专利名称：：黄芩素两种晶型物质、其制法和其药物组合物与用途的制作方法
技术领域：
：本发明公开了黄芩素化合物的两种晶型物质及其制备方法，含有黄芩素cx晶型、p晶型及(a+J3)混合晶型的药物组合物，及黄芩素晶型物质作为药物有效成分，在防治神经系统疾病、防治心脑血管系统疾病、炎症及免疫系统疾病、代谢性疾病、老年性疾病以及细菌和病毒感染等疾病中的应用。
背景技术：
：黄芩素(化学名5,6，7-三羟基黄酮；英文名Baicalien)黄芩素分子式在中国专利CN1556108A(公开号)中记载了中国药科大学发明的"黄芩素的提取工艺、药用组合物及制剂制备工艺"[1]。其中，涉及了黄芩素及其药物组合物在治疗各种病毒感染性疾病如肝炎、病毒性感冒、病毒感染引起的急性呼吸道综合症中的应用。在中国专利CN1608619A(公开号)中记载了车庆明发明的"黄芩素的药物组方"[2]。其中，涉及了黄芩素及其药学上可接受的盐类与中、西药物配合组方，用于制备药物的新用途，具体包括用于制备解热镇痛抗炎药物；用于制备抗菌、抗病毒药物；用于制备兼治解热镇痛抗炎和抗菌、抗病毒药物。在中国专利CN1606979A(公开号)中记载了车庆明发明的"黄芩素作为解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗病毒剂的作用"[3]。其中，涉及了黄芩素及其药学上可接受的盐类用于制备解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗病毒的药物。'在中国专利CN1939295A(公开号)中记载了天津市长征医院发明的"黄芩素滴丸剂及其制备方法"[4]。其中，涉及了将天然植物黄芩通过常规的提取和分离，采用新的药用辅料，研制成黄芩素滴丸，用于治疗过敏性皮肤病。在中国专利CN1559400A(公开号)中记载了杭州市第一人民医院张喜平发明的"一种黄芩素液的配制方法"[5]。其中，涉及了一种黄芩素液的配制方法，它在清除氧自由基，减轻组织缺血再灌注损伤，调节免疫功能，保肝利胆，抗感染，抗肿瘤等方面均有一定的作用，是多种中药注射液、口服液、胶囊、饮片、丸散、膏丹的组成成分。在中国专利CN1528289A(公开号)中记载了西安交通大学李宗芳等发明的"治疗急性胰腺炎的复方大黄素黄芩素注射液及其制备方法"[6]。其中，涉及了一种复方大黄素黄芩素注射液的制备方法，它在治疗急性胰腺炎中的作用。
发明内容本发明目的之一是提供黄芩素a晶型与p晶型的两种晶型固体物质样品。本发明目的之二是提供黄芩素CX晶型与(3晶型的两种晶型固体物质样品的制备工艺方法。本发明目的之三是提供含有黄岑素a晶型纯品、(3晶型纯品、或由(a+P)晶型按不同比例配比混合组成的不同晶型的固体药物及其组合物。本发明目的之四是提供含有黄芩素a晶型、(3晶型、(a+p)晶型的固体晶型药物在发挥药物治疗作用过程中而产生吸收率差异影响。本发明目的之五是提供黄芩素晶型物质在防治神经系统疾病、心脑血管系统疾病或其它类疾病中的作用，以及在治疗各种疾病过程中由于晶型作用而提高生物体内血药浓度发挥的治疗作用。本发明目的之六是提供使用黄芩素a晶型、P晶型及(a+(3)混合晶型固体物质和黄酮类化学物质(或其它类化学物质)成分等组合(含不同化学成分种类、不同含量配比)共同作为药物有效成分的原料，开发制成的复方化学药物和其各种制剂，在防治精神神经系统疾病、心脑血管系统疾病、炎症及免疫系统疾病、代谢性疾病(如糖尿病)、老年性疾病以及细菌和病毒感染等疾病中的应用。尤其是在防治神经退行性疾病如老年痴呆、帕金森氏病等疾病中的应用。本发明目的之七是提供使用黄芩素a晶型、(3晶型及(a+(3)混合晶型固体7物质和中草药(含中药复方、中药材、提取部位等)物质组合(含不同种类、不同含量配比)共同作为药物有效成分的原料，开发制成的复方中药药物和其各种制剂，在防治精神神经系统疾病、心脑血管系统疾病、炎症及免疫系统疾病、代谢性疾病(如糖尿病)、老年性疾病以及细菌和病毒感染等疾病中的应用。尤其是在防治神经退行性疾病如老年痴呆、帕金森氏病等疾病中的应用。本专利发明了黄苓素化合物的两种不同晶型(a晶型和P晶型)固体物质存在状态，并发明了两种晶型样品的制备方法；本发明发现黄芩素两种晶型固体物质在生物体内存在吸收性差异，其中(3晶型吸收率大于a晶型，(3晶型的吸收率可比a晶型提高2倍以上，在发挥药物治疗作用中由于吸收率不同，以及由此引起的血药浓度变化而造成药物生物活性作用差异；此外，本发明发现了黄芹素在防治神经系统疾病、心脑血管系统疾病等其它类疾病中的作用，尤其在防治老年痴呆和帕金森氏病中的应用。