专利名称：用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳定化制剂的制作方法
用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳定化制剂
背景技术：
本文所公开的发明是一种活疫苗稳定化制剂，其可用于提高疫苗在 溶液中的存活时间，从而实现动物的合格免疫。本文也公开了制备与应 用方法。
接种，作为一项预防措施，是为了在现代生产体系中实现动物健康 而进行的一系列活动中的一部分。它与生物安全体系、充足的饮食一起， 使得生产者在整个周期中能够获得生产体系的正确性能，从而获得较高 的经济利益。动物控制野外挑战的能力较低会引起传染病爆发，导致显 著的经济损失，这一发现证明了适当免疫接种计划的重要性。
在确定接种计划时，有几个因素必须要分析，其中包括所用疫苗的 种类、林系、给药途径、所用技术及追踪方法。
在技术方面，使用的施用途径和技术非常重要，因为它们的实施直 接决定着可能的操作成败。
疫苗本身并不是较高操作费用的一个因素，然而，它是一项需要更 多关注、保障与管理的活动。与这项活动相关的人力成本很高，因为存 在错误的可能性、偏差或较低的一致性。
对于活抗原疫苗，为了成功接种而必须给予的处理与保护尤其关 键。当前的密集生产体系需要大规模的接种和药物处理技术，这使得生 产者能够在短时间内使用少量人力来免疫大量家禽，从而降低相关费 用、扩大收益。
这些体系也必须为生产者提供灵活性与安全性，以面对由于新生产 体系中家禽密度增加导致传染性疾病增加而引起的新的健康挑战。
考虑到家禽养殖开发的规模，由于病原微生物与不利理化条件的存 在，生产农场中所使用的水质难以保证。根据所用供水系统的地理位置 及其存储类型的不同，水具有不同的硬度(无机钙和镁)状态，远离中性的pH范围，并且含有来自用于去除水中病原体的处理系统的卣素、 氯化物和》典化物。
这些条件对于动物的健康是不利的，对于接种和给药程序则更为不
利。接种和给药(medication)是需要非常特定的水质条件的两个程序 中性pH、不含氯和碘、低硬度，因而在正常的野外条件下很少能达到最 佳结果。
然而，为使此项操作能提供最大可能的保护， 一些因素必须注意， 其中最重要的是所喷水的质量。使用不具备接种所需最低质量特征的 水，就会不可避免地降低所用疫苗的有效性，从而使所接种的动物种群 的健康受到威胁。
实现接种和给药程序的最大有效性所需要的最低质量条件涉及三 个主要参数pH、水的硬度和作为消毒剂的囟素的存在。
pH是接种和给药程序的效率的一个决定因素。对于前者，病毒和细 菌对高于中性酸度或碱度范围引起的变性或失活高度耐受。接种或给药 的理想pH是pH 7。
水的硬度是指钙和镁离子的存在，它们主要来自于地下矿床。这些 离子对于预防中所使用的病毒、细菌及活性成分具有螯合或凝集作用。 理想状态是当接种或给药时水中不含或含有最低可能浓度的这些离子。
由于水中病原体的存在，需要用抗微生物剂来处理，其中最广泛使 用的是氯和碘。然而，由于它们对疫苗具有同样的效果而使其失活，从 而干扰接种过程。对于此项操作，水中必须完全不含卤素。
在接种时，家禽消化道和呼吸道中存在的介质条件对病毒和细菌的 生存能力产生不利影响。因此，在抗原停留于它们必须在其上生长的特 定组织上之前，使用一些能够阻止抗原破坏的材料。
每个活的微生物，无论病毒还是细菌，都有空间结构或三级结构， 这种结构可被溶液的渗透压所改变，而且当其改变时，能够导致细菌外 壁破坏或大部分病毒变性。因此，为了保持活抗原稳定，理想的是接种 溶液具有最小的等电电势。
几年前在畜牧业中普遍和广泛使用的做法是使用脱脂牛奶作为活抗原疫苗的稳定剂。由于牛奶具有弱碱性特征，因而牛奶具有pH中和 的性质。
由于在许多情况下，牛奶本身含有会破坏疫苗的碘化物残余物，牛
奶作为稳定剂使用不是很有利，因而必须考虑只使用经过检定不含;^典化 物的牛奶或可商购的稳定的制剂。而且，牛奶稳定pH及水中卣素存在
的能力非常有限，几乎为零。
其钙含量导致了非常严重的问题，因为钙含量实质上提高了水的硬 度水平，因而既能够影响抗原的稳定性，又能造成钙在供水体系管道或 喷嘴上的沉积。它也是一种培养基，导致在水分配体系或喷射体系内部 形成生物斑块膜，这对于动物健康是非常大的威胁。
因而，需要一种通过解决上述所有三个问题而为溶液中的抗原提供 必要稳定性的产品，它具有高稳定效率，直接的作用，而且同时不影响 接种所用的机械系统。
发明内容
本发明的应用领域为活抗原疫苗的饮用水接种和给药系统以及喷 雾接种和给药系统。疫苗分配介质通常为水，但并不限于水，所以疫苗 能够应用其他分配介质，只要它是一种液体介质。
用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳定化制剂包含一种多成分
(活病毒或细菌疫苗)提供延长的稳定性。
本发明包括一种产品，它可以是与水混合用于农畜接种的液体或固 体的形式。
pH稳定剂用于将疫苗溶液的pH稳定在6.5 7.5范围内，在此范围 内大部分细菌和病毒能够存活。pH稳定剂可以是磷酸盐、琥珀酸盐、碳 酸氢盐和乳酸盐。优选使用磷酸钾，因为其具有低刺激性并且认为其可 安全地用于动物和人类。
