一种原人参二醇衍生物的抗肿瘤用途的制作方法

专利名称：一种原人参二醇衍生物的抗肿瘤用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种原人参二醇衍生物25hdt，更具体地，是关 于原人参二醇衍生物25hdt在制备治疗癌症的药物方面的应用。
背景玟术
癌症是残害人类生命的世界第二大疾病，死亡率仅次于心脑血管疾病，是人类死亡的 最主要因素之一。在全世界60亿人口中，目前约有各类癌症患者3500万。在全世界范围 内，癌症每年造成的死亡人数约为630万人；另据国际权威调査机构统计，到2020年癌 症死亡人数将翻一番，达到1000万人以上。
近年来，工业大生产导致人类生存环境不断恶化，化学、病毒、物理辐射等各种致癌 因素逐渐增多，我国的癌症发病率也逐年上升。据国家卫生部卫生统计信息中心报道，1999 年全国城市恶性肿瘤患病率男性为169.58人/万人、女性为110.05人/万人、大城市中患 病率为148.90人/万人、中小城市为110.70人/万人。按我国13亿人口计算，每年恶性肿 瘤的新发病例达200万人。
目前，治疗癌症的常用方法有手术治疗、放疗、化疗和生物治疗等。经过50、 60年 代主要依靠外科治疗及放射治疗的进步提高癌症病人相对存活率，到现在已有40多年， 外科手术及放射治疗的进步也已近顶峰，很难再期待有更大的突破，而化疗能成功地治愈 或明显延长病人的生命，在癌症的治疗中占有越来越主要的地位；然而，化疗基本上着眼 于直接杀伤肿瘤细胞，这一治疗模式往往存在以下问题对增长缓慢的实体瘤效果差或几 乎无影响；药物选择性很小，毒副反应多且严重。肿瘤的生物治疗主要通过肿瘤宿主防御 机制或生物制剂的作用以调节机体自身的生物学反应，从而抑制或消除肿瘤。虽然没有太 大毒副作用，但由于技术要求严、工艺复杂、价格高，众多癌症患者及家属难以承受，影 响其在癌症治疗领域的普及。
鉴于上述原因，人们开始把目光转向天然抗肿瘤药物的研发上。无论是抑制或杀伤肿 瘤细胞、调整机体免疫功能、减轻放化疗毒副作用，还是肿瘤的病后调理，天然抗癌药物 都具有重要作用，天然植物新疗法将成为继手术、放疗、化疗、生物疗法之后的肿瘤第五 大治疗方法。
现有研究表明，人参皂苷具有明显的抗肿瘤和免疫调节、改善微循环、提高生命质量 等多种生物活性。但是，由于天然人参皂苷较难吸收，而由天然皂苷转化而来的低极性皂 苷、苷元或二者的衍生物是天然人参皂苷发挥其药效的原型。因此，有关低极性皂苷、苷 元或二者的衍生物的制备与抗肿瘤活性的研究非常活跃。迄今，已发现多种低极性皂苷、 苷元或二者的衍生物具有抗肿瘤活性，且基本无毒副作用，这些低极性皂苷、苷元或它们
的衍生物包括人参皂苷-Rg3、人参皂苷-Rh2、人参皂苷C-K、人参皂苷Mc、原人参路 二醇(PPD)以及3|3，12卩-二羟—20(22)， 24(25), 二烯达玛垸[dammar-3p， 12p-dihydroxyl-20 (22)， 24(25)-diene〗和3(3, 6a， 12卩-三羟-20(22), 24(25)-二烯达玛烷[dammar-3p,6a,12p-trihydroxyl-20(22)， 24(25)-diene]等。现已上市的抗肿瘤药物有参一胶囊(主要成分是人参 皂苷-Rg3);正在用于临床实验研究的抗肿瘤药物有人参皂苷-Rh2和人参皂苷-C-K。
原人参二醇衍生物25hdt，即20(R)-25-羟基-达玛垸型-3p, 12p, 20-三醇，其结构如以 下结构式I所示
I
该化合物也是PPD的一种衍生物，在赵余庆等的文献(赵余庆等，Acta.Pharmaceutica. Sinica., 25(4): 297-301, 1990)中已有报道，但目前对25hdt的研究较少，尚未见到有关该化 合物可用于相关肿瘤治疗的报道。

发明内容
发明人在抗肿瘤细胞的研究中，发现原人参二醇衍生物25hdt具有抗人癌细胞的活性。 随后，发明人通过对25hdt在体内外的抗肿瘤的研究，评价了25hdt在体内外的抗肿瘤效 果。
