专利名称：丹参丹酚酸a的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种丹参丹酚酸A的制备方法，丹酚酸A的结构如下 技术背景丹参是最常用的药材之一，用于治疗心绞痛、高血压、冠心病和中风等心脑血管疾病。但一般用的都是从丹参中提取的粗提物或直接用丹参饮片。近二十多年，丹参的主要活性成分丹酚酸类化合物陆续被发现。体外实验结果显示，丹酚酸类化合物除了用于治疗心脑血管疾病，还可治疗多种疾病，如肝病、肾病、消化溃疡、肿瘤等。丹参总酚酸中以丹酚酸B含量最高，因此，人们开发的重点集中于丹酚酸B，而含量较低而活性较强的丹酚酸A被人们忽略。
杜冠华等人对丹酚酸A的活性进行了大量研究，发现丹酚酸A对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用，对小鼠脑缺血再灌注引起的脑损伤有保护作用，对樟柳碱或东莨菪碱引起的小鼠记忆获得障碍具有明显的改善作用，对大鼠半乳糖性白内障形成有抑制作用，因此在心脑血管方向有良好的疗效。
中国专利CN1397276A，2003年公开了水或醇提、树脂层析，再经硅胶柱层析的纯化制备丹酚酸A的方法。中国专利CN1513848A，2004年公开了采用水温浸、离心、超滤、调酸、有机溶剂萃取再经反相柱层析制备丹酚酸A的方法。
由于丹酚酸A在药材中含量低，甚至没有，因此丹酚酸A产率低，生产成本高，在工业大生产上有一定的局限性，实际上并不能从根本上解决丹酚酸A的工业生产问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，提供一种丹酚酸A的制备方法。
本发明丹参丹酚酸A的制备方法，其工艺步骤为1、提取在水或乙醇水溶液作为提取溶剂时，温浸温度为50～99℃，采用乙醇水溶液作为提取溶剂时浓度为10％～95％。提取的方法可以采用回流法、温浸法。现以乙醇回流提取的方法为例进行说明。
丹参粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过。
合并提取液，采用过滤，自然沉淀或离心的方法，初步除去提取液中固体杂质。
2、柱层析纯化丹酚酸A(1)采用特选填料制备色谱柱；(2)色谱柱活化；(3)溶液经色谱柱吸附，用水、稀醇水溶液或丙酮-水溶液洗脱，除去杂质；(4)用适当浓度的醇水溶液或丙酮-水溶液或乙腈-水溶液洗脱，减压或常压浓缩至洗脱液无有机溶剂在上述步骤(1)中，特选填料是大孔树脂类、离子交换树脂、MCI-GELCHP-20P、Sephadex LH-20凝胶、或C18、C8键合相等色谱柱填料，推荐方案为用非极性或弱极性的大孔树脂做色谱柱填料，优选为聚苯乙烯骨架大孔树脂。
上述步骤(2)中色谱柱活化的方法可用丙酮、甲醇、乙腈或其他有机溶剂与水的混合物，也可用碱-水溶液，或碱醇溶液活化。
上述步骤(3)中，洗脱用水可含微量的酸或无机盐。
上述步骤(3)中，可以单用水洗脱杂质或单用稀醇水溶液或低浓度的丙酮-水溶剂洗脱杂质，也可先用水洗脱然后再用稀醇水溶液或低浓度的丙酮-水溶液洗脱杂质。
上述步骤(3)中，稀醇水溶液等溶剂可以为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，也可采用乙腈的水溶液，或它们的混合物。
上述步骤(3)中，稀醇水溶液等溶剂的浓度一般在40％以下，最好用20-30％的浓度，低浓度的丙酮-水溶液常用的丙酮含量一般在50％以下，最好为10-30％的浓度。
上述步骤(4)中，适当浓度的丙酮-水、醇水溶液或乙腈-水溶液中，有机相所占比例一般大于20％，最好用35％～60％的浓度。所述醇水溶液等溶剂可以为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇的水溶液，或它们的混合物。
3、调PH值有机溶剂萃取将如上溶液用酸或碱调PH值至2～7，经有机溶剂萃取，然后分离有机溶剂得含高含量丹酚酸A溶液。优选PH值范围为3～5。有机溶剂优选为乙酸酯类，可以是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等乙酸酯类溶剂，或它们的混合物。
4、干燥萃取液的干燥可采用一步法，也可采用两步法。两步法为先在常压或减压条件下浓缩，然后采用真空干燥或冷冻干燥等方法干燥。一步法采用减压浓缩干燥得到丹酚酸A成品。
本发明丹参丹酚酸A的制备方法，用水或醇提取，主要是把丹参酚酸类化合物提取完全，是丹酚酸A产率提高的基础。柱层析时由于在洗脱去杂质的过程采用水和低浓度醇溶剂，使提取液中的杂质得到进一步除去。在丹酚酸A的洗脱过程中，由于采用适当浓度的有机溶剂-水溶液，使丹酚酸A与其它成分得到较好分离；经过柱层析后，还有少量杂质存在，经过调节PH值有机溶剂萃取，最终制得了纯度较高的丹酚酸A。最终提取物得量达3‰以上，丹酚酸A含量达到90％以上，且质量稳定、工艺成熟、可以大规模生产。与其它丹酚酸A的制备方法相比，产率大大提高，成本降低。对于提高丹参疗效，充分利用中药材资源等具有很重要的意义。
具体实施例下面结合具体实施例，对本发明及一步详细说明实施例一丹酚酸A的制备方法，其工艺步骤为1、水提取(温浸法)丹参粗粉，加8倍量水80℃温浸3次，每次1.0小时，滤过。
2、柱层析纯化丹酚酸A合并滤液离心(4000转/分钟)10分钟，取上清液过1400大孔吸附树脂柱，先用水洗至糖检测反应为阴性，改用20％乙醇洗脱至FeCl3反应为阴性。
3、再用40％乙醇洗脱至FeCl3反应为阴性，收集洗脱液，60℃减压浓缩至无醇味。
4、调PH值，有机溶剂萃取加盐酸调节PH值至3～5，用药液1.5倍量体积的乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯相。
5、浓缩干燥减压浓缩萃取液至浸膏状，60℃真空干燥6小时，得淡黄色粉末，即为丹参丹酚酸A。