技术特征1.a晶型黄芩素样品的形态特征l丄本发明的黄芩素a晶型固体物质，其特征在于当使用粉末X射线衍射分析时(CiL^辐射)，表现为衍射峰位置2-Theta值(°)或d值(A)和衍射峰相对强度峰高值(Height%)或峰面积值(Area%)具有如下特征峰值时的晶态固体物质(表l，图1):表1a晶型黄苳素样品的粉末X射线衍射特征峰值<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1830.6792.91181.83.14154.220l扁30,50.71932細2.79293.42.94254.8591.67210.50.42032.8212,72654.03.54355.4791.65491.82.52134.0212.633021.722.44457.2801.60710.61.22235.7802.50753.97.74558.6791.57210.71.42336.1802.48073.02.51.2.本发明的黄芩素a晶型固体物质，在使用DSC图谱(图2)分析时，其特征在于它的DSC图谱中存在有一个吸热峰，转变值为271°C左右。1.3.本发明的黄芩素a晶型固体物质，在使用KBr压片分析时，获得的红外吸收光谱(图3)其特征在于它的红外吸收在341U、30卯.0、1656.5、1618.3、1586.0、1564.4、1505.3、1492.7、1471.0、1449.2、1412.1、1389.2、1338.8、1297.8、1243.9、1211.8、1182.0、1162.4、1103.2、1085.2、1032.5、1021.7、998.6、966.8、916.1、897.6、853.5、826.7、777.6、748.5、733.1、715.9、705.7、682.7、640.0、619.4、599.9、573.2、522.2、488.0、461.0、425.2cm—1处有吸收峰，其中1564.4、853.5、826.7、715.9cm—1峰为黄芩素a晶型固体物质的主要特征吸收峰。1.4.本发明的黄芩素cc晶型固体物质，其熔点值约为267至269。C。2.P晶型黄茶素样品的形态特征2丄本发明的黄芩素(3晶型固体物质，其特征在于当使用粉末X射线衍射分析时(Cu&辐射)，表现为衍射峰位置2-Theta值(°)或d值(A)和衍射峰相对强度峰高值(Height%)或峰面积值(Area%)具有如下特征峰值时的固体物质(表2，图4):表2(3晶型黄芩素样品的粉末X射线衍射特征峰值Peak2陽Thetad(A)Height%Area%Peak2-Thetad(A)Height%Area%110.0008.837830.825.71332.6612.73941.11.3211.2607.851718.915.11434細2.63464.54.413.1006.752652.538.51536.2002.47941.21.8415.2005.824140.528.11636.8792.43521.62,3516.1025.49992.61.71741.2602.18624.43.5618.2404.85979.88.31842.1812.14061.00,5"721.7994.07363.02.21944.1202.05090.80.4822.9183.87733.21.42045.1012.00860.70.4923細3.735622.519.52147.7801.卯200.60.51026.2003.3985跳0跳02249細1.85531.10.91128.6213.11645.33.62352.5191.74100.8U1231細2.79631.31.22.2.本发明的黄苳素P晶型固体物质，在使用DSC图谱(图5)分析时，其特征在于它的DSC图谱中存在两个吸热峰，其转变值分别在111°C左右和146°C左右。2.3.