,水硬度螯合剂用于去除能够导致疫苗中的病毒和细菌失活的溶于 水中的矿物质。螯合剂包括乙二胺四乙酸盐。其中，优选使用乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA二钠)，因为认为其可安全使用，不会明显改变溶 液的pH,且不会刺激活组织。
还原剂用于中和当地(实施地)水中存在的消毒剂。这些消毒剂可以 基于氯、碘、过氧化物、溴、氟、臭氧或高锰酸盐。所有这些都可认为 是氧化剂，可用(但不限于)疏代硫酸钠、焦亚硫酸钠(sodium me tab i su 1 f i te)、亚石l酸氢钠、亚石克酸钠、二IU匕好u、亚石克酸氬4妄及碌u 代硫酸铵中和。优选使用硫代硫酸钠，因其具有较高的中和能力，且被 认为是安全、无腐蚀性的。
必要时，可使用水溶性盐来提供保持疫苗中存在的病毒三级结构稳 定和细菌外壁完整所需的渗透压。其中，包括盐酸盐、氢碘酸盐、碳酸 盐、碳酸氢盐、磷酸盐、碘酸盐、氯酸盐、氢溴酸盐、溴酸盐、氢氟酸 盐、硝酸盐、亚硝酸盐、氢好^酸盐、 〃琉酸盐和亚-危酸盐。其中，优选使 用氯化钠，因其无毒、无刺激性且被认为可安全使用。
必要时，可使用碳水化合物来保护病毒或细菌结构免受家禽消化道 不利条件的影响，其中，包括葡萄糖、右旋糖、乳糖、蔗糖、甘露糖和 果糖。优选乳糖，因为其由于粉末粒径而具有高溶解性，且与家禽的正 常代谢没有不利的相互作用。
必要时，可使用食品级着色剂来为接种员提供一种可视的确认手 段，其可使稳定剂的使用者知道何时已将保护剂加入水中，并最终知道 动物已经接受了含有疫苗的水。其中，包括颜料和蓝、红、绿、紫、橙 等颜料制剂。优选使用蓝色颜料，因其与活组织的颜色具有对比效果。
必要时，可使用食品级抗湿剂来防止混合物由于其某些盐的吸湿性 而湿润。这些抗吸湿剂不会改变产品的理化功能，只是减少混合物变湿。 其实例包括二氧化硅、硬脂酸钙、硬脂酸镁、磷酸钙、磷酸镁、氧化镁、 硅酸4丐、硅酸镁、硅铝酸钠、硅酸铝酸钙等。其中，优选使用硬脂酸镁 和二氧化硅，因其无毒、无剌激性且被认为可安全使用。
所述制剂按以下方式组成乙二胺四乙酸(EDTA) 二钠盐，浓度 范围为0.03%~ 34.19%,最佳浓度为3.75%;磷酸二氢钟，浓度范围为 0.03% ~ 34.48%,最佳浓度为5%;磷酸氬二钾，浓度范围为0.03% ~56.07%,最佳浓度为41.25%;硫代硫酸钠，浓度范围为0.03% ~ 33.73%， 最佳浓度为1.75%;氯化钠，浓度范围为0.03% ~ 35.91%,最佳浓度为 10,75%;乳糖，浓度范围为0.03% ~ 51.02%,最佳浓度为28%; 二氧化 硅，浓度范围为0.03% ~5%，最佳浓度为1%;硬脂酸镁，浓度范围为 0.03% ~ 5%,最佳浓度为1%;亮蓝着色剂，浓度范围为0.03%-44,25%, 最佳浓度为7.50%。
生产方法为在最大相对湿度30%、温度15~35。 C下，以如下顺序 加入原料，每次加入后，持续搅拌下逐步混合这些原料15分钟磷酸 氢二钾、乳糖、磷酸二氩钾、乙二胺四乙酸(EDTA) 二钠盐、硫代硫 酸钠、氯化钠、硬脂酸镁、二氧化硅和亮蓝着色剂。
当将疫苗与在温度15~35° C下制备的浓度为2.85 ~ 5.93克/升溶 液的稳定化溶液相混合时，病毒或药物没有暴露于不利条件下，因此其 存活能力长期保持。当动物饮用含有疫苗的溶液时，乳糖在病毒外表面 上作为保护剂起作用，从而避免其在转运直到到达下消化道系统的过程 中受到破坏，疫苗在下消化道系统中通过肠膜进入血流，开始免疫原性 反应。
使用方法限定如下根据组成不同，在不断搅拌下，緩慢向制备的 每升疫苗溶液中加入2.85 ~ 5.93克/升的活疫苗稳定剂。 一旦溶解，就 将所需量加入到疫苗中并应用于待接种的动物。
实施例1
粉末混合物包含0.03。/qEDTA、 5.19%磷酸二氢钾、42.85 %磷酸氢 二钾、1.82%硫代硫酸钠、11.17%氯化钠、31.16%乳糖、1.04 %二氧化 硅、1.04 %硬脂酸镁和7.79 %着色剂。按每升水3.85克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH6、 100ppm总硬度及 5 ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量效 价为3.7 log IO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试凄史
据
样品A:水硬度为55ppm总硬度、pH7.1、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为起始应用浓度的94 %,因而只有6 %的疫苗 活性丧失。
样品B:测得硬度为115ppm、 pH7.1、游离氯为4ppm。观察到疫 苗效价减少为疫苗起始应用浓度的30%,因而有70%的疫苗活性丧失。
实施例2
粉末混合物包含3.75 % EDTA、 5.00 %磷酸二氢钾、41.25 %磷酸氢 二钾、1.75%石1代硫酸钠、10.75 %氯化钠、28%乳糖、1 %硬脂酸镁、1 %二氧化硅和7.50 %着色剂。按每升水4克该混合物的比例计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH6、 100ppm总硬度及 5 ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入具有1000剂量效《介 为3.7 log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的小 瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH7.0、游离氯滴定值为0。观察 到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的97 %，因而只有3 %的疫 苗活性丧失。
