专利名称：：用tcm278对hiv感染进行的长期治疗的制作方法
技术领域：
：本发明涉及通过在相对长的时间间隔间歇地以包含NNRTITMC278的肠胃外制剂给药来长期治疗HIV感染。
背景技术：
：治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染(已知为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病因)仍是主要的医学挑战。HIV能躲避免疫学压力，适应多种细胞类型和生长条件并发展出针对现有药物治疗的抗药性。后者包括核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、核苷酸类逆转录酶抑制剂(NtRTIs)、HIV-蛋白酶抑制剂(PIs)和近期的融合抑制剂。虽然这些药物各自单独使用时可有效抑制HIV，但仍要面对抗药性联合治疗。特别是"HAART"(高效抗逆转录病毒疗法)的引进在抗-HIV治疗中产生了显著的进步，从而大大地降低了HIV-相关的致病率和死亡率。目前对于抗逆转录病毒治疗的指导方针推荐这种三联疗法，甚至用于初步治疗。然而，没有一种现有药物治疗能够完全根除HIV。通常由于不坚持或不持续进行抗逆转录病毒治疗，即使HAART也要面对抗药性的出现。在这些情况下，HAART可通过用另一类的组分取代其组分之一而再次变得有效。如果正确地应用，HAART组合的治疗可抑制病毒数年，多达数十年，使其水平不再能导致爱滋病发作。一类通常用于HAART的HIV药物为NNRTI，其许多种目前已上市，另一些正处在各个开发阶l殳。目前开发中的NNRTI为化合物4隱[[4-[(4-(2-氰基乙烯基)-2,6-二曱基-苯基]-氨基)-2-嘧啶基]-氨基]-苯曱腈，也称为TMC278。该化合物不但显示出明显的抗野生型HIV的活性，而且可抗多种其突变变体。化合物TMC278、其药理活性以及多种其制备程序已描述在WO-03/16306中。各种传统的药物剂型，包括片剂、胶嚢、滴剂、栓剂、口服溶液和可注射溶液示例于本文中。因为其药动学特性以及需要保持血浆水平在最小水平以上，所以目前使用的抗-HIV药物需要以较高剂量频繁给药。需要给药的剂型的数目和/或体积通常称为"药丸负担"。由于许多原因高的药丸负担是不希望的，例如摄取频率，经常与需要吞咽大量剂型所带来的不便以及需要存储并且输送大数目或体积的药丸相关。高的药丸负担增加了病人不服用他们全部剂量的风险，从而未能遵守处方剂量服法。以及降低了治疗的效力，这也导致了病毒抗药性的出现。当病人必须服用不同的抗-HIV剂组合时，增加了与高药丸负担有关的问题。因此，希望提供降低药丸负担的HIV抑制疗法，其涉及以相对小的剂型给药，另外还不需要经常给剂。提供涉及以长的时间间隔(例如一周或更久,或甚至一个月或更久)给予剂型的抗HIV疗法将是有吸引力的。现在已经发现在一周或更久，例如多达一年的时间间隔间歇地给予NNRTITMC278的肠胃外制剂，可使得血浆量足以抑制HIV。这降低了给药的次数，从而有利于药丸负担和病人的服药依从性。
