用于诊断和治疗癌症的抗癌药物的制作方法

专利名称：：用于诊断和治疗癌症的抗癌药物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用于诊断和治疗癌症的聚合物胶束型造影介质和抗癌药物。更具体地，本发明涉及胶束型纳米颗粒造影介质和抗癌药物，其包括化学治疗剂，例如造影材料比如链末端官能化聚合物和氧化铁、以及多柔比星及其可药用盐，其能够诊断和有效治疗癌症并同时减少副作用。
背景技术：
：一般说来，用作将药物递送进有机体的运输载体(transporter)的聚合物需要被生物合成或生物降解。例如，聚合物如PLGA在有机体内被降解成如乳酸和羟基乙酸，从而其对生物体没有有害作用。因此，当药物运输载体是利用生物可降解聚合物制成时，可以预计到多种药物的持续释放(emission)作用。尤其是，对于药物而言，仅当其在预定时间段施用时才可维持恒定的血液水平以表现其作用，当所述药物被包封在由生物可降解聚合物制成的药物运输载体中时，该药物随着该聚合物载体的降解而持续释放。因此，这样的持续释放可应用于多种药物。具有所述释放机制的载体包括微球、纳米颗粒、胶束等。纳米颗粒是一种具有几纳米至几百纳米尺寸的巨大表面积的胶体非均匀分散颗粒。作为多种针对其制备的研究，已经对纳米颗粒进行了深入的性质研究和药物包封，已经充分证明了其作为药物运输载体的可能性。当将纳米颗粒引入到有机体中时，其通过多种方法例如注射、口服、皮肤等被转移。此时，药物的分布有所不同。其中的一种是利用作为胶体分散颗粒的纳米颗粒的药物运输载体。聚合物胶束是药物递送体系中的一种有前途的运输载体。通常，包含两性嵌段共聚物的嵌段共聚物胶束已被用作疏水性药物如化学治疗6200780053127剂的运输载体(Y.KazizawaandK.Kataoka,Drug.Del.Rev.,54(2)，203-222(2002))。单一聚合物胶束由数百个嵌段共聚物组成，其直径为为20-50nm。所述胶束具有两个环状的部分，即紧密堆积的疏水性嵌段的中心和亲水性壳部分。到现今一直在使用的治疗癌症的化学治疗剂的代表性实例包括多柔比星(doxorubicin)或阿德里亚霉素(adriamycin)、顺铂、紫杉醇、5-氟尿嘧啶，其在用于治疗癌症的化学治疗方法中被广泛应用。然而，即使当仅施用治疗量的药剂时，患者也会感觉到严重的疼痛。此症状的原因在于化学治疗剂不仅作用于癌细胞，而且还作用于一般细胞，为解决此问题，当利用纳米颗粒施用化学治疗剂时，由于所述特异性颗粒的尺寸为几纳米到几百纳米，因此其被特异性地转运到血管内壁中细胞连接相对松散的癌细胞组织中，但不能很好地转移到细胞连接紧密的一般细胞中。因此，如果利用这些原则施用化学治疗剂，则可从物理上克服化学治疗剂的非特异性问题。同时，包含化学治疗剂作为药物的药物运输载体的问题之一在于所用的化学治疗剂不连续释放。换句话说，在常规药物运输载体的情况下，在初期在所述载体表面上的化学治疗剂以扩散的形式释放出来，从而在初期的释放相当高。然而，随着时间的推进，释放逐渐变慢，从而难以维持恒定的血液水平。此外，应将大量的化学治疗剂包封在运输载体中。使用大量的化学治疗剂，从而在利用化学治疗剂配制药物运输载体的过程中或者在其它混合过程中的损失率很高。在这一点上，已报道在制备运输载体后在运输载体中有约50。/。或更多的化学治疗剂损失。因此，很多研究者全身心致力于增加用作药物的化学治疗剂的包封率。
