专利名称：：一种治疗阿尔茨海默症的中药组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药组合物，尤其涉及一种治疗阿尔茨海默症的中药组合物及其制备方法，属于中药领域。
背景技术：
：目前，临床治疗阿尔茨海默症(AD)，中医主要是针对肾精亏损，脑髓失养而应用益髓填精的单味药及复方药物，如何首乌、还少丹等，用于改善记忆力，提高智力水平，阻止脑萎縮的进程，或者针对心脾两虚而采用补脾益气，养血安神药，例如黄芪、党参、人参以及远志等，具有益智强记之功效。然而，由于这类治疗对于导致淀粉样蛋白沉积的级联因素影响甚微，临床疗效并未获得显著提高。可行的西医治疗分为两类其一是改善症状类，主要是提高胆碱能神经元的功能。胆碱类似物可用来缓解记忆力丧失，目前效果较好的胆碱脂酶(ACHE)的抑制剂是Tacrine和donepezil及新发展的一些类似药物、此外还开发了胆碱脂酶受体的拮抗剂。这些药物可能缓解胆碱能神经递质参与的APP的异常剪切过程，但缺乏特异的疗效。另一类是利用抗氧化剂的神经保护类药物。神经保护类药物可成功地减慢AD的病程，已证实ct一tocopherol和selegmne可以明确地减慢AD的主要病理过程，但不能缓解已经出现的症状。迄今为止，对阿尔茨海默病发病机制的认识以淀粉样物瀑布效应假说为主导地位。该学说认为p-淀粉样蛋白(A/3)沉积是AD发病的中心环节，一系列连续的变化事件是AD病理改变的主要因素。通过一些措施清除淀粉样蛋白后，神经系统病变如神经元皱縮、小胶质细胞激活可以逆转。A/S存在于脑脊液和血浆中，是健康人体液的正常组成成分。可溶性A/5是相对无毒的，一旦聚集为淀粉样蛋白后就会引起神经系统退行性变。A/3毒性作用的产生与其数量增多密切相关。研究证明，AD病人脑A(3含量比正常对照明显增加。在AD病人的脑中，A/3沉积在老年斑和大脑的血管壁上。通常认为这种沉积引发了病理的级联反应，最终导致神经元功能紊乱和死亡。A^蛋白通过恶性改变神经元的功能甚至存活来起作用。A/3增加了H202的生成，从而引起了氧化损伤和细胞死广:。氧化应激即自由某产生的细胞毒性效应，在利用氧气的lK常和异常的细胞活动中产生。氧自由基对神经元的细胞膜和线粒体的DNA产生损伤。氧化损伤也可使神经元更易受到兴奋性氨基酸的伤害。自由基也有助于A/3的聚集、沉积以及与ApoE-4的结合。在AD患者大脑皮层中脂质过氧化的增加和线粒体的破坏证明了在AD中有异常增强的氧化损伤。除了引起氧白由基对神经元的直接损害外，A/3可以激活小胶质细胞和星形胶质细胞。在动物模型中，A^斑块和激活的小胶质细胞的数量呈正相关，后者产生毒性自由基并分泌细胞因子，从而对神经元产生进一步地损害。小胶质细胞可合成和分泌A^，而刺激物恰恰是A/3本身，从而形成一个正反馈机制，使A/3生成量不断增加。在AD病人的脑中，大量炎症反应的分子标志物的水平也大大增加，这些内源产生的因子又可以促进A^产生和沉积，从而进一步刺激炎症反应。A/3也可以直接诱导小胶质细胞和血管内皮细胞释放细胞因子。同时，A/3沉积还可以激活补体的不依赖抗体形成的经典途径。补体的激活又反过来驱动并维持多种慢性、低水平的炎症反应。A/3干扰钙的稳态调节，增加神经元内钙离子的浓度，从而激活细胞内的蛋白激酶、脂酶和其他可导致细胞死亡的酶类。鈣—内流也可损伤线粒体，从而增加自由基的产生和氧化损伤。可以认为，A/340或A/542产生过多，是形成淀粉样蛋白沉积从而引起AD的主要病因。A/340和A/342是APP经过分泌酶切割后的产物。APP是一种跨膜的单链糖蛋白，它的半衰期很短，通过两条通路代谢。经分泌酶切割后，会产生A^40或A/342。因此，抑制/3分泌酶的活性，减少A^40或A^42的产生，可以达到阻断淀粉样蛋白的沉积，阻抑氧化损伤、非特异性炎症反应，保持钙离子稳态调节的目的，从而预防和治疗AD。而现有中西药物尚不能有效地阻抑上述A/340或Aj842产生过多这一核心病理过程。
