专利名称：知母提取物用于制备防治前列腺增生药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体是知母提取物在制备防治前列腺增生的药物或食品中的应用。
背景技术：
知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的根茎，具有滋阴降火，润燥滑肠的功效，临床多用于消渴症。目前知母药用时主要为单位知母饮片或与其他中药配伍煎汤后服用。
知母的化学成分主要为皂苷和黄酮类成分其中已报道的黄酮类成分主要有宝藿苷-I，淫羊藿苷-I，芒果苷、异芒果苷和新芒果苷(1.沈阳药科大学学报，1995，13(1)34；2.沈阳药学院学报，1993，10(2)141；自然杂质，2003，25(4)191；3.Naokata norita，Mineo Shimizu，et al.Studies on the medicalresources.Chimonin inAnemarthense Rhizoma[J].[日]药学杂质，1965，5(4)374)已报道的皂苷类成分有二十多种，例如知母皂苷BII，知母皂苷BIII，知母皂苷BIV，知母皂苷BV，知母皂苷BVI，西陵皂苷B，知母皂苷C，知母皂苷C1，知母皂苷C2，知母皂苷D，知母皂苷D1，知母皂苷D2，知母皂苷E1，知母皂苷E2，知母皂苷F，知母皂苷G，知母皂苷H1，知母皂苷H2，知母皂苷I1，知母皂苷I2，知母皂苷Ia，萨尔萨皂苷元，吗尔考皂苷元，新吉托皂苷元等。(1.药学学报，1992；27(1)26-32；2.药学学报，1996，31(4)271-277；3.沈阳药科大学学报，1996；13(1)34-40；4.药学学报，1997；32(6)473-475；5.中国药物化学杂志，1998；8(2)135-136，140；6.沈阳药科大学学报，1998；15(4)254-256；7.药学学报，1998；33(9)693-696；8.沈阳药科大学学报，1998；15(2)130-1319.中国药物化学杂志，1999；9(4)294-298；10.药学学报，1999；34(7)514-517；11.药学学报，1991；26(8)619-21；12.PlantaMedica，1991；5726-32；13.Chem Pharm Bull，1994；42(11)2342-5；14.Planta Med，1997；63(4)376-9；15.Planta Med，1999；65(7)661-3；16.天然产物研究与开发，2001；13(5)16-21)。
知母黄酮类成分的的药理作用已经有报道，主要有知母水提取物及其活性成分芒果苷及其糖苷具有抗糖尿病的作用。(国外医学中医中药分册，2002，24(6)353；中国发明专利ZL03115509.X)知母提取物具有抗菌作用。(植物病理学报，2006，36(3)267-272；中国发明专利ZL200410037779.0)前列腺增生症(BPH)是中老年男性常见病，资料显示，前列腺增生在40岁以前发病率很低，50岁以上占40％，80岁者近90％，90岁时几乎100％患有该病[1]。因此，研究治疗该病的有效药物，是医药界面临的迫切任务，有着重要临床意义。目前，中药治疗前列腺增生具有良好效果。
但至今未见到知母提取物用于治疗前列腺增生的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供知母提取物在制备防治前列腺增生的药物或食品中的应用。
本发明将知母提取物用于防治前列腺增生的药物或食品。本发明所说的知母提取物，其为主要成分芒果苷和新芒果苷的含量之和≥50％的知母黄酮混合物。
本发明的知母提取物的制备方法为知母粉碎后，用20-95％含水乙醇加热提取或浸泡提取，提取液浓缩后离心或过滤，弃沉淀，上清液或过滤液备用；将上述上清液或过滤液进行聚苯乙烯多孔性吸附树脂吸附，水淋去杂质后，用上样生药质量的5～15倍量体积的15～25％含水的C1～C5低级醇洗脱；洗脱液浓缩至无醇，静置，析出沉淀，离心或过滤，得沉淀提取物1，上清液或过滤液备用；在上清液或过滤液中加入乙醇醇沉，乙醇终浓度为70-95％，弃沉淀，将醇沉后的上清浓缩至干，得固体物为提取物2；或将上清浓缩后，喷雾干燥，也得提取物2；合并提取物1与提取物2并混合均匀，即得知母提取物。