样品B:测得硬度为105 ppm、 pH5.9、游离氯为5 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的25 %,因而有75 %的疫苗活性丧 失。
实施例3
粉末混合物包含34.19 % EDTA、 3.42 %磷酸二氢钾、28.21 %磷酸 氩二钾、1.20%硫代疏酸钠、7.35°/。氯化钠、9.5°/。乳糖、0.68 %硬脂 酸镁、0,68 %二氧化硅和5.13 %着色剂。按每升水5.85克该混合物的比例计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH6、 100卯m总硬度及 5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量效价 为3.7 1ogl0的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A)的 小并瓦中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH7.0、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的97 %，因而只有3 %的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为110ppm、 pH6.0、游离氯为4ppm。观察到疫 苗效价减少为疫苗起始应用浓度的30%，因而有70%的疫苗活性丧失。
实施例4
粉末混合物包含3.95 %EDTA、 0.03 %磷酸二氢钾、43.41 %磷酸氢 二钾、1.84%硫代硫酸钠、11.31 %氯化钠、29.47 %乳糖、1.05 %硬脂酸 镁、1.05 %二氧化硅和7.89 %着色剂。按每升水3.8克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、 100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 loglO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH7.6、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的93 %,因而只有7 %的 疫苗活性丧失。
样品B:测得石更度为102 ppm、 pH6.0、游离氯为5 ppm。 观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的35%，因而有65%的疫苗活性丧
10失。
实施例6
粉末混合物包含2.59% EDTA、 34.48 %磷酸二氩钾、28.45 %磷酸 氢二钾、1.21%硫代硫酸钠、7.41°/0氯化钠、19.31 %乳糖、0.69 %硬脂 酸镁、0.69 %二氧化硅和5.17 °/。着色剂。按每升水5.8克该混合物的比 例计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH6、 100ppm总硬度 及5 ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 loglO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH6.2、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的83 %,因而只有17 % 的疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为104 ppm、 pH6.0、游离氯为5 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的33 %，因而有67 %的疫苗活性丧 失。
实施例7
粉末混合物包含6.32。/oEDTA、 8.51 %磷酸二氢钾、0.03 %磷酸氢 二钾、2.98%硫代硫酸钠、18.29 %氯化钠、47.64 %乳糖、1.70 %硬脂酸 镁、1.70 %二氧化硅和12.76 %着色剂。按每升水2.35克该混合物的比
例计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、 100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 loglO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为2ppm总硬度、pH5.8、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的73 %,因而只有27 % 的疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为102 ppm、 pH5.9、游离氯为4 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的29%,因而有71 %的疫苗活性丧 失。