发明内容技术问题本发明的一个目标是解决现有技术中存在的上述问题。本发明的另一个目标是同时诊断并治疗癌症。本发明的又一个目标是显著提高常规抗癌化学治疗剂的作用。本发明又一个目标是显著降低常规抗癌化学治疗剂的副作用。本发明又一个目标是显著降低多柔比星的心脏毒性副作用。本发明的另一个目标是将多柔比星特异性地仅转移到癌症区域。本发明的另一个目标是同时诊断和治疗实体癌症。本发明的另一个目标是同时诊断和治疗转移性癌症和原发性癌症。本发明的另一个目标是提供具有优良溶解性和稳定制剂并当其施用给患者时表现出很少副作用的抗癌药物。本发明的另一个目的是转移抗癌药物并起到造影介质的作用，从而诊断疾病并监测疾病的发展。本发明的另一个目的是提供纳米颗粒形式的抗癌药物，从而获得将所述抗癌药物特异性转移到癌细胞组织的把向作用，其中在所述癌细胞组织的血管内壁中的细胞连接相对松散。此外，本发明的一个目的是由于高靶向性而降低抗癌药物的使用量。本发明的另一个目的是使得化学治疗剂能够逐渐释放，从而维持抗癌药物的疗效并防止抗癌药物的副作用。本发明的另一个目的是以等于或小于常规抗癌药物剂量的量获得优良的抗癌作用并减少副作用。技术方案为实现上述目的，提供了一种同时进行诊断和治疗癌症的抗癌药物，其包含如以下化学式1所示的链末端官能化聚合物；[化学式1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中，R是甲基、正丁基、仲丁基、叔丁基或曱氧基，和n是10-500的整数，造影材料；以及化学治疗剂，其中所述抗癌药物是具有胶束结构的纳米颗粒的形式。此外，根据本发明的另一个实施方案，提供了一种进行癌症诊断的聚合物胶束型造影介质，其包含如以下化学式1所示的聚合物；[化学式1义,、乂K其中，R是曱基、正丁基、仲丁基、叔丁基或曱氧基，和n是10-500的整数，以及造影材料，其中所述造影介质是具有胶束结构的纳米颗粒的形式。同时，根据本发明的另一个方面，提供了一种制备聚合物胶束型抗癌药物的方法，所述方法包括第一步将药物溶解在二甲基亚砜(DMSO)中以制备所述药物的DMSO溶液；第二步向所得溶液中加入三乙胺；第三步将链末端官能化聚合物溶解在DMSO中以制备所述聚合物的DMSO溶液；第四步将所述药物的所述DMSO溶液与所述聚合物的所述DMSO溶液混合；第五步向所得溶液中加入造影材料；以及第六步将所得溶液透析和冻干。此外，根据本发明的另一个实施方案，提供了一种制备聚合物胶束型造影介质的方法，所述方法包括第一步将链末端官能化聚合物溶解在DMSO中以制备所述聚合物的DMSO溶液；第二步向所得聚合物溶液中加入造影材料；以及第三步将所得溶液透析和冻干。有益效果本发明的聚合物胶束型抗癌药物可治疗癌症并起到造影介质的作用，从而诊断癌症并监测所述疾病的发展。此外，本发明的聚合物胶束型抗癌药物可显著降低多柔比星的心脏毒性副作用。本发明提供了纳米颗粒形式的抗癌药物，从而表现出将所述抗癌药物特异性转移到癌细胞组织中的靶向作用，其中在所述癌细胞组织的血管内壁中的细胞连接相对松散。此外，由于高靶向作用，可降低所使用抗癌药物的量并显著降低副作用和毒性。而且，当以与现有技术中相等的量使用所述抗癌药物时，由于靶向作用，因而可获得更高的抗癌作用。本发明的聚合物胶束型抗癌药物能够逐渐释放，从而可长期维持药物的疗效并还可避免短期的大量释放。此外，本发明的聚合物胶束型抗癌药物具有优良的溶解性和稳定的制剂，并且当施用给患者时表现出很小的副作用。根据以下详细描述并结合附图，本发明的上述和其它目的、特征和优点将更明显，其中图1显示根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型抗癌药物的结构；10图2显示根据本发明一个实施方案的PEO-TMA-FA聚合物的FT-IR光语；图3显示根据本发明一个实施方案的PEO-TMA-FA聚合物的FT國匪R谱；图4显示根据本发明一个实施方案的PEO-TMA-FA聚合物的GPC曲线；图5显示根据本发明一个实施方案制备的修饰型mPEG的NMR镨；图6显示根据本发明一个实施方案制备的修饰型mPEG-TMA的匪R语；图7显示根据本发明一个实施方案制备的修饰型mPEG-TMA-TA的匪Ri普；图8-10是显示根据本发明一个实施方案制备的聚合物胶束型造影介质和抗癌药物之结构的照片，所述结构利用低温-TEM(BIO-TEM(生物透射电镜)，可商购自FEICO.