发明内容在一个方面，本发明涉及包含抗病毒有效量的TMC278或其药用酸加成盐以及载体的肠胃外制剂在制备药物中的用途，该药物用于治疗蜂皮HIV感染的对象，其中所述制剂在一周到一年范围的时间间隔间歇地给药。或者，本发明涉及包含抗病毒有效量的TMC278或其药用酸加成盐以及载体的肠胃外制剂的用途，用于治疗被HIV感染的对象，其中所述制剂在一周到一年范围的时间间隔间歇地给药。在另一方面，提供了治疗被HIV感染的对象的方法，所述方法包括以肠胃外制剂给药，该肠胃外给药制剂包含抗病毒有效量的TMC278或其药用酸加成盐以及载体，其中所述制剂在一周到一年范围的时间间隔间歇地给药。在一个实施方案中，本发明涉及如这里阐明的用途或方法，其中肠胃外制剂以一周到一个月范围，或以一个月到三个月范围，或以三个月到六个月范围，或以六个月到十二个月范围的时间间隔给药。在另一个实施方案中，本发明涉及这里阐明的用途或方法，其中肠胃外制剂以每两周一次、或每月一次、或每三个月一次给药，或准备以此频率给药。具体实施例方式用于本发明的化合物为4-[[4-[[4-(2-氰基乙烯基)-2,6-二甲基苯基]氨基]-2-嘧啶基]氨基]苯曱腈，其具有通用名称rilpivirine,也称为TMC278(或之前称为R278474)。TMC278作为属于NNRTIs类的HIV抑制剂处于在临床开发中。TMC278可以石咸的形式或以可药用盐的形式，特别是以酸加成盐的形式使用。可药用盐是指包括治疗上有活性的无毒盐形式。酸加成盐的形式可通过用适当的酸处理碱形式而获得，例如无机酸，如氲闺酸，例如盐酸、氩溴酸等；硫酸；硝酸；磷酸等；或有机酸，例如乙酸、丙酸、羟乙酸、2-羟丙酸、2-氧〗戈丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、2-羟基-l,2,3-丙烷三羧酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、4-曱基-苯磺酸、环己烷磺酸、2-羟基苯甲酸、4-氨基-2-羟基苯甲酸和类似的酸。术语加成盐也包括可书f生自化合物TMC278的水合物和溶剂加成形式。这种形式的例子为例如水合物、醇化物等。TMC278以立体异构体形式、更具体是以E-和Z-异构体形式出现。两种异构体均可在本发明中使用。本文在任何时侯提及TMC278时，都包括E-或Z-形式以及任何这两种形式的混合物。优选用于本发明的TMC278的形式为E异构体，即(E)-4-[[4-[[4-(2-氰基乙烯基)-2,6-二甲基-苯基]-氨基)-2-嘧啶基]-氨基]-苯曱腈，其可称为E-TMC278。也可使用TMC278的Z-异构体，即(Z)-4-[[4-[[4-(2-氰基乙烯基)-2，6-二甲基苯基]-氨基)-2-嘧啶基]-氨基]-苯甲腈，其可称为Z-TMC278)。本文在任何时侯提及E-形式的TMC278(即E-TMC278)时，是指包含纯E-异构体，或任何E-和Z-形式的异构混合物，其中E-形式占优势存在，即异构混合物包含大于50%或特别大于80%的Z-形式，或甚至大于90。/o的E-形式。特别关注的是基本上不含Z-形式的E-形式。在本文中基本上不含是指没有或几乎没有Z-形式的E-Z混合物，例如包含多达90%、特别是95%或甚至是98%或99%的E-形式的异构体混合物。同样地，本文在任何时侯提及Z-形式的TMC278(即Z-TMC278)时，是指包含纯Z-异构体，或任何Z-和E-形式的异构体混合物，其中Z-形式占优势存在，即异构体混合物包含大于50%或特别大于80%的Z-形式，或甚至大于90。/。的Z-形式。特别关注的是基本上不含E-形式的Z-形式。在本文中基本上不含是指没有或几乎没有E-形式的E-Z混合物，例如包含多达90%,特别是95%或甚至是98%或99%的Z-形式的异构体混合物。在本发明中所使用的也包括TMC278立体异构体形式的盐，特别是上述的Z-TMC278或E-TMC278的盐。任何在本文中使用的术语"TMC278"也指碱形式或任何其药用酸加成盐形式，并且还指TMC278的立体异构体形式以及所述立体异构体形式的任何药用酸加成盐。尤其是，术语"TMC278，，指TMC278的E-异构体以及其药用酸加成盐。