本发明的黄芩素P晶型固体物质，在使用KBr压片分析时，获得的红外吸收光谱(图6)其特征在于它的红外吸收在3411.7、3089.4、1656.7、1619.4、1586.3、1506.0、1492.6、1471.1、1449.2、1390.0、1339.4、1298.5、1243.9、1211.4、1182.1、1103.3、1085.2、1033.7、1021.8、999.0、967.5、916.0、897.9、853.0、826.1、777.3、733.5、717.2、706.4、682.3、640.3、619.5、599.4、573.1、521.8、487.9、461.0、425.7cm—1处有吸收峰，其中853.0、826.1、717.2cm—1峰为黄零素p晶型固体物质的主要特征吸收峰。2.4.本发明的黄芩素P晶型固体物质，其熔点值约为264至266。C。3.黄芩素样品的生物利用度特征本发明的黄芩素ot晶型纯品与(3晶型纯品均可通过口服吸收，但生物利用度存在差异，口服(3晶型纯品的生物利用度比a晶型高2倍以上，两种晶型按任意比例组合后得到的混晶固体物质样品亦存在有不同的生物利用度差异。4.黄茶素防治神经系统疾病及其他疾病的特征本发明的防治疾病的用途特征是包括对神经细胞的保护作用，对神经损伤性动物模型运动障碍和肌肉震颤等症状的改善作用，对多巴胺系统和胆碱能神经系统的诱导的动物运动障碍的治疗作用，以及对相关酶活性的抑制作用。此外，在防治精神神经系统疾病、心脑血管系统疾病、炎症及免疫系统疾病、代谢性疾病(如糖尿病)、老年性疾病以及细菌和病毒感染等疾病中的应用。5.黄芩素样品的给药量与药物制剂特征本发明再一方面还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。本发明的药物制剂特征是含有黄芩素a晶型纯品、(3晶型纯品、(a+(3)晶型任意比例组合得到的混合晶型固体样品，其特征在于每日给药剂量在2000mg范围以内的药物组合物。本发明的药物组合物，含有有效剂量的如权利要求1(a晶型)和\或权利要求4((3晶型)和\权利要求7(a+(3混合晶型)所述的黄芩素固体物质和药学上可接受的载体。药物组合物还含有黄酮类化学物质，或还含有中草药物质。所述的中草药物质包括中药复方、中药材、提取部位。这种药物组合物包含有片剂、胶囊、丸剂、针剂、缓释制剂、控释制剂等不同的药物制剂形式。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合M可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二垸基磺酸钠等;'润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-e-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150mg/Kg体重，优选为0.1-100mg/Kg体重，更优选为1-60mg/Kg体重，最优选为2-30mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。图1a晶型黄芩素样品的粉末X射线衍射图谱图2a晶型黄芩素样品的DSC图谱图3a晶型黄芩素样品的红外吸收图谱图4P晶型黄芩素样品的粉末X射线衍射图谱图5P晶型黄芩素样品的DSC图谱图6(3晶型黄芩素样品的红外吸收图谱图7黄芩素对6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞活力的影响图8黄芩素对6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞ATP含量的影响.图9黄芩素对6-OHDA所致SH-SY5Y细胞凋亡率的影响图10黄芩素大鼠口服(200mg/kg)后不同时间血液中药物浓度具体实施例方式晶型制备实施例1黄芩素a晶型样品的制备方法1:含有一种黄芩素a晶型样品的制备方法，其特征在于使用氯仿、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲垸、甲苯、苯、正己烷、环己垸、DMF、石油醚、氨水、正丙醇、水等单一溶剂系统。先将黄苳素样品完全溶解，放置在温度范围在4。C至250。C，相对湿度范围在90%以内的环境条件下，经过重结晶生长时间1天至60天，制备获得的a晶型固体样品；在黄芩素样品完全溶解状态下，利用真空并控制温度范围在-50至100。C(制冷或加热)制备获得的ct晶型固体样品。实施例2黄芩素a晶型样品的制备方法2:含有一种黄芩素a晶型样品的制备方法，其特征在于使用甲醇、乙醇、异丙醇、95%乙醇，氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲烷、甲苯、苯、正己烷、环己烷、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇、水等溶剂种类，经不同组合(两种或两种以上溶剂混合使用)与不同配比制成的混合溶剂系统。