义或siRNA分子来减轻感染例如病毒感染的一个实例中，核酸可通过如下方式送递通过细胞内送递(例如通过核酸载体的表达或通过受体介导机制)；或通过给予至细胞内的恰当核酸表达载体，例如通过使用反转录病毒载体(参见美国专利No.4,980,286);或通过直接注射；或通过使用微粒轰击(例如基因枪；Biolistic，Dupont);或用脂质或细胞表面受体或转染剂包被；或通过将其与同源框样肽(homeobox-likepeptide)相连接给予，已知该同源框样肽可进入细胞核(例如Joliotetal，Proc.Natl.Acad.ScLUSA1991，88:1864-8)。本公开包括所有形式的核酸送递，包括合成的01igo、棵DNA、质粒和病毒送递(不论是否整合至基因组)。如上所述，载体送递可借助病毒系统例如可包装重组反转录病毒基因纟且的反转录病毒载体系统(参见例如Pastanetal.，Proc.Natl.Acad.SciU.S.A.85:4486，1988;Milleretal.，Mol.Cell.Biol.6:2895，1986)。然后重组反转录病毒可用来感染并由此将核酸例如反义分子或siRNA送递至感染细胞。当然，将发生变化的核酸引入哺乳动物细胞的具体方法并不限于使用反转录病毒载体。该方法可广泛采用其它技术，包括如下载体的使用腺病毒载体(Mitanietal.，Hum.GeneTher.5:941-948,1994)、腺伴随病毒(AAV)栽体(Goodmanetal.，Blood84:1492—1500,1994)、慢病毒载体(Naidinietal.，Science272:263-267，1996)和假型反转录病毒载体(Agrawaletal.，Exper.Hematol.24:738-747，1996)。还可使用其它非病原体载体系统例如泡沫病毒载体(Parketal."InhibitionofsimianimmunodeficiencyvirusbyfoamyvirusvectorsexpressingsiRNAs."Virology.2005Sep20)。还可通过载体送递系统来送递短发夹RNA(shRNA)，目的是抑制基因表达(参见Pichleretal."InvivoRMinterference—mediatedablationofMDR1P-glycoprotein."CIinCancerRes.2005Jun15;11(12):4487-94;Leeetal."SpecificinhibitionofHIV-IreplicationbyshorthairpinRNAstargetinghumancyclinTlwithoutinducingapoptosis."FEBSLett.2005Jun6;579(14):3100-6.)。还可使用物理转导技术例如脂质体送递和受体介导的胞吞机制以及其它胞吞机制(参见例如Schwartzenbergeretal.，Blood87:472-478，1996)等实例。本发明可与任意上述或其它常用基因转移方法一起使用。本申请通篇引用了多篇出版物。这些出版物的公开内容通过援引全文纳入本申请，目的是为了充分描述与本发明相关的现有技术。对于本领域的技术人员而言显而易见的是，在不背离本发明的范围或精神的条件下，本发明可有多种修改和改变。通过考虑在此公开的本发明的说明书及其实施，本发明的其它实施方案对于本领域的技术人员是显而易见的。说明书和实施例仅旨在示例，而本发明的真实范围和精神由下面的权利要求书指明。实施例病毒为在其生命周期中的不同阶段均依赖于宿主细胞专性细胞内寄生物。病毒感染和/或细胞杀伤所需的细胞基因的特征对理解病毒生命周期很重要，并且可为新的抗病毒治疗方法提供细胞靶标。溶解性反转录病毒感染所需的候选基因可由标记序列诱变法鉴定，这是一种可快速鉴定基因捕获所破坏的基因的方法。从含有2xl()S个独立的被破坏基因的细胞文库中筛选出了一百五十一个反转录抗性克隆，其中有lll个克隆在先前表征的基因和功能未知的转录单位中含有突变。总而言之，与反转录病毒抗性相关的基因不同于被随机基因捕获耙中的基因，表现在已知突变热点未被充分表示出来，并且很多突变似乎集中在特定细胞过程中，包括IGF-n表达/信号传导、嚢泡转运/细胞骨架运输和细胞凋亡。标记序列诱变法提供了一种在基因组范围内快速鉴定病毒感染所需候选细胞基因的方法。细胞基因可能参与病毒生命周期的全部阶段，包括附着至细胞受体、内化、分解、mRNA的翻译、组装和脱离细胞[l]。不同细胞类型对病毒感染的敏感性大不相同，并且感染后期经常会出现病毒抗性细胞[2-4]。这表明遗传决定因子会影响对病毒生命周期有贡献的宿主细胞。尽管有影响病毒感染的哺乳动物基因的实例，但是由于缺乏对培养细胞进行遗传分析的实用方法，使得对这类基因的鉴定受到阻碍。^研究中，不论标记序列诱变法---种广泛用于对小鼠胚胎干细胞中的基因进行突变的基因捕获方法[5-10]—一是否被用来鉴定反转录病毒引起的溶解性感染所必需的候选细胞基因，均对在细胞质中复制的小型溶细胞RNA病毒进行测试。