专利名称：一种用于防治畜禽病毒性传染病的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药物，尤其涉及一种用于防治畜禽病毒性传染病的药物，属生物技术领域。
背景技术：
畜禽病毒性传染病是养殖业的最大威胁，给养殖业造成严重的经济损失。对畜禽病毒性传染病的防治传统上有以下几种方式1、免疫接种疫苗许多动物病毒性传染病是通过疫苗接种而得到很好的防制，但仍存在一些严重问题①弱毒疫苗存在潜在安全隐患；②灭活疫苗虽然安全，但免疫效力尤其细胞免疫作用具有局限性；③基因工程亚单位疫苗虽具有应作潜力，但其免疫效果特别是细胞免疫不足；④在肉鸡生产中，注射油乳佐剂灭活苗会造成机体残留，严重影响肉的品质。⑤疾病血清型趋于复杂、毒株变异快，常常导致疫苗免疫失败；⑥新的病毒不断产生，目前还尚无成功的疫苗可用于预防接种，一时难以控制。2、抗病毒药物目前在市场上存在许多抗病毒药物，如病毒唑、金刚烷胺、利巴伟林等，具有一定的抗病毒效果。其对机体细胞有一定毒性，不可长期使用，长期使用又会导致出现耐药性，影响了抗病毒药物的临床使用效果。3、抗病毒中草药抗病毒中草药在畜禽病毒性传染病的治疗和预防上发挥了有效的作用，许多养殖户在动物饲料中或饮水中添加大量抗病毒药物以预防传染病，但抗病毒中草药在饲料和饮水中的使用，导致其机体中有中草药异味残留，而严重影响我国肉产品的出口。另外中草药的抗病毒有效成份及其机理尚未研究清楚，是中草药在畜禽病毒性传染病预防和治疗上的使用未被多数国家认可的技术障碍。
发明内容
本发明在于提供一种用于防治畜禽病毒性传染病的药物，以有效预防和治疗动物病毒性传染病。
为了达到上述目的，本发明的技术方案在于采用了一种用于防治畜禽病毒性传染病的药物，该药物含有干扰素和特异性抗体及有效成分提取物。
所述的干扰素和抗体的用量比为100-0.1万单位1μg。
所述的干扰素为同种属干扰素。
所述的同种属干扰素可以为α干扰素、β干扰素和γ干扰素中的任意一种或其任意组合。
所述的特异性抗体可以为血清抗体、母乳抗体、卵黄抗体、基因工程抗体及免疫球蛋白中的任意一种。
所述的有效成分提取物由板蓝根、大青叶、金银花、淡竹叶、连翘、黄苓中的一种或其任意组合制备而成。
所述的药物可以为任意一种剂型。
本发明的药物中的该药物包含有动物干扰素和特异性抗体，其中干扰素是动物细胞受到适宜的刺激时产生的一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。病毒、细菌及其内、外毒素以及人工合成的物质如聚肌苷酸、聚胞苷酸等均能诱导干扰素的产生。但一般情况下动物体内干扰素基因常处于封闭状态，只有在病毒等因素诱导下才表达，并且表达量极微。所以，在考虑使用干扰素防治畜禽传染病时，只有给予大量外源性干扰素才能达到防治效果。我们已成功表达了猪、鸡、牛、犬、羊等系列动物的干扰素，经体外实验证明具有较强的抗病毒生物活性和免疫调节活性。干扰素的抗病毒作用是通过与靶细胞受体结合，使细胞抗病毒蛋白基因去抑制而被激活，转录合成特定的mRNA，产生抗病毒蛋白(AVP)而间接发挥抗病毒作用；因此干扰素的抗病毒作用仅限于细胞内的病毒复制，而对于存在于体液中，干扰素不起作用。如果单独使用干扰素治疗病毒病，须长期(不少于三天)大剂量使用才有效果，而干扰素的长时间大剂量使用易产生副作用，甚至诱导机体产生抗干扰素抗体，影响随后的使用效果。抗体是机体受到病毒、细菌、毒素等抗原刺激后产生的针对该抗原的免疫球蛋白。抗体具有中和病毒的作用，又称为中和抗体，包括IgG、IgM、IgA等。抗体与病毒表面抗原结合后，使病毒失去与细胞表面受体结合的能力，同时形成复合体后，介导免疫吞噬细胞的吞噬作用和激活补体。抗体中和病毒的机制包括两个方面，一是使病毒不能吸附在细胞上，其作用过程是病毒表面由许多重复的亚单位组成，当抗体与病毒覆盖后，形成病毒抗体复合物，由于构型的改变，使其不能吸附在细胞上；二是增强对病毒的分解，由于被抗体处理过的病毒，降低了其对细胞的吸附能力，从而延长了其在细胞外的停留时间，最终必须被吞噬细胞吞噬，在吞噬细胞内通过溶酶体将病毒抗体复合物分解，同时激活补体系统清除病原体。中和抗体不能进入细胞内消灭病毒，而只能存在于细胞外体液中，一旦有病毒从细胞内脱出，中和抗体与病毒表面结合，使其失去与细胞结合的能力，在中和抗体的介导下，由细胞毒淋巴细胞或吞噬细胞清除。