研究发现，25hdt对体外培养的人癌细胞的抑制作用优于PPD、人参皂苷-Rg3 、 Rh2 和25^0H-PPT,且25hdt对肿瘤细胞具有特异性的抑制生长、诱导凋亡、抑制增殖等作用。 同时，在进行体内实验时，没有引起实验鼠体重的明显变化，也没有观察到任何毒性反应。
因此，本发明的第一个目的，就在于提供一种原人参二醇衍生物25hdt，即20(R)-25-羟基-达玛垸型-3p， 12P,20-三醇，用于制备抗癌症药物的应用。
在本发明的一个优选的实施例中，25hdt对人体外前列腺肿瘤细胞的抑制效果，优于 PPD和人参皂苷-Rh2对人体外前列腺肿瘤细胞系的抑制效果，明显优于人参皂苷-Rg3和 25^0H-PPT对人体外前列腺肿瘤细胞系的抑制效果。
在本发明的另一个优选的实施例中，25hdt对人体外神经胶质瘤细胞的抑制效果，优 于PPD和人参皂苷-Rh2对人体外神经胶质瘤细胞系的抑制效果，明显优于人参皂苷-Rg3 和25"OH-PPT对人体外神经胶质瘤细胞系的抑制效果。
在本发明的另一个优选的实施例中，25hdt对人体外胰腺癌细胞的抑制效果，优于PPD 和人参皂苷-Rh2对人体外胰腺癌细胞系的抑制效果，明显优于人参皂苷-Rg3和 25~OH-PPT对人体外胰腺癌细胞系的抑制效果。
在本发明的另一个优选的实施例中，25hdt对人体外肺癌细胞的抑制效果，优于PPD 和人参皂苷-Rh2对人体外肺癌细胞系的抑制效果，明显优于人参皂苷-Rg3和25-OH-PPT 对人体外肺癌细胞系的抑制效果。
在本发明的另一个优选的实施例中，25hdt对人体外乳腺癌细胞的抑制效果，优于PPD 和人参皂苷-Rh2对人体外乳腺癌细胞系的抑制效果，明显优于人参皂苷-Rg3和 25-OH-PPT对人体外乳腺癌细胞系的抑制效果。
在本发明的另一个优选的实施例中，25hdt对人体前列腺肿瘤细胞具有诱导凋亡作用。
在本发明的另一个优选的实施例中，25hdt对人体前列腺肿瘤细胞具有抑制增殖作用。
在本发明的另一个优选的实施例中，25hdt对人体前列腺肿瘤细胞具有抑制生长作用。
在本发明的另一个优选的实施例中，25hdt对人体前列腺肿瘤细胞基因表达具有调控 作用。
在本发明的另一个特别优选的实施例中，25hdt对人体前列腺肿瘤细胞具有特异性抑 制生长作用。
在本发明的另一个优选的实施例中，在体内抑制前列腺肿瘤细胞生长同时，25hdt没 有导致实验动物体重明显的变化，也没有观察到有任何的毒性作用。
在本发明的另一个更优选的实施例中，25hdt与常规临床抗癌药吉西他滨和/或多西紫 杉醇联合使用，能够提高对前列腺癌的治疗效果。
在本发明的另一个更优选的实施例中，25hdt能够提高临床放射线治疗前列腺癌的治 疗效果。
因此，本发明的25hdt显然可用于制备癌症药物化合物或药物组合物，也可以用于制 备体外抗癌细胞药物。
本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，以25hdt为有效成分，其总有效剂量为 l-50mg/kg/d。
本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，25hdt可与任何法定药用配合剂和赋形剂制成各 种药用剂型的制剂。
本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，25hdt可与目前市场上的任何化疗药、生物制剂， 包括激素类、烷化剂类、铂类、抗代谢类、拓扑异构酶抑制剂类、抗微丝微管类、诱导分 化类、抗肿瘤生长类、提高机体免疫类及其他药物，制备成复方制剂。
本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，制剂剂型为口服、注射或局部用药剂型。
本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，口服剂型包括片剂、粉剂、悬浊液、乳浊液、胶 囊、颗粒剂、糖衣片、药丸、液体、糖浆和柠檬水剂等。
所述注射剂包括水剂、冻干粉针、静脉乳剂、多相质脂体制剂、静脉微乳剂、悬浊液
等；
本发明所提供的新型抗肿瘤制剂中，局部用药剂型包括软膏、固体、悬浊液、水剂、 粉剂、糊剂、栓剂、气溶胶、泥敷剂、涂抹剂、灌肠剂和乳剂等。