先将黄芩素样品完全溶解，放置在温度范围在4。C至250°C，相对湿度范围在90%以内的环境条件下，经过重结晶生长时间1天至60天，制备获得的a晶型固体样品；在黄芩素样品完全溶解状态下，利用真空并控制温度范围在-50至100°C(制冷或加热)制备获得的a晶型固体样品。实施例3黄芩素(3晶型样品的制备方法1:黄苳素p晶型样品的制备方法，其特征在于使用黄芩素ot晶型固体样品作为原料，经过固体研磨、加压、加热等转晶工艺条件及其它物理转晶方法制备获得的p晶型固体样品。实施例4黄芩素P晶型样品的制备方法2:黄芩素p晶型样品的制备方法，其特征在于使用氯仿、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲垸、甲苯、苯、正己烷、环己垸、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇、水等单一溶剂或混合溶剂系统将黄芩素样品溶解后，再使用冷喷雾方法快速获得P晶型固体样品。制剂实施例5组合药物制剂的制备方法l(片剂)-一种组合药物制剂的制备方法，其特征在于使用几种赋形剂将黄芩素a晶型纯品、P晶型纯品、或由(a+p)晶型按不同比例配比混合而成的固体物质作为组合药物的原料药，制成每片含药量在10~500mg的片剂，表3给出片剂配方表3黄芩素组合药物片剂的制备配方原辅料名称配方用量(g/1000片)配方l配方2配方3配方4配方5配方6配方7黄芩素10.050.0100.0200.0300.0概0500.0乳糖100.0100.0跳o适量适量适量适量淀粉90.050.0低取代羟丙基纤维素3.03.03.03.03,03.03.0微晶纤维素——3.03.03.03.03.0滑石粉10.010.010.010.010.010.0訓硬脂酸镁1,01.01.01.01.01.01.01%羟甲基纤维素钠适量适量适量适量适量适量适量将黄芩素a晶型纯品、卩晶型纯品或由(a+P)晶型按不同比例配比混合而成的原料药制备成片剂制剂的方法是将几种赋形剂与原料药混合均匀，加入1%羟甲基纤维素钠溶液适量，制成软料，过筛制粒，湿粒烘干，过筛整粒，加入硬脂酸镁和滑石粉混合均匀，压片，即得。实施例6组合药物制剂的制备方法2(胶囊)一种组合药物制剂的制备方法，其特征在于使用几种赋形剂将黄芩素a晶型纯品、P晶型纯品、或由(a+(3)晶型按不同比例配比混合而成的固体物质作为组合药物的原料药，制成每粒含药量在10~500mg的胶囊，表4给出胶囊配方表4黄芩素组合药物胶囊的制备配方<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>将黄芩素a晶型纯品、(3晶型纯品、或由(a+p)晶型按不同比例配比混合而成的原料药制备成胶囊制剂的方法是将几种赋形剂与原料药混合均匀，加入1%羟甲基纤维素钠溶液适量，制成湿粒，烘干，过筛整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，插入胶囊制得。或不使用制粒步骤，而直接将原料药与几种赋形剂混合均匀，过筛后，直接装入胶囊制得。药理实验实施例7黄芩素对6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞的保护作用7.1在37°C、5%<302恒温培养箱中，用1640培养基(含10%胎牛血清，青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml)培养SH-SY5Y细胞。细胞铺成单层后，吸除原培养基，加入终浓度100uM的6-OHDA100ul，24h后进行实验。采用MTT法测定细胞活力；采用CellTiter-Gl0⑧Luminescent试剂盒测定细胞中ATP的含量。结果表明10—5mol/L黄苳素能明显抑制6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞活力的下降(图7)。