由于哺乳动物反转录病毒能够优先在增殖细胞和未分化细胞中复制，它们可作为病毒-宿主细胞相互作用的有用模型[3]。基因捕获为在小鼠的研究中评价得到的最初在胚胎干细胞中诱导突变的有效突变剂。体细胞中，该方法假定基因捕获法引起的功能丧失突变由于基因剂量效应(例如单剂量不足)、已有的杂合性或杂合性的丧失可赋予反转录病毒抗性。在用U3NeoSVl反转录病毒基因捕获穿梭载体感染后，分离经诱变得到的大鼠肠上皮(RIE)-1细胞克隆的文库，其中每个克隆含有被原病毒整合所破坏的单个基因[6]。用l型反转录病毒感染捕获文库，还可在针对不存在细胞突变时表现出病毒抗性的持续感染细胞(PI)出现进行选择的条件下筛选抗病毒克隆[4]。通过对与捕获载体毗邻的基因组DNA区域进行测序，鉴定了总共151种抗反转录病毒细胞中的被破坏的基因[6];其中，有lll种在之前表征的基因和未知转录单位中含有突变。抗反转录病毒的克隆从捕获文库中选出的频率较从未诱变细胞中选出的频率要高，表明抗反转录病毒表型是由基因捕获诱变引起的。但是在任何遗传筛选中，具有所选择表型的克隆都可能是由于自发突变产生的，因此需要其它实验来证明基因捕获所破坏的个体基因实际上对抗反转录病毒表型有贡献。例如，胰岛素生长因子II(IGF-n)的转录阻遏物"c/"的突变是与影响IGF-n表达和/或信号传导的反转录病毒抗性相关的4种突变之一。随后的实验表明增强的IGF-n表达足以赋予高水平的反转录病毒抗性[4]。简而言之，在一系列抗反转录病毒克隆中通过标记序列诱变共同鉴定的基因为对参与病毒生命周期的细胞过程的机制研究提供了候选物。由于被破坏的基因并不会对细胞存活有不利影响，因此，抑制由这些基因编码的蛋白质的药物预计不会对细胞产生明显的毒性。因此，候选基因还可包括新的抗病毒治疗的耙标。RIE-1、L-细胞和病毒1型反转录病毒毒林Lang最初获自BernardN.Fields。病毒在L-细胞中传代，并在先前已有描述的CsCl梯度溶液中对第三代毒林进行纯化并将其用于这些实验[59]。为开发PI细胞系，用l型反转录病毒感染RIE-1细胞，感染复数(MOI)为5,存活细胞在达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基(DMEM)(IrvineScientific,SantaAna，CA，USA)中培养。表达作为即刻早期基因的报告基因lacZ的单纯疱渗病毒(HSV)-1克隆HSV-1K0Stkl2由PatriciaSpear,NorthwesternUniversity,USA馈赠。对于RIE-1和L-细胞，培养基中添加了10%胎牛血清、2mM/mlL-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100jag/ml链霉素(IrvineScientific,SantaAna,CA，USA)[完全培养基]。在某些实验中，培养基中没有血清。反转录病毒或HSV-1感染后的细胞单层的维持时间由曱紫染色测定。标记序列诱变和反转录病毒抗性的筛选在RIE-1细胞被U3neoSVl载体感染(MOI为0.1)后，在含有1mg/mlG418為泉酸盐(Clontech，PaloAlto,CA，USA)的培养基中就新霉素抗性筛选诱变细胞[6]。使二十个文库的突变体RIE-1细胞以及一个文库的A549人腺癌细胞(每个文库由104基因捕获事件组成)增殖，直到约103同胞细胞代表每个突变克隆。以亚汇合密度将这些细胞铺板并在无血清培养基中培养3天，直至它们休眠，然后用血清型1型反转录病毒感染(MOI为每个细胞35个噬斑形成单位(pfu))。感染18小时后，用胰蛋白酶使细胞脱离，并在含有10y。胎牛血清(FBS)(HycloneLaboratories,Inc.,Logan,Utah,USA)的培养基铺板。6hr后，除去培养基，将细胞在无血清培养基中培养，直至仅有少数细胞还贴附在培养瓶中。平均而言，从含有107个突变细胞组成的文库中回收了一至十个克隆(所选择细胞的富集度为六个数量级)。将在筛选中存活的细胞转移至装有培养基(含有10好BS)的细胞培养板，并将细胞分为用于DNA提取的和深低温保藏的。HSV-1即刻早期基因报告基因的转录和翻译HSV-1即刻早期基因报告基因/acZ的转录和翻译分别由标准Northern印迹技术和P-半乳糖苷酶分析测定。诱变的RIE-1细胞文库的形成将诱变细胞文库用血清型-1型反转录病毒毒林Lang感染来筛选抗溶解性感染的克隆。在无血清培养基中进行抗病毒克隆的筛选，以遏制持续性感染(PI)细胞的出现[4]。这是很重要的，因为在病毒和细胞基因组中由包括适应性突变的过程产生的PI细胞提供了一种使RIE-1细胞不进行细胞突变就可获得病毒抗性的手段。未感染RIE-1细胞发生生长抑制，而PIRIE-1细胞在无血清培养基中被杀死。DNA序列分析130个细胞系中的每个细胞系中紧邻原病毒插入物的5，端的基因组DM通过质粒拯救进行克隆[6]。