(USA);型号TecnaiG2Spirit))进行测量；图11-14是显示根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型造影介质的造影作用的照片；图15是显示根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型抗癌药物的心脏毒性试验的图16是显示根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型抗癌药物的胞吞作用试验的图17和18是显示施用聚合物胶束型抗癌药物后血浆浓度随时间推进而变化的图19和20是显示施用聚合物胶束型抗癌药物后测量药物在每种器官中分布程度的生物分布试验的结果的图21显示多柔比星的特征性峰；图22显示根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型抗癌药物的HPLC峰；图23是显示仅使用DMSO作为溶剂的情况和使用DMSO与水的混合溶液作为溶剂的情况之间包封率差异的图24和25是显示给大鼠施用聚合物胶束型抗癌药物后胂瘤生长的测量结果的图；以及图26和27是显示给大鼠施用聚合物胶束型抗癌药物后肿瘤生长的照片。最佳实施方式在下文中，将更具体地描述本发明。在本发明的一个实施方案中，化学式1的聚合物可以是链末端官能化的聚环氧乙烷。在本发明的另一个实施方案中，化学式l的聚合物可以是链末端官能化的曱氧基聚乙二醇(m-PEG)。具体地，当化学式1中的R是甲基、正丁基、仲丁基或叔丁基时，所述聚合物是链末端官能化的聚环氧乙烷。同时，当化学式l中的R是曱氧基时，所述聚合物是链末端官能化的曱氧基聚乙二醇(m-PEG)。当化学式1中的n小于10时，难以形成作为聚合物的胶束。当n大于500时，所述胶束颗粒的尺寸太大，以致于难以将胶束靶向性地仅转移到所期望的癌细胞中。在本发明的一个实施方案中，所述链末端官能化聚合物优选数均分子量为110023000。当分子量小于1100时，难以形成作为聚合物的胶束。当分子量大于23000时，胶束颗粒的尺寸太大，以至于难以将胶束靶向性地仅转移到所期望的癌细胞中。根据本发明的一个实施方案的抗癌药物的组合物中，链末端官能化聚合物:氧化铁:多柔比星或其可药用盐的重量比为5~50:2.5~20:1~2。当氧化铁偏离此范围时，所述胶束纳米颗粒就不能形成。当多柔比星的量太小时，包封率就低；当多柔比星的量太大时，所述胶束纳米颗粒就不能形成。当聚合物的量太小时，难以形成胶束结构；当聚合物的量太大时，多柔比星或其可药用盐以及氧化铁的包封率就降低。多柔比星或其可药用盐的量是指其可被包封进本发明的胶束型纳米颗粒中的合适比例。所述胶束纳米颗粒的尺寸是30~200nm,优选50~100nm。在根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型造影介质组合物中，造影材料可选自氧化铁、釓、锰、铝、硅、钡、钇和稀土元素，并且优选氧化铁。氧化铁(Fe304)有助于细胞彼此粘附、移动及生长，尤其在MRI造影作用和胶束形成中发挥着重要作用。氧化铁优选为纳米颗粒。在根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型抗癌药物中，作为药物被包封的化学治疗剂可选自多柔比星、顺铂、紫杉醇、5-氟尿嘧啶及其可药用盐，并且优选多柔比星。可作为化学治疗剂用于本发明一个实施方案的抗癌药物中的多柔比星的可药用盐包括酸加成盐或碱加成盐。可药用碱加成盐的实例包括钠盐、钾盐、钓盐、铵盐、有机胺盐或镁盐或类似盐。可药用酸加成盐的实例包括源自诸如以下的无机酸的盐盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、硫酸、硫酸盐(dibasicsulfate)、氢碘酸或磷酸，以及源自诸如以下的相对无毒的有机酸的盐乙酸、抗坏血酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、乳酸、苹果酸、谷氨酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对曱苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸、乳糖酸等。