图1是5种人参皂苷化合物25hdt、 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3对人肺癌细胞的 细胞毒性的影响。
图2是5种人参皂苷化合物25hdt、 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3对肺癌细胞凋亡 活性的影响。
图3是5种人参皂苷化合物25hdt、 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3对肺癌细胞抑制 增殖活性的影响。
图4是5种人参皂苷化合物25hdt、 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3对肺癌细胞的细 胞周期分布的影响。
图5是25-OH-PPT和25hdt对人前列腺癌细胞(A) LNCaP和(B) PC3以及对人原 代成纤维细胞(C) IMR90-EEA和(D) IMR90-E1A的细胞毒性的影响。 图6是25-OH-PPT和25hdt对前列腺癌细胞凋亡活性的影响。 图7是25-OH-PPT和25hdt对前列腺癌细胞增殖的影响。 图8是25-OH-PPT和25hdt对前列腺癌细胞周期分布的影响。
图9是25-OH-PPT和25hdt对前列腺癌细胞基因表达的影响。 图10是25hdt单独使用或与多西紫杉醇、吉西他滨、放疗联合使用对前列腺异体移 植瘤活性及体重的影响。
具体实施例方式
本发明分别在体外癌细胞系和癌症模型动物体内进行了抗癌细胞实验。实验结果显 示，25hdt对体内外癌细胞的抑制作用均优于PPD、人参皂苷-Rg3和Rh2。另外，25hdt 对人癌细胞具有特异性抑制作用，且无毒副作用。25hdt与常规临床抗癌药联合使用，能 提高对前列腺癌的治疗效果，还能提高临床放射线治疗的疗效。
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解为，以下实施例仅用于说明本 发明，而非用于限定本发明的范围。
本申请的发明人采用赵余庆等人(赵余庆等，Acta. Pharmaceutica. Sinica., 25(4)， 297-301,1990)的文献中所述的提取工艺，首先制备人参果总皂苷初提液，然后经氯仿萃 取、反向HPLC纯化获得了 25hdt,通过电子电离质谱(EI-MS)，红外光谱(IR)， &核 磁共振谱('H-NMR)和13(3核磁共振谱(l3C-NMR)等方法鉴定，确定所获得的物质为 25hdt纯品。以下实施例中所使用的25hdt，为发明人纯化制备获得的纯品。
以下实施例中所用的各细胞系，均购自美国模式培养物收集中心(ATCC， Rockville， MD, USA)。
实施例1、 25hdt对体外癌细胞的特异性生长抑制
1.1、人参皂苷化合物25hdt， 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3抑制人癌细胞体外生长 实验研究
在本实施例中，以人参皂苷化合物25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3为参照，考察了 25hdt对人癌细胞体外生长的抑制作用。
分别配制浓度依次为O、 1^M、 IOhM、 25pM、 100pM、 250pM和500一的25hdt, 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3。
采用配制好的以上溶液，针对人神经胶质瘤细胞系A172 (p53野生/突变型杂合子， p53wt/mt)和T98G (p53突变型，p53mt)、人胰腺癌细胞系HPAC (p53野生型，p53wt) 和Panc-l (p53mt)、人肺癌细胞系A549 (p53wt)、 H1299 (p53缺失型，p53 null)、 H358 (p53 wt)和H838 (p53 null)、人乳腺癌细胞系MCF7(p53 wt)和MDA-MB-468 (p53 mt)、 人前列腺癌细胞系LNCaP (p53wt)和PC3 (p53 null), 37°C,培养72h。具体培养方式 如下