中和抗体主要是防止病毒传入和扩散蔓延的作用。抗体在临床上治疗病毒病已有许多成功的报道，如用鸡的粗制卵黄抗体治疗鸡的传染性法氏囊病。但是单独使用抗体，在许多病毒性传染病的防治上无效果，甚至会导致病情的进一步恶化，如猪的繁殖呼吸综合症，猪的圆环病毒病，鸡的新城疫等。本发明所述的特异性抗体是通过用相对应的病毒制成灭活疫苗连续免疫同种属动物，检测抗体达到要求时，无菌采血分离血清抗体，经纯化浓缩精制后制成。禽类则又可采用卵黄抗体。同种属干扰素和特异性抗体联合使用，在细胞内抑制病毒复制和在细胞外中和病毒，使病毒丧失与细胞结合的能力并通过形成病毒抗体复合体而介导被免疫细胞吞噬，从二方面达到快速抑制和清除机体内的病毒，克服单独使用干扰素或者特异性抗体所存在的问题。该发明所提供的药物防治畜禽病毒性传染病，具有显著的进步，一是具有抗病毒作用广谱，疗效快，用药量少，成本低，减少因注射而多次抓捕动物造成的应激反应等。另一更显著的进步是该发明提供的药物可以通过胎盘屏障进入胚胎，抑制胎儿体内的病毒复制。因此可用于怀孕母畜，预防和治疗因病毒感染而造成的流产、死胎及繁殖障碍，这一点是本发明显著的进步，克服了其他抗病毒药物因不能通过胎盘屏障保护胚胎的缺陷。
本发明的药物，可以制成液体和粉剂，液体的辅助成分还包括EDTA、巯基乙醇、tris-HCL、MgCL2、KCL和10％-50％的甘油，并调节PH值为7.0-7.4。在-18℃以下低温条件下保存，并在0-4℃条件下运输。粉剂的辅助成分还包括脱脂奶粉、葡萄糖、蔗糖、淀粉、聚乳糖、聚乙二醇、羧甲基纤维素。根据方便临床使用可制成不同的浓度，本发明的药物可以采取注射、饮水、拌料、滴口、滴鼻、点眼等用药方式。
本发明提供的药物可以含有抗病毒中草药提取液。涉及到的中草药提取液的使用剂量根据动物的体重和品种以及中草药提取液的浓度在具体配制上可有适当的使用范围。
本发明的药物，可含同种属畜禽白细胞介素2，白细胞介素2具有免疫增强作用及促进淋巴细胞增殖活性，可促进NK细胞、K细胞、LAK细胞及CTL细胞的杀细胞活性。将已表达成功的猪、鸡、牛的白细胞介素2重组蛋白以活性单位与干扰素的活性单位的比例，在1∶1-1000的范围，临床上治疗病毒性疾病，显示出明显的治疗效果。
干扰素的用量在1,000μ-100,000μ每公斤体重，抗体用量应根据畜禽品种以中和病毒的有效剂量，大约不低于0.1μg/kg的剂量施用的。动物干扰素是同种属动物干扰素，既包括天然干扰素又包括基因工程干扰素。特异性抗体包括血清抗体、母乳抗体、卵黄抗体和基因工程抗体，经纯化浓缩后，按照优化比例与同种属干扰素充分混合。
具体实施例方式
实施例1细胞抑制动物病毒实验用VSV分别在MDBK、PK、鸡成纤维细胞上对本发明所提供的药物进行检测。多次检测结果表明，本发明所提供的药物具有很高的抗病毒活性，比单纯干扰素组平均高100-1000倍。
用猪瘟病毒在PK细胞上培养，然后用猪瘟荧光抗体染色，荧光显微镜观察，结果表明本发明所提供的药物比单纯干扰素活性高100倍。
在96孔微量细胞板上用DMEM培养基培养PK细胞和Marc145细胞，待长成细胞单层后，用不同含量的本发明产品进行处理，然后吸弃，再分别接种1000个TCID50猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪流感病毒，结果表明本发明所提供的药物对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪流感病毒感染所引起的细胞病变具有强烈的抑制作用，而未经处理的细胞接种病毒后，均出现细胞变圆、脱落、崩解等细胞病变。
在96孔微量细胞板上用DMEM培养基培养鸡胚成纤维细胞(CEF)，待长成细胞单层后，用不同含量的本发明产品进行处理，然后吸弃，再分别接种1000个TCID50的鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病毒，结果表明本发明所提供的产品对鸡新城疫病毒和传染性法氏囊病毒所引起的细胞病变具有强烈的抑制作用，未处理细胞接种病毒后，均出现细胞病变。