7.2在7.1实施例实验条件下，l(r5mol/L，l(T6mol/L黄芩素能减少6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞ATP含量的下降(图8)，对6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞损伤有保护作用。7.3培养细胞接种于六孔培养板铺成单层后，吸除原培养基，加入不同浓度的黄芩素(l(T5，10—6，l(T7mol/L)预孵育1小时后，加入6隱OHDA，使其终浓度15为100uM，24h后进行实验。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果表明l(T5mol/L，l(r6mol/L黄苳素能减少6-0HDA所致的SH-SY5Y细胞的凋亡(图9)。实施例8黄芩素对MFTP所致帕金森病小鼠模型的神经保护作用8.1黄芩素对MPTP所致帕金森病小鼠模型自主活动作用雄性8周龄C57BL/6J小鼠，随机分为3组，每组10只，分别为对照组、模型组、黄芩素组(280mg/kg)。连续灌胃给药一周后，在第8天灌胃lh后腹腔注射MPTP30mg/kg,连续5天，最后1次给药后1天进行行为学指标检测。使用ZIL-2型小鼠自主活动仪测定小鼠自发活动并计数，将小鼠放入自主活动箱中(高13cm，直径25cm，每次同时测定4只小鼠，每个活动箱中1只)，由记录仪自动记录小鼠活动，测定每只小鼠5min内的活动次数，进行统计学处理。结果显示，与对照组相比，MPTP可明显减少小鼠的自发活动，给予黄芩素(280mg/kg)后可明显增加小鼠的自主活动(表5)。表5.黄芩素对MPTP所致帕金森病小鼠自主活动的影响(5±":组别只数给药前损伤后自发活动数差值(次/5分)变化率对照10179.40±55.81158.70±41.56.20.70±59.37#-11.54模型10208.83±53.6728.91±35.30-184.18±44.49=*-88.22黄芩素(280mg-kg-1)10138.67±31.5232.17±27,53-106.50±34.95#-76.80*P<0.05(与对照组相比)，V〈0力5(与模型组相比)8.2黄芩素对动物运动协调的作用——爬杆测验在上述动物模型制备的条件下，将一直径为2.5cm的软木小球固定于一根长50cm粗lcm的木杆顶端，木杆上缠上纱布以防打滑，然后将被测小鼠放到小球上，记录小鼠爬到杆底的时间值，超过60s的以60s计。结果显示MPTP可以显著延长小鼠的爬杆时间，黄芩素(280mg/kg)能够显著改善MPTP所致帕金森病小鼠爬杆时间的增加(表6)。.表6.黄芩素对MPTP所致帕金森病小鼠爬杆能力的作用(i±s):组别只数给药前损伤后爬杆时间差值(秒)变化率对照1022.67±9.5723.97±12.061.3±7.33#5.74模型1022.18±12.9135.97±14.9813.78±6.46*71.74黄荅素(280mg.kg-1)1027.06±9.8230.25±8.733.19±6.61#11.81*户<0.05(与对照组相比)，#户<0.05(与模型组相比)实施例9黄芩素对6-0HDA定位注射诱发偏侧帕金森病大鼠模型的治疗作用9.1黄苓素对动物模型肌电的影响模型建立3%戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉，以后肢回縮反射消失及角膜反射消失为麻醉指标，必要时可小剂量追加。将大鼠头部固定在立体定位仪上，暴露颅骨后参照Paxinos和Watson鼠脑立体定位图谱，在左侧相当于MFB区的颅骨表面钻孔，直径约2.5cm。清理脑膜后，在三维推动器的引导下行MFB两点注射6-OHDA(4mg/ml)。坐标如下(1)TB:-2.3mm，AP:-4.4mm,ML丄2mm,V:-7.8mm;(2)TB:+3.4mm,AP:-4.0mm，ML:0.8mm,V:-8.0mm。两点注射6-OHDA的量均为3^1，注射速度控制在1]ul/min，每次注射后留针10min后缓慢出针。假手术组定位注射等量的生理盐水。术后7天，14天测试阿朴吗啡(APO，皮下注射，0.2mg/kg)诱导的旋转行为，选取转速〉240r/40tnin的大鼠作为成功PD模型大鼠。将成功PD模型大鼠随机分为两组，每组10只，分别为模型组和黄芩素组(200mg/kg),另外取假手术组IO只作为对照。于第五周进行大鼠震颤行为，自主活动和转棒能力的测定。使用BL-420S生物信号采集器对大鼠后肢进行肌电测定，评价其震颤频率和震颤幅度。