专利名称：：一种抗肿瘤及辅助肿瘤放化疗的中药组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用于抗肿瘤和辅助肿瘤放化疗过程的中药组合物，具体涉及一种由中药原料药黄芪、胶陀螺、斑蝥组成的中药组合物，属丁中药抗癌药物领域。
背景技术：
：据世界卫生组织1997年报道，1996年全球58亿人口中因癌症死亡约有630万人，约占总死亡人数的12%，是仅仅次于心血管疾病的第二大死因。从1996年以来全球每年新确诊的肿瘤患者均在1000万人以上，到1999年底全球肿瘤患者总数已超过4000万。世界卫生组织2001年报道，世界癌症发病率和死亡率比1990年上升了22%，今后20年还将上升大约50%。因此，治疗和预防肿瘤疾病的药物成为整个医药行业的研发热点。随着肿瘤发病率的上升和新药的不断涌现，抗癌市场将发生巨大变化，研究开发和生产新型抗癌药特别是天然抗癌药物成为医药市场上增长的新热点。在我国，中草药及其活性成分的抗肿瘤药物研究意识国家重点基础研究发展规划项目之一。我国20世纪90年代上市的抗肿瘤药物中出米托蒽醌、烃基脲和顺铂等少数几种抗肿瘤药物为化学合成外，已上市(或扔在研制阶段)的一些列抗肿瘤药物(含人体免疫调节剂)均为从天然草药中提取的成分。中草药提取物抗癌的主要机制是(1)抑杀肿瘤细胞；(2)调整机体免疫等抗癌潜能，以改善患者的生命质量，延长生命期；(3)提高放化疗效果的增敏作用；(4)降低放化疗毒副作用的减毒作用。黄芪是一味传统中药，能补虚，可固可托，具有益气、补虚、升阳、固表排脓、效忠等功效。黄芪在中医的应用，主要有以下四点一是补气升阳，用于气虚引起的脱肛、子宫脱垂、崩漏、眩晕乏力等；二是固表敛汗，多用于体虚表弱所致的自汗，如表气不固，外感风寒而汗出。三是托疮排脓，用于疮疡久不溃破而内陷，有促进溃破及局限作用，用于疮疡溃破后久不收口，有生肌收口之作用；四是利尿消肿，用于阳气不足所致的虚性水肿。黄芪多糖是黄芪中的生物活性成分，具有抗肿瘤作用。其抗肿瘤活性主要通过调节细胞免疫功能，增强IL-2/LAK抗肿瘤作用或促进抗癌细胞因子的分泌、IL-2受体的表达、LAK前提细胞的增生、防止过氧化等作用达到对肿瘤细胞的杀伤和抑制。近几年的研究表明，黄芪多糖还可以通过诱发肿瘤细胞眺望的机制达到抗肿瘤作用。临床上，以黄芪为原料制备黄芪多糖注射液具有益气养元、扶正驱邪、养心通脉、健脾利湿作用，用于心气虚损、血脉瘀阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虚湿困之肝炎。胶陀螺，别名猪嘴菇，木海参，木海螺，为胶陀螺科真菌胶陀螺Budgariainguinans(Pers)的子实体，属子囊菌类。产于吉林、辽宁、黑龙江，民间常食用。胶陀螺中含多种活性成分和营养元素及微量元素，如麦角甾醇、半乳糖醇、草酸、多种氨基酸、无机元素、糖、脂肪、蛋白质等。斑蝥早在《仁斋直指方》中就有记载，可用于乳癌及腹部癌。古人常用"斑蝥煮鸡蛋，弃斑蝥食蛋"的偏方治疗肝癌及其它消化洗脱癌症，至今仍在民间沿用。中医学认为斑蝥性寒味辛，有毒。据《神农本草经》记载，斑蝥可以治疗痈疽、溃疡、廯疮等病症，具有攻毒蚀疸、破血散结的作用。临床发现其还有多种新用途，治疗一些疑难杂症具有独特的疗效，如治疗风湿痛、神经痛、梅核气、斑秃、乳腺增生、鼻炎、肝炎、肿瘤等。
发明内容本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤作用和能够抑制肿瘤放化疗后白细胞减少、机体免疫降低的中药组合物。本发明的研究人员在研究过程中发现，将黄芪、胶陀螺和斑蝥组合使用，不仅能够抑制肿瘤细胞的生长，还能提高肿瘤患者的机体免疫力，升高因放化疗而导致的白细胞减少数目，具有很好的协同治疗作用。本发明中药组合物由中药原料药黄芪、胶陀螺和斑蝥组成，具体组成比例为黄甚80-200份胶陀螺10-80份斑蝥0.1-1份优选地组成比例为黄芪100-180份胶陀螺30-80份斑蝥0.3-0.8份更优选的原料药的组成比例为黄甚150份胶陀螺60份斑蝥0.5份本发明的还一目的是提供制备本发明组合物活性成分的方法。