将上述细胞分别接种96孔细胞培养板，每孔细胞浓度为4-5xl03， 37°C，培养72h。 再采用甲基偶氮唑盐(MTT)比色法，测定各细胞系半数细胞生长抑制浓度(IC50)。 具体测定方法为
每孔分别加入10pL的MTT溶液，37'C培养2-4小时后，去上清，用lOO^L DMSO 溶解剩余的甲臜结晶，读取570nm处的吸光值，计算细胞存活率和IC50。结果如表1所示。
表l、 25hdt、 25~OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3对人癌细胞生长的影响
ic50
癌症类型细胞系25hdt25-OH-PPTPPDRh2Rg3
神经胶质瘤A17249.4>50077.656.0303.0
T98G27.5125.972.871.8397.0
胰腺癌HPAC22.5>50063.966.4>500
Panc-l21.2>50030.241.3l肌3
肺癌A54922.5>50027.233.9369.1
H129911.6>50020.320.4357.2
H35822.9>50050.465.8470.0
H83825.9>50077.464.4293.0
乳腺癌MCF759.8〉50068.441.5361.2
MDA德-46868.7>50069.043.0153.1
前列腺癌LNCaP35.7>50044.846.7302.1
PC359.8>50029.329.3266.5
由表1的结果可见，25hdt对于人神经胶质瘤细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、乳腺癌 细胞和前列腺癌细胞，大多数细胞系的IC50值在10-60 pM的范围，具有明显的抑制生 长作用。对于人神经胶质瘤细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞的抑制效果，25hdt明显优于PPD 和Rh2，对于乳腺癌细胞和前列腺癌细胞的抑制效果与PPD和Rh2相当；对于人神经胶 质瘤细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞和前列腺癌细胞的抑制效果，25hdt明显 优于Rg3和25- 0H-PPT。
1.2、 25hdt与25~OH-PPT对正常人成纤维细胞系IMR90-EEA和IMR9(WE1A细胞的
体外毒性实验
在本实施例中，以25-OH-PPT为对照，考察了 25hdt对正常人成纤维细胞系
IMR90"EEA和IMR90-E1A细胞的体外细胞毒性。
按实施例1.1的方法，分别用配制好的浓度依次为0、 lnM、 10pM、 25fiM、 10(HiM、 250^M和500pM的25hdt禾Q 25-OH—PPT处理正常人成纤维细胞系IMR90-EEA和 IMR90-E1A细胞72小时后，采用甲基偶氮唑盐比色法，测定正常人成纤维细胞 IMR卯-EEA和IMR90~E1A的生长状况，实验结果见图5C和图5D。
图5C和图5D的结果显示，25-OH-PPT对正常人成纤维细胞的存活率降低幅度的影 响与对前列腺癌细胞的存活率降低幅度的影响差异不大；而25hdt对正常人成纤维细胞的 存活率的影响则不如前列腺癌细胞敏感。因此，25hdt对人癌细胞具有特异性抑制作用。
实施例2、 25hdt在体外肺癌细胞系中的抗肺癌实验
在以下实施例中，用25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3为参照，考察了25hdt在体外肺 癌细胞系H838和H358中的抗肺癌效果。 2.1 、 25hdt在体外诱导人肺癌细胞凋亡