发明内容本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供-种对于阿尔茨海默症疗效显著的中药组合物。本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的一种治疗阿尔茨海默症的中药组合物，由以下重量份的原料药制成栀子150-200份和三七总皂苷4-6份。优选的，各原料药的重量份是栀子180份，三七总皂苷5份。三七总皂苷是将五加科植物三七[尸a"ox"otog/"""gF/Z.C/je"]的芦头按照现有的提取工艺提取得的总皂苷，另外，三七总皂苷在国内很多医药公司有售(例如云南玉溪万方天然药物有限公司，商品名称三七总皂苷)。本发明所用到的原料都可从普通中医药商店购买得到，其规格符合行业标准。本发明人在多年的研究基础上发现，肾虚是阿尔茨海默症的发生与发展的根本原因，而痰浊停聚和脉络瘀阻后化毒为害，产生的"内生之毒"则为阿尔茨海默症发病过程中的基本病理环节。阿尔茨海默症病程延绵，脑神难复的深层病机乃为"毒损脑络"。其实质为年高体虚，肾衰精枯，肝脾肾功能低下，七情内伤，气血失调，痰浊内生，气滞血瘀，痰浊瘀血混杂于脑髓，元神失养，神明失聪，神机失调而致痴呆，其发病特点是本虚标实，虚实夹杂的疾患。现代神经病理学、分子生物学、神经生理及神经解剖学证实，老年痴呆的发生与发展过程与脑的微循环及神经细胞的内环境变化有关，且与超氧自由基的攻击、兴奋性氨基酸的增加而产生的神经毒性作用密切相关。因此，解毒、通络是针对本病病机关键的核心治疗大法。本发明针对阿尔茨海默症乃AiS40或A^42产生过多这一核心病理过程，解决对脑神(神经元)的保护作用问题。本发明从毒论治以"解毒通络"立法，建立凉血解毒、化瘀通络的药物配伍原则，解毒以祛除内生毒性物质损害，则络脉易和，脑神可复；通络以改善缺血脑区的微灌流状态，畅通气血的渗灌使毒易祛，从而阻断淀粉样蛋白沉积的恶性循环损伤病理过程。本发明中药组合物可有效阻抑A/340和A042的过度产生，阻断淀粉样蛋白的沉积，保持钙离子稳态调节，阻抑淀粉样斑块引起的氧化损伤、非特异性炎症反应和代谢毒性物质对神经细胞的继发性损害。从而解除病变的发生和发展，减轻迟发性神经细胞死亡和皮层萎縮，对于阿尔茨海默症疗效显著。本发明药物活性组分可以加入制备不同剂型时所需的各种辅料，例如崩解剂、润滑剂、黏合剂等，以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用的口服制剂或注射制剂，例如可以是丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、口服液或注射液等，优选为注射液。优选的，一种制备本发明中药组合物的方法，包括以下步骤(1)按下述重量份称取各原料栀子150-200份，三七总皂苷4-6份；(2)将栀子粉碎成粗粉，用50-90%的乙醇渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，浓縮，得清膏l;(3)将清膏l加水稀释，搅匀，冷藏，滤过，将滤液减压浓縮，得清膏2;(4)将清膏2上活性炭柱，先叫蒸馏水洗脱至洗脱液无色，再用60-80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得栀子半成品；(5)将梔子半成品与三七总皂苷混匀，按照现有技术制剂成型，即得。上述制备方法中，优选的，步骤(2)中将栀子粉碎成粗粉，用70%的乙醇渗漉；所述清膏1的相对密度优选为1.10(6(TC测定)。步骤(3)中优选将清膏1加3-5倍重量水稀释；所述的冷藏优选为在0-4"C温度下冷藏48小时；所述清膏2的相对密度优选为1.10(6(TC测定)。步骤(4)中所述乙醇洗脱优选为用8-12倍重量70%乙醇进行洗脱。本发明药物的用法与用量本发明药物的用药量取决于具体剂型，以及病人的年龄、体重、健康状况等因素。作为指导:注射液在临床使用过程中，患者每次3支(30ml)，每日一次，加入0.9。/。生理盐水250ml，40滴/分钟。具体实施方式以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。