此外，还包括氨基酸如精氨酸的盐，有机酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸的盐。其中，盐酸盐是优选的。在根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型抗癌药物中，所述癌症优选是实体瘤。在根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型抗癌药物中，所述癌症可以是原发癌或转移癌。图l显示了根据本发明一个实施方案的聚合物胶束型抗癌药物的结构。其中，造影材料是氧化铁(Fe304),所述药物是作为化学治疗剂的多柔比星或其可药用盐(Dox)。显示出链末端连接有叶酸的聚环氧乙烷(PEO)或甲氧基聚乙二醇(m-PEG)形成了胶束结构，并且氧化铁和多柔比星被包封其中。多柔比星及其可药用盐是用于治疗实体瘤的静脉内药物，并被广泛用于治疗多种癌症，例如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、血液恶性肿瘤等。氧化铁有助于细胞彼此粘附、移动和生长。当细胞粘附于氧化铁时，癌细胞吞食多柔比星，从而抗癌药物仅进入癌细胞而不进入其它正常部位。多柔比星具有极高的抗癌作用。然而，当实际上给患者施用多柔比星时，由于多柔比星的副作用，患者可耐受的其剂量非常有限。当施用多柔比星过多时，其高度损伤正常心脏细胞，从而可引起心危象。这些副作用可通过药物的靶向转移和药物的緩慢释放而得到减少。在本发明的抗癌药物中，所述胶束结构在水溶液中自发形成。此外，所述抗癌药物具有以下性质取决于所述生物可降解聚合物的降解速率，药物逐渐被释放。同时，通过本发明制备的所述聚合物胶束型抗癌药物的药代动力学如下。该胶束结构避免了肾排斥并增加了药物通过被动扩散进入靶标部位的血管通透性。此外，由于胞吞作用的增加和多药抗性(MDR)作用的减少，该胶束结构在有机体中的药物摄入量增加。此外，随着PEO骨架或与药物键合的mPEG被化学降解，在药物-PEO聚合物或药物-mPEG聚合物部分上的药物被逐渐释放。本发明的聚合物胶束型抗癌药物起到药物制剂中有效成分的作用并且与可药用载体、稀释剂或赋形剂一起构成药物制剂。同时，作为有效成分的本发明聚合物胶束型抗癌药物的含量优选占总组合物的0.001~99wt%。可用的载体、赋形剂或稀释剂包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钧、纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油，并14且可使用其中的一种或多种。此外，将所述抗癌组合物制备成药物时，其还可包含填充剂、抗聚集剂(anti-aggregatoryagent)、润滑剂、润湿剂、调味剂、乳化剂或抗菌剂等。本发明的聚合物胶束型抗癌药物可以口服、胃肠外、直肠、局部、经皮、静脉内、肌肉内、腹内和皮下施用途径进行施用。然而，最优选的施用途径是静脉内施用。此外，本发明的聚合物胶束型抗癌药物的剂量可根据患者的年龄、性别、体重、待治疗的具体疾病或病理状态、以及疾病或病理状态的严重程度、施用途径和处方医师的判断而不同。本领域技术人员可基于上述因素确定剂量。通常，多柔比星或其可药用盐的剂量为1.2~2.4mg/kg/天。本发明的聚合物胶束型抗癌药物可靶向转移。因此，当其以通常施用的量施用时，疗效可更高。此外，甚至当药物以低于其通常施用量的量施用时，由于能进行靼向转移，从而作用与其以通常量施用的情况相似。因此，可显著降低本发明抗癌药物的剂量。本发明的实施方式在下文中，参考优选的实施方案，将更具体地描述本发明。