以本发明的TMC278^会药可足以治疗HIV感染，^f旦是在i午多情况下，建议与其他HIV抑制剂共同给药。后者优选包括其他种类的HIV抑制剂，特别是选自NRTIs、PIs和融合抑制剂的抑制剂。在一个实施方案中，共同给药的其他HIV抑制剂为PI。在另一实施方案中，共同给药的其〗也HIV抑制剂为NRTI。可共同给药的HIV抑制剂可为在包含NNRTI的HAART组合中4吏用的抑制剂。例如另两种NRTIs或NRTI和PI可共同给药。这种共同给药可为口服给药或肠胃外给药。在某些实例中，HIV感染的治疗可仅限于根据本发明的方法以TMC278的肠胃外制剂给药，即作为单一疗法而没有另外的HIV抑制剂共同给药。例如，当病毒载量相对低时，例如当病毒载量(表示为特定体积血清中病毒RNA的拷贝数)低于约200拷贝/ml、特别是低于约IOO拷贝/ml、更特别是低于50拷贝/ml、特别是低于病毒的检测限时，可建议这种选择。在一个实施方案中，这种类型的单一疗法可在用HIV药物组直到血浆内的病毒载量达到前述的低病毒水平后应用。'因此，在另一方面，本发明涉及包含抗病毒有效量的TMC278或其药用酸加成盐以及载体的肠胃外制剂的用途，用于治疗被HIV感染的对象，或用于制备治疗被HIV感染的对象的药物，其中所述制剂在用HIV抑制剂组合治疗所述对象后给药，并且该制剂是在一周到一年范围的时间间隔间歇地给药。或在另一方面，本发明提供用于长期治疗被HIV感染的对象的方法，该方法包括「(i)用HIV抑制剂的组合治疗所述对象；接着(ii)间歇性地以包含抗病毒有效量的TMC278或其药用酸加成盐以及载体的肠胃外制剂给药，其中该制剂在一周到一年范围的时间间隔给药。在一个实施方案中，在前面两^殳所提及的用途或方法中，以TMC278的肠胃外给药制剂的间歇治疗在用抗HIV药物的组合治疗降低病毒载量到低于约200拷贝/ml、特别是低于约100拷贝/ml、更特别是低于50拷贝/ml或低于病毒的检测限后开始或准备开始。TMC278的肠胃外制剂在至少一周的时间间隔或特别是在本文所提及的时间间隔间歇地给药，这意味着肠胃外制剂在没有任何中间另外TMC278《会药的情况下给药。或换句话说，TMC278在通过至少一周的在此期间不进行TMC278给药。因此给药计划简单，需要很少给药次数，从而显著地降低标准HIV药物治疗所面临的"药丸负担"问题。这继而将改善病人对于处方药物治疗的依从性。TMC278的肠胃外制剂可在上述的时间间隔给药。在一个实施方案中，该时间间隔为一到二周，或二到三周，或三到四周的范围。在另一个实施方案中，该时间间隔为一到二个月，或二到三个月，或三到四个月的范围。时间间隔可为至少一周，但是也可为几周，例如2、3、4、5或6周，或为一个月的时间间隔，或几个月的时间间隔，例如2、3、4、5或6个月，或甚至更久，例如7、8、9或12个月。在一个实施方案中，肠胃外给药制剂在一、二或三个月的时间间隔给药。这些介于肠胃外制剂各次给药间的较长的时期在于甚至进一步改善"药丸负担"和依从性。为了进一步改善依从性，当所述制剂以每周的时间安排给药时，病人可依指示在一周的某一天服用其药物，或在以每月的时间安排给药的情况下，在每月的某一天服用药物。TMC278的肠胃外制剂各次给药之间的时间间隔可改变。例如，当认为TMC278的血浆水平过低时，例如当接近下文指定的最小血浆水平时，间隔可更短。当认为TMC278的血浆水平过高时，间隔可更长。在一个实施方案中，TMC278的肠胃外制剂以相同的时间间隔给药，例如每周，或每两周，每个月，或本文所提及的时间间隔。具有相同长度的时间间隔的优点是例如在每周的同一天，或在每月的同一天给药，,人而有助于治疗的依从性。