专利名称：：制备和提纯9-硝基-20-喜树碱的方法以及9-硝基-20-喜树碱及其组合物的制作方法
技术领域：
：本发明是关于制备和提纯9-硝基-20-喜树碱(9NC)的方法以及9-硝基-20-喜树;成及其组合物。
背景技术：
：9-硝基-20(S)-喜树碱在治疗某些类型的癌症中已显示出大有前景。对这种水不溶的9-硝基-20(S)-喜树碱已进行了体内和体外研究并将9-硝基-20(S)-喜树碱用于某些癌症的临床试验中。日本公开的专利申请59-51288号提供一种用稍微过量的浓硝酸在浓硫酸中处理喜树碱来制备9-硝基喜树碱的方法。但是，使用该方法时，得到可用于医药用途的9NC产物的收率仅约3%-约7%。另外，该方法产生不需要的副产物，例如无活性的异构体，12-硝基喜树碱(12NC),其中9NC与12NC的比例约1-3。下面的反应式表示使用硝酸和硫酸的反应。+副产品但在此反应，不需要的12NC是主要产物，占收率的约60%。因为9NC收率低且有许多副产物，分离和提纯9NC的方法耗费时间和费用大，还可能进一步降低9NC的收率。因此，需要有一种提高9NC收率的方法并最好没有以前制备9NC的方法所产生的许多副产物。
发明内容本发明的一个目的是提供制备9-硝基喜树碱的方法，该方法能得到高的9-硝基喜树碱收率。本发明的另一目的是提供一种纯化9-硝基喜树碱的改进的提纯方法。本发明的其他目的和优点有部分在下面说明书中说明，有部分可从说明书清楚地反映出来。本发明的这些目的和其他优点可通过说明书和所附的权利要求中特别指出的各个要点及其组合来实现和达到。为了达到这些和其他优点并根据本发明的目的，正如在这里具体和概括说明的，本发明是关于制备9-硝基喜树碱的方法。该方法的步骤包括20-喜树碱与至少一种无机硝酸盐反应并用一种对催化生成硝镄离子有效的酸。该反应在足以生成9-硝基喜树石威的温度和时间下。本发明也是关于用柱色谱提纯9-硝基喜树^4的方法，优选使用含四氢呋喃和二氯曱烷的洗脱液。具体地，本发明提供了如下的技术方案1.制备9-硝基喜树碱的方法，包括在足以生成所述9-硝基喜树碱的温度和时间下，将20-喜树碱与至少一种无机硝酸盐和至少一种对催化生成硝镎离子有效的酸反应。2.项1的方法，其中所述20-喜树碱是外消旋的20-喜树碱或20(S)-喜树碱。3.项2的方法，其中所述20-喜树碱是20(S)-喜树碱，且所述9-硝基喜树碱是9-硝基-20(S)-喜树碱。4.项1的方法，其中所述酸是浓硫酸、三氟乙酸或三氟乙酐。5.项1的方法，其中所述无机硝酸盐是KN03;NH4N03;LiN03;AgN03;T1N03;BiON03;Cu(N03)2.2.5H20;Hg(N03)2.H20;Ca(N03)24H20;Ba(N03)2;Zn(N03)26H20;Mg(N03)2.6H20;Co(N03)26H20;Sr(N03)2;Pb(N03)2;A1(N03)3.9H20;Fe(N03)3犯20;Cr(N03)3.9H20;La(N03)3'6H20;或其混合物。6.项1的方法，其中所述无机硝酸盐是至少两种无机硝酸盐的混合物。7.项6的方法，其中所述无机硝酸盐包括KN03和至少一种其他无机硝酸盐。8.项6的方法，其中所述无机硝酸盐包括KN03和Cu(N03)2■2.5H20;KNCM口T1N03;KN03和Hg(N03)2.H20;KN03和Ca(N03)2.4H20;KN03和Ba(N03)2;KN03和Zn(N03)26H20;KN03和Sr(N03)2;KN03和Pb(N03)2;KN03和A1(N03)3'KN03和Fe(N03)3LiN03和Hg(N03)2LiN03和Cu(N03)2LiN03和Co(N03)29H20;9H20;H20;2.5H20;6H20;AgN03和Cr(N03)39H20;Cu(N03)22.5H20和Fe(N03)39H20;Hg(N03)2H20和Fe(N03)39H20;NH4N03和Cu(N03)22.5H20;KN03、T1N03和Cu(N03)22.5H20;KN03、T1N03和Zn(N03)2.6H20;KN〇3、T1N03和Pb(N03)2;KN03、Cu(N03)22.5H20和Fe(N03)3.9H20;KN03、LiN03、Cu(N03)2'2.5恥、Hg(N03)2.