按照实施例l.l的方法，分别用配制好的浓度依次为0、 lnM、 l(HtM、 25jxM和50nM 的25hdt和其它4种人参皂苷化合物25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3处理人肺癌细胞系 H838和H358，待处理细胞48小时后，以Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(购自Biovision 公司)检测凋亡细胞发生率，采用与文献(Li M， Zhang Z， Hill D， Chen X， Wang H， Zhang R. Cancer Res.， 65: 8200-8208. 2005)相同的方法检测。根据早期和晚期凋亡的检测数据，相 对于未用药处理的正常细胞，计算凋亡指数AI (凋亡指数AI是指，随机计数一定量的细 胞中，凋亡形态的细胞所占的百分数)，并进行比较分析。结果如图2所示。
图2的结果显示，化合物25hdt、 PPD及Rh2均以剂量依存的方式诱导细胞凋亡。在 不同的浓度水平，25hdt均比其他化合物具更强的细胞凋亡诱导活性，而PPD和Rh2在 高浓度时有一定活性，Rg3的活性很小，25-OH-PPT无明显活性。
2.2、 25hdt在体外抑制细胞增殖
按照实施例1.1的方法，分别用配制好的浓度依次为0、 lnM、 10|iM、 25pM和50pM 的25hdt和其它4种人参皂苷化合物25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3处理人肺癌细胞系 H838和H358，待处理细胞24小时后，用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)核素掺入法(使用 BrdUrd cell proliferation assay kit试剂盒，购自Oncogene Science, La Jolla， CA)，测定细胞 增殖率，计算增殖指数PI (增殖指数PI是指，随机计数一定量的细胞中，Brdu阳性细胞 所占的百分数)，结果如图3所示。
图3的结果显示，25hdt对人肺癌细胞系H838和H358细胞均能以剂量依存的方式抑
制细胞增殖活性。
2.3、 25hdt在体外阻滞细胞在Gl期
按照实施例1.1的方法，分别用配制好的浓度依次为0、 lpM、 l(VM、 25pM和5(HiM 的25hdt和其它4种人参皂苷化合物25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3处理人肺癌细胞系 H838和H358，待处理细胞24小时后，使用流式细胞仪测定人肺癌细胞周期分布，结果 如图4所示。
图4的结果显示,25hdt对人肺癌细胞系H838和H358细胞均能以剂量依存的方式阻 滞细胞周期在Gl期，而且25hdt的阻滞细胞周期在Gl期的能力要比实验中所用的其它四 种人参皂苷化合物的能力更强。
因此，25hdt能将人肺癌细胞系H838和H358细胞阻滞在Gl期，从而抑制肿瘤细胞 的增殖。
综合本实施例和实施例1的体外实验结果可见，对于人肺癌细胞，25hdt具有抑制肺 癌细胞生长、诱导肺癌细胞凋亡、抑制肺癌细胞增殖和阻滞肺癌细胞于G1期的作用。
实施例3、 25hdt在体外前列腺癌细胞系的抗前列腺癌实验
在本实施例中，用25~OH-PPT做参照，考察了 25hdt在体外前列腺癌细胞系LNCaP 和PC3的抗前列腺癌的效果。
3.1、 25hdt在体外诱导人前列腺癌细胞凋亡
采用实施例1.1的方法，分别用配制好的浓度依次为0、 lpM、 10nM、 25nM和50pM 的25hdt和25-OH-PPT处理人前列腺癌细胞系LNCaP和PC3的细胞，待处理细胞48小 时后，以AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测凋亡细胞发生率，采用与文献(Li M, Zhang Z, Hill D， Chen X， Wang H, Zhang R. Cancer Res., 65: 8200-8208. 2005)相同的方法检测。根 据早期和晚期凋亡的检测数据，相对于未用药处理的正常细胞，计算凋亡指数AI，并进 行比较。结果如图6所示。