获得的知母提取物成分分析经硅胶，sephadexLH-20，ODS等反相色谱担体柱色谱获得2个化合物，用化学，波谱法测定了结构，分别为芒果苷(mangiferin)和新芒果苷(neomangiferin)。
其中芒果苷的R基团为H新芒果苷的R基团为Glu(葡萄糖)所以，本发明的知母提取物主要是芒果苷与新芒果苷的混合物，用HPLC检测定量分析表明，知母提取物中芒果苷和新芒果苷含量之和≥50％，且芒果苷与新芒果苷的含量比为1∶1～5∶1。
用本发明的知母提取物进行药理实验知母提取物对SD(Sprague-Dawley)去势(大鼠手术摘除睾丸)大鼠前列腺增生模型的增生抑制作用。
实验方法1)给药组各成分比例确定根据知母的临床常用剂量，及知母主要有效成分，知母提取物的得率，设计知母提取物的给药剂量。
2)动物处理动物模型造模。将SD大鼠随机分组知母提取物给药组，模型对照和空白对照组。除空白对照组外，其他组每只大鼠皮下注射丙酸睾酮注射液3mg/(kg·d)，正常对照组皮下注射精制麻油。知母提取物给药组用相应提取物灌胃，空白对照组和模型模型对照组给以等量蒸馏水，连续灌胃4周。
SD大鼠去势前列腺增生模型(制备方法详见《西药新药临床前研究指导原则》的药理学部分，中华人民共和国卫生部药政管理局，1993；《药理试验方法学》第三版，人民卫生出版社)采取大鼠双侧睾丸摘除，在灌胃给药四周后，处死，取前列腺，称量湿重，计算前列腺增生指数，组织作病理切片作进一步观察。
3)前列腺湿重及指数的测定最后一次灌胃24h后，颈椎脱臼处死大鼠，剖取前列腺，仔细分离各叶前列腺，用电子天平称大鼠前列腺湿重，并计算前列腺指数。10％福尔马林溶液固定前列腺，石蜡包埋，切片，常规HE染色，镜下进行组织病理学观察。
前列腺指数＝前列腺湿重(g)/大鼠体重(g)×1004)数据及统计学处理各项参数均以x±S表示，显著性差异采用软件spss10.0进行方差分析。
实验结果对丙酸睾丸素所致的前列腺增生大鼠的作用模型组大鼠前列腺增生明显，前列腺指数增加，与空白组比较具有统计学意义(P＜0.01)，知母提取物组可减轻前列腺增生程度，明显减轻腹叶前列腺系数，与模型组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。
病理结果显示空白组正常前列腺组织，腺上皮单层或复层，无明显乳头；模型组前列腺组织重度增生，腺泡显著增多，腺上皮增生形成大量乳头状结构；知母提取物组皆具有减轻前列腺增生作用。知母提取物组前列腺组织轻度增生，上皮增生，可见乳头状结构。
以上试验结果说明，知母提取物可明显治疗丙酸睾酮引起的大鼠前列腺增生，前列腺重量级前列腺增生指数与模型组比均有明显改善，病理结果显示，服用知母提取物组的前列腺增生较轻。这些作用都有利于防止和治疗前列腺增生。因此，知母提取物可用于制备防治前列腺增生的药物或食品。实验结果证明，经知母提取物治疗后，可使前列腺增生大鼠的前列腺湿重和前列腺指数(前列腺指数＝前列腺湿重(g)/大鼠体重(g)×100)降低，给药组前列腺组织给药后增生抑制明显。因此，知母提取物可用于制备防治前列腺增生的药品和食品。
本发明对知母提取物拓展了新的医药用途，也为防治前列腺增生提供了一种新的药物来源。知母提取物安全低毒，药理作用较强，其原料来源丰富，价格低廉，制备工艺简单，可用于制备防治前列腺增生(肥大)的药物或食品。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施不限于此。
实施例1知母提取物制备100公斤粉碎后的知母药材，投入提取罐，在90～100℃依次用70％乙醇400升加热提取3次，每次提取时间为90分钟，合并3次提取液，浓缩至80升，过滤，将滤液用蒸馏水调节至100升。再缓缓通过有350升ZTC-1型大孔树脂(天津正天成澄清技术有限公司生产)的吸附柱，用500升蒸馏水淋洗出去杂质；再用1000升20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至10升，静置24小时，沉淀析出，过滤，干燥粉碎后得浅黄色沉淀0.4公斤，为提取物1；再将滤液再搅拌下缓缓加入100升95％乙醇，静置12小时，离心，并沉淀上清液浓缩至干，干燥粉碎后得黄色粉末1.6公斤，为提取物2；合并提取物1与提取物2混合均匀，即为本发明的知母提取物，共重2.0公斤，按生药量计得率为2.0％。