实施例二与实施例一基本相同，所不同的是提取过程为60％乙醇水溶液回流提取。具体方法如下丹参粗粉，加10倍量60％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过。
实施例三与实施例一基本相同，所不同的是提取液离心后采用过滤初步除去固体杂质。
实施例四与实施例一基本相同，所不同的是实施例一中的工艺步骤2中，直接用10％乙醇水溶液洗脱，除去杂质。
实施例五与实施例一基本相同，所不同的是实施例一中的工艺步骤3中，用80％乙醇水溶液洗脱丹酚酸A。
实施例六与实施例一基本相同，所不同的是浓缩洗脱液时采用常压浓缩。
实施例七与实施例一基本相同，所不同的是调PH值有机溶剂萃取时调PH值至2～3。
实施例八与实施例一基本相同，所不同的是调PH值有机溶剂萃取时采用的有机溶剂为乙酸丁酯。
实施例九与实施例一基本相同，所不同的是浓缩干燥采用一步法直接减压浓缩干燥得到丹酚酸A成品。
实施例十与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是甲醇水溶液。
实施例十一与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是丙酮-水溶液。
实施例十二与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的是乙腈水溶液。
实施例十三与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的MCI-GEL CHP-20P作色谱柱填料。
实施例十四与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用C18键合相作色谱柱填料。
实施例十五与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的C8键合相作色谱柱填料。
实施例十六与实施例一基本相同，所不同的是在柱层析分离、纯化丹酚酸A的洗脱过程中，采用的Sephadex LH-20作色谱柱填料。
本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例(具体试验结果见下页附表1)所表达的技术方案的具体组合。
附表1
使用仪器类型高效液相色谱仪梯度方法恒流检测器紫外检测器 仪器型号Agilent 1100检测波长285nm柱型号Kromasil KR100-7C18柱(250×4.6mm)积分方法面积归一法图1实施例四产品高效液相含量测定2实施例六产品高效液相含量测定3实施例八产品高效液相含量测定4实施例十六产品高效液相含量测定图
权利要求
1.一种丹参丹酚酸A的制备方法，其工艺步骤为步骤一、提取提取为将丹参饮片或粉碎的丹参采用水或浓度10-95％的乙醇作为提取溶剂，采用温浸、回流法提取，采用过滤、自然沉淀或离心方法初步除去固体杂质。步骤二、柱层析纯化丹酚酸A(1)采用填料制备色谱柱；(2)色谱柱活化；(3)溶液经色谱柱吸附，用水、40％以下浓度的稀醇水溶液或50％以下浓度的丙酮水溶液洗脱，除去杂质。(4)再用有机相占比例大于20％的醇水溶液或丙酮-水溶液或乙腈-水溶液洗脱，减压或常压浓缩至洗脱液无有机溶剂。步骤三、调PH值有机溶剂萃取将如上溶液用酸或碱调PH值至2～7，经有机溶剂萃取，然后分离有机溶剂得高含量丹酚酸A溶液。步骤四、浓缩干燥。浓缩采用减压浓缩或常压浓缩，干燥采用真空干燥或冷冻干燥。
2.权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，其特征是水或乙醇水溶液作为提取溶剂时，温浸温度为50～99℃。
3.权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二柱层析纯化丹酚酸A(1)采用填料制各色谱柱，所采用的用于制备色谱柱的填料是大孔树脂类、离子交换树脂、MCI-GEL CHP-20P、Sephadex LH-20凝胶、或C18、C8键合相色谱柱填料。
4.权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二柱层析纯化丹酚酸A(1)采用填料制备色谱柱，采用的填料为非极性或弱极性的大孔树脂。
5.权利要求3或权利要求4所述的丹参丹酚酸A的制备方法，所选用的是聚苯乙烯骨架的大孔树脂。
6.权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤三调PH值有机溶剂萃取中，PH值范围为3～5，有机溶剂为乙酸酯类。
7.权利要求6所述的丹参丹酚酸A的制备方法，乙酸酯类是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯或它们的混合物。
8.权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二中所述的稀醇水溶液或醇水溶液指的是甲醇、乙醇、丙醇、丁醇的水溶液，或它们的混合物。
9.权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二(3)中的稀醇水溶液和丙酮水溶液是稀醇水溶液20-30％的浓度；丙酮水溶液10-30％的浓度。
10.权利要求1所述的丹参丹酚酸A的制备方法，步骤二(4)中的丙酮-水、醇水溶液或乙腈-水溶液中，有机相浓度为35～60％。
全文摘要
本发明公开了一种丹参丹酚酸A的制备方法。将丹参药材用水或醇提取。初步除去固体杂质，柱色谱纯化丹酚酸A，浓缩洗脱液，再经调pH值有机溶剂萃取，浓缩干燥，即得丹酚酸A。用本发明方法制备丹酚酸A提取率高，纯度好，提取物中丹酚酸A含量可达90％以上，且质量稳定，可大规模生产。
文档编号A61K36/185GK101041620SQ200610165779
公开日2007年9月26日 申请日期2006年12月18日 优先权日2006年7月13日
发明者黎豫杭, 柴建国, 张善飞, 潘迎锋, 张建兵 申请人:正大青春宝药业有限公司