本领域技术人员可容易地理解，提供所述实施方案以举例说明本发明，而不是限制本发明。实施方案<制备实施例1:PEO-TMA-FA(聚环氧乙烷-偏苯三酸酐(tritrimellicticanhydride)國叶酸)聚合物的制备>根据以下方法制备了化学式2的PEO-TMA-FA。粒径f复径rWt.Wnm)氳化铁包封率(％、药物包封車(％)实施方式1116.5削2."4.5实施方式2114.0師.9、4.6实施方式3115.6微.2)4.7实施方式4107.0<"87.414.7实施方式5150.7n99.7、3.2实施方式6125.5m5.2、3.4实施方式7118.4U01.4、3.4实施方式894.8f67.5、4.2实施方式9100.6$2.0、4.3实施方式1099.4r75.8)4.7实施方式11102.9"8.7、4.7实施方式1297.3f95.4)4.5实施方式13109.4險4、4.4_实施方式14110.4亂6、4.5实施方式1595.4f80.0、4.5实施方式16102.0r72.2、3.1实施方式17128.6H10.7、实施方式18100.6,-S、26<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>*直径测量尺寸时三种测量值的平均尺寸，即，根据光散射测量的尺寸、根据重量测量的尺寸和根据数目测量的尺寸。*Wt:根据重量测量的尺寸*包封率(％):氧化铁和药物的包封率是指测量三次的平均值。误差范围±0.2才艮据以下方法，利用BIO-TEM(BiologicalTransmissionElectronMicroscopy,TecnaiG2Spirit型，FEICO.(USA))测量了才艮据实施方式4和23制备的聚合物胶束型造影介质和抗癌药物以及PEO-TMA-FA聚合物的冷冻-TEM。首先，将明胶在生理盐溶液中混合成10%,从而使得明胶在37匸下成为液相。将所述液相明胶与所述聚合物胶束样品充分混合，然后使其在室温下固化。然后，利用超薄切片机将样品切成厚度为70nm的片。然后，将其置于涂碳格栅中，然后进行TEM测量。测量结果显示在图8-10中。图8显示了对聚合物PEO-TMA-FA的结构的测量，图9和10分别显示了对根据实施方式4和23制备的聚合物胶束的结构的测量。如图所示，可以看出，根据这些实施方式制备的造影介质和抗癌药物所具有胶束的类型并Jbl粒径为50100nm的纳米颗粒。<实验实施例2:聚合物胶束型造影介质的造影作用的测量>正常小鼠的肝造影作用为检查在小鼠肝脏中的造影作用，将雄性SD大鼠麻醉。然后，分别将根据实施方式10和21制备的造影介质以0.9cc(固定量)注射iMa静脉中，以便获得MR图像。其中，实施方式10和21的结果显示在图11和12中。左图是T2造影前的照片，右图是T2造影后的照片。可以看出，在标记了T2的图像中，在注射MR造影介质后肝的信号强度降低。换言之，可以看出，所iiit影介质适合用作肝的MR造影介质。肝癌模型小鼠的肝细胞瘤造影为建立肝细胞瘤模型，给8周龄的SD大鼠提供以1:10,000比例稀释的二乙基亚硝胺的7jC溶液12周直到产生肿瘤。在饲养10周后检查到大鼠中已产生肝细胞瘤后，向大鼠尾静脉中以2mL/kg(固定量)分别注射根据实施方式10和21制备的MR造影介质。结果可见，在标记了T2的图像和标记了12*的图像中可见大鼠肝细胞瘤的造影作用。其中，实施方式10和21的结果显示在图13和14中。如图13和14中所示，当显示其中肝实质低的信号强度时，其中肝细胞瘤相对高的信号强度也显示出来，从而可容易地发现肝细胞瘤，并且获得与市场上4吏用的Resovist相同的作用。此外，由于造影介质是含铁的纳米颗粒，所以纳米颗粒被选择性地摄入肝细胞瘤中。因此，可以预见，肝细胞瘤信号强度的目标区域(ROI)将降低。事实上，如图13和14所示，肝细胞瘤中信号强度的ROI降低。