专利名称：Bmp-2蛋白胶原水溶液及制法和在植骨材料中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种BMP-2蛋白胶原水溶液及制备方法及其在植骨材料中 的应用。
背景技术：
所说的BMP—2蛋白，是一种对骨生长和修复有明显生物活性的细胞 因子——骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Protein, BMP) ， BMP既 是多功能形态发生因子，同时又具有突出的诱骨成骨活性，具有巨大的基 础研究价值和广阔的临床应用前景。到目前为止，已发现二十种BMP，分 别命名为BMP-1， BMP-2，...。
BMP-2可从动物组织内提纯(p-BMP2),也可用基因工程构建重组细胞 表达合成(rhBMP-2)。如在1979年 Urist [UAnn Thorac Surg ， 1990;49(6):864-5]领导的小组率先从兔脱钙骨中成功地分离纯化了兔的 MP-2，于1982年从牛骨中提取出牛骨形态发生蛋白(bBMP)， 1987年Urist [Clin Orthop Relat Res.， 1987(214):295-304]建立了一套从人及牛骨中提取 BMP的标准步骤。目前，pBMP—2大多从牛、猪、羊、马、兔、鼠等动物 的正常骨中提取。天津中津药业股份有限公司生产的金世植骨灵®重组 合异种骨(RBX)中的成骨诱导因子就是从牛骨中提取，然后再同牛骨基 质复合而成，用于治疗骨折延迟连接、不连接和骨缺损治疗。
利用基因工程方法生产人BMP-2，不仅可保证大量生产，还可避免免 疫排斥反应，是极具发展前景和吸引力的方法。自1988年Wozney等以牛骨为来源的BMP—2基因,并在重组大肠杆菌中成功表达后，基因工程大量 生产人的BMP—2也就成为可能(WozneyJM， Rosen V， Celeste AJ， etal, Novel regulators of bone formation:molecular clones and activities, science, 1988;242(4885):1525 — 34)。目前，用于表达BMP-2基因的系统既有真核， 也有原核细胞，两种表达系统各有优缺点。
BMP—2蛋白，可以与植骨材料组合，用于骨生长和修复。但是，无论 是天然提取的BMP—2蛋白，还是原核基因表达的BMP-2蛋白，在一般缓 冲液中不能溶解，只能溶解在高浓度尿素或盐酸胍中。而尿素或盐酸胍不 可能在体内使用，这就给该药物的临床使用以及与植骨材料的复合带来极 大困难。这也是目前国内外研究BMP-2应用技术的难题之一，极大的限制 了 BMP—2蛋白在临床上的应用。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是公开一种BMP-2蛋白胶原水溶液，以克 服现有技术存在的上述缺陷。
本发明需要解决的另一个技术问题是公开所述BMP-2蛋白胶原水溶液 的制备方法。
本发明再一个需要解决的技术问题是公开BMP-2蛋白胶原水溶液在植 骨材料中的应用。
本发明所说的BMP-2蛋白胶原水溶液中
BMP-2蛋白的浓度为10mg 20mg/ml，胶原的重量浓度为0.5~5%，优 选1 3%，特别优选1%，以及包括使所说的BMP-2蛋白胶原水溶液的pH 为3—6的pH调节剂；
所说的BMP-2蛋白，选自从动物组织中提取的天然BMP-2或原核基因 表达的BMP-2蛋白；
术语"胶原"指的是从牛或猪的骨组织或筋腱中提取纯化的胶原蛋白，纯 度应达到电泳纯度。