实施例8
粉末混合物包含2.80 % EDTA、 3.74 %磷酸二氢钾、56.07 %磷酸氢 二钾、1.31%硫代硫酸钠、8.04 %氯化钠、20.93 %乳糖、0.75 %硬脂酸 镁、0.75 %二氧化硅和5.61 %着色剂。按每升水5.35克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH6、 100 ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为3 ppm总硬度、pH7.6、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的91%,因而只有9%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为108 ppm、 pH6.1、游离氯为5 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的36%，因而有64%的疫苗活性丧 失。
实施例9
粉末混合物包含3.82。/。EDTA、 5.09%磷酸二氢钾、41.97 %磷酸氬二钾、0.03%硫代硫酸钠、10.94 %氯化钠、28.49 %乳糖、1.02 %硬脂酸 镁、1.02 %二氧化硅和7.63 %着色剂。按每升水3.93克该混合物的比例
计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、 100 ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为4 ppm总硬度、pH 7.1 、游离氯滴定值为2 ppm。 观察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的72 %,因而只有28 % 的疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为100 ppm、 pH6.0、游离氯为5 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的35 %,因而有65 %的疫苗活性丧 失。
实施例10
粉末混合物包含2.53 %EDTA、 3.37%磷酸二氢钟、27.82 °/。磷酸氢 二钾、33.73 %硫代硫酸钠、7,25 %氯化钠、18.89 %乳糖、0.67 %硬脂酸 镁、0.67 %二氧化硅和5.06 %着色剂。按每升水5.93克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、 100 ppm总硬度 及5 ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为1 ppm总硬度、pH7.0、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的96%，因而只有4%的疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为107 ppm、 pH6.1、游离氯为5 ppm。 观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的32%，因而有68%的疫苗活性丧 失。
实施例11
粉末混合物包含4.20 % EDTA、 5.60 %磷酸二氢钾、46.21 %磷酸氢 二钟、1.96%硫代硫酸钠、0.03 %氯化钠、31.36 %乳糖、1.12 %硬脂酸 镁、1.12 %二氧化硅和8.40 °/。着色剂。按每升水3.57克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、 100ppm总硬度 及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 log 10的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为0ppm总硬度、pH7.2、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的96%,因而只有4%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为103 ppm、 pH6.0、游离氯为5 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的28%,因而有72%的疫苗活性丧失。
实施例12
粉末混合物包含2.69 % EDTA、 3.59 %磷酸二氢钾、29.62 %磷酸氢 二钾、1.26%硫代硫酸钠、35.91 %氯化钠、20.11 %乳糖、0.72 %硬脂酸 镁、0.72 %二氧化硅和5.39 %着色剂。按每升水5.57克该混合物的比例