本发明中，组合物可以是各自原药材经粉碎成细粉后直接入药，也可以是提取其有效成分后组合入药。本发明中，当以提取的有效成分组合入药时，提取的方法可以是合并提取，也可以是分别提取，还可以是合并其中两者提取再与第三味药材的提取物合并。优选地，本发明组合物活性成分的提取制备方法为黄芪先以60%80%的乙醇回流提取两次后，合并乙醇提取液，减压浓縮，除去乙醇，将浓縮物上大孔吸附树脂柱，先以蒸馏水洗脱至无糖，收集水洗脱液备用；水洗至无糖后，再用70%的乙醇洗脱至无黄芪皂苷，合并收集70%乙醇洗脱部分，减压浓縮，干燥，得黄芪皂苷总提物，备用；黄芪药渣和胶陀螺合并，以上述收集的水洗脱液为溶媒，煎煮提取2-3次，合并水煎煮提取液，减压浓縮至相对密度约为1.15-1.30，加入95%的乙醇，调节浓縮液使浓縮液乙醇相对含量约为80%，搅拌均匀后，室温静置12小时以上，过滤或离心，不容物加适量蒸馏水溶解，再往水溶解后的药液中加95%的乙醇，使药液乙醇相对含量为60%，充分搅拌均匀，室温静置12小时以上，过滤或离心，不容物干燥，得多糖提取物，备用；斑蝥粉碎成粗粉，以蒸馏水浸泡提取3-4次，合并浸泡提取液，减压浓縮，干燥，得斑蝥提取物，备用；将上述三步骤中所得的提取物混合均匀，即得组合物活性提取物。本发明组合物活性成分的提取还可以通过如下步骤制备称取黄芪、胶陀螺，粉碎合并，以水煎煮提取2-3次，过滤，合并滤液，滤液减压浓縮至相对密度约为1.20，加95%的乙醇，调节使浓縮液中乙醇相对含量约为80%，充分搅拌均匀，室温静置12小时以上，过滤或离心，滤液或上清液备用，沉淀以适量水溶解，继续加入95%的乙醇使药液中乙醇相对含量为60%，充分搅拌均匀，室温静置12小时以上，离心或过滤，上清液或滤液备用，沉淀真空干燥，得多糖提取物，备用；两次醇沉的上清液或滤液合并，减压浓縮至无醇味，浓縮液上大孔吸附树脂柱，先以蒸馏水洗脱除树脂柱去除一些水溶性成分，再改用60%的乙醇洗脱约3个柱床体积，收集60%的乙醇洗脱部分，合并，减压浓縮，干燥，得皂苷提取物，备用；斑蝥加水浸泡提取2-4次，合并水浸泡提取液，减压浓縮，干燥，得斑蝥提取物，备用；将上所得提取物合并，充分混合均匀，即得本发明组合物活性提取物组合物。本发明中，斑蝥还可以以斑蝥素或去甲斑蝥素替代。本发明组合物根据用药需要，加入制药上可接受的常规辅料，可制成各种所需的口服剂型，如制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等。以下从本发明组合物药理药效实施例来说明本发明所取得的有益效果。以下药理实施例中，均采用制备实施例1所得的组合物活性提取物为实验药。给药的三个剂量组为高剂量组80mg/kg、40mg/kg、20mg/kg。一、抗肿瘤作用1、对小鼠移植性肉瘤的抑制作用取接种传代小鼠S^，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠Swo瘤匀浆液，再以生理盐水l:3稀释，然后以0.2ml/只诸如小鼠左腋下皮下，24小时后将已接种的小鼠随机分为对照组、本发明组合物三个剂量组，每组10只。给药组小鼠每日灌胃给药1次，每次0.2mL，对照组给予等量生理盐水，共7天。停药次日处死小鼠，称体重并细心剥离皮下瘤块，与EM50电子天平上称取瘤重，按照公式"抑瘤率=(对照组瘤重平均值-给药组瘤重平均值)/对照组瘤重平均值xlOO"，计算抑瘤率。本发明组合物三个剂量组对小鼠移植性肉瘤S18()的瘤体生长均有明显的抑制作用。其中高剂量组的抑瘤率为59.8%，与对照组比较具有显著性差异(PO.Ol)，说明本发明组合物对小鼠移植性肉瘤S，具有抑制或杀伤作用。见表1。表1对小鼠S18。肉瘤生长抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与对照组相比*P<0.05，**P<0.012、对小鼠移植性肝癌H22的抑制作用无菌抽取接种七天后的肝癌H22荷瘤小鼠腹水，用生理盐水按l:3的比例稀释成肝癌H22悬液，立即接种于小鼠右前肢腋窝处皮下，每只接种0.2mL，接种24小时后随机分为对照组、本发明高、中、低二个剂量组，每组10只。