肝素口服纳米乳组合物及其制备方法

专利名称：肝素口服纳米乳组合物及其制备方法
技术领域：
本发明属药物制剂领域，涉及肝素口服纳米乳组合物及其制备方法。
背景技术：
肝素(Standard Heparin，SH)是一类糖胺聚糖，由糖醛酸和葡萄糖胺以1，4键连接的重复二糖单位组成的多糖链混合物，含10～30个二糖单位不等，分子量为4000～20000Da，平均分子量12000Da。低分子量肝素(Low Molecular WeightHeparin，LMWH)是肝素通过酶降解或化学解聚得到的低分子量组分，分子量范围一般为3000-8000Da。临床上SH和LMWH主要用于预防和治疗血栓栓塞性疾病如深静脉血栓、肺栓塞等。深静脉血栓(Deep Venous Thrombosis，DVT)最常见的是下肢及下腔静脉血栓形成，尤其是髂一股静脉血栓形成。DVT可致慢性静脉功能不全、下肢肿胀甚至溃疡等，更严重的是22％-29％的DVT患者可并发致命性的肺栓塞。DVT术后发病率更高，特别是人工髋关节置换术后DVT的发生率高达40-70％。急性DVT经典疗法是住院期间静脉注射肝素或皮下注射低分子量肝素，出院后口服抗凝药华法林(Warfarin)6个月。由于华法令血浆蛋白结合率高达99％、与其他药物相互作用多、有易出血等副作用，故患者在出院之前往往要经历数周时间进行剂量调整和监控，口服该药期间还要定期检查血小板及凝血酶原时间国际标准化率，这给DVT患者的治疗造成极大的不便。因此研究肝素或低分子量肝素口服制剂以代替口服华法令有利于增强DVT患者治疗的安全性与顺应性。但是肝素或低分子量肝素属大分子药物，水溶性极强、分子量大及荷负电荷的特点使其难以透过胃肠粘膜吸收。

发明内容
本发明目的在于提供一种肝素口服纳米乳组合物及其制备方法。
本发明旨在通过纳米乳剂型提高肝素或低分子量肝素经肠粘膜的吸收。本发明能提高肝素经肠粘膜通透的能力，同时增加肝素口服生物利用度。
本发明肝素口服纳米乳是由油相、表面活性剂、助表面活性剂及水相按适当比例组成的澄清透明溶液。
本发明所述肝素选自肝素、低分子量肝素、硫酸类肝素或上述成分的混合物。
所述的肝素口服纳米乳，其特征在于油相是中链三甘酯、中链二甘酯或中链单甘酯，其中中链是指碳链为C8-C10。
所述的肝素口服纳米乳，其特征在于表面活性剂选自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯(Tween)、聚氧乙烯脂肪醇醚类(苄泽，Brij)、聚氧乙烯脂肪酸酯类(卖泽，Myrj)、氧化乙烯-氧化丙烯嵌段共聚物(泊洛沙姆，Poloxamer)、聚氧乙烯甘醇酸化的天然或氢化蓖麻油(Cremophor或HCO，BASF)、琥珀酸维生素E聚乙二醇酯(TPGS，Eastman)、聚乙二醇-8-甘油辛/癸酸酯(Labrasol，Gattefosse)、卵磷脂、或豆磷脂。在上述表面活性剂中，优选Cremophor、Tween、TPGS和Labrasol。
所述的肝素口服纳米乳，其特征在于助表面活性剂采用中链单甘酯、中链二甘酯、中链混合单/二甘酯、二乙二醇单乙醚(Transcutol-P)、丙二醇、聚乙二醇(分子量200-600的PEG)、乙醇或上述成分混合物。在上述助表面活性剂中，优选中链单甘酯、中链二甘酯和中链混合单/二甘酯。
本发明所述的中链单甘酯商品名是Imwitor988(Sasol Corp.)或CapmulMCM C8(Abitec Corp.)；中链混合单/二甘酯商品名是Imwitor742(Sasol Corp.)、CapMumMCM(Abitec Corp.)或CapmulMCM C10(Abitec Corp.)；中链三甘酯商品名是Miglycol812N(Sasol Corp.)、Captex355EP、Captex350或Captex300 EP(Abitec Corp.)等。
本发明肝素口服纳米乳，其特征在于所述的油相和表面活性剂的比例为24∶1-1∶6，其中优选比例为6∶1-1∶1。
所述的表面活性剂和助表面活性剂的比例为5∶1-1∶5，其中优选比例为3∶1-1∶3。
本发明肝素口服纳米乳可以直接口服，也可以装入硬明胶胶囊或软明胶胶囊、肠溶硬明胶胶囊或肠溶软明胶胶囊中，也可与固体载体如二氧化硅、硫酸钙、海藻酸等混合，而后制成固体片剂或固体颗粒胶囊制剂口服。
