专利名称：：滇桂艾纳香总黄酮提取物及其药物组合物与制备方法
技术领域：
：本发明涉及植物药滇桂艾纳香有效部位及其提取方法，以及含有滇桂艾纳香有效部位的药物组合物。
背景技术：
：滇桂艾纳香是菊科植物Blumeariparia(BL.)DC的干燥全草，为广西民间常用药材，收载于《广西中药材标准》1996年版。广西民间用于治疗妇女月经过多，经期延长和产后恶露不绝等病症，使用历史悠久，疗效确切。目前在市面上流通的以滇桂艾纳香为主药制成的中成药有滇桂艾纳香颗粒(原名"妇血康"颗粒)，收载于《国家中成药标准汇编外科妇科分册》第一册第590页，主要功能为活血化瘀、止血调经。用于瘀血阻滞所致的月经量多，经期延长。目前对这一品种的研究未涉及到滇桂艾纳香有效部位和活性成份。专利方面有2006年3月29日授权，专利号为ZL2004100130410的"一种治疗妇科疾病的药物的硬胶囊剂及其制作方法"和2005年6月15日公开，申请号为2004100606963的"一种治疗妇科疾病的颗粒剂及其制备方法"等。以上这些专利亦未涉及滇桂艾纳香止血作用的物质基础。
发明内容本发明要解决的技术问题是:对滇桂艾纳香的止血活性(有效部位)进行研究，确定提取分离工艺，以及含有该有效部位的药物组合物。与现有技术相比，具有以下优势以滇桂艾纳香总黄酮提取物作为药用有效部位，单独使用或用于治疗妇科出血症的药物组合物中，患者服用方便，剂量小，每次服用量从原来的lg降低到0.2g左右，副作用小，疗效更确切，质量更稳定，同时适合工业化生产，具有广阔的应用前景。本发明的技术方案如下一种滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备方法，其特征在于按如下方法制备将滇桂艾纳香的水提取液，浓縮成6(TC测得相对密度为1.081.13的浓縮液；取浓縮液，上HPDIOO、D101或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70%乙醇洗脱液；将该洗脱液回收乙醇后，浓縮，干燥，得滇桂艾纳香总黄酮提取物。本发明滇桂艾纳香总黄酮提取物的提取率为2_3%左右(提取物药材)。提取物中总黄酮含量达50-60%(以卢丁为对照的紫外分光光度法)本发明的产品或提取物可以通过适宜的方式制成片剂、颗粒剂、口服液、滴丸、软或硬胶囊剂等各种口服剂型。本发明的滇桂艾纳香总黄酮提取物每日口服剂量在200mg800mg范围，每日给药一次或多次，优选剂量为每日600mg,分3次服用。具体实施例方式实施例1滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备取滇桂艾纳香30kg,切碎，加水浸泡3小时，提取2次，加水量分别为10和8倍，提取时间分别为1.5小时和1小时，滤过，滤液浓缩，浓縮液相对密度为1.10(60'C测)，上HPDIOO大孔吸附树脂柱，上样量为药材重量大孔树脂重量=1.5:1，用水洗脱，再用30%乙醇洗脱，最后用60°/。乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，回收乙醇后浓縮，干燥，得滇桂艾纳香总黄酮提取物0.65kg;以卢丁为对照品，分光光度法测定，提取物中总黄酮含量为60%(测定方法参照中国药典2005年版一部P246:槐花总黄酮含量测定)。实施例2滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备取滇桂艾纳香30kg，切碎，加水浸泡3小时，提取2次，加水量分别为10和8倍，提取时间分别为1.5小时和1小时，滤过，滤液浓縮，浓縮液相对密度为1.13(6(TC测)，上AB8大孔吸附树脂柱，上样量为药材重量大孔树脂重量=1:1，用水洗脱，再用40%乙醇洗脱，最后用70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，回收乙醇后浓缩，干燥，得滇桂艾纳香总黄酮提取物0.80kg;以芦丁为对照品，分光光度法测定，提取物中总黄酮含量为57%(测定方法参照中国药典2005年版一部P246:槐花总黄酮含量测定)。实施例3滇桂艾纳香总黄酮提取物药效试验供试品为每ml含滇桂艾纳香总黄酮提取物100mg的水溶液，相当于每ml含原药材4g。用时将其稀释或浓縮，使各剂量组动物的给药体积相等。