实施例l按下述重量称取各原料栀子150g，三七总皂苷4g;将栀子粉碎成粗粉，用50%的乙醇渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，浓縮，得清膏l;将清膏1加3倍重量水稀释，搅匀，冷藏，滤过，将滤液减压浓縮，得清膏2;将清膏2上活性炭柱，先用蒸馏水洗脱至洗脱液无色，再用8倍重量60%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓縮，干燥，得栀子半成品；在取得栀子半成品后，将其用适量注射用水溶解，滤过；另取三七总皂苷(购自云南玉溪万方天然药物有限公司，商品名称三七总皂苷)，加适量注射用水溶解，过滤；将三七药液与栀子药液混匀，调节pH值至6.0-7.0，0-4T:冷藏24小时，0.45/mi滤膜过滤，加注射用水于滤液中至1000ml，再用0.22/mi滤膜过滤，滤液灌装成于注射液安瓿，11(TC热压灭菌30分钟，即得。实施例2按下述重量称取各原料栀子200g，三七总皂苷6g;将栀子粉碎成粗粉，用90%的乙醇渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，浓縮，得清膏l;将清膏1加5倍重量水稀释，搅匀，冷藏，滤过，将滤液减压浓縮，得清膏2;将清膏2上活性炭柱，先用蒸馏水洗脱至洗脱液无色，再用12倍重量80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得栀子半成品；在取得栀子半成品后，将其用适量注射用水溶解，滤过；另取三七总皂苷(购自云南fi溪万方天然药物有限公司，商品名称三七总皂苷)，加适量注射用水溶解，过滤；将三七药液与栀子药液混匀，调节pH值至6.0-7.0，0-4t:冷藏24小时，0.45/wn滤膜过滤，加注射用水于滤液中至1000ml，再用0.22pm滤膜过滤，滤液灌装成于注射液安瓿，11(TC热压灭菌30分钟，即得。实施例3按下述重量称取各原料栀子180g,三七总皂苷5g;将栀子粉碎成粗粉，用70%的乙醇渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，浓縮至相对密度为I.IO(60°C测定)，得清膏l;将清膏1加4倍重量水稀释，搅匀，0-4"C温度下冷藏48小时，滤过，将滤液减压浓縮至相对密度为I.IO(60°C测定)，得清膏2;将清膏2上活性炭柱，先用蒸馏水洗脱至洗脱液无色，再用10倍重量70%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓縮，干燥，得栀子半成品；在取得栀子半成品后，将其用适量注射用水溶解，滤过；另取三七总皂苷(购自云南玉溪万方天然药物有限公司，商品名称三七总皂苷)，加适量注射用水溶解，过滤；将三七药液与梔子药液混匀，调节pH值至6.0-7.0，0-4'C冷藏24小时，0.45/mv滤膜过滤，加注射用水于滤液中至1000ml，再用0.22pm滤膜过滤，滤液灌装成于注射液安瓿，11(TC热压灭菌30分钟，即得。实施例4制备颗粒剂按下述重量称取各原料栀子180g，三七总皂苷5g;将栀子粉碎成粗粉，用70%的乙醇渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，浓縮至相对密度为I.IO(60°C测定)，得清膏l;将清膏1加4倍重量水稀释，搅匀，0-4"C温度下冷藏48小时，滤过，将滤液减压浓縮至相对密度为I.IO(60°C测定)，得清膏2;将清膏2上活性炭柱，先用蒸馏水洗脱至洗脱液无色，再用10倍重量70%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓縮，干燥，得栀子半成品；在取得栀子半成品后，将其用适量纯水溶解，另取三七总皂苷(购自云南玉溪万方天然药物有限公司，商品名称三七总皂苷)，加适量纯水溶解；将三七药液与梔子药液充分混匀，低温真空浓縮为清膏，喷雾干燥，制成细粉，以l:l比例加糊精，混匀，制粒，干燥，分装入袋，即得。