图6的结果显示，25hdt以剂量依存的方式诱导细胞凋亡，且在所有的测试浓度下， 25hdt均具较强的细胞凋亡诱导活性，而25-OH-PPT的细胞凋亡诱导活性则很低。因此， 25hdt对前列腺癌细胞具有诱导凋亡作用，即其对前列腺癌细胞具有杀伤作用。
3.2、 25hdt在体外抑制人前列腺癌细胞增殖
采用实施例l.l的方法，分别用配制好的浓度依次为0、 1hM、 10pM、 25pM和50nM
的25hdt和25-OH-PPT处理人前列腺癌细胞系LNCaP和PC3的细胞，待处理细胞24小 时后，采用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)核素掺入法，参照文献(Li M， Zhang Z， Hill D， Chen X， Wang H, Zhang R. Cancer Res.， 65: 8200-8208. 2005)中所述的方法，检测人前列腺癌细 胞增殖率，并计算增殖指数PI，结果如图7所示。
图7的结果显示，25hdt对细胞系LNCaP有剂量依存的抑制细胞增殖活性。在所测试 的浓度水平中，25hdt均显示出很强的抑制细胞增殖的活性，而25-OH-PPT对细胞增殖则 无明显影响。
3.3、 25hdt在体外阻滞人前列腺癌细胞在Gl期
采用实施例U的方法，分别用配制好的浓度依次为0、 lnM、 10pM、 25pM和50nM 的25hdt和25-0H-PPT处理人前列腺癌细胞系LNCaP和PC3，待处理细胞24小时后， 使用流式细胞仪测定人前列腺癌细胞周期分布，结果如图8所示。
图8的结果显示，在处理前列腺癌细胞系LNCaP细胞24小时后，25hdt均以剂量依 存的方式将前列腺癌细胞阻滞在Gl期。25hdt (在最高浓度25|nM)对细胞系LNCaP具更 强的活性；而25"OH-PPT (在最高浓度50nM)对细胞周期分布无明显影响。
3.4、 25hdt调控人前列腺癌细胞基因表达
采用以上1.1的方法，分别用配制好的浓度依次为0、 1hM、 10pM、 25nM和50pM 的25hdt和25~OH-PPT处理人前列腺癌细胞系LNCaP和PC3的细胞24小时，然后用不 同的特异性抗体作免疫印迹来检测目标蛋白，结果如图9A和B所示。所检测的目标蛋白 包括与癌细胞的增殖密切相关的以下因子
原癌基因蛋白MDM2、 Bcl2;
抑癌基因蛋白p53、 p21、 p27、 BAX;
转录因子E2F1、 cleaved PARP;
细胞周期调控因子cdk2、 cdk4、 cdk6和cyclin Dl 。
图9A和B的结果显示，在LNCaP细胞中，25hdt导致p21WAF/CIP和p27KIPl及 Bax的增加，同时降低了 MDM2、 Bcl2、 E2F1、 cdk2、 cdk4和cyclin Dl的表达水平。 25~OH-PPT在LNCaP细胞中可适度提高p21的表达、降低cdk2的表达。
综合本实施例和实施例1的体外实验结果，对于前列腺癌细胞，25hdt具有抑制前列 腺癌细胞生长、诱导前列腺癌细胞凋亡、抑制前列腺癌细胞增殖和阻滞前列腺癌细胞于 Gl期的作用，且25hdt还能调控人前列腺癌细胞基因表达。
实施例4、 25hdt在癌症模型动物体内的抗肿瘤实验
4.1、 25hdt单独抑制前列腺异体移植瘤的生长。
在本实施例中，在前列腺异体移植瘤模型鼠(Zhang Z， Li M， Wang H， Agrawal S， Zhang R.Proc Natl Acad Sci USA 100: 11636-11641.2003)体内，腹腔注射25hdt抑制前列腺癌生 长作用实验。本实验采取了以下给药方案
以5mg/kg体重/次，或10mg/kg体重/次的剂量给实验组老鼠腹腔注射25hdt (溶剂为 PEG400)，每周给药5次，连续给药4周；同时以相同的剂量给对照组老鼠腹腔注射生理 盐水，每周给药5次，连续给药4周。每天观察实验动物生存状态，并测量体重和肿瘤大 小，结果如图10B1、图10B2所示。
图10B1的结果显示，在给药4周后，以5mg/kg体重/次的剂量给药的小鼠，其肿瘤 大小只有对照组肿瘤大小的一半；而以10mg/kg体重/次的剂量给药的小鼠，其肿瘤大小 更是只有对照组肿瘤大小的16%。
