专利名称：：因卡膦酸二钠用于制备预防及治疗骨质疏松症的药物的制作方法因卡膦酸二钠用于制备预防及治疗骨质疏松症的药物
技术领域：
骨质疏松症是以骨组织显微结构受损，骨矿成分和骨基质等比例不断减少，骨质变薄，骨小梁数量减少，骨脆性增加和骨折危险度升高的一种全身骨代谢障碍的疾病。骨质疏松是老年人最常见的疾病。本发明涉及因卡膦酸二钠在防治骨质疏松症的应用。双膦酸盐是一种内源性焦膦酸盐类似物，附着在骨骼羟磷灰石表面，取代了骨基质的焦膦酸盐，抑制破骨细胞的过量骨吸收，因此能有效治疗骨转移性疼痛。本课题组研究发现口服因卡膦酸二钠对骨质疏松具有较好的预防及治疗作用。当今社会与年龄和绝经有关的骨质疏松症的发病率已位居全球常见病的第7位,近20年来，双膦酸盐类药物已发展成为最有效的骨吸收抑制剂，由于它能减少各种原因引起的骨吸收，因此被用来预防和治疗原发性骨质疏松症等骨代谢疾病。二膦酸(盐)，即二膦酸或其药学上可接受的盐，是天然焦磷酸的合成类似物。由于它们对固相磷酸钙的显著亲合力，二膦酸(盐)能牢固地结合到骨矿物质上。因卡膦酸二钠抑制骨吸收作用是第二代双膦酸盐阿仑膦酸钠的io倍，在日本进行的m期临床研究中显示了很好的药效。国外研究资料表明，因卡膦酸二钠性能优良，抑制骨吸收能力强，其治疗恶性肿瘤引起的高钙血症的作用比帕米膦酸二钠强50倍，是一种高效骨吸收抑制剂。骨吸收抑制作用维持时间长。毒副反应小，临床上治疗恶性肿瘤引起的高钙血症和溶骨性疼痛安全有效。本课题组研究发现口服因卡膦酸二钠对骨质疏松具有较好的预防及治疗作用。本发明的目的是提供了口服因卡膦酸二钠在治疗骨质疏松症中的预防及治疗作用。因卡膦酸二钠，化学名环庚胺基甲撑二膦酸二钠一水合物；分子式C8H17NNa206P2'H20;英文名IncadronateDisodium;分子量349.17;化学结构式
背景技术：
发明内容具体实施方式实例h口服因卡膦酸二钠对维甲酸造成骨质疏松症的大鼠的防治1.1动物模型的制备大鼠(250-320g)，雌雄各半，共50只。随机分为5组正常对照组，模型对照组，因卡膦酸二钠0.5639mg/kg、3.6712mg/kg、10.6418mg/kg(低、中、高)三个剂量组。除正常对照组外，其他各组均灌服维甲酸65mg/kg，每日一次，连续2周。造模同时各给药组依所设剂量灌胃给药0.15ml/kg，每日一次，对照组给予等量溶媒，模型对照组正常饲养，连续4周。1.2因卡膦酸二钠对维甲酸造成骨质疏松的大鼠骨密度、抗弯力的影响最后一次给药后次日，以10%水合氯醛(350mg/kg,i.p.)麻醉大鼠，置于双能线骨密度测定仪探头下，仰位固定于检测台上，头与身体呈直线，线球管对准身体纵轴中点，选择大鼠骨质疏松敏感区域单侧(左侧)股骨中点的皮质骨和第三腰椎骨测定骨密度。应用万能材料试验机进行抗弯力测定。置标本于跨距为20mm的支架上，以2mm/min速度作三点完全试验，记录股骨断裂载荷，单位为牛顿(N)。实验结果经统计学处理，作t检验判断显著性，结果见表l。表1因卡膦酸二钠对骨质疏松大鼠骨密度、抗弯力的影响(11=10，x土SD)组别抗弯力(N)股骨密度(g/cm2)椎骨密度(g/cm2)正<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>模型组与正常组比较P<0.05，"PO.Ol样品组与模型组比较:Ap〈0.05，AAP<0.01由表1可见，与正常组相比模型组大鼠股骨密度、椎骨密度和抗弯力显著下降，因卡膦酸二钠低、中、高剂量组均能提高骨质疏松大鼠股骨密度、椎骨密度和抗弯力，并且中、高剂量组效果显著(PO.01)。1.3因卡膦酸二钠对维甲酸造成骨质疏松的大鼠股骨长度、直径和体积的影响取大鼠左右两侧股骨并去掉附着的软组织，右股骨用游标卡尺测量长度与直径，根据阿基米德原理测量其体积。实验结果经统计学处理，作t检验判断显著性，结果见表2。表2因卡膦酸二钠对骨质疏松大鼠股骨长度、直径和体积的影响(n=10，x±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>模型组与正常组比较><0.05，"P<0.01样品组与模型组比较:AP0.05，AAP<0.01由表2可见，与正常组相比模型组大鼠骨长度、直径和体积均有下降，骨体积下降显著(P<0.01)。因卡膦酸二钠低、中、高剂量组均能提高骨质疏松大鼠骨长度、直径和体积。中、高剂量组均能显著提高骨质疏松大鼠骨体积(PO.01)，并且高剂量组还能显著提高骨质疏松大鼠骨长度和骨直径(PO.Ol)。