本试验的药量均以原药材g/kg表示。[实验动物]小白鼠昆明种，芈^兼用，普通级，由广西药检所动物室提供，颗粒饲料喂养。豚鼠早性，体重370-420g，普通级，购于市场。适应本实验室条件1周后供试验。家兔日本大耳白兔，体重1.8-3.0kg，孚S兼用，普通级，广西职业病研究所动物室提供。[实验条件]实验室温22士2。C(空调)，相对湿度65±5%。[实验材料]已烯雌酚片广州侨光制药有限公司出品。已烯雌酚注射液广州明兴制药有限公司出品。云南白药云南白药集团股份有限公司出品。田七粉云南善美制药有限公司出品。台式自动平衡记录仪上海大华仪表厂产。1、小鼠出血时间的影响试验取小鼠48只，罕S兼用，体重20土2g，随机均分为4组，本品高剂量及低剂量组分别以15、7.2g/kgi.g给药(分别为临床日剂量的25倍、12倍)，连续4天；阳性对照组以云南白药1.5g/kgi.g给药，连续4天；空白对照组i.g.等体积水，以剪尾法测定出血时间；末次给药后30min，置小鼠于固定器中，将小鼠尾尖剪去0.5cm，自断尾出血开始计时，每30秒用滤纸吸血1次，至出血停止(滤纸吸时无血)为止，作为出血时间，与空白组比较作组间t检验。结果见表l。表l对小鼠出血时间的影响结果(min.3T土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注与空白组比较，*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01,以下均同。结果可见，与空白组比较，本品低剂量组出血时间縮短35.1%，差异有显著性意义，提示本品有缩短小鼠出血时间的作用。2、对小鼠凝血时间的影响试验取小鼠48只，罕S兼用，体重23士2g，随机均分为4组，本品高、低剂量组分别以15、7.2g/kg/d的剂量i.g.给药4天；阳性对照组以云南白药1.5g/kg/d的剂量i.g.给药4天；空白对照组i.g.等体积水，以毛细玻管法测定凝血时间；末次给药后60min,以长10cm内径0.8mm的玻管插入内眦球后静脉丛取血，玻管充满血液后拔出，每30秒折断玻管一小段，直至出现血凝丝为止。自采血至出现血凝丝的时间为凝血时间，与空白组比较作组间t检验，结果见表2。表2、对小鼠凝血时间的影响结果(min.7±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>结果可见，与空白组比较，本品高、低剂量组凝血时间分别縮短43.0、21.2%，其中高剂量组差异有显著性意义，提示本品有縮短小鼠凝血时间的作用。3、对豚鼠在体子宫的影响试验取早性无孕家兔2只，试验前2天i.m已烯雌酚lmg/kg。停饲24小时后i.p戊巴比妥纳40呢/kg使麻醉，固定，剖腹暴露一侧子宫，并固定于特制的玻璃罩上，中点缝线连接记录仪，加以1.5g负荷，静候10min，记录一段正常收缩曲线，随即从十二指肠注入本浓缩液3.75ml/kg(相当于原药材15g/kg)，记录给药后子宫收縮曲线。结果见表3。表3、对豚鼠在体子宫的影响结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>结果可见，本品给药后，豚鼠子宫的节律性收縮频率、波幅及张力均有明显的提高，提示本品对豚鼠子宫平滑肌有明显的兴奋作用。4、对兔耳皮下血斑吸收的影响试验取家兔16只，罕$兼用，随机均分为4组。家兔每耳背部皮下分别注射自身血两处，每处O.lml，相距约3.5cm，形成两个血￡，用内径lcm的塑料筒套于血丘外围并紧压，以直径相宜前端平截的玻棒于筒内轻压血丘，使之形成直径lcm的血斑。造型后，本品高、低剂量组分别以15、7.2g/kg/d的剂量i.g.给药；阳性对照组以田七粉0.3g/kg/d的剂量i.g.给药；空白对照组i.g.去离子水5ml/kg。每日给药1次，直至血斑完全吸收为止。以药后第5天血斑直径縮小百分率、血斑半数吸收时间(天)、血斑完全吸收时间(天)为指标，与空白组比较作间t检验。结果见表4。结果可见，与空白组比较，本品低剂量组第5天血斑吸收率达65.5%,差异有非常显著性意义；血斑半数吸收时间及完全吸收时间均縮短，差异有显著性意义，提示本品有促进兔耳皮下血斑吸收的作用。