图10B2的结果显示，这种给药方案没有引起小鼠体重的明显变化，也没有观察到任 何毒性反应。
根据图10B1和10B2的结果，腹腔注射25hdt在对前列腺癌取得良好的抑制作用的同 时，没有引起实验动物体重的明显变化，也没有观察到任何不良的毒性反应。
因此，根据上述结果，25hdt能在体内抑制前列腺癌细胞生长，有制备成抗前列腺癌 的药物的良好前景。
4.2、 25hdt与常规临床抗癌药联合使用，提高对前列腺癌的治疗效果 本实施例中，在前列腺异体移植瘤模型鼠体内，观察了25hdt分别和吉西他滨、多西
紫杉醇的联合使用的效果。其中，吉西他滨为雄激素依赖的治疗前列腺癌的一线药物。
实验鼠的处理方法以10mg/kg体重/天的剂量，对实验鼠采用腹腔注射方式注射 25hdt,每周注射5天，持续注射4周，并在第5、 12天对实验鼠腹腔注射多西紫杉醇(15 mg/kg)或吉西他滨(160mg/kg)。
同时，对实验对照鼠进行处理，具体处理方法为对照组鼠除注射药物为生理盐水外， 其余操作与实验组相同。
检测体重、肿瘤大小及其他常见毒性反应指标(如进食量、呼吸、心电图、血尿粪常 规等)，实验结果如图10C1、 IODI所示。
图10C1和10D1的结果显示，25hdt可提高临床抗癌药的疗效。多西紫杉醇单独使用
可抑制肿瘤生长69%，与25hdt联合使用肿瘤生长几乎完全抑制(> 98%)。同样，与给 予药物媒介物的小鼠相比，吉西他滨单独使用会抑制肿瘤生长80%，与25hdt联合使用时， 可导致肿瘤生长抑制达92%。接受化疗的实验动物出现暂时的体重降低，但之后又有所 恢复，并且没有观察到其它毒性反应。
根据本实验的结果可见，与常规临床抗癌药联合使用，25hdt能提高对前列腺癌的治 疗效果。
4.3、 25mdt提高临床放射线治疗的疗效
本实施例中，在前列腺异体移植瘤模型鼠体内，观察了25hdt对临床放射线治疗的影响。
实验鼠的处理方法以10mg/kg体重/天的剂量，对实验鼠采用腹腔注射方式注射 25hdt，每周注射5天，持续注射4周，并在第5、 12和19天以3Gy的放射量对实验鼠进 行放射治疗。对照组的模型鼠接受放疗，但是不注射25hdt。
检测体重、肿瘤大小及其他常见毒性反应指标(如进食量、呼吸、心电图、血尿粪常 规等)，结果如图10E1和10E2所示，
图10 El和10 E2的结果显示，单独放射线治疗可降低约40%的异体移植瘤的生长， 与25hdt联合使用使肿瘤生长抑制提高到75X。接受放疗的实验动物出现暂时的体重降低， 但之后又有所恢复，并且没有观察到其它毒性反应。
根据本实验的结果可见，25hdt可提高临床放射线治疗的疗效。
综上所述，25hdt具有优于PPD、人参皂苷-Rg3和Rh2的对人体外癌细胞系的抑制效 果，且25hdt对人癌细胞具有抑制调控、诱导凋亡、抑制增殖作用，此外，25hdt对人癌 细胞具有特异性抑制生长作用，在体内抑制前列腺肿瘤细胞生长实验时，25hdt没有导致 实验动物体重发生明显的变化，也没有观察到25hdt对实验动物有任何毒性作用。
因此，本发明的25hdt显然可制备为抗癌症，特别是神经胶质瘤、胰腺癌、肺癌、乳 腺癌和前列腺癌的药物化合物，或作为抗这些抗癌症的药物组合物的活性成分，或与其他 药用配合剂和/或赋形剂等制成各种药用制剂。
权利要求
1、具有结构式I的原人参二醇衍生物化合物25hdt，即20(R)-25-羟基-达玛烷型-3β，12β，20-三醇，用于制备治疗癌症的药物的应用。id="icf0001" file="A2006101473630002C1.gif" wi="52" he="44" top= "48" left = "79" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>
2、如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述癌症为前列腺癌。
3、如权利要求2所述的应用，其特征在于，用于制备抑制前列腺癌细胞生长的药物。
4、如权利要求2所述的应用，其特征在于，用于制备特异性抑制前列腺癌细胞生长的药物.
