一种混合核苷酸、氨基酸与中药保健胶囊的配方及制作工艺的制作方法

专利名称：：一种混合核苷酸、氨基酸与中药保健胶囊的配方及制作工艺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药保健品，具体涉及一种混合核苷酸、氨基酸与中药的保健胶囊。
背景技术：
：目前市场上的各种补充核酸及氨基酸的各种保健品很多，例如一些产品含(RNA+DNA)》0.2g/粒，其中DNA含量极少，也有一些产品核苷酸主要成分为5—核苷酸，含量为20%，功效都为提高免疫力。这些保健品的不足之处主要体现在核酸变成核苷酸需要经过二个步骤；1、核糖核酸降解为核糖核苷酸，其转化率为60%左右，脱氧核酸降解为脱氧核苷酸，其转化率为50%左右；2、核糖核苷酸从肠道上皮细胞吸收进入血液，吸收率为80%,脱氧核苷酸从肠道上皮细胞吸收进入血液，吸收率为95%;3、以上产品均为单纯的补充核酸，而人体吸收核酸是以核蛋白形式存在，所以人体的转化、吸收存在较大的难题。
发明内容本发明的目的是提供一种混合核苷酸、氨基酸与中药保健胶囊的配方及制作工艺，它由DNA的基本组成单位脱氧核苷酸、RNA酶解制得的核苷酸及氨基酸组成的科学配方不仅解决了外援性核酸在人体吸收转换率低的难题，而且解决了DNA、RNA、蛋白质三项补充的难题。为了解决
背景技术：
所存在的问题，本发明是采用以下技术方案它由葛根、核苷酸、杜仲、L-赖氨酸盐酸盐组成，葛根所占重量百分比为18-53%，核苷酸所占重量百分比为20-55%，杜仲所占重量百分比为5-15%,L-赖氨酸盐酸盐所占重量百分比为10-14%，将杜仲和葛下干燥；将杜仲和葛根粉碎并过120目筛，加入相应重量的核苷酸、L-赖氨酸盐酸盐混合均匀，将均匀混合物料置于60-7(TC下干燥5小时灭菌，最后填充胶囊。由于人体吸收核酸是以核蛋白形式存在，本发明在核酸类产品开发方面取得了突破性进展，由DNA的基本组成单位脱氧核苷酸、RNA酶解制得的核苷酸及氨基酸组成的科学配方不仅解决了外援性核酸在人体吸收转换率低的难题，而且解决了DNA、RNA、蛋白质三项补充的难题。具体实施例方式本具体实施方式采用以下技术方案它由葛根、核苷酸、杜仲、L-赖氨酸盐酸盐组成，采用葛根380g、核苷酸350g、杜仲150g、L-赖氨酸盐酸盐120g混合制作成1000g成品，将杜仲和葛根分别置在60°C-7(TC下干燥；将杜仲和葛根粉碎并过120目筛，加入相应重量的混合核苷酸、L-赖氨酸盐酸盐混合均匀，将均匀混合物料置于60-70t:下干燥5小时灭菌，最后填充胶囊。核苷酸核苷酸属于食品添加剂目录中的营养强化剂，核苷酸是核酸的基本构成单元，核酸由许许多多的核苷酸通过3'-5'磷酸二酯键连接而成。核酸是细胞构成的重要组分，它参与控制细胞的遗传、变异、蛋白质的合成以及参与细胞中各种新陈代谢活动，在生命活动中具有重要的意义。核酸在体内有两种合成方式；从头合成途径和补救合成途径。从头合成是指在体内，细胞利用多种合成酶和能量，将体内的营养物质如氨基酸，叶酸等物质一步步合成核酸大分子。随着年龄的增长，体内的某些酶的缺乏和能量不能够及时供给，导致从头合成的效率降低甚至丧失，这时体内核酸的补充大多依赖补救合成途径。补救合成是指细胞利用核苷和核苷酸直接合成大分子核酸。因此在成长过程中及中老年时期，补充一定量的核苷酸是有益的。一般来说，食物中含有的核苷酸约为4一80Mmol/L，含量较低，由此可见补4充外源性的核苷酸对于健康很重要。膳食中的核苷酸是以核蛋白的形式存在，需经蛋白水解作用分离出核酸，核酸进一步降解成核苷酸才能吸收。本产品是以混合核苷酸为主要原料经科学加工而成，更利于被人体吸收。葛根常用的传统中药，药食两用，除含有约占新鲜葛根20-25%的高级淀粉以及丰富的人体必需氨基酸和矿物元素等营养成分外，主要为异黄酮类化合物以及少量的黄酮类物质。其中，黄豆苷原、黄豆苷、葛根素是葛根的主要活性成分，尤以葛根素含量最高。此外，葛根中还含有葛根素木糖苷、3-谷甾醇和花生酸等多种生理活性物质。其性味辛、甘、平。生理功能葛根中的总黄酮能增加脑及冠状动脉的血流量。葛根对动物和人体的脑循环以及外周循环有明显的促进作用。葛根不仅能改善人体的正常脑微循环，而且对微循环障碍也有明显的改善作用，主要表现为局部微血管血流和运动的幅度增加。葛根素对突发性耳聋患者的甲皱微循环也有改善作用，能加快微血管血流速度，清除血管袢淤血，提高患者的听力。葛根素对缺氧心肌具有保护作用，能明显降低缺血心肌的耗氧量，保护心脏免受缺血再灌注所致的超微结构损伤。