本发明提供的肝素口服纳米乳具有提高肝素经肠粘膜通透的能力并增加肝素口服生物利用度的作用。


图1是实施例1、实施例2、实施例3和肝素溶液剂经大鼠在体原位给药后活化部分凝血活酶时间(APTT)-时间曲线；图2是实施例1、实施例4、实施例5和肝素溶液剂经大鼠灌胃给药后活化部分凝血活酶时间(APTT)-时间曲线；图3是肝素各组制剂经大鼠灌胃后空肠的组织切片图。
其中，A溶液剂；B实施例1；C实施例4；D实施例5；E0.1％曲拉通
具体实施例方式
实施例1 制备纳米乳组分量(g)Miglycol 812N 0.2Tween 800.2Imwitor 742 0.15蒸馏水 0.05LMWH0.05精密称取处方量的LMWH，蒸馏水溶解后，加入Tween 80、Imwitor742，混合均匀，再加入处方量的Miglyol812N，搅拌形成澄清透明的溶液即得。用NicompTM380ZLS型粒度激光散射测定仪(Santa Barbara，USA)测定，粒径为27.1±2.0nm。
实施例2 制备纳米乳组分量(g)Miglycol 812N 0.32Cremophor EL 0.08Imwitor 988 0.15蒸馏水0.05肝素 0.05精密称取处方量的肝素，蒸馏水溶解后，加入Cremophor EL、Imwitor 988，混合均匀，再加入处方量的Miglyol812N，搅拌形成澄清透明的溶液即得。用NicompTM380ZLS型粒度激光散射测定仪测定，粒径为29.2±3.5nm。
实施例3 制备纳米乳组分 量(g)Miglycol 812N 0.1TPGS 0.2丙二醇0.25蒸馏水0.05LMWH 0.05精密称取处方量的LMWH，用蒸馏水溶解后，加入TPGS、丙二醇，混合均匀，再加入处方量的Miglyol812N，搅拌形成澄清透明的溶液即得。
实施例4组分 量(g)Miglycol 812N 0.3Labrasol 0.15Transcutol-P 0.1蒸馏水0.05肝素 0.05纳米乳制备时，精密称取处方量的肝素，用蒸馏水溶解后，加入Labrasol、Transcutol-P，混合均匀，再加入处方量的Miglyol812N，搅拌形成澄清透明的溶液即得。
实施例5组分 量(g)Miglycol 812N 0.25Tween 80 0.1Imwitor 742 0.2LMWH 0.05制备时，将处方量的Miglycol 812N、Cremophor EL和Imwitor742混合并搅拌使形成澄清透明的溶液，加入LMWH，搅拌使形成混悬剂，装入硬胶囊中即得。
实施例6本发明应用活化部分凝血活酶时间(APTT)反映肝素纳米乳口服后在体内的药理效应，结果显示，血浆中肝素浓度越高，APTT越长。
本发明肝素口服纳米乳进行在体原位肠袢实验取体重250g～280g的SD大鼠24只，隔夜禁食(可自由饮水)，称重后腹腔注射水合氯醛(6.5％)溶液1ml/100g，麻醉后将其背位固定于手术台板上，作颈动脉插管以供取血用。大鼠随机分为4组，沿腹中线剪开腹部，空肠注射肝素剂量为50mg/kg的各组制剂，分别是肝素生理盐水溶液(0.2ml)以及本发明实施例1-3。上述各组均于给药前及给药后不同时间取血0.45ml，加至已含有3.2％枸橼酸钠溶液0.05ml的离心管中，混匀，6000rpm离心10min，取血浆迅速贮存于-20℃冰箱中，应用活化部分凝血活酶时间测定试剂盒测定APTT，APTT-时间曲线见图1。结果显示本发明肝素口服纳米乳实施例1-3空肠给药后血浆APTT较溶液剂显著延长，表明本发明肝素纳米乳能显著增加肝素经肠粘膜的通透能力。
本发明肝素口服纳米乳进行灌胃给药实验取体重250g～280g的SD大鼠24只，隔夜禁食，自由饮水，将大鼠随机分为4组，每组6只。大鼠灌胃给予肝素剂量为50mg/kg的各组制剂，分别是肝素生理盐水溶液(0.2ml)以及本发明实施例1、实施例4和实施例5。分别于给药前及给药后不同时间眼眶取血0.45ml，加至已含有3.2％枸橼酸钠溶液0.05ml的离心管中，混匀，6000rpm离心10min，取血浆迅速贮存于-20℃冰箱中，测定APTT，不同时间APTT曲线见图2所示。结果显示，较之溶液剂，本发明肝素口服纳米乳实施例1和实施例4-5经大鼠灌胃后均显著延长血浆APTT，表明本发明肝素口服纳米乳能显著增加肝素口服生物利用度。