所说的pH调节剂选自稀释的冰醋酸或盐酸中的一种，重量浓度为5 30%;
本发明的BMP-2蛋白胶原水溶液的制备方法包括如下步骤
按照上述的比例，将BMP-2干粉与胶原水溶液搅拌混合，加入pH调 节剂调节pH至3—6，获得所说的BMP-2蛋白胶原水溶液；胶原水溶液的 重量浓度为0.5~5%，优选1 3%，特别优选1%;
本发明所说的BMP-2蛋白胶原水溶液，可以与植骨材料复合，以组合 物的形式，对需要进行植骨治疗。
所说的BMP-2蛋白胶原水溶液与植骨材料复合形成的组合物中， BMP-2蛋白胶原水溶液与植骨材料的比例根据不同的植骨材料而定；
动物试验证明，所说的BMP-2蛋白胶原水溶液无毒性，与所说的植骨 材料复合后，可以采用常规的方法对患者进行治疗。
本发明很好的解决了 BMP-2的溶解问题，从而解决了与各种材料难以 复合难题。胶原是抗原性极低的蛋白，而且具有结合BMP-2，促进BMP-2 活性的作用，因此在体内与BMP-2复合使用不仅不会带来药物的副作用， 而且有利于BMP-2活性的发挥。
具体实施例方式
实施例1将BMP-2干粉与重量浓度为1%的胶原水溶液搅拌混合，加入重量浓 度为10%的盐酸调节pH至6，获得所说的BMP-2蛋白胶原水溶液； BMP-2蛋白胶原水溶液中
BMP-2蛋白的浓度为20mg/ml， BMP-2蛋白选自从动物组织中提取的 天然BMP-2。
实施例2
将BMP-2干粉与重量浓度为3%的胶原水溶液搅拌混合，加入重量浓 度为25%的冰醋酸调节pH至3，获得所说的BMP-2蛋白胶原水溶液； BMP-2蛋白胶原水溶液中 BMP-2蛋白的浓度为10mg/ml; BMP-2蛋白，选自从动物组织中提取的天然BMP-2。
权利要求
1. 一种BMP-2蛋白胶原水溶液，组分和浓度为BMP-2蛋白的浓度为10mg～20mg/ml，胶原的的重量浓度为0.5～5％。
2. 根据权利要求l所述的BMP-2蛋白胶原水溶液，其特征在于，所说 的BMP-2蛋白，选自从动物组织中提取的天然BMP-2或原核基因表达的 BMP-2蛋白。
3. 根据权利要求l所述的BMP-2蛋白胶原水溶液，其特征在于，胶原 的的重量浓度为1 3%。
4. 根据权利要求3所述的BMP-2蛋白胶原水溶液，其特征在于，胶原 的重量浓度为1%。
5. 根据权利要求l所述的BMP-2蛋白胶原水溶液，其特征在于，所说 的pH调节剂选自稀释的冰醋酸或盐酸中的一种。
6. 根据权利要求1所述的BMP-2蛋白胶原水溶液的制备方法，其特征 在于，包括如下步骤按照比例，将BMP-2干粉与胶原水溶液搅拌混合， 加入pH调节剂调节pH至3 — 6，获得所说的BMP-2蛋白胶原水溶液。
7. 权利要求1或2所述的BMP-2蛋白胶原水溶液在制备植骨材料中的 应用。
全文摘要
本发明公开了一种BMP-2蛋白胶原水溶液及制备方法及其在植骨材料中的应用。所说的BMP-2蛋白胶原水溶液中BMP-2蛋白的浓度为10mg～20mg/ml，胶原的重量浓度为0.5～5％，优选1～3％，特别优选1％和使所说的BMP-2蛋白胶原水溶液的pH为3-6的pH调节剂；本发明很好的解决了BMP-2的溶解问题，从而解决了与各种材料难以复合难题。胶原是抗原性极低的蛋白，而且具有结合BMP-2，促进BMP-2活性的作用，因此在体内与BMP-2复合使用不仅不会带来药物的副作用，而且有利于BMP-2活性的发挥。
文档编号A61L27/38GK101204593SQ200610147609
公开日2008年6月25日 申请日期2006年12月20日 优先权日2006年12月20日
发明者丁红梅, 刘农乐, 王会信, 绍宁生 申请人:上海海泰药业有限公司