杜仲杜仲是传统名贵滋补中药，具有补肝肾、降血压、抗衰老等多种独特功效，尤其是调节免疫功能对维护人体健康能起到至关重要的作用，因而有神奇之树的美称。《神农本草》、《本草纲目》、《中国医学大辞典》等各类医学宝典均列其为上品，言其生山中，滋阴肥健，久服轻身耐老，叶可食亦堪入药。杜仲的增强机体免疫功能皮下注射杜仲的水溶性提取物，能提高小鼠血中炭末廓清率，增强网状内皮系统的吞噬功能，实验表明灌服经水提取后醇沉淀的杜仲，可抑制DNCB(2，4-二硝基氯苯)所致的迟发型超敏反应，并能对抗大剂量氢化可的松所致的T细胞百分比降低，增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能。从杜仲中提取的碱性物质有抗破坏人体免疫系统病毒的功能，并认为这种碱性物质有抗HIV作用，有可能用于治疗和预防艾滋病。提取的碱性物质为含糖醛酸的酸性多糖类。杜仲的多糖能兴奋网状内皮系统，增强机体非特异性免疫功能。杜仲煎剂灌服，对氢化可的松的作用下小鼠巨噬细胞吞噬红细胞功能有明显影响，吞噬活力增加。L—赖氨酸盐酸盐赖氨酸是八种必需氨基酸之一，它在生物机体的代谢中起着重要的作用，赖氨酸缺乏会引起蛋白质功能障碍，影响人体免疫功能的发挥。因植物性蛋白中普遍缺乏赖氨酸，故营养学家称之为"第一必须氨基酸"。赖氨酸在医药上具有特殊的用途，它是合成脑神经及生殖细胞、核蛋白、血红蛋白的必须物质。近年来混合核苷酸在国外已经应用于肝病、脑血管、心血管等疾病的治疗。各种资料综合表明，核苷酸的功能主要体现在以下几个方面(1)增强机体免疫力；(2)促进受损肝细胞的修复和再生；(3)促进蛋白质的新陈代谢；(4)是人体内一些辅酶的重要组分。国内外大量文献也表明，核苷酸对于免疫以下作用(1)增加化学抗原、细菌抗原等引起的迟发型超敏反应强度；(2)增强同种抗原诱导的淋巴细胞增长；(3)营养不良及饥饿诱导的抑制时，补充核苷酸可以恢复正常的免疫功能，而补充蛋白质则不能起到相似的效果；(4)可以增强巨噬细胞的吞噬能力；(5)增加增殖的脾淋巴细胞IL-2产量、IL-2受体及iyt-1表面标志的表达。下面是本具体实施方式应用检测报告依据卫法检发-200342号，保健食品检测与评价技术规范功能学评价及检测方法增强免疫力功能。解释与说明；珍科牌珍科胶囊(本发明)人体推荐量为每天1.2g/60kg体重，样品中核苷酸成分为35%，其他配料成为为65%，实验设三个剂量组，即0.1g/kg体重组、0.2g/kg体重组、0.6g/kg体重组，低中高三个组的计量分别相当于人体推荐摄入量的5倍10倍30倍，同时设立溶剂对照组和中剂量配料组0.13g、/kg体重。用蒸馏水将样品配制所需浓度，即取0.28(低)。0.4g(中)、1.2g(高)样品、0.26g配料用蒸馏水配至40ml，按每天0.2ml/10g体重经口灌胃。实验结果表明，珍科牌珍科胶囊能提高小鼠的肿胀度、增加小鼠的抗体生成细胞数、血清溶血素水平；提高腹腔巨噬细胞吞噬指数；对单核巨噬细胞碳廓清能力、脾淋巴细胞增殖能力、nk细胞活性、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值无影响。提示珍科牌珍科胶囊具有增强免疫力的功能。说明*号为国家实验室认可的项目号为分包项目备注*值为溶剂对照组比较卸值为与中剂量配料组比较珍科牌珍科胶囊增强免疫力功能实验1.材料与方法1.1样品，由青岛珍科生物工程有限公司提供硬胶囊/内灰白色粉末样品，同时提供不含核苷酸的配料。1.2实验动物选用中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心(许可证号为SCXK—(军)一2002—001)繁殖的健康昆明雌性小鼠，清洁级，体重18—22g，共240只，分为四组，免疫一组进行脏器/体重比值、迟发型变态反应抗体生成细胞检测及血清溶血素测定；免疫二组进行碳廓清实验;免疫三组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；免疫四组进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化为实验和NK细胞活性测定实验。实验环境屏障环境，实验动物实用许可证号为SYXK(鲁)20030006。1.3剂量选择:珍科牌珍科胶囊人体推荐量为每天1.2g/60kg体重(核苷酸含量为35%，配料成分为65%),实验设三个剂量组，g卩O.lg/kg体重组、0.2/kg体重组、0,6/kg体重组，低、中、高三个组的剂量分别相当于人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍，同时设立溶剂对照组和中剂量配料组(0.13g/kg体重)。