计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH6、 100卯m总硬度 及5 ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量效价为3.7 loglO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。 混合2小时后，荻得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为3 ppm总硬度、PH6.8、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的91%,因而只有9%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为100 ppm、 H6.0、游离氯为5 ppm。观察到疫 苗效价减少为疫苗起始应用浓度的31%,因而有69%的疫苗活性丧失。
实施例13
粉末混合物包含5.21 %EDTA、 6.94%磷酸二氢钾、57.27 %磷酸氢 二钾、2.43%硫代硫酸钠、14.93 %氯化钠、0.03 %乳糖、1.39 %硬脂酸 镁、1.39 %二氧化硅和10.41 %着色剂。按每升水2.88克该混合物的比
例计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、 100 ppm总硬度 及5 ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 loglO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小弁瓦中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为4 ppm总硬度、pH7.0、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的93%,因而只有7%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为100 ppm、 pH5.9、游离氯为4 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的36%,因而有64%的疫苗活性丧失。
实施例14
粉末混合物包含2.55 % EDTA、 3.40 %磷酸二氢钾、28.06 %磷酸氢
15二钾、1.19%硫代硫酸钠、7.31 %氯化钠、51.02 %乳糖、0.68 %硬脂酸 镁、0.68 %二氧化硅和5.1 %着色剂。按每升水6.88克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验，其中将产品加入到pH 6、 100 ppm总硬度 及5 ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂量 效价为3.7 loglO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品A) 的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为21 ppm总硬度、pH7.3、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的95%，因而只有5%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为107 ppm、 pH6.0、游离氯为5 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的31%,因而有69%的疫苗活性丧失。
实施例15
粉末混合物包含3.97。/。EDTA、 5.29%磷酸二氢钾、43.64 %磷酸氢 二钾、1.85%硫代硫酸钠、11.37%氯化钠、31.74 %乳糖、0.60 %硬脂酸 镁、0.60 %二氧化硅和0.03 °/。着色剂。按每升水3.78克该混合物的比例 计量制备。
进行实验室规模试验，其中将该产品加入到pH 6、 100ppm总硬 度及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂 量效价为3.7 loglO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品 A)的小瓶中，还包括使用不含产品的空白溶液的重复样品(样品B)。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为2ppm总硬度、pH7.0、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的97%,因而只有3%的 疫苗活性丧失。样品B:测得硬度为100 ppm、 pH6.0、游离氯为5 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的25%,因而有75%的疫苗活性丧失。
实施例16
粉末混合物包含2.21 %EDTA、 2.95%磷酸二氢钾、24.34 %磷酸氢 二钾、1.03%硫代硫酸钠、6.34 %氯化钠、17.70 %乳糖、0.59°/。硬脂酸 镁、0.59 %二氧化硅和44.25 %着色剂。按每升水6.78克该混合物的比 例计量制备。