恥和Zn(N03)2.6H20;KN03、LiN03、Cu(N03)2'2.5&0、Hg(N03)2.2.5H20和Fe(N03);.9H20;KN03、LiN03、AgN03、Cu(N03)22.5H20、Hg(N03)2H2()和Fe(N03)3■9H20;KN03、LiN03、Zn(N03)2■6H20、Cu(N03)2■2.5H20、Hg(N03)2.H20和Fe(N03)39H20;或KN03、Zn(N03)2.6H20、Cu(N03)2■2.5H20、Hg(N03)2H20和Fe(N03)3'9H20。9.项1的方法，还包括用柱色谱提纯9-硝基喜树碱的步骤。10.项9的方法，其中所述柱色语用含有四氢呋喃和二氯曱烷的洗脱液进行。11.项1的方法，还包括用从乙醇中再沉淀提纯9-硝基喜树碱。12.9-硝基喜树碱，其熔点为268。C,其中该9-硝基喜树碱具有如下特征1)'H画R:1.05(3H，t，J=7.40Hz，C19-曱基质子)，1.92(2H,m,C18-亚曱基质子)，3.82(1H,s,C20-OH),5.40(2H，s，C5-亚曱基质子)，5.55(2H,dd，J=14.21Hz,14.21Hz，C17-亚曱基质子)，7.70(1H,s,C14-H)，7.92(1H,t,J=8.40Hz,Cll-H),8.48(1H,d,J=8.35Hz,C10-H),8.55(1H,d,风35Hz,C12-H),9.36(1H,s,C7-H);2)质谱m/e(相对强度):393(M+,100%),364(M-C2H5,35%)，349(48%)，334(25%)，320(25%),293(35%)，274(8%),262(8%),246(15%),234(6%),218(20%)，205(8%),190(9%)，177(5%),164(3%),151(30/0),137(5%),123(4%),109(5%),95(5%),75(3%),60(23%);精密质谱393.096(实验值)，393.096(C2。H,5N306计算值)。13.含项12的9-硝基喜树碱的组合物。14.项13的组合物，其中所述9-硝基喜树碱是由乙醇作为起始溶剂的纯化过程形成的。15.项13的组合物，该组合物是用于治疗癌症的组合物。16.项12的9-硝基喜树碱的纯化方法，包括用乙醇作为起始溶剂使9-硝基喜树碱进行纯化过程，所形成的9-硝基喜树碱的熔点为268°C。当然，上面一般说听和下面的详细说明仅是示例性的和说明性的，旨在进一步解释要求保护的本发明。具体实施例方式一般，制备9-硝基喜树碱的方法包括将20-喜树碱与至少一种无机硝酸盐和对催化由硝酸盐形成硝错离子有效的酸反应。该反应在足以生成9-硝基喜树碱的温度和时间下进行。关于原料，所述喜树碱可以是任何20-喜树碱。优选的喜树碱是外消旋的20-喜树碱(即20(R,S)-喜树碱)或20(S)-喜树碱。更优选的20-喜树碱是20(S)-喜树碱。所述喜树碱在市场上可以从中国北京京涛(Jintao)科技开发公司买到。可使用任何纯度的喜树碱，但20-喜树碱纯度优选约85%-约99%，更优选至少约92%。与至少一种无机硝酸盐和一种催化生成硝镎离子有效的酸反应的20-喜树碱的量可以是任何量，只要存在足够量的剩余组分即可。无机硝酸盐可以是能够生成硝错离子的任何盐，所述硝镱离子最后生成连接在喜树碱9-位上的硝基取代基。