专利名称：甘草素在制备用于预防和治疗肿瘤药物的应用的制作方法
涉及领域本发明涉及医药领域，具体地说，本发明涉及将天然植物甘草中提取的二氢黄酮类单体化合物甘草素(Liquiritigenin)或人工合成的甘草素制备用于预防和治疗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
20世纪70年代以来，我国的癌症发病率一直呈上升趋势，目前我国每年癌症的发病人数约200万人，死于癌症的人数超过140万人，其中，肝癌死亡率位于癌症死亡率的第三位，每年有11万人死于肝癌，约占世界肝癌死亡总数的45％。我国肝癌高发情况十分严重，目前我国约有1.3亿HBV携带者，25％的病毒携带者最终将发展成为慢性肝炎、肝硬化和肝癌。WHO预计到2020年，每年可发生2千万新癌症病例，其中大多数在发展中国家。对此，我国提出重点预防的癌症依次为肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、乳腺癌、宫颈癌及鼻咽癌，它们合计占癌症死因的80％。面临癌症高发的挑战。通过研究天然植物中的化学抗癌物质预防癌症的发生和发展，已成为癌症化学预防研究的一个重要领域，并受到世界各国科学界的普遍关注。
天然植物甘草在我国资源丰富，甘草具有多种药理功能及人体保健作用，它被卫生部列入既是食品又是药品的保健食品名单。甘草在中医临床治疗肿瘤病人的中药配方中是一味重要的常用中药，探讨甘草中具有抗肿瘤活性的单体成分是研究的重要方向。虽然许多化学分析者已从化学分析的角度，对甘草成分进行了系统的分析，但对于甘草中存在的抗癌活性成分的研究尚不全面。目前研究认为甘草中三萜类和黄酮类化合物是抗肿瘤的主要活性成分，其中甘草三萜类化合物甘草酸和甘草甜素抗肿瘤的研究较多，如黄炜等研究发现，三萜类单体甘草酸浓度为2.5mmol/L、5mmol/L、10mmol/L作用肝癌细胞96h后，细胞增殖抑制率分别为32.2％、59.4％、85.1％[1]。而对甘草黄酮类化合物抗癌作用的研究很少，并均为甘草黄酮类混合物，非黄酮类单体化合物。例如傅乃武等研究发现甘草黄酮类混合物具有抗癌、抗突变和抗氧化作用，认为甘草黄酮很有希望发展成为一个有效预防肿瘤的药物[2]。日本Hatano研究发现甘草黄酮类物质可引起大鼠腹上肝癌和小鼠艾氏腹水癌细胞形态学上的变化[3]。甘草素属二氢黄酮化合物，以往的研究报道甘草素具有抗病毒作用，如甘草素有治疗感染HIV和慢性丙型肝炎病毒的作用，还具有抗艾滋病毒的作用[4]，近两年来，Crance等研究又发现甘草素能抑制SARS相关冠状病毒的复制[5]，但迄今为止，对于甘草素抗肿瘤作用及其机制的研究尚未见有报道。
发明内容
本发明的目的就是提供一种天然植物甘草中提取或人工合成的二氢黄酮类单体化合物甘草素(Liquiritigenin)在制备用于预防和治疗治肿瘤药物中的应用，所述的治癌药物用于治疗和预防肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、白血病、等多种癌症。
本发明的目的、优点等，将通过下面优先实施例的非限制性说明进行图示和解释，这些实施例是参照附图仅作为例子给出的。
图1为显示甘草素200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L对肝癌细胞生长的抑制呈剂量反应关系示意图。
图2为甘草素对结肠癌细胞的抑制作用示意图具体实施方式
如图1、图2及表1、表2、表3、表4、表5、表6所示，本发明的研究过程中，进行了体外不同肿瘤细胞的筛选实验，包括人肺癌细胞A549、人胃癌细胞(SGC7901)、人肝癌细胞(SMMC7721)、人结肠癌细胞(LOVO)、人早幼粒细胞白血病细胞HL-60，经多次筛选，发现甘草素具有明显抑制癌细胞生长的作用，并呈剂量反应关系，初步结果为本项目的深入研究提供了良好的基础。
一、细胞株与筛选方法细胞株人肺癌细胞A549人低分化胃腺癌细胞BGC-823人肝癌细胞SMMC-7721人早幼粒细胞白血病细胞HL-60方法1.取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数2-4×104个/ml，制成细胞悬液。
2.取细胞悬液接种于96孔板上，180/孔，置恒温CO2培养箱中培养24小时。
3.换液，加入受试药物，20/孔，培养72小时。
4.将MTT加入96孔板中，20/孔，培养箱中培养4小时。
5.吸去上清液，加入DMSO，150/孔，平板摇床上振摇5分钟。
6.用酶联免疫检测仪在波长570nm处测定每孔的吸光值，并计算细胞抑制率。
表1 抗肿瘤活性判断标准
二、筛选结果表2 甘草素对癌细胞的抑制作用
表3 阿霉素对癌细胞的抑制作用
表4结果显示，甘草素250μmol/L、500μmol/L对胃癌细胞的抑制分别为54.5％、58.1％。
表4 甘草素对胃癌细胞(SGC7901)的抑制作用(48h)
与DMSO比较*＜0.05，**＜0.01表5结果显示，甘草素250μmol/L、500μmol/L对肝癌细胞生长抑制率分别为42.0％和89.9％。
本发明在经反复体外抗肿瘤筛选实验，发现甘草中提取的黄酮类单体化合物甘草素(liquiritigenin)，对SMMC7721肝癌细胞生长具有明显的抑制作用，甘草素200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L作用肝癌细胞48h，对肝癌细胞生长抑制率分别为23.5％、45.2％、84.0％，其抑制肿瘤的作用明显高于甘草三萜类单体化合物甘草酸。
表5 甘草素对肝癌细胞(SMMC7721)的抑制作用(48h)
与DMSO比较*＜0.05，**＜0.01表6结果显示，甘草素125μmol/L、250μmol/L对结肠癌细胞生长抑制率分别为57.6％和91.9％。
表6 甘草素对LOVO(结肠癌)细胞的抑制作用(48h)
与DMSO比较*＜0.05，**＜0.013.3、结论甘草素具有抑制人肝癌细胞(SMMC7721)、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞(SGC7901)、人低分化胃腺癌细胞BGC-823、人结肠癌细胞(LOVO)、人早幼粒细胞白血病细胞HL-60生长的作用。
权利要求
1.甘草素在制备预防和治疗治癌药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述的甘草素为二氢黄酮化合物。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述的治癌药物用于治疗和预防肺癌。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述的治癌药物用于治疗和预防肝癌。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述的治癌药物用于治疗和预防胃癌。
6.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述的治癌药物用于治疗和预防结肠癌。
全文摘要
本发明涉及医药领域，具体地说，本发明涉及天然植物甘草中的活性物质甘草素在制备预防和治疗治癌药物中的应用。所述的治癌药物用于治疗和预防肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌等多种癌症。
文档编号A61P35/00GK101036638SQ20061003888
公开日2007年9月19日 申请日期2006年3月16日 优先权日2006年3月16日
发明者蔡云清 申请人:南京医科大学