结果显示黄芩素(200mg/kg)可明显改善6-OHDA所致帕金森病模型大鼠的震颤反应，减少震颤频率，降低震颤幅度。结果显示黄芩素对MPTP所致帕金森病大鼠有一定的震颤改善作用(表7)。表7.黄芩素对6-OHDA所致帕金森病模型大鼠的震颤作用(5士c):<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>*尸<0.05(与假手术组相比)，#P<ftft5(与模型组相比)—9.2黄苳素对动物模型自主活动影响在上述9.1所制备的动物模型条件下，使用DZIL-2型大鼠自主活动仪记录每只大鼠IO分钟内的活动次数。结果显示黄芩素组大鼠自主活动数与模型组相比有显著的增加，黄芩素可改善帕金森病模型大鼠的自发活动(表8)。表8.黄芩素对6-OHDA所致帕金森病模型大鼠自发活动的影响(i±cO组别只数自主活动(次/10分钟)假手术组10115.00±15.51#模型组1053.30±9.44*黄苳素pOOmg.kg-1)1073,83±18.20#~*P<ft05(与假手术组相比)，#尸<0.05(与模型组相比)实施例10(X晶型与(3晶型的黄芩素固体原料药在体内的吸收特征和血药浓度特征对清洁级大鼠胃内分别给予a晶型、卩晶型黄芩素固体原料药粉末，给药剂量为200mg/kg，在给药后不同时间点内抽取大鼠动脉血测定黄芩素含量(表9，图10)。结果证明不同晶型黄芩素原料药在口服同样剂量的条件下，血液中的药物浓度和达到高峰浓度的时间不同，其中a晶型的血药浓度明显低于p晶型的血药浓度。表9.大鼠口服黄芩素不同晶型样品后不同时间的血药浓度(HPLC检测)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>权利要求1.黄芩素的α晶型，其特征在于，当使用粉末X射线衍射分析时(CuKα辐射)，衍射峰位置2-Theta值(°)或d值()和衍射峰相对强度峰高值(Height％)或峰面积值(Area％)具有如下特征2.根据权利要求1的黄芩素a晶型，其特征在于，其DSC图谱中存在有一个吸热峰，其转变值约在271。C左右。3.根据权利要求l的黄苓素a晶型，其特征在于，其红外吸收光谱在3411.1、3090.0、1656.5、1618.3、1586.0、1564.4、1505.3、1492.7、1471.0、1449.2、1412.1、1389.2、1338.8、1297.8、1243.9、1211.8、1182.0、1162.4、1103.2、1085.2、1032.5、1021.7、998.6、966.8、916.1、897.6、853.5、826.7、777.6、748.5、733.1、715.9、705.7、682.7、640.0、619.4、599.9、573.2、522.2、488.0、461.0、425.2cm"处有吸收峰，其中1564.4、853.5、826.7、715.9cm"峰为黄芩素a晶型固体物质的主要特征吸收峰。4.根据权利要求l的黄芩素a晶型，其特征在于，其熔点值约为267至269。C。5.—种黄芩素P晶型，其特征在于，当使用粉末X射线衍射分析时(Cu^。辐射)，衍射峰位置2-Theta值(°)或d值(A)和衍射峰相对强度峰高值(Height%)或峰面积值(Area%)具有如下特征<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>6.根据权利要求5的黄芩素(3晶型，其特征在于，其DSC图谱中存在两个吸热峰，其转变值分别约在111°C左右和146°C左右。7.根据权利要求5的黄芩素(3晶型，其特征在于，其红外吸收光谱在3411.7、3089.4、1656.7、1619.4、1586.3、1506.0、1492.6、1471.1、1449.2、1390.0、1339.4、1298.5、1243.9、1211.4、1182.1、1103.3、1085.2、1033.7、1021.8、999.0、967.5、916.0、897.9、853.0、826.1、777.3、733.5、717.2、706.4、682.3、640.3、619.5、599.4、573.1、521.8、487.9、461.0、425.7cm—1处有吸收峰，其中853.0、826.1、717.2cm-1峰为黄芩素|3晶型固体物质的主要特征吸收峰。8.根据权利要求5的黄芩素p晶型，其特征在于，其熔点值约为264至266。C。9.