进行实验室规模试验，其中将该产品加入到pH 6、 100ppm总硬 度及5ppm游离氯的空白水溶液中，并在5分钟内加入到具有1000剂 量效价为3.7 loglO的作为生物模型的禽类传染性支气管炎疫苗(样品 A )的小并瓦中，还包括使用不含该产品的空白溶液的重复样品(样品B )。
混合2小时后，获得以下仪器分析理化测量和鸡胚滴定生物测试数
据
样品A:水硬度为35 ppm总硬度、pH6.9、游离氯滴定值为0。观 察到疫苗效价保持在浓度为疫苗起始应用浓度的92%，因而只有8%的 疫苗活性丧失。
样品B:测得硬度为109 ppm、 pH6.0、游离氯为5 ppm。观察到 疫苗效价减少为疫苗起始应用浓度的33%,因而有67%的疫苗活性丧 失。
已经描述了本发明，认为本发明在应用领域具有新颖性，因而请求 专利保护权利要求书的内容。
权利要求
1. 用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳定化制剂，其特征在于它包含缓冲溶液和还原剂。
2. 如权利要求1所述的用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳定 化制剂，其特征在于所述緩沖溶液由pH稳定剂和水硬度螯合剂制成。
3. 如权利要求1和2所述的用于大规^莫接种系统的活抗原的疫苗 稳定化制剂，其特征在于所述pH稳定剂是下列化合物之一磷酸盐、 琥珀酸盐、碳酸氢盐、醋酸盐和乳酸盐等；优选磷酸二氢钾和磷酸氢二 钾。
4. 如权利要求1和2所述的用于大规模接种系统的活抗原的疫苗 稳定化制剂，其特征在于所述水螯合剂是下列化合物之一乙二胺四乙 酸(EDTA)单钠盐、乙二胺四乙酸(EDTA) 二钠盐、乙二胺四乙酸(EDTA)三钠盐、乙二胺四乙酸(EDTA)四钠盐等；优选乙二胺四乙 酸(EDTA) 二钠盐。
5. 如权利要求1所述的用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳定 化制剂，其特征在于所述还原剂是下列化合物之一硫代硫酸钠、焦亚^琉酸钠、亚碌u酸氢钠、亚硫酸钠、二氧化好u、亚碌u酸氢铵和碌u代碌u酸铵等，优选硫代硫酸钠。
6. 如权利要求1 ~ 5所述的用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳 定化制剂，其特征在于可任选地加入下列化合物之一或其任意组合a) 水溶性盐，如盐酸盐、氢碘酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、 碘酸盐、氯酸盐、氢溴酸盐、溴酸盐、氬氟酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、 氬硫酸盐、硫酸盐和亚硫酸盐等；优选氯化钠，以提供必需的渗透压来 保持病毒结构和细菌外壁稳定；b) 碳水化合物，如葡萄糖、右旋糖、乳糖、蔗糖、甘露糖和果糖 等；优选乳糖，来保护病毒或细菌结构免受家禽消化道不利条件的影响；c) 食品级着色剂，优选亮蓝色着色剂，为使用者提供一种可视的确 认手段来确定应用稳定剂的时刻以及接受该制剂的动物；d)食品级抗湿剂，如二氧化硅、硬脂酸4丐、硬脂酸镁、磷酸4丐、 磷酸镁、氧化镁、硅酸4丐、硅酸镁、硅铝酸钠、硅酸铝酸4丐等；优选二 氧化硅和硬脂酸镁，以防止混合物在接触环境时因具有吸湿性而湿润。
7. 如权利要求1 ~ 6所述的用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳 定化制剂，其特征在于所述乙二胺四乙酸(EDTA) 二钠盐的浓度范围 为0.03% ~ 34.19%,所述磷酸二氬钾的浓度范围为0.03% ~ 34.48%,所 述磷酸氢二钾的浓度范围为0.03%~ 56.07%,所述硫代硫酸钠的浓度范 围为0.03%- 33.73%,所述氯化钠的浓度范围为0.03% ~ 35.91%,所述 乳糖的浓度范围为0.03%~51.02%，所述二氧化硅的浓度范围为 0.03%~5°/。，所述硬脂酸镁的浓度范围为0.03%~5%，所述亮蓝着色剂 的浓度范围为0.03% ~ 44.25%。
8. 如权利要求7所述的用于大规模接种系统的活抗原的疫苗稳定 化制剂，其特征在于下列物质的最佳浓度分别为所述乙二胺四乙酸(EDTA) 二钠盐为3.75%,所述磷酸二氢钾为5%，所述磷酸氢二钾为 41.25%,所述硫代硫酸钠为1.75%,所述氯化钠为10.75%,所述乳糖 为28%，所述二氧化硅为1 %，所述硬脂酸镁为1 %,所述亮蓝着色剂 为7.50 %。
全文摘要
本发明涉及一种用于在动物蛋白质生产过程中使用的大规模给药和接种系统的活抗原的疫苗稳定化制剂。本发明包括一种形式为能够溶于水中的粉末或液体的产品，它是由有机和无机来源的化合物的均匀混合物形成的。本发明能够用于在接种时稳定水的关键理化参数(pH、硬度和消毒剂的存在)，从而减少接种时由环境暴露所造成的疫苗的微生物和病毒效价损失。本发明的制剂预期用于饮用水给药和接种系统以及喷雾给药和接种系统。
文档编号A61K39/12GK101291689SQ200580051850
公开日2008年10月22日 申请日期2005年9月1日 优先权日2005年9月1日
发明者若泽·路易斯·努诺·阿雅拉 申请人:若泽·路易斯·努诺·阿雅拉