无机硝酸盐的例子包括但不限于KN03;NH4N03;LiN03;AgN03;T1N03;BiON03;Cu(N03)22.5H20;Hg(N03)2H20;Ca(N03)2.4H20;Ba(N03)2;Zn(N03)2.6H20;Mg(N03)2.6H20;Co(N03)2.6H20;Sr(N03)2;Pb(N03)2;A1(N03)3■9H20;Fe(N03)3■9H20;Cr(N03)39H20和La(N03)36H20。在本发明的方法中，至少一种无机硝酸盐用于反应中。也可以使用多种无机硝酸盐，例如，两种或三种或更多种不同的无机硝酸盐可以用于该反应中。某些无机硝酸盐的组合物改进了9-硝基喜树碱收率的百分数并使9-硝基喜树碱收率百分数与12-硝基喜树碱收率百分数有更理想的比例，以及使硝化的总百分数更高和/或反应副产物的百分数更低。无机硝酸盐组合物的具体例子包括但不限于KN03和Cu(N03)2.2.5H20;KN03和T1N03;KN03和Hg(N03)2H20;KN02和Ca(N03)2.4H20;KN03和Ba(N03)2;KN03和Zn(N03)2.6H20;KN03和Sr(N03)2;KN03和Pb(N03)2;KN03和A1(N03)39H20;KN03和Fe(N03)3.9H20;LiN03和Hg(N03)2H20;LiN03和Cu(N03)2,2.5H20;LiN03和Co(N03)2.6H20;AgNCb和Cr(N03)3,9H20;Cu(N03)2.2.5H20和Fe(N03)3.9H20;Hg(N03)2.H20;和Fe(N03)3.9H20;NH4N03和Cu(N03)2.2.5H20;KN03,T1N03,和Cu(N03)2,2.5H20;KN03,T1N03,和Zn(N03)26H20;KN03,T1N03，和Pb(N03)2;KN03,Cu(N03)2.2.5H20,和Fe(N03)39H20;KN03，LiN03,Cu(N03)22.5H20,Hg(N03)2H20,和Fe(N03)3'9H20;Zn(N03)2,0;KN03,LiN03,AgN03,Cu(N。3)22.5H20'Hg(N03)2H20,和Fe(N03)39H20;KN03,LiN03，Cu(N03)22.5H2()，Hg(N03)2H20和Zn(N03)26H20;KN〇3,LiN03,Zn(N03)26H20，Cu(N03)2.2.5H20，Hg(N03)2H20,和Fe(N03)3.9H20;和KN03，Zn(N03)26H20，Cu(N03)2.2.5H20,Hg(N03)2H20,和Fe(N03)3.9H20。在反应中存在的无机硝酸盐的量(与反应中使用的喜树碱量比较)超过使用的喜树碱量，更优选是大于喜树碱量约2倍-约3倍(摩尔)。无机硝酸盐可/人市场上例如AldrichChemicalCo.,Milwaukee,WI买到。本发明方法中使用的酸在催化生成硝镎离子中是有效的。酸的例子包括但不限于浓硫酸、三氟乙酸或三氟乙酐。使用的术语"浓的"指的是硫酸的浓度至少约95%,更优选约％%-约98%。在反应中使的酸量应是50ml-120ml/g20-CPD,更优选100ml/g20-CPT。在实施本发明的方法时，原料一般可以任何顺序加入反应容器中，混合在一起直到生成9-硝基喜树碱。原料加入反应器中的顺序不是严格的，但优选首先将酸加入装有磁性搅拌器的反应容器中，然后加入喜树碱和无机硝酸盐。混合物在室温下搅拌优选至少约72小时，更优选约72-约96小时。在混合物搅拌足够时间后，可将混合物分批倒入冰水中同时搅拌以避免过热。生成的悬浮液用溶剂例如二氯曱烷萃取，萃取液可以用例如碌b酸钠干燥几小时。如同表1所示，该反应式表示喜树碱1用无积工贿酸盐硝化得到9-硝基喜树碱4、12-硝基喜树碱5、和其他副产物。