给药组小鼠每日灌胃给药l次，0.2mL/只，对照组给予等量生理盐水，每组连续给药7天。于末次给药24小时后脱颈椎处死小鼠，剥取肿瘤称重，求出抑瘤率。结果表明，本发明组合物三个剂量组对小鼠肝癌H22腹水转实体的瘤体生长均有明显的抑制作用，其中高剂量组的抑瘤率为73.4%，与对照组比较差异具有显著性(PO.Ol)，说明本发明组合物对小鼠一致性肝癌H22具有抑制或杀伤作用，见表2。表2对移植性肝癌H22的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>与对照组相比*P<0.05，**P<0.01二、对小鼠免疫功能的影响1、对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响取小鼠40只，随机分为4组，每组10只正常对照组、肿瘤对照组，受试药高剂量组和受试药低剂量组，除正常对照组外，其余小鼠按S咖项下小鼠操作造模，末次给药后30min，每鼠腹腔注射5。/。CRBC生理盐水悬浮液0.2mL，24小时后处死动物，用2.5mLHank's液冲洗每组腹腔，滴约0.2mL冲洗液于载玻片上，37。C温孵30min，用NS冲去玻片上未贴壁的细胞。甲醇固定，Giemsa-PBS液染色(PH6.5)，晾干，油镜下观察IOO个巨噬细胞，并计算吞噬CRBC的百分率及吞噬指数。结果表明，肿瘤对照组的巨噬细胞的吞噬功能明显降低，而本品两个剂量组能提高肿瘤模型小鼠的吞噬功能，从而提高机体的免疫力。见表3表3对荷S18o肉瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2、对荷S^肉瘤小鼠网状内皮系统(RES)的碳粒廓清能力的影响取小鼠40只，随机分为4组，每组10只正常对照组、肿瘤对照组、本发明组合物高、低剂量组，造模同试验l，末次给药后30min，各组小鼠均iv20M印度墨汁0.1ml/10g，于注射后2min及12min分别由眼眶取学20W，溶于2ml0.1%*2<:03溶液中，波长600nm处测定各样本的光密度值(OD)，用0.1%Na2CO3溶液作空白对照。末次取血后，立即脱颈椎处死小鼠，取出肝脏、脾脏，分别称重记录，计算清除速度和吞噬指数。结果表明，肿瘤对照组的小鼠在造模后RES功能显著降低，表现为RES对碳粒的清除速度和吞噬指数下降；本发明组合物的两个剂量组与肿瘤对照组比较，碳粒廓清能力得到显著增强，提示本发明组合物能提高荷瘤小鼠的RES功能。见表4。表4对荷S，肉瘤小鼠网状内皮系统的碳粒廓清能力的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与肿瘤对照组相比，**P<0.01三、对放、化疗小鼠白细胞的影响本发明组合物临用前先以1%的羧甲基纤维素(CMC)配制成悬浮液，对照组给予空白的1%羧甲基纤维素。1、对化疗小鼠升高白细胞的作用NIH小鼠按表5分组与给药，灌胃给药本发明组合物后第5天开始，给环磷酰胺90mg/kg腹腔注射连续三天，实验结束时，尾静脉采血比较各组实验前后白细胞数。2、对放疗小鼠的升高白细胞作用NIH小鼠雌雄各半眼球采血，先测定10只小鼠的白细胞(9.98±1.12)xl09/L作为参考数按表6分组及给药，给本发明组合物后第5天，将小鼠作^Co-Y射线辐照，源强为6根品字形叠加式，462镭克当量，中心距离100cm，剂量率59伦琴/min,—次全身照射总剂量为500伦琴，于照射后第8天、第20天分批测定小鼠白细胞数。结果由表5可知，给环磷酰胺前4组小鼠的白细胞均值无显著性差异，于实验结束时，给药组的白细胞数明显升高，与对照组相比，差异有显著性。由表6可知，^Co-Y射线照射后第8天，给药组和对照组比较，前者白细胞树脂随较高，但与后者相比无明显差异。在折射后20d，给药组的白细胞数比对照组显著提高，表明本发明组合物对6()c0-7射线照射所致小鼠的白细胞降低有明显对抗作用，但恢复缓慢。