5、如权利要求2所述的应用，其特征在于，用于制备调控前列腺癌细胞的药物。
6、如权利要求2所述的应用，其特征在于，用于制备诱导前列腺癌细胞凋亡的药物。
7、如权利要求2所述的应用，其特征在于，用于制备抑制前列腺癌细胞增殖的药物。
8、如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述癌症为肺癌。
9、如权利要求8所述的应用，其特征在于,用于制备抑制肺癌细胞生长的药物。
10、如权利要求8所述的应用，其特征在于，用于制备特异性抑制肺癌细胞生长的药物。
11、 如权利要求8所述的应用，其特征在于，用于制备调控肺癌细胞的药物。
12、 如权利要求8所述的应用，其特征在于，用于制备诱导肺癌细胞凋亡的药物。
13、 如权利要求8所述的应用，其特征在于，用于制备抑制肺癌细胞增殖的药物。
14、 如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述癌症为神经胶质瘤。
15、 如权利要求14所述的应用，其特征在于，用于制备抑制神经胶质瘤细胞生长的 药物。
16、 如权利要求14所述的应用，其特征在于，用于制备特异性抑制神经胶质瘤细胞 的药物。
17、 如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述癌症为胰腺癌。
18、 如权利要求17所述的应用，其特征在于，用于制备抑制胰腺癌细胞生长的药物。
19、 如权利要求17所述的应用，其特征在于，用于制备特异性抑制胰腺癌细胞生长 的药物。
20、 如权利要求l所述的应用，其特征在于，所述癌症为乳腺癌。
21、 如权利要求20所述的应用，其特征在于，用于制备抑制乳腺癌细胞生长的药物。
22、 如权利要求20所述的应用，其特征在于，用于制备特异性抑制乳腺癌细胞生长 的药物。
23、 一种治疗癌症的药物，其特征在于，该药物以25hdt为有效成分。
24、 如权利要求23所述的治疗癌症的药物，其特征在于，所述癌症包括前列腺癌、 肺癌、神经胶质瘤、乳腺癌和胰腺癌。
25、 一种治疗癌症的药物组合物，其特征在于，该药物含有25hdt以及至少一种化疗 药物。
26、 如权利要求25所述的药物组合物，其特征在于，所述化疗药物包括吉西他滨和 多西紫杉醇。
27、 如权利要求25或26所述的治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述癌症包括-前列腺癌、肺癌、神经胶质瘤、乳腺癌和胰腺癌。
全文摘要
本发明公布了一种原人参二醇衍生物化合物25hdt，即20(R)-25-羟基-达玛烷型-3β，12β，20-三醇，在制备抗癌症药物。该化合物25hdt具有优于PPD、人参皂苷-Rg3和Rh2的对人体外肿瘤细胞系的抑制效果，同时，25hdt对人体肿瘤细胞具有抑制调控、诱导凋亡、抑制增殖作用，且25hdt对人肿瘤细胞具有特异性抑制生长作用，使用25hdt治疗癌症，没有导致实验动物体重明显的变化，也没有任何的毒性作用，和其他化疗方法或放疗方法同时配合治疗癌症，更能提高治疗效果。
文档编号A61K31/575GK101199534SQ20061014736
公开日2008年6月18日 申请日期2006年12月15日 优先权日2006年12月15日
发明者孙宝山, 张瑞稳, 伟 王, 慧 王, 赵余庆, 凌 韩 申请人:中国科学院上海生命科学研究院