试验例1、本发明中药组合物对APP695转化的K269细胞所产生的AjS40和A/42含量的影响试验材料1、药品与试剂受试药本发明实施例1所制备的注射液，外观呈淡黄色，含量104mg/10ml/支。具有凉血解毒，化瘀通络之功能，主治阿尔茨海默症。试剂与药品细胞培养用胎牛血清，美国Hyclone公司生产。DMEM液体培养基，美国Hyclone公司生产。选择试剂G418，美国Promega公司生产。2、细胞APP695转化的K269细胞3、仪器HERAcell50细胞培养箱，TECANSAFIRE2酶标仪。方法与结果1、给药APP695转化的K269细胞，在每ml培养基中分别加入lOOul、200ul试验药(本发明药物)，阴性对照组加入200ul试验药的溶剂。2、Aj840和A)342的含量的测定加药后，细胞培养48小时，收集培养基。采用BIOSOURCE的ELISA试剂盒测定A/340和A/342的含量。阴性对照组培养基中测定出的A/340和A/342含量定为100%，其余组测定的A/340和A)342含量与之相比，给出相对值。结果见表l。表1受试药对APP695转化K269细胞所产生的A/340和A/342含量的影响(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>结果显示，细胞培养基中仅加入试验药的溶剂时(即阴性对照组)培养基中A04O和A/342含量较高。细胞培养基中加入受试药时，受试药可明显降低APP转化的K269细胞所产生的A/340和A/342的含量。受试药各剂量组对于AWO和AW2的含量均有不同程度的改善。试验例2本发明中药组合物对C99转化K269细胞所产生的AWO和A/342含量的影响试验材料1、药品与试剂受试药本发明实施例2所制备的注射液。2、细胞C99转化的K269细胞3、仪器HERAcell50细胞培养箱，TECANSAFIRE2酶标仪，方法与结果1、给药C99转化的K269细胞，在每ml培养基中分别加入lOOul、200ul受试药(本发明药物)，阴性对照组加入200ul试验药的溶剂。2、A/340和A)842的含量的测定加药后，细胞培养48小时，收集培养基。采用BIOSOURCE的ELISA试剂盒测定A/340和A/342的含量。阴性对照组培养基中测定出的A/340和A/342含量定为100%，其余组测定的A/340和A/342含量与之相比，给出相对值。结果见表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>结果显示，细胞培养基中仅加入试验药的溶剂时(即阴性对照组)，培养基中A04O和A/342含量较高。细胞培养基中加入试验药(本发明药物)时，试验药可明显降低C99转化的K269细胞所产生的A|840和A/842的含量。试验药各剂量组对于A/340和A/342的含量均有不同程度的改善。试验例3本发明中药组合物对/3分泌酶(BACE)转化的K269细胞中BACE活性的影响。试验材料1、药品与试剂受试药本发明实施例3所制备的注射液。2、细胞BACE转化的K269细胞3、仪器HERAcell50细胞培养箱，TECANSAFIRE2酶标仪。方法与结果1、给药BACE转化的K269细胞，在每ml培养基中分别加入lOOul、200ul试验药(本发明药物)，阴性对照组加入200ul试验药的溶剂。2、BACE活性的测定加药后，细胞培养48小时。在Tnton-100裂解液中裂解细胞，在pH4.5条件下，采用荧光底物检测BACE的活性。阴性对照组中测定出的BACE活性定为100%，其余组测定的BACE活性与之相比，给出相对值。结果见表3。表3试验药对BACE转化K269细胞的BACE活性的影响(X±SD)组别剂量NBACE活性(％)pl/ml培养基阴性对照组20010100±7.36试验药组1001092.25±7.142001079.07士5.62试验结果显示，细胞培养基中仅加入试验药的溶剂时(即阴性对照组)，在BACE转化的K269细胞的细胞裂解物当中，BACE的活性较高。当加入试验药(本发明药物)时，试验药可明显降低BACE的活性。试验药各剂量组对于BACE活性的降低均有不同程度的影响。