表4、对兔耳皮下血斑吸收的影响结果(7土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>5、兔纤维蛋白溶解功能的影响试验収家兔16只，早6各半，随机均分为4组，本品高、低剂量组分别以15、7.2g/kg/d的剂量i.g.给药；阳性对照组以田七粉0.3g/kg/di.g.给药；空白对照组给等体积水。连续给药7天，以优球蛋白溶解试验法测定纤维蛋白溶解功能，末次给药后次日，麻醉下剖腹，主动脉采血，作优球蛋白溶解时间测定。与空白组比较作组间t检验。结果见表5。表5、对家兔优球蛋白溶解时间的影响结果(rain.7±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>结果可见，本品高剂量、低剂量组的优球蛋白溶解时间分别延长106.1%、23.9%,虽无统计学意义，仍可提示本品有抑制家兔纤维蛋白溶解的趋势。综上实验结果本品能縮短小鼠的出血时间及凝血时间，有延长家兔优球蛋白溶解时间的趋势，具有一定的止血作用；能促进兔耳皮下血斑的吸收，又有一定的活血化瘀作用；对豚鼠子宫平滑肌有明显的兴奋作用。权利要求1、滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，按如下方法制备将滇桂艾纳香的水提取液，浓缩成60℃测得相对密度为1.08～1.13的浓缩液；取浓缩液，上HPD100、D101或AB8型号的大孔树脂柱，用水及含水乙醇梯度洗脱，收集60-70％乙醇洗脱液；将该洗脱液回收乙醇后，浓缩，干燥，得滇桂艾纳香总黄酮提取物。2、根据权利要求1所述滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备方法，其特征在于将滇桂艾纳香水提取液，浓縮成6(TC测得相对密度为1.081.13的浓縮液，取浓縮液，，上HPD100或AB8型号的大孔树脂柱，分别用水及2030%乙醇洗脱后，收集6070%乙醇洗脱液，将该洗脱液回收乙醇后，浓縮，干燥，得滇桂艾纳香总黄酮提取物。3、根据权利要求1所述的滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，上柱时，上样量按药材重量大孔树脂重量计为21:1。4、根据权利要求3所述的滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，上柱时，上样量按药材重量大孔树脂重量计为1.5:1。5、根据权利要求1所述的滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，收集60%乙醇洗脱液。6、根据权利要求4所述的滇桂艾纳香总黄酮提取物的制备方法，其特征在于取滇桂艾纳香切碎，加水浸泡3小时，加水提取2次，加水量分别为10和8倍量，提取时间分别为1.5小时和1小时；将水提液合并，滤过，滤液浓縮成60'C测得相对密度为1.081.13的浓縮液，上HPD100大孔树脂柱，先用水洗脱，再用30%乙醇洗脱，最后用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓縮，干燥，得滇桂艾纳香总黄酮提取物。7、一种用于治疗妇科出血症的药物组合物，其中含有权利要求1的滇桂艾纳香总黄酮提取物和药学上可接受的载体。8、权利要求l的滇桂艾纳香总黄酮提取物，在制备治疗妇科出血症药物中的应用。全文摘要本发明涉及植物药滇桂艾纳香有效部位及其提取方法，以及含有滇桂艾纳香有效部位的药物组合物。该方法是采用大孔树脂吸附，乙醇梯度洗脱分离得到总黄酮提取物。以滇桂艾纳香总黄酮提取物作为药用有效部位，单独使用或用于治疗妇科出血症的药物组合物中，患者服用方便，剂量小，每次服用量从原来的1g降低到0.2g左右，副作用小，疗效更确切，质量更稳定，同时适合工业化生产，具有广阔的应用前景。本发明滇桂艾纳香总黄酮提取物的提取率为2-3％左右，提取物中总黄酮含量达50-60％。本发明的产品或提取物可以通过适宜的方式制成片剂、颗粒剂、口服液、滴丸、软或硬胶囊剂等各种口服剂型。文档编号A61K36/185GK101181329SQ20071019412公开日2008年5月21日申请日期2007年11月28日优先权日2007年11月28日发明者廖慧彬,伟肖,覃唯法,许振朝,谭文明,韦宏官申请人:广西万寿堂药业有限公司;广西南宁允上医药科技开发有限公司