含有权利要求1的a晶型、权利要求5的p晶型中的任意晶型纯品黄芩素固体物质、或含有黄芩素两种(a+p)晶型样品可按任意比例经物理混合后组合得到的混合晶型固体物质作为药物活性成分(全部或部分)的原料药。10.黄芩素a晶型的制备方法，其特征在于，使用氯仿、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲垸、甲苯、苯、正己烷、环己烷、DMF、石油醚、氨水、正丙醇、水等单一溶剂系统；先将黄芩素样品完全溶解，放置在温度范围在4°C至250°C，相对湿度范围在90%以内的环境条件下，经过重结晶生长时间1天至60天，制备获得的a晶型固体样品；在黄芩素样品完全溶解状态下，利用真空并控制温度范围在-50至100。C(制冷或加热)制备获得的a晶型固体样品。11.黄芩素a晶型的制备方法，其特征在于，使用甲醇、乙醇、异丙醇、95%乙醇，氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲烷、甲苯、苯、正己垸、环己烷、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇、水等溶剂种类，经不同组合(两种或两种以上溶剂混合使用)与不同配比制成的混合溶剂系统；先将黄芩素样品完全溶解，放置在温度范围在4°C至250°C，相对湿度范围在卯％以内的环境条件下，经过重结晶生长时间1天至60天，制备获得的a晶型固体样品；在黄芩素样品完全溶解状态下，利用真空并控制温度范围在-50至100。C(制冷或加热)制备获得的a晶型固体样品。12.黄芩素(3晶型的制备方法，其特征在于，使用黄芩素a晶型固体样品作为原料，经过固体研磨、加压、加热等转晶工艺条件及其它物理转晶方法制备获得的P晶型固体样品。13.黄芩素P晶型的制备方法，其特征在于，使用氯仿、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲垸、甲苯、苯、正己垸、环己烷、DMF、石油醚、氨水、正丙醇、水等任何一种单一溶剂、或使用甲醇、乙醇、异丙醇、95%乙醇，氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、冰醋酸、甲酸、乙醚、二氯甲烷、甲苯、苯、正己烷、环己烷、二氧六环、DMF、石油醚、氨水、正丙醇、水等中任意混合溶剂，将黄芩素样品溶解后，使用冷喷雾方法快速获得P晶型固体样品。14.一种药物组合物，含有有效剂量的如权利要求1(a晶型)和\或权利要求4((3晶型)和\权利要求7(a+p混合晶型)所述的黄芩素晶型物质和药学上可接受的载体。15.根据权利要求14的药物组合物，其特征在于，还含有黄酮类化学物质。16.根据权利要求14的药物组合物，其特征在于，还含有中草药物质。17.根据权利要求16的药物组合物，其特征在于，所述的中草药物质包括中药复方、中药材、提取部位。18.根据权利要求14-17的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物是片剂、胶囊、丸剂、针剂、缓释制剂、控释制剂。19.权利要求l(a晶型)、权利要求5(P晶型)与权利要求9(a+p混合晶型)中所述的黄芩素晶型物质在防治神经系统疾病、防治心脑血管系统疾病、炎症及免疫系统疾病、代谢性疾病、老年性疾病以及细菌和病毒感染等疾病中的应用。20.根据权利要求19的应用，其特征在于，所述的神经系统疾病包括老年痴呆(阿尔滋采默病)、帕金森氏病；所述的代谢性疾病包括糖尿病。全文摘要本发明公开了黄芩素化合物(化学名5，6，7-三羟基黄酮；英文名Baicalien)化合物的两种晶型物质及其制备方法，含有黄芩素α晶型、β晶型及(α+β)混合晶型的药物组合物，及黄芩素晶型物质作为药物有效成分，防治精神神经系统疾病、心脑血管系统疾病、细菌及病毒感染性疾病、炎症及免疫系统疾病、代谢性疾病以及老年性疾病中的应用，尤其在防治老年痴呆和帕金森氏病中的应用。此外，本发明还涉及使用黄芩素α晶型、β晶型及(α+β)混合晶型固体物质和黄酮类化学物质(或其它类化学物质)和\或中草药物质组合共同作为药物有效成分的药物组合物。文档编号A61P9/00GK101434593SQ200710177330公开日2009年5月20日申请日期2007年11月14日优先权日2007年11月14日发明者何国荣,扬吕,颖常,成银霞,杜冠华,裴利霞申请人:中国医学科学院药物研究所