试验例4本发明中药组合物对BACE转化的K269细胞中BACE表达水平的影响。试验材料1、药品与试剂受试药同试验例1。2、细胞BACE转化的K269细胞3、仪器HERAcell50细胞培养箱，TECANSAFIRE2酶标仪。方法与结果-1、给药BACE转化的K269细胞，在每ml培养基中分别加入lOOul、200ul试验药(本发明药物)，阴性对照组加入200ul试验药的溶剂。2、BACE表达水平的测定加药后，细胞培养48小时。在Triton-100裂解液中裂解细胞，裂解物采用Westemblot方—法分析蛋白质的表达水平。用抗BACE的单克隆抗体检测BACE的表达水平；用抗actin的抗体检测actin的表达水平，作为内对照。与阴性对照组中测定出的BACE和actin表达水平对比。结果显示，细胞培养基中加入试验药的溶剂时(即阴性对照组)，在BACE转化的K269细胞的细胞裂解物当中，BACE的表达水平较高。当加入试验药时，试验药各剂量组对于BACE的表达水平没有显著影响。综合以上试验结果可以看出，本发明中药组合物可明显降低APP转化的神经元细胞所产生的A/340和A/342的含量，产生A/340的量与对照相比降低了约50%，产生A/342的量与对照相比降低了约75%;另外，在C99转化的神经元细胞上，A/340和A/542的产量也明显降低，与对照相比，产生A/340的量降低了约40。/。，产生A/342的量降低了约25%，显示了其具有减少A/340和A/342产生，保护神经细胞之功效；另外，细胞裂解物当中，BACE的表达量没有显著改变，A)840和A042产生量的降低，主要是由于BACE的活性降低了20%，显示其作用的靶点主要在于阻抑BACE的活性。权利要求1.一种治疗阿尔茨海默症的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料药制成栀子150-200份和三七总皂苷4-6份。2、按照权利要求l的中药组合物，其特征在于，各原料药的重量份是栀子1S0份，三七总皂苷5份。3、一种制备权利要求l中药组合物的方法，包括以下步骤(1)按下述重量份称取各原料栀子150-200份，三七总皂苷4-6份；(2)将栀子粉碎成粗粉，用50-90%的乙醇渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，浓縮，得清膏l;(3)将清膏l加水稀释，搅匀，冷藏，滤过，将滤液减压浓縮，得清膏2;(4)将清膏2t活性炭柱，先用蒸馏水洗脱至洗脱液无色，再用60-80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓縮，干燥，得栀子半成品；(5)将栀子半成品与三七总皂苷混匀，按照现有技术制剂成型，即得。4、按照权利要求3的方法，其特征在于，步骤(2)中将栀子粉碎成粗粉后用70%的乙醇渗漉。5、按照权利要求3的方法，其特征在于，步骤(3)中将清膏1加3-5倍重量水稀释；所述的冷藏为在0-4t:温度下冷藏48小时。6、按照权利要求3的方法，其特征在于，所述清膏1或清膏2的相对密度为1.10，测定温度为6(TC。7、按照权利要求3的方法，其特征在于，步骤(4)中所述乙醇洗脱为用8-12倍重量70%乙醇进行洗脱。8、权利要求1或2的中药组合物在制备治疗阿尔茨海默症药物中的用途。全文摘要本发明公开了一种治疗阿尔茨海默症的中药组合物及其制备方法。该中药组合物由以下重量份的原料药制成栀子150-200份和三七总皂苷4-6份。本发明中药组合物可有效阻抑Aβ40和Aβ42的过度产生，阻断淀粉样蛋白的沉积，保持钙离子稳态调节，阻抑淀粉样斑块引起的氧化损伤、非特异性炎症反应和代谢毒性物质对神经细胞的继发性损害，从而解除病变的发生和发展，减轻迟发性神经细胞死亡和皮层萎缩，对于阿尔茨海默症具有显著的治疗效果。文档编号A61K36/185GK101224247SQ200710062879公开日2008年7月23日申请日期2007年1月19日优先权日2007年1月19日发明者茜华,李澎涛,勇申申请人:北京中医药大学