<实验实施例3:聚合物胶束型抗癌药物的MTT测量毒性试验>毒性试验在KB(A^皮癌)细胞和A549(人肺癌)细胞中测量了生物可降解聚合物胶束型抗癌药物的毒性。将细胞用200jiLRPMI1640以5xl(^细胞/mL稀释，并铺板于96孔细胞培养板中。24小时后，利用不同浓度的细胞培养基处理游离多柔比星的溶液(FD)、空白胶束和根据实施方式23制备的其中包封有多柔比星的抗癌药物(胶束多柔比星，MD),然后将其孵育48小时(37"C，5%C02)。孵育后，以PBS清洗三次，将含有20jiLMTT(四唑鎗盐)的100nL培养基应用于每一孔，然后再次孵育4小时。向每一孔应用100nLDMSO并将板强烈振荡以便溶解细胞。利用ELISA读数仪在540nm测量吸光度以检查细胞毒性的程度。MTT测量结果显示在图15中。在图15中，MD显示根据实施方式23制备的胶束溶液。从细胞毒性的检查结果可以看出，与FD(游离多柔比星)相比，在所测试浓度范围内MD具有更高的杀死癌细胞的能力。机理研究从韩国细胞系库(KoreanCellLineBank)中获得KB(A^皮癌)细胞和A549细胞(人肺癌)。将每种细胞系培养在RPMI1640培养基(10%胎牛血清，100单位/mL青霉素，0.1mg/mL链霉素)中。在培养细胞中，全部时间都维持37X:,5%C02和卯。/。湿度的条件。在叶酸竟争性抑制试验中，添加了叶酸。在KB细胞(或Caco-2，HepG2)(其中叶酸受体大量表达)和A549细胞(其中叶酸受体未表达)中比较了游离多柔比星的溶液(FD)和PEO-TMA-FA/Fe/Dox(实施方式23)的胞^^^作用的量。将才艮据实施方式23制备的游离多柔比星(20nM)和PEO-TMA-FA/Fe/Dox(20jiM)分别与叶酸(2mM)—起孵育3小时，然后以PBS清洗3次。然后收集细胞。随后，利用上述定量方法测量被引入细胞中的多柔比星的量。结果示于图16。从结果可以看出，多柔比星被KB细胞摄取要大大多于被A549细胞摄取。换言之，可间接检查叶酸的靶向功能。<实验实施例4:聚合物胶束型抗癌药物的緩释检查/药代动力学研究>血浆浓度随时间的变化使用氯胺酮和乙酰丙噢将SpragueDawley(SD)成年雄性大鼠轻度麻醉。然后，使用生理盐溶液进行股静脉插管，利用聚乙烯管(PE-50,intramedic,Clay-Adams)(其中填充40I.U./mL的生理盐溶液)进行动脉插管，对其进行肝素处理。在经过适当的恢复期后，通过静脉分别施用10mg/kg(基于多柔比星)游离多柔比星的溶液和根据实施方案23制备的多柔比星的聚合物胶束制剂。在施用后0(空白)、1、5、15、30、60和120分钟，分别取样血液0,3mL，然后将其离心分离(13,000rpm,3分钟)以分离出约0.1mL血浆。然后，除去蛋白质，IC^以HPLC进行分析。使用采用^jt目C-18柱(Shim-packCLS-ODS，4.6mm内径，250mm长，5m粒径)的HPLC法。向所取的0.1mL血浆样品中加入50内标物溶液(2nL/mL多柔比星)、100jiL甲醇和1.0mL乙酸乙酯。4混合物29溶液摇动3分钟并离心分离3分钟(3,000rpm)以仅財机层(1.0mL)，然后将其以真空离心浓缩器(speed-vac)干燥。将残余物重置于300流动相中，然后将其中100|JL直接注入HPLC系统中。使用去离子水(以磷酸调节pH=2.5):乙腈=6:4的溶液作为HPLC系统的流动相，流速为1mL/分钟。使用470nm的齓t波长和565nm的发射波长的荧光分析法作为HPLC检测方法。通过将多柔比星溶解在曱醇中从而使其为0.05、0.1、0.5、l和3ng/mL而制备用于制作校正曲线的多柔比星标准溶液。当制备生物样品校正曲线时，用100nL0.05、0.1、0.5、l和3照/mL的多柔比星标准溶液替代100jiL甲醇用于预处理。然后，制作校正曲线，从中获得血浆中的多柔比星。结果示于图17和18中。