用蒸馏水将样品配至所需浓度，即取0,2g(低)、0.4g(中)、1.2g(高)，0.26g配料用蒸馏水配至40ml，按每天0.2ml/10g体重经口灌胃30天后，测各项免疫指标。1.4一起与试剂紫外可见分光光度计、电子天平、数显游标卡尺(精密度O.Olmm)、微量注射器(50ul)、C02培养箱、恒温水浴箱、离心机、酶标仪、显微镜、玻片架、200目筛网、手术器械、秒表、一次性定量取血管、24孔和96孔细胞培养板。SRBC、补体(豚鼠血清)、Hanks液、SA缓冲液、琼脂糖、印度墨汁、Na2C03溶液、都式试剂、YAC-1细胞、RPMI1640完全培养液、乳酸锂、INT、PMS、NAD、0.2mol/LTris-HCL缓冲液、1%冰醋酸MTT液、酸性异丙醇、lmol/LHCL溶液、PBS缓冲液、Giemsa染液等1.5实验方法1.5.1迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)小鼠腹腔注射2%(V/V)SRBS，致敏后4天测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20%(V/V)SRBS,每鼠注射20ul，注射后24小时测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取均值。以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。1.5.2ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)无菌取脾，制备脾细胞悬液，用Hanks液洗2次，每次离心10min(1000r/min),将细胞悬液浮于lmlRPMI1640完全培养液中，调整细胞浓度为3*10的六次方个/ml。将细胞悬液分两个孔加入24孔培养板中，每孔lml，一孔加入75ulConA液，另一孔作为对照，置5。％C02、37摄氏度培养箱72小时。培养结束前4小时，每孔吸取上清液0.7ml，力卩入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640完全培养液，同时加入MTT50ul，继续培养4小时。培养结束后，每孔加入lml酸性异丙醇，吹打均匀使紫色结晶完全溶解，在570nm波长处测定OD值，以加ConA孔的0D值减去不加ConA孔的OD值表示淋巴细胞增殖能力。1.5.3小鼠脏器/体重比值及血清溶血素测定小鼠腹腔注射SRBC五天后，摘眼球取血，离心取血清稀释200倍，进行半数溶血值测定。然后处死物，取胸腺、脾脏称重，计算脏器/体重比值。同时制备脾细胞悬液，进行抗体生成细胞测定。取脾，制成细胞悬液。将表层培养基加热溶解后与等量双倍Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml,再向管内加50ul10%SRBC(v/v，用SA液配制)、20ul脾细胞悬液，迅速混匀后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂糖凝固后，将玻片水平扣在玻片架上，放入C02培养箱温育1.5h,然后用SA液稀释的补体(1:8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶液空斑数。1.5.5小鼠碳廓清实验小鼠尾静脉注射l:3稀释的印度墨汁，待墨汁注入立即计时，注入墨汁后2、10min，分别从内龇静脉丛取血20ul，并将其加到2mlNa2C03溶液中，用紫外可见光光度计在600nm波长处以Na2C03溶液作为空白对照测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝和脾脏称重，计算吞噬指数。吞噬指数&=结束体重*K*1/3/(肝重+脾重)K-(1ogOD,—logOD2)/(t2-t01.5.6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验小鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液lml,间隔30分钟处死，固定于鼠板上，剪开腹壁皮肤，注射生理盐水2ml，转动鼠板l分钟，吸出腹腔洗液lml，分滴于2片玻片上，37度温育30分钟，用生理盐水漂洗，晾干，以l:l病痛甲醇溶液固定，Giemsa染液染色3分钟，用蒸馏水漂洗晾干，用油镜镜检，计算吞噬率和吞噬指数。