对约300至600个碱基对的该侧翼DM进行测序并与非冗余(nr)的、表达的序列标记(dbEST)核酸数据库进行比较[61]。数据库中具有正向同源序列的匹配概率根据种间变异、侧翼DNA中外显子的量(在侧翼DNA与cDNA序列匹配的情况下)、交替剪接和测序错误而有所不同。若概率得分<10—5并且序列为非重复的，则数据库中的序列的匹配被认为有潜在意义的。大部分情况下，匹配基因与原病毒位于相同的转录位置。并且，涉及cDNA序列的匹配在侧翼基因组DM中的外显子上为共线性，而在剪接位点趋异。如所叙述那样，实际上鉴定的所有基因以p<10—18与鼠、大鼠或人基因序列匹配。标记序列诱变和抗反转录病毒基因克隆的筛选在二十个文库的诱变RIE-1细胞(每个文库代表约104独立基因捕获事件)被U3NeoSVl基因捕获反转录病毒感染后对其进行分离。U3NeoSVl在病毒长末端重复(LTR)的U3区域中含有新霉素抗性基因的编码序列。就新霉素抗性所进行的筛选产生具有原病毒插入活性转录基因内的克隆。从每个捕获文库中收集到的细胞分别以感染复数35用1型反转录病毒感染，并在无血清培养基中筛选抗反转录病毒克隆以遏制持续性感染(PI)细胞的出现(ref)。分离了总共151种抗反转录病毒克隆一一约1个突变体/103个基因捕获克隆或1个突变/107反转录病毒感染细胞。为进行比较，从未进行基因捕获诱变的RIE-1细胞中回收抗性克隆的频率小于1(T8。这表明抗反转录病毒表型由基因捕获诱变所致。无血清培养基中筛选的抗反转录病毒细胞不表达病毒抗原(图1),也并不产生感染性病毒(由噬斑分析评估)。大部分克隆可抵抗高滴度反转录病毒的感染并被进一步分析(图2)。而反转录病毒抗性最初并不是由持续性感染的建立所致，很多克隆在随后的传代中被持续性感染，推测这是由于呈现出病毒抗性的突变细胞对筛选中所使用的残留病毒的PI状态[2]的建立敏感。抗反转录病毒克隆中被破坏的基因的鉴定U3NeoSVl基因捕获栽体含有质粒复制起点和抗氨千青霉素基因；因此，毗邻寻靶载体的基因组DNA的区域很容易通过质粒拯救进行克隆并测序[6]。将侧翼序列与核酸数据库相比较，以鉴定由于基因捕获而发生改变时赋予了对反转录病毒引起的溶解性感染的抗性的候选细胞基因。同时，这151个克隆得到的侧翼序列与公共DNA序列数据库[非冗余9(nr)、高通量基因组序列(htgs)]和人、小鼠和大鼠基因组序列中的111个已注释的基因和转录单位匹配[6]。40个侧翼序列没有信息，因为它们与基因组DNA的重复元件或区域相匹配，而这些基因组DNA与任何已注释的转录单位均不相关。表1列出了抗反转录病毒克隆中被破坏的基因，从中可获知某些功能信息。该表还包括编码已知可以物理方式相互的蛋白质的基因。与具体代谢或信号传导途径相关的基因示于表2。这包括在病毒复制所有方面有可能起作用的基因产物，所述病毒复制的所有方面为进入、分解、转录、翻译和重新组装(表l、2，图3)。编码钙周期蛋白、胰岛素生长因子结合蛋白5蛋白酶(prssll)、C型样凝集素蛋白(C/"-尸和-C、"朋力/-/4/7""1//7+(Aprx)、GATA结合蛋白4(fa&力、Bcl2样-l("c/"力，和染色体10可译框架3(C力W&r尸J)和^^^#举、fer-l样蛋白3(尸eW/J)、S100a6(编码钙周期蛋白)，和两种功能未知的cDNA的十一种基因在独立细胞文库中分别被突变(表1)。在这些独立的突变克隆内的原病毒位于彼此的7至1500多个核普酸内。HSV-1抗性进行实验来确定基因对HSV-1感染是否有抗性。这些实验使用了HSV-1(KOS)tkl2，这是一种表达作为即刻早期基因的/acZ报告基因的感染性病毒[46]。f//757^J/^a/.#卵〃和/g尸2r基因突变的四种克隆对HSV-I感染有抗性，并且表达即刻早期7acZ报告基因的能力降低。f/"W久餘a〃和/《/7r突变的克隆还可表现出病毒mRNA的转录和翻译以及细胞死亡有所降低。已知i^/^r的突变可影响HSV复制[15，54,58];然而，HSV复制与由^7/AM、J/"/和#卵^编码的蛋白质的关系是新的。这些数据表明在反转录病毒感染中存活的克隆中发现的一些候选基因可影响被其它病毒利用的常见细胞过程。<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>;<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage77</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>表2基于功能对捕获到的基因的分类捕获到的基因由官方HUGO基因命名委员会命名(若有的话)列出。基因或其产物的功能位置由文献描述确定。一些基因有一种以上的细胞功能，分类比较随意，而其它基因作用尚不确定。