本文所用的术语"治疗HIV感染"涉及治疗被HIV感染的对象的情况。术语"对象，，特别涉及人类。优选该肠胃外制剂以单次给药的方式给药，例如在至少一周的时间间隔后通过一次注射给药，例如通过每周一次注射给药或通过每月一次注射给药。选择给药的TMC278剂量，其为用于本发明的肠胃外制剂中TMC278的量，使得TMC278的血浆浓度在较长的时段期间保持在最小血浆水平以上。在本文中的术语"最小血浆水平，，是指最低的有效血浆水平，后者为提供有效治疗HIV的TMC278的血浆水平，或者换句话说，为有效抑制HIV的TMC278血浆水平。术语"有效治疗HIV"，"有效抑制病毒载量"，或类似的术语是指治疗使得HIV的增殖被抑制到病毒载量相对低的量，例如抑制到病毒载量(表示为特定血清体积中病毒RNA的拷贝数)低于约200拷贝/ml、特别是低于约100拷贝/ml、更特别是低于50拷贝/ml，特别是低于病毒的检测限。"有效量"是指在给药后降低了病毒载量，特别是降低病毒载量到低于上述拷贝数的TMC278的量。术语"有效血浆量"是指那些导致病毒载量降低，特別是低于上述拷贝数的TMC278血浆水平。具体地讲，TMC278的血浆水平保持在约5到约500ng/ml，或约5ng/ml到约200ng/ml，或约5ng/ml到约100ng/ml，或约10ng/ml到约50ng/ml范围的最小血浆水平之上。更具体地讲，TMC278的血浆水平保持在约5到约50ng/ml范围，或在约10到约50ng/ml范围，或在约15到约50ng/ml范围的最小血浆水平之上。在某些实施方案中，TMC278的血浆水平保持在约10ng/ml，或约15ng/ml,或约20ng/ml,或约40ng/ml,或约100ng/ml，或约200ng/ml,或约400ng/ml的最小血浆水平之上。在具体实施方案中，TMC278的血浆水平保持在约13.5ng/ml,或约20.3ng/ml的水平之上。TMC278的血浆水平应保持在这些临界血浆量上，因为在较低量时药物可能不再有效，从而增加了突变的风险。TMC278的给药剂量也取决于其给药的时间间隔。当给药频率较低时，剂量较高。每次给药的剂量应以约0.5mg/天到约50mg/天，或约1mg/天到约20mg/天，或约1mg/天到约10mg/天，或约3mg/天到约7mg/天，例如约5mg/天为基础计算。这对应于约3.5mg到约350mg,或约7mg到约140mg,或约7mg到约70mg,或约21mg到约49mg,例如约35mg的周剂量，或者从约15mg到约1,500mg,或约30mg到约600mg,或约30mg到约300mg,或约卯mg到约210mg，例如约150mg的月剂量。将上述的每天剂量乘以给出的时间间隔的天数获得该时间间隔的剂量或剂量范围。已经发现，一旦给药，TMC278的血浆水平为更稳定或不稳定，即在有限边界内波动。已经发现血浆水平在较长的时段期间接近稳定状态模式。"稳定状态"是指存在于对象血浆中的药物量在较长时段期间保持大致相同的量的状况。TMC278的血浆水平通常不显示任何低于在药物有效时的最小血浆水平。术语"保持大致相同的量，，不排除在可接受范围内血浆浓度的小波动，例如在约30%的范围内，特别是在约20%的范围内，进一步特别是在约10%的范围内。对象血浆中的TMC278浓度(或"C，，)通常以每单位体积的质量表示，典型的为纳克每毫升(ng/ml)。为了方便，在本文中该浓度可称为"血浆药物浓度"或"血浆浓度"。TMC278的血浆浓度可达到相对高的水平，而不会引起显著副作用，但是不应超过最高血浆水平(或Cmax)，其是TMC278引起显著副作用的血浆水平。