图17显示了实施方式23的结果，图18显示了实施方式26的结果。由图17和18可见，当施用才艮据实施方式23和26制备的聚合物胶束型抗癌药物时，与施用FD(游离多柔比星)的情况相比，血液中的多柔比星浓度在每个取样时间都增加。根据由血液水平对时间作图而得到的曲线下面积(AUC)，对于聚合物胶束型抗癌药物而言，AUC增加了5倍或更多。因此，总清除率(CL)(其通过利用AUC划分剂量)也增加(参考表2)。这意味着所述聚合物胶束型抗癌药物比FD(游离多柔比星)暴露于身体更长时间。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><实验实施例8:施用聚合物胶束型抗癌药物后大鼠中肺瘤生长的测量>为制备肝细胞瘤模型，给8周龄的SD大鼠提供以1:10,000比例稀释的二乙基亚硝胺的水溶液12周直到产生肿瘤。肝细胞瘤形成了100%。在饲养10周后检查是否已产生肝细胞瘤。当最大肿瘤的尺寸为直径5mm时，向大鼠尾静脉中以2mg/kg分别注射根据实施方式23和26制备的生理盐溶液、多柔比星(ADM)、聚合物胶束型抗癌药物(YCC)。然后，进行MRI照相。每5天进行静脉输液3次。然后，在最后一次静脉输液后一周，通过MRI照相比较肺瘤的尺寸。图24显示实施方式23的肺瘤尺寸和重量的变化，图25显示实施方式26的肿瘤尺寸和重量的变化。图26是实施方式23的MRI照片，图27是实施方式26的MRI照片。如图24和25所示，可以看出，本发明的聚合物胶束型抗癌药物最大程度地抑制肿瘤生长。此外，本发明的聚合物胶束型抗癌药物不引起体重降低。如图26和27所示，生理盐溶液和多柔比星处理组的肿瘤尺寸更大。然而，当施用本发明的聚合物胶束型抗癌药物时，肿瘤尺寸被大大缩小。<实验实施例9:对肿瘤移植后施用聚合物胶束型抗癌药物导致大鼠重量变化的测量>在以2mg/kg向大鼠尾静脉注射根据实施方式23和26制备的聚合物胶束型抗癌药物后，测量了施用所述药物的大鼠的重量变化。结果示于图24和25中。图24显示实施方式23的变化，图25显示实施方式26的变化。如图24和25所示，在施用药物后没有大鼠死亡。换言之，存活率为100%。[工业实用性根据本发明的聚合物胶束型抗癌药物可治疗癌症并起到造影介质的作用，从而诊断癌症并检测所述疾病的发展。虽然参照某些优选的实施方式已展示并描述了本发明，但本领域技术人员应当理解，可对本发明4故出多种形式和细节上的改变而不背离如所附权利要求书所定义的本发明的精神和范围。权利要求1.一种同时进行癌症的诊断和治疗的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其包含如以下化学式1所示的链末端官能化聚合物[化学式1]其中，R是甲基、正丁基、仲丁基、叔丁基或甲氧基，和n是10-500的整数，造影材料；以及化学治疗剂，其中所述抗癌药物是具有胶束结构的纳米颗粒的形式。2.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述链末端官能化聚合物的所述化学式1中的R为正丁基。3.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述链末端官能化聚合物的所述化学式1中的R为甲氧基。4.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述链末端官能化聚合物的数均分子量为1,100至23,000。5.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述聚合物抗癌药物的粒径为30至200nm。6.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述链末端官能化聚合物、造影材料和所述化学治疗剂的重量比为550:2.5~20:1~2。7.