实施例2药理活性试验试验材料1.动物SD大鼠，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，清洁级(动物合格证号SCXK(沪)2002-0010)2.药物知母提取物均按实施例1中具体制备方法制备。
3.试剂丙酸睾酮注射液(上海通用药业股份有限公司，1ml/支，批号国药准字H31020524)方法与结果方法1)动物处理动物模型参考上文试验方法部分造模。将SD大鼠随机分组(每组10只)知母提取物给药组，模型对照和空白对照组。除空白组外，其他组每只大鼠皮下注射丙酸睾酮注射液3mg/(kg·d)，正常对照组皮下注射精制麻油。给药组分别用相应的药材或提取物灌胃，空白对照组和模型对照组给以等量蒸馏水，连续灌胃4周。
2)前列腺湿重及指数的测定最后一次灌胃24h后，颈椎脱臼处死大鼠，剖取前列腺，仔细分离各叶前列腺，用电子天平称大鼠前列腺湿重，并计算前列腺指数。10％福尔马林溶液固定前列腺，石蜡包埋，切片，常规HE染色，镜下进行组织学观察。
前列腺指数＝前列腺湿重(g)/大鼠体重(g)×1003)数据及统计学处理各项参数均以X±S表示，显著性差异采用软件spss10.0进行方差分析。
结果对丙酸睾丸素所致的前列腺增生大鼠的作用模型对照组大鼠前列腺增生明显，前列腺指数增加，与空白对照组比较具有统计学意义(P＜0.01)，知母提取物给药组明显减轻腹叶前列腺系数，与模型对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，实验结果见表1。
表1知母黄柏有效成分对前列腺增生的影响(x±S，n＝10)
△△P＜0.01vs空白对照组，*P＜0.05，**P＜0.01vs模型对照组病理结果显示空白组正常前列腺组织，腺上皮单层或复层，无明显乳头；模型组前列腺组织重度增生，腺泡显著增多，腺上皮增生形成大量乳头状结构；知母提取物组具有减轻前列腺增生作用，前列腺组织轻度增生，上皮增生，可见较多乳头状结构。
权利要求
1.知母提取物在制备防治前列腺增生的药物或食品中的应用，所述的知母提取物中芒果苷和新芒果苷的含量之和≥50％，它是用如下方法制得的知母粉碎后，用20-95％含水乙醇加热提取或浸泡提取，提取液浓缩后离心或过滤，弃沉淀，上清液或过滤液备用；将上述上清液或过滤液进行聚苯乙烯多孔性吸附树脂吸附，水淋去杂质后，用上样生药质量的5～15倍量体积的15～25％含水的C1～C5低级醇洗脱；洗脱液浓缩至无醇，静置，析出沉淀，离心或过滤，得沉淀提取物1，上清液或过滤液备用；在上清液或过滤液中加入乙醇醇沉，乙醇终浓度为70-95％，弃沉淀，将醇沉后的上清浓缩至干，得固体物为提取物2；或将上清浓缩后，喷雾干燥，也得提取物2；合并提取物1与提取物2并混合均匀，即得知母提取物。
2.根据权利要求1所述的知母提取物，其特征在于知母提取物中芒果苷与新芒果苷的含量比为1∶1～5∶1。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域。知母的化学成分主要为皂苷和黄酮类成分，已知有抗糖尿病的药用和抗菌作用。本发明的目的在于提供知母提取物在制备防治前列腺增生的药物或食品中的应用，本发明的知母提取物是指芒果苷和新芒果苷的含量之和≥50％的知母黄酮混合物，本发明还提供了上述知母提取物的具体制备方法。本发明经动物实验证明知母提取物可明显治疗丙酸睾酮引起的大鼠前列腺增生，因此，知母提取物可用于制备防治前列腺增生的药品和食品。本发明对知母提取物拓展了新的医药用途，也为防治前列腺增生提供了一种新的药物来源。
文档编号A61P13/08GK101062250SQ20071004099
公开日2007年10月31日 申请日期2007年5月22日 优先权日2007年5月22日
发明者陈万生, 孙赫, 孙连娜, 李铁军 申请人:中国人民解放军第二军医大学