如本文所用，术语'显著副作用，是指该副作用存在于相关的病人人群中达到该副作用影响病人正常功能的程度。TMC278的Cm"可通过外推细胞化验的测试数据或通过临床测试来确定，并且优选不应超过约1000ng/ml的值。在某些情况下，在给药后立刻可能会有小的初始血浆浓度峰值，在这之后血浆水平达到上述的'稳定状态，。肠胃外TMC278制剂可通过静脉注射给药，或优选通过皮下注射或肌肉注射全合药。本发明基于活性组分TMC278的肠胃外制剂的用途，这样必须选择载体的性质以适合肠胃外给药。载剂可为液体并且可为油状，但是大多数情况下是水性的。在后一情况中，载体包含无菌水，虽然也可包括其他成分。载体也可包含共i^剂，例如醇类如乙醇、丙醇、乙二醇、丙二醇或作为共溶剂的聚合物，例如聚乙二醇(PEG)或多乙氧基化荒麻油(Cremophor)。为了提高活性化合物的溶解度，可将另外的成分添加到活性组分TMC278的肠胃外制剂中，该成分具有促进溶解度的效果，例如为增溶剂和表面活性剂，或该成分同时为表面活性剂和增溶剂。这种另外的成分的例子为环糊精或环糊精衍生物。适合的环糊精为a-、卩-、"环糊精或醚类以及其混合醚类，其中环糊精的葡萄糖酐单位的一个或多个羟基可被以下基团取代d-6烷基，特别是甲基、乙基或异丙基，例如无规甲基化P-CD;羟基Q-6烷基，特别是羟乙基、羟丙基或羟丁基；羧基C广6烷基，特别是羧甲基或羧乙基；Cr6烷基羰基，特别是乙酰基。特别值得注意的配位剂和/或增溶剂为卩-CD、无规甲基化卩-CD、2,6-二甲基-卩-CD、2-羟乙基-卩-CD、2-羟乙基-卩-CD、2-羟丙基-卩-CD和(2-羧基甲氧基)丙基-P-CD，特別是2-羟丙基-p-CD(2-HP+CD)。其他具有表面活性剂特性的这类成分为泊洛沙姆，其为通常符合式HO-[CH2CH20〗x-[CH(CH3)CH20]y-[CH2CH20]z-H的聚氧乙烯、聚氧丙烯嵌段共聚物，其中x、y和z可具有不同的值，市售商品名Pluronk,例如Phironk^F108，对应于泊洛沙姆338,其中x、y和z的平均值分别为128、54和128。其他这类成分为a-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯，特别是维生素ETGPS;聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯(也称为聚山梨醇酯)，市售商品名Tweef,例如Tween⑧80;聚乙二醇(PEGs),例如PEG400。活性组分TMC278的肠胃外制剂可进一步包括悬浮剂和緩冲剂和/或pH值调节剂以及任选的防腐剂和等张(isotonizing)剂。具体的成分可同时具有二或多种这些试剂的功能，例如相当于防腐剂和緩冲剂，或相当于緩冲剂和等张剂。緩冲剂和pH值调节剂应以足够量使用，使得分散液从中性到变为非常轻微的碱性(达到pH值8.5),优选pH值在7到7.5的范围。具体的緩沖剂为弱酸的盐类。可添加的緩冲剖和pH值调节剂可选自酒石酸、马来酸、甘氨酸、乳酸钠/乳酸、抗坏血酸、^檬酸钠/4檬酸、醋酸钠/醋酸、碳酸氢钠/碳酸、琥珀酸钠/琥珀酸、苯甲酸钠/苯甲酸、磷酸钠、三(羟甲基)氨基甲烷、碳酸氢钠/碳酸钠、氢氧化铵、苯磺酸、笨甲酸钠/苯甲酸、二乙醇胺、葡萄糖酸-S-内酯、盐酸、溴化氢、赖氨酸、甲磺酸、一乙醇胺、氢氧化钠、氨基丁三醇、葡萄糖酸、甘油酸、戊二酸(gluratic)、谷氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、三乙醇胺，包括其混合物。