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数1.5.7NK细胞活性测定实验前24小时将靶细胞传代培养，应用前以Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4*105次方个/ml。小鼠颈椎脱臼处死，无菌去脾，制备脾细胞悬液，用Hanks液洗2次，每次离心10min)1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起，加入0.5ml灭菌水裂解红细胞，20秒后再加入0.5ml2倍Hanks液及8mlHanks液，离心10minl000r/min)，用lml含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1%冰醋酸稀释后计数，调整细胞浓度为2*10的7次方个/ml。将靶细胞加入％孔培养板，每孔100ul，试验孔加入100ul脾细胞(效靶比50:1)，自然释放孔加入100ul培养液，最大释放孔加入100ull%NP40，37°C培养4小时，离心，取上清100ul置96孔酶标板。中，加入LDH基质液100ul，反应6分钟，以imol/L的HCI终止反应，在酶标仪4卯nm处测定OD值反应孔OD"—自然释放孔ODNK细胞活性(％)=■--------------------------------------------------*100%最大释放孔OD—自然释放孔OD1.6实验数据用Excel软件建立数据库，用SPSS软件进行统计分析，再用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法(Duiinett)进行比较。2.结果2.1珍科牌珍科胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响表l珍科牌珍科胶囊对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响组别(g/kg体重)动物数(只)足跖肿胀度(mm)丰p值拿p值溶剂对照组120.21±0.063中剂量配料120.25±0.049>0.050.1120.30±0.054<0.01X).050.2120.35±0.043<0.01<0.010.6120.33±0.042<0.01<0.0111由表1可见，中剂量配料组与溶剂组对照组比较无显著差异(pX).05)，低剂量组与溶剂对照组比较有显著性差异(p<0.01)，中、高剂量组与剂量对照组和中剂量配料组，比较有极显著性差异(p<0.01，pO.Ol)2.2珍科牌珍科胶囊对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验的影响。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表2可见，中剂量配料组与溶剂组对照组比较无显著差异(p>0.05)，各剂量组与溶剂对照组和中剂量配料组比较均无显著性差异(p>0.05，p>0.05)2.3珍科牌珍科胶囊对小鼠脏器/体重比值的影响表3珍科牌珍科胶囊对小鼠脏器/体重比值的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表3可见，中剂量配料组与溶剂组对照组比较无显著差异(pX).05)，各组小鼠的脾脏/体重比值和胸腺/体重与溶剂对照组和中剂量配料组比较均无显著性差异(p>0.05，p>0.05)2.4珍科牌珍科胶囊对小鼠抗体生成细胞数的影响表4珍科牌珍科胶囊对小鼠抗体生成细胞数的影响组别(g/kg体重)动物数(只)溶血空斑数(xlOV全脾)承P值"值溶剂对照组1254.4±15.5中剂量配料1254.5±17.3>0.050.11274.2±24.2<0.05<0.050.21267.6±17.2>0.05>0,050.61263.6±16.3>0.05>0.05由表4可见，中剂量配料组与溶剂组对照组比较无显著差异(p>0.05)，低剂量组与溶剂对照组和中剂量配料组比较均无显著性差异(p<0.05，p<0.05)2.5珍科牌珍科胶囊对小鼠血清溶血素的影响表5珍科牌珍科胶囊对小鼠血清溶血素的影响组别(g/kg体重)动物数(只)半数溶血值(HC50)孝p值承P值溶剂对照组1290.