优选的硝化反应是得到合适比例的9—硝基喜树碱和12-硝基喜树碱以及较高的总硝化收率和低的副产物收率(百分数)。表2概要地说明在浓石克酸中喜树碱与常用的无机盐的硝化反应。从结果可以看出，根据9-硝基喜树碱的收率和/或得到的9-硝基喜树碱与12-硝基喜树碱的比例，T1N03和KN03是优选的无机硝酸盐。表3提供的数据表示在反应中使用两个不同无片/U肖酸盐的几种组合物生成9-硝基喜树碱。3可以看出得到此结果优选使用KN03/T1N03;KN03/Zn(N03)2;和KN03/Sr(N03)2。例如，KN03/T1N03的组合物，与单独用硝酸钾或硝酸铊作为硝化剂反应得到的结果比较，提供了改进的9-硝基喜树碱和12-硝基喜树碱的比例1:1.4以及较高的9-硝基喜树碱收率29%。KN03和Hg(N03)2的组合物也显示改进的9-硝基喜树碱和12-硝基喜树碱的比例1:1.2。表4概述了使用三种或更多种无4/L硝酸盐作为硝化剂并表示这些组合物是可以使用的。表5概述用不同比例的硝酸钾和硝酸铊在浓硫酸中的组合物硝化喜树碱的结果。从表5中可以看出在优选的无机硝酸盐组合物是1.4/1.0-1.0/1.5比例的KNO/TlN03时，得到较高百分收率的9-硝基喜树碱以及改进的9-硝基喜树碱和12-硝基喜树碱的比例。更优选使用1.3/1.0-1.0/1.0'的KN03/T1N03。用上述比例可以得到纯的9-硝基喜树碱的稳定的收率20±1%，而一般方法得到的收率最多5±2%。下列实施例进一步说明本发明，但这些实施例只是举例性的。实施例在下列实施例中，所有玻璃仪器在使用以前都在70土10。C下烘干至少2小时。熔点用MEL-TEMP熔点仪得到，不校正。约10。/。(w/v)CDCl3溶液的'HNMR用JEOLGX-270WBNMR波i普仪在270.05MHz下得到。化学位移以每百万中的份数记录(5标度)，用四曱基硅烷作内标。在记录NMR数据时，我们使用下列缩写以赫兹表示的偶合常数(J),单峰(S),二重峰(d)，三重峰(t)，宽峰(bs)，多重峰(m)，等等。质谱用分辨率10000的VGZAB-SEQ质语仪(英国VGAnalgticalCo.)记录。常规使用的溶剂例如氯仿和二氯曱烷经干燥和新蒸馏的。柱色谱的硅胶(230-400目，Aldrich)用于所有产物的分离。在薄层色谱(TLC)中使用Eastman色谱板(含有聚乙烯的萤光指示剂的硅胶)。在NMR数据中使用的数字在表1的结构1中表示。20(S)-喜树碱从中华人民共和国北京京涛科技开发公司购买，买来就用。所有其他无机硝酸盐从AldrichChemicalCo.(Milwaukee，WI)购买，也是买来就用。浓硫酸浓度96%,由Fisher得到，得到就使用。实施例1—在乙酸中喜树碱与KN03的反应将0.50g(0.0014mol)20(S)-喜树碱和0.50gKNO3(0.0050mol)加入在100ml装有磁性搅拌器的圓底烧瓶中的30ml乙酸中。混合物在室温下搅拌24小时，并在搅拌下分几份倒入500ml冰水中。悬浮液用每次200mi二氯甲烷(200mlx3)萃取3次。合并的萃取液用20g无水硫酸钠干燥6小时。在用旋转蒸发器分离二氯甲烷后，剩余物在石油醚中回流4小时。在过滤和在空气中干燥4小时后得到的产物是灰白色粉末。HPLC分析表示在乙酸中无喜树碱与KN03硝化的指示。起始的喜树碱100。/。回收(表1)实施例2在乙酐中喜树碱与KN03的反应用与实施例1中的反应相同的方法将喜树碱硝化和处理。反应产物的HPLC分析表明起始的喜树碱100%回收。实施例3在三氟乙酐中喜树碱与KN03的反应用与实施例1相同的方法将喜树碱硝化和处理。反应混合物的HPLC分析数据在表1中所示。实施例4在浓硫酸中喜树碱用KN03的硝化将0.50g(0.0014mol)喜树碱和(0.50g,0.0050mol)KNO3同时加入在100ml装有磁性搅拌器的圓底烧瓶中的30ml浓硫酸中。