防腐剂包含抗菌剂和抗氧化剂，其可选自苯甲酸、苯甲醇、丁基化羟基笨甲醚(BHA)、丁基化羟基甲笨(BHT)、氯丁醇、没食子酸盐、羟基笨甲酸盐、EDTA、粉、氯甲酚、间甲酚、苄索氯馁、十四烷基对甲基吡啶氯化物、乙酸苯汞和)琉柳汞。自由基清除剂包括BHA、BHT、维生素E和抗坏血酸棕榈酸酯以及其混合物。氧清除剂包括抗坏血酸钠、亚硫酸钠、L-半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、硫代甘油、丙酮亚硫酸氬钠、异抗坏血酸、羟丙基环糊精。螯合剂包括柠檬酸钠、EDTA钠和苹果酸。等张剂为例如氯化钠、右旋糖、蔗糖、果糖、海藻糖、甘露糖醇、甘油、山梨糖醇、木糖醇、乳糖、硫酸钠。悬浮液适当地包含从0到10%(w/v),特别是0到6%的等张剂。典型的非离子等张剂是优选的，特别是甘油，因为电解液可影响胶体的稳定性。在某些情况下，TMC27S的肠胃外制剂可以适当的控制释放或持续释放或持续释放载体进行配制或配制在其中。例如，活性成分TMC278可纟皮包封到以可控制的速率緩慢降解并释放活性组分的小聚合微球内。微球的一种形式为其中活性成分被包封在生物可降解聚合物(例如聚丙交酯/聚乙交酯聚合物或共聚物)内的微球。另一种聚合物基技术为MacroMed公司的ReGelTM技术，其使用聚(丙交酯_共_乙交酯)和聚乙二醇的三嵌段共聚物。这些为热敏的和生物可降解的聚合物，其在加热后变成凝胶并且在冷却后恢复其初始状态。这些聚合物/水凝胶体系可在给药温度下作为溶液应用并且在注射位置变成不溶性凝胶。不溶性凝胶沉积物(depot)在注射后立即形成并且在该位置保持几周的时间。药物释放通过结合自聚合物的扩散和聚合物的降解来控制。另一种类型的持续释放可注射剂型是基于脂质体体系的，其可在亲脂性药物或经亲脂改性的前体药物的情况下使用。该脂质体粒子可涂覆上例如聚乙二醇以躲避免疫系统。还有另一种类型的持续释放可注射剂型为SkyePharma公司的称为DepoFoam的微观微球粒子。这些粒子基本上为脂质性质，包含大量小的包封待递送药物的水性区室。选择优选的载剂使得剂型具有良好的耐受性，具有最小或没有副作用。当根据本发明给药时TMC278的肠胃外剂型可对HIV感染提供有效治疗，因为其保持抑制病毒复制的同时降低了病毒载量。有限的药物给药数次数和每次给药后没有不希望的副作用增加了病人对治疗的依从性。当选择显示优良的局部耐受性并且易于给药的肠胃外制剂时，可进一步改善病人的依从性。实施例此实施例示出了目的在于证明TMC278肠胃外制剂给药在较长的时段期间产生稳定的血浆水平的研究。通过增加TMC278肠胃外制剂的剂量，可获得更高的血浆水平，例如约10mg/kg的剂量预期可产生有效血浆水平。通过以一个月的时间间隔间歇地给予该肠胃外制剂，可获得稳定的TMC278的血浆水平，有效地抑制病毒增殖。进行该研究是为了研究在以2.5mg/kg的TMC278的30%二甲基乙酰胺(DMA)/50。/o聚乙二醇400(PEG400)水溶液单一肌肉给药(IM)后，比格犬中TMC278的血浆动力学和绝对的生物利用率。狗以IM给药。本实-睑使用两只雄性比才各犬(狗编号16924和16854),大约3岁并且在实-睑开始阶段重量在11和12kg之间。通过注射制剂到左边(狗编号16924)或右边(狗编号16854)的股二头肌，两只狗以0.1ml/每千克体重肌肉给药。在给药的前一天，将TMC278以25mg/ml配制在30%(w/v)DMA/50%(w/v)PEG400的水溶液中。溶液的成分为TMC278、DMA30%(w/v)、PEG40050%(~)和高热所产生的游离水。TMC278在制剂中的含量使用LC来检测。