本发明肝素口服纳米乳毒性考察取隔夜禁食的体重250g～280g的SD大鼠数只，用肝素溶液剂(0.2ml)、本发明实施例1和实施例4-5经大鼠灌胃(肝素50mg/kg)后1h，用乙醚麻醉大鼠至死，剪开腹部，取出空肠段，用pH6.8PBS冲洗后置于多聚甲醛溶液中，作石蜡切片，用苏木精和曙红染色，在光学显微镜下观察小肠绒毛变化，观察空肠粘膜是否有绒毛融合、脱落等损伤，结果见图3。图3A显示口服肝素溶液剂后绒毛保持完整；图3B显示口服本发明实施例1后肠绒毛没有损伤；图3C和3D显示口服本发明实施例4和实施例5后肠绒毛略有变短及脱落现象，但总体上保持绒毛较完整的形态；图3E为阳性对照，显示口服0.1％曲拉通后肠绒毛已经严重融合并且脱落。以上实验表明肝素口服纳米乳对肠粘膜几乎没有毒性。
权利要求
1.一种肝素口服纳米乳组合物，其特征是由油相、表面活性剂、助表面活性剂和/或水相制成澄清透明溶液，所述的油相与表面活性剂的比例为24∶1-1∶6，所述的表面活性剂与助表面活性剂的比例为5∶1-1∶5。
2.根据权利要求1所述的肝素口服纳米乳组合物，其特征是所述肝素选自肝素、低分子量肝素、硫酸类肝素或上述成分的混合物。
3.根据权利要求1所述的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于所述油相是中链三甘酯、中链二甘酯、中链单甘酯或上述混合物。
4.根据权利要求3所述的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于所述油相其中中链是碳链C8-C10。
5.根据权利要求1所述的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于所述表面活性剂选自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚类、聚氧乙烯脂肪酸酯类、氧化乙烯-氧化丙烯嵌段共聚物、聚氧乙烯甘醇酸化的天然或氢化蓖麻油、琥珀酸维生素E聚乙二醇酯、聚乙二醇-8-甘油辛酸/癸酸酯、卵磷脂或豆磷脂。
6.根据权利要求5所述的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于所述表面活性剂是聚氧乙烯甘醇酸化的天然或氢化蓖麻油、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、琥珀酸维生素E聚乙二醇酯或聚乙二醇-8-甘油辛/癸酸酯。
7.根据权利要求1所述的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于所述的助表面活性剂选自中链单甘酯、中链二甘酯、中链混合单/二甘酯、二乙二醇单乙醚(Transcutol P)、丙二醇、聚乙二醇(分子量200-600的PEG)、乙醇或上述混合物。
8.根据权利要求7所述的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于所述的助表面活性剂是中链单甘酯、中链二甘酯或中链混合单/二甘酯。
9.根据权利要求1所述及的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于油相与表面活性剂的比例为6∶1-1∶1。
10.根据权利要求1所述及的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于表面活性剂与助表面活性剂的比例为3∶1-1∶3。
11.根据权利要求1所述及的肝素口服纳米乳组合物，其特征在于所述肝素口服纳米乳直接口服，或装入硬明胶胶囊或软明胶胶囊或肠溶硬明胶胶囊或肠溶软明胶胶囊；或与固体载体二氧化硅、硫酸钙或海藻酸混合制成固体片剂或固体颗粒胶囊制剂口服。
全文摘要
本发明属药物制剂领域，涉及肝素口服纳米乳组合物及其制备方法。本发明由油相、表面活性剂、助表面活性剂和(或)水相按适当比例制成澄清透明溶液，其中油相与表面活性剂的比例为24∶1－1∶6，表面活性剂和助表面活性剂的比例为5∶1－1∶5。本发明肝素口服纳米乳能显著提高肝素经肠粘膜通透的能力并增加肝素口服生物利用度，且对肠粘膜几乎没有损伤。
文档编号A61K9/20GK1839876SQ20061002350
公开日2006年10月4日 申请日期2006年1月18日 优先权日2006年1月18日
发明者沈腾, 徐惠南, 翁伟宇, 张建芳 申请人:复旦大学