混合物在室温下搅拌1天，并在搅拌下缓慢地倒入500ml冰水中。黄色的悬浮液用每次200ml二氯曱烷(200mlx3)萃取3次。合并的萃取液用无水硫酸钠干燥1天。用旋转蒸发器分离二氯曱烷，剩余物在石油醚中回流4小时。在冷却至室温后混合物经过滤和得到的黄色粉末在空气中干燥1天。反应混合物(黄色粉末)的HPLC分析在表1中所示。实施例5在硫酸中喜树碱用各种硝酸盐的硝化将喜树碱(0.50g,0.0014mol)和硝酸铵(0.56g，0.0070mol)加入在100ml装有磁性搅拌器的圓底烧瓶中的20ml浓硫酸中。混合物在室温下搅拌72小时，然后在搅拌下倒入500ml水水中，用每次200mi二氯曱烷(200mlx3)萃取3次。合并的萃取液用每次100ml水(100mlx2)洗涤2次。将2次的洗涤液合并，用每次100ml二氯曱烷(200mlx2)萃取2次。将所有萃取液(-600ml+200ml)合并，干燥(Na2S04,20g)4小时，然后蒸发得到白色粉末状粗反应产物，含有9NC(19%)，12NC(41%),未反应的喜树碱(25%)，和其他副产物(15%)。所有这些反应的HPLC分析结果在表2中所示。实施例6在硫酸中喜树碱用两种不同硝酸盐组合物的硝化将喜树碱(4.0g,0.0115mol)加入在250ml三口烧瓶中的100ml浓硫酸中。悬浮液用磁性搅拌器搅拌直到大多数喜树碱进入溶液中(约15-30分钟)。将KN03(2.32g,0.0230mol)和Cu(N03)2'2.5I"bO(2.67g,0.0115mol)同时加入该溶液中。混合物在室温下搅拌72小时，在搅拌下倒入1500ml冰水中。在水中的黄色悬浮液用每次500ml二氯曱烷(500mlx4)萃取4次。合并的萃取液用无水硫酸钠干燥8小时。用过滤分离硫酸钠。在用旋转蒸发器分离二氯曱烷后，得到黄色粉末状的粗反应产物，含有9NC(24。/。)，12NC(50%),未反应的喜树碱(6%),和其他副产物(20%)。所有这些硝化反应的HPLC分析结果在表3中所示。实施例7在硫酸中喜树碱用三种或更多种无机硝酸盐组合物的硝化将喜树碱(4.0g,0.0115mol)悬浮于在250ml装有磁性搅拌器的圆底烧瓶中的100ml浓硫酸中。在搅拌约30分钟(直到喜树碱几乎溶解)后，同时加入KN03(1.16g,0.0115mol)，TlNO3(3.0g,0.0116mol)和Cu(N03)22.5H20(2.67g,0.0115mol)的组合物。混合物在室温下搅拌72小时，在搅拌下倒入1500ml冰水中。黄色悬浮液用每次500ml二氯曱烷(500mlx4)萃取4次。合并的萃取液用无水硫酸钠干燥，过滤，和蒸发。得到黄色粉末状的粗反应产物，含有9NC(25。/。)，12NC(44%),未反应的喜树碱(10%)，和其他副产物(21%)。所有这些硝化反应的HPLC分析结果在表4中所示。实施例8在硫酸中喜树碱用不同比例的KN03和T1N03组合物的硝化将喜树碱(6.0g,0.0172mol)加入在250ml装有磁性搅拌器的三口烧瓶中的100ml浓碌b酸中。在室温下搅拌约30分钟后，同时加入KN03(1.74g,0.0172mol)和TlN03(4.58g，0.0172mol)的组合物。混合物在室温下搅拌72小时，在搅拌下倒入1500ml冰水中。黄色悬浮液用每次500ml二氯曱烷(500mlx4)萃取4次。合并的萃取液用无水Na2S04干燥8小时。在用旋转蒸发器分离二氯曱烷后，得到黄色粉末状的粗反应产物，含有9NC(26%),12NC(49%)，未反应的喜树碱(11%),和其他副产物(14%)。所有这些反应的HPLC分析结果在表5中所示。实施例9在不同体积的硫酸中喜树碱用KN03和T1N03(比例1.0/1.3)的组合物的硝化按照实施例8的一般方法，只是KNOs和T1N03与表6所示的不同体积硫酸一起使用。