TMC278在制剂中的浓度为25mg/ml。在给药后0(=给药前)、0.5、1、2、4、8、24、32、48、72、96、144、192、240和312小时从狗的颈静脉收集血液样本(EDTA上4ml)。取样后，立即将血样放置在融化的冰上并且避开光线。在5。C下，将血样以约1900xg离心IO分钟以使血浆分离。在分离后，立即将血浆样本避开光线，放置在融化的水上并且在S-18。C下存储直到分析。将冷冻的血浆样本转移进行生物分析。因为在给药后312小时的血浆样本中仍可检测出TMC278,所以在36、50、64、78、92、106、120、134和148天另外采集两只狗的血样。将这些样本进行类似地处理和分析。在给剂后的232天进行超声检查分析后，在髂淋巴结(注射侧)上、在非注射后腿的月几肉上和在注射侧的肌肉上进4亍活才企0又编号16924狗)。所有组织样本尽可能的避开光线并且存储在融化的冰上。所有样本避开光线并且在S-18。C下存储。最后，在272天采集另外的血样。将该样本以类似于其他血样的方式进行处理和分析。TMC278在狗血浆中的浓度在固相萃取(SPE)后通过合格的研究LC-MS/MS方法进行测定。TMC278的血浆浓度在适当的样本清理后进行测定。使用固相萃取方法(BondElutCertify固相柱，130mg,SPE,Varmn)对样本(O.lml等份血浆)进行萃取。SPE柱用3ml的曱醇、3ml的水和1ml的醋酸IM进行条件化。将3ml的醋酸添加到O.lml等份血浆中后，在柱上提取样本，接着用1ml的水、1ml的1M乙酸、和3ml的曱醇洗涤该柱。用3ml甲醇/NH40H25%(98:2,v/v)洗脱该柱。将提取物蒸干并且在150pi的0.01M曱酸胺(用甲酸调整pH值4)/曱醇(50/50)中重建。将20等份试样以800pl/分的流速注射到反相LC-柱(IOOx4.6毫米ID,配备有3pmHypersilC18BDS)上。洗脱混合物为甲酸胺0.01M(用曱酸调整pH值4)/甲醇(40:60,v/v)。在分开后，到质谱仪的流速为约100nl/分。在连接到HPLC-系统的API-3000系统(应用的生物系统)上进行St丄uciaMS/MS分析。进行测定。组织样本在Milli-Q水中稀释10-倍通过Ultra-Turrax装置进行均质化。组织均浆物(200pl等份)通过添加600pl的甲醇进行提取(包含TMC278和/或R152929和/或甲醇)。在涡旋和离心后，将上清液转移到HPLC小瓶中并且注入20pl等分试样丄C和MSMS的条件与上述相同。较低的定量极限为10.0ng/g组织。样本在生物分析期间需避开光线。将单个血浆浓度-时间曲线用于非-房室药动学分析。测定血浆浓度峰值(Cmax)和对应的峰值时间(Tmax)。从时间0到时间t的AUC(AUCO-t,其中t为与最后可测量的高于定量限的浓度相关的时间点)通过线性/对数梯形法则计算即线性梯形法则直至Tmax:AUC0-Tmax=2[(t1+1-0.(d+C1+1)/2]，和曲线剩余部分的对数梯形法则AUCT咖x-t-S[(tw-t,).(d-C1+1)/In(d/C1+1)],Q和C1+1分别为在时间^和时间t1+1的血浆浓度。外推到无限大的曲线下面积(AUCo—oo)和TMC278在本发明制剂中的绝对生物利用率无法充分计算，因为在给药后的72小时和312小时之间，血浆浓度仍保持相当的恒定或轻微增加。根据tl/2=ln(2)/k计算出在给药后1小时到24小时间(t1/2,h)或8小时到24小时间(t1/2,8-24h)及24小时和72小时间(t!/2,24-72h)的半衰期，k对应于各自时间范围内的速率常数。