1.4因卡膦酸二钠对维甲酸造成骨质疏松的大鼠骨重的影响取左侧股骨，去除附着的肌肉和结缔组织，在股骨上端和骨干骺端分别穿孔，双蒸水冲洗骨髓。以2份三氯甲烷加1份甲醇混合液，脱脂72小时，置120。C烘箱6时，立即置干燥器内冷却后称干重(g)，然后标本置瓷坩埚中，置80CTC马福炉内灰化6小时，干燥器内冷却后称灰重(g)。实验结果经统计学处理，作t检验判断显著性，结果见表3。表3因卡膦酸二钠对骨质疏松大鼠骨重的影响(11=10，x士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>模型组与正常组比较P<0.05，"PO.01样品组与模型组比较:AP0.05，AAP<0.01由表3可见，与正常组相比模型组大鼠骨湿重、干重和灰重均有下降，骨湿重、干重下降显著(P<0.01)。因卡膦酸二钠低、中、高剂量组均能显著提高骨质疏松大鼠骨湿重、干重和灰重(P<0.01)。1.5因卡膦酸二钠对维甲酸造成骨质疏松的大鼠骨钙含量的影响依据国家标准GB12398—90进行测定。称取样品于小三角烧瓶中，加5mlHN03;HCL04(4:1)，加上漏斗，置于电热板上加热消化，如消化不完全，补加硝酸继续加热至无色透明为止，加2ml去离子水，加热以除去多余的硝酸。取下冷却，用2%氧化镧溶液定容至100ml容量瓶中。实验结果经统计学处理，作t检验判断显著性，结果见表4。表4因卡膦酸二钠对骨质疏松大鼠骨钙含量的影响01=10，x土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表4可见，与正常组相比模型组大鼠骨钙含量下降显著(PO.01)。因卡膦酸二钠低、中、高剂量组均能提高骨质疏松大鼠骨钙含量，中、高剂量组效果显著(P<0.01)。实例2:因卡膦酸二钠对卵巢切除大鼠的骨质疏松的防治绝经伴随骨质疏松的发生已为许多流行病学研究所证实。绝经可引起糖代谢紊乱，产生胰岛素抵抗，而糖代谢紊乱是引起晚期糖化终末产物增加的主要原因。高水平的晚期糖化终末产物可导致成骨细胞数量减少，活性降低，骨形成降低，最终造成骨质疏松症。目前，对绝经后骨质疏松的治疗主要采用激素替代疗法，虽然对骨质疏松有一定的疗效，但可引起乳腺癌和子宫内膜癌的发生。本发明采用卵巢切除方法制作大鼠骨质疏松模型，证明因卡膦酸二钠对绝经后骨质疏松的防治作用。1.6动物模型的制备大鼠(250-320g)，雌雄各半，共50只。随机分为5组假手术组，模型对照组，样品高、中、低三个剂量组。在无菌条件下，将大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液，模型对照组和样品组麻醉后进行经背部切口，切除双侧卵巢。假手术组打开腹腔后切除少量脂防。手术后一周，将高、中、低三个剂量的因卡膦酸二钠样品稀释后供大鼠每R饮用。其它组饮用自来水，常规喂养3个月。1.7因卡膦酸二钠对大鼠骨密度、抗弯力的影响最后一次给药后次日，以10%水合氯醛(350mg/kg,i.p.)麻醉大鼠，置于双能线骨密度测定仪探头下，仰位固定于检测台上，头与身体呈直线，线球管对准身体纵轴中点，选择大鼠骨质疏松敏感区域单侧(左侧)股骨中点的皮质骨和第三腰椎骨测定骨密度。应用万能材料试验机进行抗弯力测定。置标本于跨距为20mm的支架上，以2mm/min速度作三点完全试验，记录股骨断裂载荷，单位为牛顿(N)。实验结果经统计学处理，作t检验判断显著性，结果见表5。'表5因卡膦酸:二钠对大鼠骨密度、抗弯力的影响(11=10，x士SD)组别抗弯力(N)股骨密度(g/cm2)椎骨密度(g/cm2)假手术组117.52±11.360.65±0.040.70±0.01模型组91.32±5.67**0.47士0.01".承氺0.48±0.01低剂量组98.44±13,21A0.53±0,01A0,54±0.05A中剂量组104.81±9.76AA0,59±0.09AA0.62±0.05AA高剂量组118.43±10.56AA0.66土0.05厶a0.69±0.04AA模型组与正常组比较::><0.05，"PO.01样品组与模型组比较:AP<0,05，AAP<0,01由表5可见，与假手术组相比模型组大鼠股骨密度、椎骨密度和抗弯力显著下降，因卡膦酸二钠高、中剂量组均能显著提高骨质疏松大鼠股骨密度、椎骨密度和抗弯力(P<0.01)。