结果也在表6中所示。实施例10制备9-硝基喜树碱的方法将喜树碱(4.0g，0.0115mol)加入在1000ml三口烧瓶中的300ml浓硫酸中。在搅拌约15分钟后，同时加入KNO3(2.0g，0.0198mol)和TlNO3(5.0g,0.0188mol)。混合物在室温下搅拌72小时后在搅拌下倒入3500ml冰水中。黄色悬浮液用总量3300ml二氯曱烷(1500mlx1;和900mlx2)萃取3次。合并的萃取液用无水硫酸钠干燥8小时。在过滤后用旋转蒸发器分离溶剂。剩余物用色谱法分离。将粗的9-硝基喜树碱在无水乙醇中回流2-4小时。用从乙醇中再沉淀得到的纯产物(9NC)是浅黄色粉末，(mp268。C,收率20%)NMR:1.05(3H,t,J二7.40Hz,C19-甲基质子)，1.92(2H,m,C18-亚曱基质子)，3.82(1H,s,C20-OH),5.40(2H,s，C5-亚甲基质子)，5.55(2H,dd,J=14.21Hz,14.21Hz,C17-亚曱基质子)，7.70(1H,s,C14-H)，7.92(1H,t，J=8.40Hz,Cll邻,8.48(1H,d,风35Hz,C10-H),8.55(1H，d,J=8.35Hz,C12-H),9.36(1H，s,C7-H);massm/e(相对强度)393(M+,100%),364(M-C2H5,35%),349(48%)，334(25%),320(25%),293(35%),274(8%),262(8%),246(15%)，234(6%),218(20%)，205(8%),190(9%),177(5%),164(3%),151(3%),137(5%),123(4%),109(5%),95(5%)，75(3%),60(23%);精密质i普393.096(实验值)，393.096(C2。H,sN306计算值)。实施例119一硝基喜树碱的HPLC的纯度分析仪器由贝克曼控制器组成的HPLC系统，所述控制器有两个110A泵和2ml定量注射管。UV检测器是SPD-110AV型检测器(Shimadzu,Kyoto,日本)。HPLC检测器用于监测在220nm的UV吸收。分析用的集中软件是EZCChrome(Shimadzu,日本)和FLO-ONe/beta(Ra-diomaticInserumenes,Meridian,CT)。C-8Microsorb来自RaininInserument(Woburn,MA)。HPLC分析试样的反相HPLC分析用乙腈-乙酸乙酯-水流动相体系进行。分析在室温下以流速lml/min进行。9NC浓度约O.lmg/ml乙腈溶液用将其溶于所述溶剂中制备。取出一份上述溶液300ia1,加入700|110.1%乙酸水溶液中。在振动约10秒后，通过2ml管将上述溶液注入柱中，用70%含有0.1%乙酸的水和30%乙腈作为流动相进行色:^普分析第一个5分钟。然后流动相梯度在4分钟周期内按程序升至100%乙腈。在15分钟内得到完全的HPLC谱图。9NC纯度通过测定在254nm的UV峰面积和计算与9NC峰有关的百分数决定。9NC纯度至少96%。在这些条件下9-硝基喜树碱的保留时间约6.5分钟。表1.在不同溶剂中喜树碱用KN03的硝化a<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>a.喜才对石咸0.5g,;肖酉臾確甲0.5g,;容剂30ml,反应时间24小时，反应溫度二!ll溫cb.TFAA表示三氟乙酐。c.%CPT表示喜树碱％回收率和CPT表示喜树碱。d.9NC表示9-硝基喜树碱和12NC表示12-硝基喜树石成。表2.