<table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>表3<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage84</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage85</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage87</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage91</image><table>tableseeoriginaldocumentpage92</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage94</image><table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage97</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage99</image><table>tableseeoriginaldocumentpage100</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage101</image><table>tableseeoriginaldocumentpage102</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage103</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage104</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage105</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage106</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage107</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage109</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage110</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table><image>imageseeoriginaldocumentpage112</image><table>tableseeoriginaldocumentpage113</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage114</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage115</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage117</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage118</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage120</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage121</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage122</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage123</column></row><table>参考文献1.OpDeBeeck入Caillet-FauquetP:Virusesandthecellcycle.iVogCWZCycfe及忍s1997，3:1-19,2.DermodyTS，MbertML,WetzelJD,TongX，Fields:CellsandviruseswithmutationsaffectingviraleatryareselectedduringpersistentinfectionsofLcellswithmammalian:腸virases,J"Rra/1993，67(4》:2055-2063.3.TaterkaJ，SutcHffeM,RubinDH:Selectivereovkusinfectionofmurinehepatocardnomaceilsduringcelldivision.Amodelofviralliverinfection-C7/"/"ve^1994，94(1):353穆.4,ShengJ,OrganEL,HaoC，WellsKS，RuleyHE,RubinDH:MutationsintheIGF-IIpathwaythatconferresi劲.anceto.lytic,reovimsiafection,^RAfCCd72004，5(1):32.5,HansenJ，Ho怒T，VanSlcmnP，Ric她auerBM,VautiF,.ArnoldHH，SchnutgenF,W鹏tW,vonMdchn红H，RuizP:Alarge-scale,gene-driv節m她ge鹏is邵proaehforthefenctionaianalysisof1themousegenome,PracAT"dJCffi/&i2003，100(17):9918-9922.6,HicksGG，ShiBG,LiXM,liCH，PawlakM，RukyHE:Functionalgenomicskimicebytaggedsequenceimrtagmesis.AtoGe敏1997，16(4):338-344,7,SalminenM，MeyerBI，GrussP:BfficiaatpolyAtrapapproachallowsttiecaptureofgenesspecificallyactiveindiflfeittntiatedembryonicstemceUsfflidin.mouseembryos.ZfevZ)，3卿，2即):326"333.8.StrykeD,KawamotoM,HuangCC，JohnsSJ,KingLA,HarperCA，MengEC,3LeeRB，Yee.入MtaUenLe《fl/:BayGenomics:aresourceoftosertkmalmutationsinmouseembryonicstemeel!s.他cfe&』c淑及徴2003,31(1):278-281,9.WilesMV,VautiP，OtteJ,FiKM)auetEM，RuizP,FiK她auerA,ArnoldHH^JLdtirach玩MeteT，toiiMe!chnerH"Z:Establishmentofagene-trapsequencetagMbmrytogeneratemutantmicefrom鹏bryonicstemcells'MiifGe"2000,24(1):13-K10,2咖browiezBP,FriedrichGA,BuxtonEC，Lilleb邻SX，PersonC，SandsAT:DisraptiOTandsequenceidentificationof2,000ge加skamouseembiyonicstemcells.iV。f"re19诉，392(6676):608~611.11,OsipovichAB，White-OrixKileyEK,fficksGG，RoshonMJ，ShafferC，MooreJH,BLE,R:Aetivatioiiofcryptic3，splicesiteswithinintionsofcellulargenesfollowinggeneentr邻ment,Afeefe!'ei然inpress.12,DeCeuninck:F,PoirmwfeauS,PaganoM，TsagrisL,BlaiwhardO，WilleputJ，Corvo直M:IohiWtkmofdiondroc辨cathepsinBandLactivitiesbyinsulin-likegrowthfector-n(!GF邻anditsSe譜variantinvitro:possibleroleofthem腦ose6-phosphate/IGF-IIreceptor.AfoZCy/五"4&cr紐"1995，113(2):205-13,MartinezCO,GuineaR,BenaventeJ,CairascoL:The您tryofreovimsintoLcellsisdepmdentonv織olarproton-ATTPaseactivity,J"Fi'm/1996,70(1):576-579.14,GuineaR,CairascoL:R叫uirem鄉forvacuolarproton-ATPaseactivityduringentryofinflueazavirusintocells./Firo/1995,69(4):2306-2312.15,B腿ettiCR>BurkeRL,KomfeWS,GregoryW,Masiarz跟DingwdlKS，JohnsonDC:Herpessimples■viiroglycoproteinDacquire迈aimose:6-phosphateimiduesaidbindsto加araiose6~phospliatereceptors,/及to/Clte附1將4，2^9(25):17067-17074.16,ZerigFY,GericeV，GaMusHJ:IdentificationofaimexinHannexinVI肌dglyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenaseasealcyclis-binding