1.8因卡膦酸二钠对大鼠股骨长度、直径和体积的影响取大鼠左右两侧股骨并去掉附着的软组织，右股骨用游标卡尺测量长度与直径，根据阿基米德原理测量其体积。实验结果经统计学处理，作t检验判断显著性，结果见表6。表6因卡膦酸二钠对大鼠股骨长度、直径和体积的影响(n=10，x±SD)组别骨长度(cm)骨直径(cm)骨体积(cm3)假手术组3.498±0.0440.334±0.0150.705±0.025模型组3.407±0.042*0.296±0.021'0.618土0.011"低剂量组3.423±0.010A0,317±0.005A0.627±0.012A中剂量组3.463±0.037AA0.326i0.017AA0.656±0.018AA高剂量组3.489±0.035AA0.335±0.015AA0.696±0.024AA模型组与正常组比较P<0.05，P<0.01样品组与模型组比较:Ap〈0.05，AAP<0.01由表6可见，与假手术组相比模型组大鼠骨长度、直径和体积均有下降，骨体积下降显著(PO.Ol)。因卡膦酸二钠低、中、高剂量组均能提高骨质疏松大鼠骨长度、直径和体积，中、高剂量组效果显著(PO.01)。1.9因卡膦酸二钠对大鼠骨重的影响取左侧股骨，去除附着的肌肉和结缔组织，在股骨上端和骨干骺端分别穿孔，双蒸水冲洗骨髓。以2份三氯甲烷加1份甲醇混合液，脱脂72小时，置120'C烘箱6小时，立即置干燥器内冷却后称干重(g)，然后标本置瓷坩埚中，置80O'C马福炉内灰化6小时，干燥器内冷却后称灰重(g)。实验结果经统计学处理，作t检验判断显著性，结果见表7。表7因卡膦酸—钠对大鼠骨重的影响(n=10，^士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>模型组与正常组比较》<0.05，P<0.01样品组与模型组比较:AP<0.05，AAP<0.01由表7可见，与假手术组相比模型组大鼠骨湿重、干重和灰重均有下降(P<0.05)。因卡膦酸二钠低、中、高剂量组均能提高骨质疏松大鼠骨湿重、干重和灰重，中、高剂量组对骨质疏松大鼠骨湿重、干重效果显著(P<0.01)。1.10因卡膦酸二钠对大鼠骨钙含量的影响依据国家标准GB12398—90进行测定。称取样品于小三角烧瓶中，加5mlHN03;HCL04(4:1)，加上漏斗，置于电热板上加热消化，如消化不完全，补加硝酸继续加热至无色透明为止，加2ml去离子水，加热以除去多余的硝酸。取下冷却，用2%氧化镧溶液定容至100ml容量瓶中。实验结果经统计学处理，作t检验判断显著性，结果见表8。表8因卡膦酸二钠对大鼠骨钙含量的影响(11=10，i±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>模型组与正常组比较》<0.05，"PO.Ol样品组与模型组比较AP0.05，AAP<0.01由表8可见，与假手术组相比模型组大鼠骨钙含量下降显著(P<0.01)。因卡膦酸二钠低、中、高剂量组均能提高骨质疏松大鼠骨钙含量，中、高剂量组效果显著(P<0.01)。权利要求1.因卡膦酸二钠用于制备预防和治疗骨质疏松症药物，其特征在于因卡膦酸二钠可以制备成临床上治疗骨质疏松症的药物制剂。2、根据权利要求l所述的应用，其特征在于因卡膦酸二钠的使用剂量范围为O.lmg100mg。3、根据权利要求l所述的应用，其特征在于包括含有因卡膦酸二钠的用于治疗或预防骨质疏松的药物组合物。4、根据权利要求l所述的因卡膦酸二钠作为预防和治疗骨质疏松症药物的应用，其特征是因卡膦酸二钠与临床上接受的药物载体或辅料配合制成治疗骨质疏松的片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、干混悬剂、口服液等口服制剂形式。全文摘要本发明公开了因卡膦酸二钠用于制备防治骨质疏松症药物的用途，动物实验研究发现因卡膦酸二钠不仅对卵巢切除大鼠的骨质疏松症具有较好的预防及治疗作用，并且对维甲酸造成骨质疏松的大鼠的骨密度、骨钙含量有明显提高。因卡膦酸二钠可制成临床可接受的片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、干混悬剂、口服液等口服制剂中的任何一种，供临床原发性及继发性骨质疏松症及由骨质疏松症引起的骨折症的应用。文档编号A61P19/00GK101254195SQ20081001078公开日2008年9月3日申请日期2008年3月28日优先权日2008年3月28日发明者洪王,静韩申请人:王洪;韩静