在硫酸中喜树碱用各种硝酸盐的硝化<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>BiON〇3111748241/1.528Cu(N03)22.5H2022531241/2.475Hg(N03)2H2022431351/2.065Ca(N03)24H2020491301/2.569Ba(N03)217543201/3.271Zn(N03)26H20214419161Z2.165Mg(N03)26H2023459231/2.068Co(N03)26H2021410381/2.062Sr(N03)222361411/1.658Pb(N03)2185013191/2.868A1(N03)39H2017461361/2.763Fe(N03)39H2023510261/2.274Cr(N03)39H20132846131/2.241La(N03)36H2011342541/3.145a.对每个反应喜树碱0.5g(0.0014mo1),H2SO4:20ml,硝酸盐0.0070mol.72小时，和室温。表3.在硫酸中喜树碱用两种不同硝酸盐组合物的硝化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>a.对每个反应喜树碱4.0g(0.0115mol),硫酸lOOml，72小时、和室温。b.A(N03)m与B(N03)n的摩尔比2.0:1.0。c.K/Cu表示相应的KN03/Cu(N〇3)22.5H20，同样用于其他组合物。表4在硫酸中喜树碱用三个或更多个硝酸盐组合物的硝化<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>a.对每个反应喜树碱4.0g(0.0115mol)，硫酸100ml,72小时，和室温。b.在试剂的组合物中所有硝酸盐的摩尔比是1:1:1。c.K/TI/Cu表示相应的KN03/TlN03/Cu(N03)22.5H20，同样用于其他试剂。表5.在硫酸中喜树碱用不同比例的KN03和TION03组合物的硝化a<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>a.喜斗对石威4.0g,硝酸钾2.0g,石肖酸铊4.0g，反应时间72小时，反应溫二室溫o当然，前面的一般说明和后面的详细说明仅是示例性的和说明性的和用来提供要求保护的本发明的进一步说明。权利要求1.制备9-硝基喜树碱的方法，包括在足以生成所述9-硝基喜树碱的温度和时间下，将20-喜树碱与至少一种无机硝酸盐和至少一种对催化生成硝离子有效的酸反应。2.权利要求1的方法，其中所述20-喜树碱是外消旋的20-喜树碱或20(S)-喜树碱。3.权利要求2的方法，其中所述20-喜树石成是20(S)-喜树碱，且所述9-硝基喜树碱是9-硝基-20(S)-喜树碱。4.权利要求l的方法，其中所述酸是硫酸、三氟乙酸或三氟乙酐。5.权利要求1的方法，其中所述无机硝酸盐是KN03;NH4N03;LiN03;AgN03;T1N03;BiON03;Cu(N03)2.2.5H20;Hg(N03)2'H20;Ca(N03)2.4H20;Ba(N03)2;Zn(N03)2.6H20;Mg(N03)2,6H20;Co(N03)26H20;Sr(N03)2;Pb(N03)2;A1(N03)39H20;Fe(N03)3奶20;Cr(N03)3"9H20;La(N03)3.6H20;或其混合物。6.权利要求1的方法，其中所述无机硝酸盐是至少两种无机硝酸盐的混合物。7.权利要求6的方法，其中所述无机硝酸盐包括KNO3和至少一种其他无机硝酸盐。8.权利要求6的方法，其中所述无机硝酸盐包括KN03和Cu(N03)2.2.5H20;KN03和HN03;KN03和Hg(N03)2.H20;KN03和Ca(N03)24H20;KN03和Ba(N03)2;KN03和Zn(N03)26H20;KN03和Sr(N03)2;KN。