实施例2临床实验用本发明的药物分别在临床上预防和治疗猪瘟、猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪圆环病毒病、猪口蹄疫、猪细小病毒病、猪乙型脑炎、猪伪狂犬病、猪流感。本发明所提供的药物的使用方法按每公斤体重0.01ml注射液用适量无菌生理盐水稀释后肌肉注射。每毫升注射液含100万单位的猪干扰素和100ug猪特异性血清抗体。一次注射，在疾病发作期注射二次。用于怀孕母猪可保护胎儿不受病毒感染。
预防和治疗鸡新城疫、法氏囊、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、脑脊髓炎、马立克、淋巴白血病、网状内皮细胞增生症、传染性贫血、病毒性关节炎、鸡痘、鸭的病毒性肝炎、鸭瘟。本发明所提供的药物的使用方法按每只成年鸡0.01ml注射液用适量无菌生理盐水稀释后肌肉注射或饮水。每毫升注射液含100万单位的鸡干扰素和100ug鸡特异性卵黄抗体。一次注射，在疾病发作期使用二次。
预防和治疗牛的口蹄疫、病毒性腹泻、水疱性口炎、传染性鼻气管炎，细小病毒感染、蓝舌病。按每公斤体重0.01ml注射液用适量无菌生理盐水稀释后肌肉注射。每毫升注射液含100万单位的牛干扰素和100μg牛特异性血清抗体。一次注射，在疾病发作期注射二次。用于怀孕母牛可保护胎儿不受病毒感染。
实施例3本发明所提供的药物根据方便临床使用可制成液态和粉剂。液体的辅助成分还包括EDTA、巯基乙醇、tris-HCL、MgCL2、KCL和10％-50％的甘油，并调节PH值为7.0-7.4。在-18℃以下低温条件下保存，并在0-4℃条件下运输。粉剂的辅助成分还包括脱脂奶粉、葡萄糖、蔗糖、淀粉、聚乳糖、聚乙二醇、羧甲基纤维素。
实施例4本发明提供的药物可以含有抗病毒中草药提取液。涉及到的中草药包括板蓝根、大青叶、金银花、淡竹叶、连翘、黄苓。中草药提取液的使用剂量根据动物的体重和品种以及中草药提取液的浓度在具体配制上可有适当的使用范围。在动物临床试验表明具有明显的治疗效果。
实施例5本发明提供的药物，可含同种属动物白细胞介素2。白细胞介素2具有免疫增强作用，具有促进淋巴细胞增殖活性，可促进NK细胞、K细胞、LAK细胞及CTL细胞的杀细胞活性。将已表达成功的猪、鸡、牛的白细胞介素2重组蛋白以活性单位与干扰素的活性单位的比例，在1∶1-1000的范围，临床上治疗病毒性疾病，显示出明显的治疗效果。经试验以1∶100的使用效果最好。
最后所应说明的是以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
权利要求
1.一种用于防治畜禽病毒性传染病的药物，其特征在于该药物含有干扰素和特异性抗体及有效成分提取物。
2.根据权利要求1所述的用于防治畜禽病毒性传染病的药物，其特征在于所述的干扰素和特异性抗体的用量比为100-0.1万单位1μg。
3.根据权利要求2所述的用于防治畜禽病毒性传染病的药物，其特征在于所述的干扰素为同种属干扰素。
4.根据权利要求3所述的用于防治畜禽病毒性传染病的药物，其特征在于所述的同种属干扰素可以为α干扰素、β干扰素和γ干扰素中的任意一种或其任意组合。
5.根据权利要求4所述的用于防治畜禽病毒性传染病的药物，其特征在于所述的特异性抗体可以为血清抗体、母乳抗体、卵黄抗体、基因工程抗体及免疫球蛋白中的任意一种。
6.根据权利要求1所述的用于防治畜禽病毒性传染病的药物，其特征在于所述的有效成分提取物由板蓝根、大青叶、金银花、淡竹叶、连翘、黄苓中的一种或其任意组合制备而成。
7.根据权利要求1-6中的任一条所述用于防治畜禽病毒性传染病的药物，其特征在于所述的药物可以为任意一种剂型。
全文摘要
本发明涉及一种用于防治畜禽病毒性传染病的药物，该药物含有干扰素和特异性抗体及有效成分提取物。本发明所提供的药物防治畜禽病毒性传染病，具有显著的进步，一是具有抗病毒作用广谱，疗效快，用药量少，成本低，减少因注射而多次抓捕动物造成的应激反应等。另一更显著的进步是该发明提供的药物可以通过胎盘屏障进入胚胎，抑制胎儿体内的病毒复制。因此可用于怀孕母畜，预防和治疗因病毒感染而造成的流产、死胎及繁殖障碍，这一点是本发明显著的进步，克服了其他抗病毒药物因不能通过胎盘屏障保护胚胎的缺陷。
文档编号A61P31/00GK101057971SQ200710006069
公开日2007年10月24日 申请日期2007年1月26日 优先权日2006年4月20日
发明者王彦彬, 崔保安, 康相涛, 许兰菊 申请人:河南农业大学