表5本发明组合物不同剂量对化疔小鼠升高白细胞的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6本发明组合物对放疗小鼠的升高白细胞作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>具体实施例以下从制备实施例来说明本发明的制备实施步骤，需要说明的是，所列举的制备实施方式不是为了限制本发明的具体实施方式，而是为了对本发明的实施过程做一个详细的说明，其它类似于本发明步骤，也属于本发明实施的范围。实施例1黄芪1500g胶陀螺600g斑蝥5g取黄芪、胶陀螺，粉碎成粗粉，合并，以10被重量的蒸馏水煎煮提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，滤液减压浓縮至相对密度为约为1.10，往浓缩液中加95%的乙醇，边加边搅拌，至浓縮液中乙醇相对含量为80%，室温静置24小时，离心，上清液收集备用，沉淀加适量蒸馏水加热溶解，溶解后的药液中加95%的乙醇，边加边搅拌，至药液中相对密度约为1.25，室温静置24小时，离心，上清液收集备用，沉淀真空干燥，得多糖提取物，备用；将两次醇沉后的上清液合并，减压浓縮，至浓縮液无醇，上已处理后的HP-20型大孔吸附树脂柱，先用水洗脱树脂柱月4个柱床体积，弃水洗液，改用60%的乙醇洗脱树脂柱约3个柱床体积，收集60%的乙醇洗脱部分，合并，减压浓縮，干燥，得皂苷提取物；斑蝥粉碎成粗粉，以水浸泡提取4次，每次浸泡12小时，合并水浸泡部分，20ml/kg7.29±1.3220mg/kg7.62±1.2740mg/kg7.18±1.6580mg/kg7.74±1.463.48±0.287.08±0.684.19±0.348.21±0.54*4.41±0.229.89土0.49**4.98±0.3911.01±0.51**召"nlplmilrTT.IiS;经经自对遣量懂型剂剂剂模低中高减压浓缩低温真空干燥，得斑蝥提取物；合并上述提取物，混匀，加入制药上可接受的辅料或赋形剂，制成所需的口服剂型。实施例2黄芪2000g胶陀螺200g斑蝥8g取黄芪药材，粉碎，以10倍量60%的乙醇回流提取两次，每次2小时，过滤，合并乙醇提取液，减压浓縮至无醇味，浓縮液上已处理好的AB-8i大孔吸附树脂柱，先以蒸馏水洗脱至无糖，收集水洗脱液，备用；再改用70°/。的乙醇洗脱树脂柱，至无皂苷，收集70%的乙醇洗脱部分，合并，减压浓縮，干燥得黄芪总皂苷提取物，备用；经乙醇提取后的黄芪药渣与胶陀螺合并，以上述洗脱树脂柱的水为溶媒煎煮提取2-3次，合并水煎煮提取液，减压浓縮至相对密度约为1.10，加入95%的乙醇，边加边搅拌，至浓縮液中乙醇相对含量为80%，室温静置24小时，过滤，沉淀以适量蒸馏水加热溶解，再往溶解后的药液中加入95%的乙醇，边加边搅拌，至药液中乙醇相对含量为60%，室温静置24小时，过滤，不容物干燥，得多糖提取物；斑蝥粉碎，以蒸馏水浸泡提取3-4次，过滤，合并水浸泡提取液，减压浓縮，低温干燥，得斑蝥提取物，备用；合并上述各提取物，混匀，加入制药上可接受的辅料或赋形剂，制成所需的口服剂型。权利要求1、一种抗肿瘤和辅助肿瘤放化疗的中药组合物，其特征是所述组合物由原料药黄芪、胶陀螺和斑蝥组成，其中原料药的组成比例为黄芪80-200份，胶陀螺10-80份，斑蝥0.1-1份。2、根据权利要求l所述的中药组合物，其特征是所述原料药的组成比例为黄芪100-180份，胶陀螺30-80份，斑蝥0.3-0.8份。3、根据权利要求l所述的中药组合物，其特征是所述原料药的组成比例为黄芪150份，胶陀螺60份，斑蝥0.5份。全文摘要本发明涉及一种抗肿瘤和辅助肿瘤放化疗作用的中药组合物，具体由原料药黄芪、胶陀螺和斑蝥组成，经提取制备其有效成分。本发明组合物具有抑制肿瘤细胞生长、增强肿瘤小鼠免疫力和升高放化疗小鼠白细胞水平的作用，可用于肿瘤的治疗和辅助治疗。文档编号A61K35/56GK101322740SQ200810117369公开日2008年12月17日申请日期2008年7月30日优先权日2008年7月30日发明者张树祥,熊国裕申请人:北京星昊医药股份有限公司