3和Pb(N03)2;KN03和A1(N03)3.9H20;KN03和Fe(N03)39H20;LiN03和Hg(N03)2.H20;LiN03和Cu(N03)22.5H20;LiN〇3和Co(N03)26H20;AgN03和Cr(N03)39H20;Cu(N03)2.2.5H2〇和Fe(N03)3.9H20;Hg(N03)2H20和Fe(N03)3.9H20;NH4N03和Cu(N03)2.2.5H20;KN03、顶03和Cu(N03)22.5H20;KN03、T1N03和Zn(N03)2'6H20;KN03、T1N〇3和Pb(N03)2;KN03、Cu(N03)2.2.5H20和Fe(N03)3.9H20;KN03、LiN03、Cu(N03)2'2.5H20、Hg(N03)2.H20和Zn(N03)2,0;KN03、LiN03、Cu(N03)2'2.5恥、Hg(N03)2'H20和Fe(N03)39H20;KN03、LiN03、AgN03、Cu(N03)2■2.5H20、Hg(N03)2H20和Fe(N03)3■9H20;KN03、LiN03、Zn(N03)2.6H20、Cu(N03)2■2.5H20、Hg(N〇3)2H20和Fe(N03)39H20;或KN03、Zn(N03)2.6H20、Cu(N03)2■2.5H20、Hg(N03)2.H20和Fe(N03)39H20。9.权利要求l的方法，还包括用柱色谱提纯9-硝基喜树碱的步骤。10.权利要求9的方法，其中所述柱色谱用含有四氢呋喃和二氯曱烷的洗脱液进4亍。11.权利要求l的方法，还包括用从乙醇中再沉淀提纯9-硝基喜树碱。12.9-硝基喜树碱，其熔点为268。C,其中该9-硝基喜树碱具有如下特征1)'HNMR:1.05(3H,t,J=7.40Hz,C19-曱基质子)，1.92(2H，m,C18-亚曱基质子)，3.82(1H,s,C20-OH),5.40(2H,s,C5-亚曱基质子)，5.55(2H,dd,J=14.21Hz,14.21Hz,C17-亚曱基质子),7.70(1H,s,C14邻,7.92(1H，t,J=8.40Hz,Cll-H),8.48(1H,d,J=8.35Hz，C10-H),8.55(1H，d,J=8.35Hz,C12邻，9.36(1H,s,C7-H);2)质谱m/e(相对强度)393(MT",100%),364(M-C2H5，35%),349(48%)，334(25%),320(25%)，293(35%),274(8%),262(8%)，246(15%),234(6%),218(20%),205(8%),190(9%),177(5。/。)，164(3%),151(3%),137(5%),123(线)，109(5%),95(5%)，75(3%),60(23%);精密质谱:393.096(实验值),393.096(C2。H!5N306计算值)。13.含权利要求12的9-硝基喜树碱的组合物。14.权利要求13的组合物，其中所述9-硝基喜树碱是由乙醇作为起始溶剂的纯化过程形成的。15.权利要求13的组合物，该组合物是用于治疗癌症的组合物。16.权利要求12的9-硝基喜树碱的纯化方法，包括用乙醇作为起始溶剂使9-硝基喜树碱进行纯化过程，所形成的9-硝基喜树碱的熔点为268。C。全文摘要本发明公开了制备9-硝基喜树碱的方法，包括20-喜树碱与至少一种无机硝酸盐反应并用至少一种对催化生成硝离子有效的酸，其中反应在足以生成9-硝基喜树碱的温度和时间内进行。本发明还公开了用柱色谱或再沉淀提纯9-硝基喜树碱的方法。文档编号A61K31/4375GK101186609SQ20071016259公开日2008年5月28日申请日期1998年7月10日优先权日1997年8月5日发明者曹志松申请人:斯特林癌症研究基金会