计算出平均(11=2)血浆浓度和药动学参数。单个和平均0=2)血浆浓度和/或一些基本的药动学参数在表1和表2中示出。在给药后232天采集的组织水平(髂淋巴腺，肌肉)在表3中示出。在以2.5mg/kg的TMC278的30%DMA/50%PEG400水溶液月几肉《合药后，平均血浆浓度峰值(Cmax)总计为31.9ng/ml。在给药后的1到8小时内达到个体血浆水平峰值。C,x后，血浆水平迅速下降直到给药后24小时，接着以63小时的半衰期(t1/2,24-72小时)更緩慢下降至给药后的72小时。给药72小时后，血浆水平保持相当的恒定或轻微地增加，直至给药后的312小时。平均AUC。-M2h值总计为1863ng.h/ml。因为血浆浓度在给药后的72小时和312小时之间仍保持相当的恒定或轻微增加，另外的血样在36、50、64、78、92、106、120、134和148天采取。在此清洗期(wash-outperiod)间，血浆量仍保持相当的恒定(范围1.24-4.23ng/ml)。因此，在髂淋巴结(注射侧)上、在非注射后腿的肌肉上和在注射侧的肌肉上进行活才全。活检在232天仅对编号16924的狗进行。TMC278在肌肉中的水平低于定量极限(IO.Ong/g)。在淋巴结中的量总计为72.6ng/g,其相对于在148天(即平均1.33ng/ml)和在272天(<1.00ng/ml)的血浆浓度较高。表1:在以2.5mg/kg的TMC278的30%DMA/50%PEG400水溶液单一肌肉给药后，比格犬中TMC278的单个和平均(n-2)血浆浓度(ng/ml)以及一些基本药动学参数。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>权利要求1.一种包含抗病毒有效量的TMC278或其药用酸加成盐以及载体的肠胃外制剂在制备药物中的用途，所述药物用于治疗被HIV感染的对象，其中所述制剂在一周到一年范围的时间间隔间歇地给药。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述制剂在一周到一个月范围的时间间隔给药。3.根据权利要求1所述的用途，其中所述制剂在一个月到三个月范围的时间间隔给药。4.根据权利要求1所述的用途，其中所述制剂在三个月到六个月范围的时间间隔给药。5.根据权利要求1所述的用途，其中所述制剂每两周给药一次。6.根据权利要求1所述的用途，其中所迷制剂每月给药一次。7.根据权利要求1所述的用途，其中选择在所述肠胃外制剂中TMC278的有效量使得在较长的时段期间，TMC278的血浆浓度保持在最小血浆水平之上，所述最小血浆水平为使HIV抑制剂有效抑制HIV的最低血浆水平。8.根据权利要求4所述的用途，其中所述血浆水平保持在等于或大于约20ng/ml的水平。9.根据权利要求l-5任一项所述的用途，其中所述制剂通过皮下注射或肌肉内注射《会药。10.—种治疗^皮HIV感染的对象的方法，所述方法包括以包含抗病毒有效量的TMC278或其药用酸加成盐以及载体的肠胃外制剂给药，其中所述制剂以至少一周的时间间隔间歇地给药。全文摘要本发明涉及包含抗病毒有效量的TMC278或其药用酸加成盐以及载体的肠胃外制剂在制备药物中的用途，该药物用于治疗被HIV感染的对象，其中所述制剂以至少一周的时间间隔间歇地给药。文档编号A61K31/505GK101370504SQ200780002426公开日2009年2月18日申请日期2007年1月19日优先权日2006年1月20日发明者G·A·E·范特克卢斯特,G·克劳斯,L·E·C·巴尔特申请人:泰博特克药品有限公司