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述造影材料选自氧化铁、钆、锰、铝、硅、钡、钇和稀土元素。8.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述造影材料为氧化铁。9.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述化学治疗剂是多柔比星、阿德里亚霉素、顺铂、紫杉醇、5-氟尿嘧啶或其可药用盐。10.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述化学治疗剂是多柔比星或其可药用盐。11.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述化学治疗剂是盐酸多柔比星。12.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述癌症是实体癌。13.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述癌症是原发癌。14.根据权利要求l的具有胶束结构的聚合物抗癌药物，其中所述癌症是转移癌。15.—种用于进行癌症诊断的具有胶束结构的聚合物造影介质，其包含如以下化学式1所示的聚合物[化学式1IIIIunCHjCH2-C—0H其中，R是甲基、正丁基、仲丁基、叔丁基或甲氧基，和n是10-500的整数，以及造影材料，其中所述造影介质是具有胶束结构的纳米颗粒的形式。16.根据权利要求15的具有胶束结构的聚合物造影介质，其中所述链末端官能化聚合物的所述化学式1中的R为正丁基。17.根据权利要求15的具有胶束结构的聚合物造影介质，其中所述链末端官能化聚合物的所述化学式l中的R为甲氧基。18.根据权利要求15的具有胶束结构的聚合物造影介质，其中所述链末端官能化聚合物的数均分子量为1,100至23,000。19.根据权利要求15的具有胶束结构的聚合物造影介质，其中所述聚合物胶束型造影介质的粒径为30至200nm。20.根据权利要求15的具有胶束结构的聚合物造影介质，其中所述链末端官能化聚合物和所述造影材料的重量比为1~10:0.5~4。21.根据权利要求15的具有胶束结构的聚合物造影介质，其中所述造影材料选自氧化铁、釓、锰、铝、硅、钡、钇和稀土元素。22.根据权利要求15的具有胶束结构的聚合物造影介质，其中所述造影材料是氧化铁。23.—种制备根据权利要求1的具有胶束结构的聚合物抗癌药物的方法，包括将药物溶解在二甲基亚砜(DMSO)中以制备所述药物的DMSO溶液；向所得溶液中加入三乙胺；将链末端官能化聚合物溶解在DMSO中以制备所述聚合物的DMSO溶液；将所述药物的所述DMSO溶液与所述聚合物的所述DMSO溶液混合；向所得溶液中加入造影材料；以及将所得溶液透析和冻干。24.根据权利要求23的方法，其中所述药物是盐酸多柔比星，所述造影材料是氧化铁，并且所述药物溶解在DMSO中，所述盐酸多柔比星仅溶解在DMSO中。25.—种制备根据权利要求15的具有胶束结构的聚合物造影介质的方法，所述方法包括将链末端官能化聚合物溶解在DMSO中以制备所述聚合物的DMSO溶液；向所得聚合物溶液中加入造影材料；以及将所得溶液透析和冻干。全文摘要本发明公开了一种抗癌药物，其包含链末端官能化聚合物、造影材料如氧化铁和化学治疗剂如多柔比星或其可药用盐。所述抗癌药物可同时进行癌症的诊断和治疗，显著降低多柔比星的心脏毒性副作用并具有优良的针对癌症部位的靶向作用，从而显著提高抗癌作用。同时，提供所述抗癌药物作为MRI造影介质，其可诊断癌症并监测所述疾病的发展。尤其是公开了对实体癌的诊断和治疗更好并且可有效地进行转移癌及原发癌的诊断和治疗的所述抗癌药物。文档编号A61K31/4985GK101678021SQ200780053127公开日2010年3月24日申请日期2007年7月5日优先权日2007年5月29日发明者辛东崙,金长燮申请人:栗村化学株式会社