'protdnsinbovineheartJ"fJBtod棚i993，25(7):1019-1027,17,LeeKH，NaDS'KimJW:Cakiom-dependortkrte:mctkraofamiexinIwi也腿exin:nandmappingoftheinteractionsites.1999,442(2-3):143-146,汰Filipek入WojdaU,LesnMcW:InteractionofcalcycHnanditseyanogenbromideftagmentswithannexinHandglyceraldehjde3-phospliatedehydrogenase.CW/Jfc/1995,27(1123-1131,19.I*ietH>|>aoioRL,Co卿tonT:Directinteractionbetweentomfflicyto加egalovkusglycoproteinBradcelMarannexinn,/■F輔1997,20.OoliteinaNL,KordowskaJ,WangCL，LehrerSS:Ca2+-dqpendentbindingof:calcyclinto斑uscktropomyosin,丑/oc^e挑5i'ojpA"及o1Co挑mMM1996，220(2):360-365,21.扭daK，WadaJ,ZhaagH,Hir，shi:K,TsucM3rarnaY,SMkataK,MaM加H:IdentificationofgenesspecificallyexpressedinHieaccumulatedvisceraladiposetissueofOLETF她.J"￡*Wites2000,4:i(10):1615-1622.22.KatohM:IGSFl1gene,frecpentlyup-regulatedinintestinal-typegastriccaneer，encodesadhesionmoleculehomoiog,toCXADR，FLJ22415andESAM./M"0腳/2啦，23(2):525-531.23.BartonES，ForrestJC，Co腿oilyJL,ChappellJD，LiuY，SchneliFJ，Nusr敏入ParkosCA，DermodyTS:Junctionadhesionraotecu31eisareceptorforreovirus.Ce//2001，104(3):441-451.24.We.i加rHL，PowersML，FiddsBN:AbsoluteHnkageofvirulenceandcentralnervoussystemcelltropismofreovirusestoviralliemagglutiiiiiLJ7t/eciDfe1980,141(5):609-616.25.RubinDHWetzelJD,WilliamsWV,CohenJA，I>workkC,DermodyTS:Bindingoftype3mavimsbyadomainofthesigma1proteinimportantforb.eoiagghitinationleadstoinfectionofnKttiiieerythroleukemiacells,*/CKA備f1鄉，9卿:2536-2542.26.SizovaDV,KolupaevaVG，PestovaTV，ShatskyIN,HellenCU:Specificinteractionofeukaryotictranslationinitiationfartor3witibithe5'nontranslatedregionsofhepatitisCvirus節dclassical:swinefervervirusRNAs.J"FiVd19邻，72(6):47754782.27.McGregorF，PhelanA，DunlopJ，ClementsIB:Rsguiationofh邵essimplexviruspoly(A)siteusageandtheactionofimmediate-eariyprotein正63intheearly-lateswitch./Wro/19%,70(3):193l-測.28.PithaPM，AuWC,LowtherW，JuangYT,SchaferSL,BurysekL，HiscottJ，MoorePA:Roleo她einterferonregulatoryfactots(IRFs)invirus-mediatedsignalingandregulationofcdlgrowttt历ocfe'舰'e1998，80(8邻651-6汰29.HawigarJ:Ikaatc!immunityandinflamnmtion:atonscriptionalparadigm./附m總oZites200123(2-3):9SM09.30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