8±21.6中剂量配料1295.2±24.0>0.050.112132.3±27.7<0.01<0.050.212144.3±4.3<0.01<0.010.612136.5±14.5<0.01<0.0113由表5可见，中剂量配料组与溶剂组对照组比较无显著差异(p>0.05)，低剂量组与溶剂对照组和中剂量配料组比较均有显著性差异(p<0.01，p<0.01)，中、高剂量组与溶剂对照组和中剂量配料组比较均有极显著性差异(p<0.01,p<0.01)2.6珍科牌珍科胶囊对小鼠单核一巨噬细胞巨噬功能的影响表6珍科牌珍科胶囊对小鼠单核一巨噬细胞巨噬功能的影响组别(g/kg体重)动物数(只)吞噬指数(a)丰p值承p值溶剂对照组124.77±0.744中剂量配料125.19±0.788>0.050.1125.01±0.636>0.05>0.050.2125.30±0.625X).05>0.050.6125.30±0.710>0.05>0.05由表6可见，中剂量配料组与溶剂组对照组比较无显著差异(p>0.05)，三个剂量组与溶剂对照组和中剂量配料组比较均无显著性差异(pX).05，p>0.05)。2.7珍科牌珍科胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响表7珍科牌珍科胶囊对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响组别(g/kg体重)动物数(只)吞噬百分率(%)傘p值弁p值吞噬指数(a)承P值印值溶剂对照组1224.扭8.510.31±0.12中剂量配料1231.2±9.81>0.050.50±0.22>0.050.11233.6±9.84>0.05X).050.56±0.26<0.05>0.050.21230.7±9.40>0.05>0.050.52±0.20<0.05X).050.61220.0±10.80X).05X).050.48±0.18>0.05X).05由表7可见，中剂量配料组与溶剂对照组比较无显著性差异(p>0.05);低、中、高三个剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬百分率与溶剂对照组和中剂量配料组比较均无显著性差异(p>0.05、p>0.05);低、中剂量组小鼠巨噬细胞吞噬指数与溶剂对照组比较均有显著性差异(p<0.05、p<0.05)。低、中、高三个剂量组小鼠巨噬细胞吞噬指数与中尽量配料组比较均无显著性差异(p>0.05)。2.8珍科牌珍科胶囊对小鼠NK细胞活性的影响表8珍科牌珍科胶囊对小鼠NK细胞活性的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>由表8可见，中剂量配料组与溶剂组对照组比较无显著差异(p>0.05)，三个剂量组与溶剂对照组和中剂量配料组比较均无显著性差异(p>0.05,p>0.05)。表9各组小鼠的初始体重<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>由表9可见，小鼠的初始体重在低、中、高剂量组、中剂量配料组和对照组之间的比较均无显著性差异(p>0.005)，即小鼠的初始体重在各组之间较为均衡。表10各组小鼠的中期体重<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表ll各组小鼠的末期体重<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表12珍科牌珍科胶囊对小鼠体重的影响组别(g/kg体重)动物数(只)免疫一组体重(g)免疫二组体重(g)免疫三组体重(g)免疫四组体重(g)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由表12可见，各组小鼠的体重增加值与溶剂对照组和中剂量配料组比较均无显著性差异(p>0.05、p>0.05)3.小结实验结果表明，珍科牌珍科胶囊能提高小鼠的足趾肿胀程度、增加小鼠的抗体生成细胞数、血清溶血素水平；提高腹腔巨噬细胞吞噬指数；对单核一巨噬细胞碳廓清能力、脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性、脾脏/体重比值、胸腺/体重比值无影响。提示珍科牌珍科胶囊具有增强免疫力的作用。权利要求1、一种混合核苷酸、氨基酸与中药保健胶囊的配方及制作工艺，其特征在于它采用以下技术方案它由葛根、混合核苷酸、杜仲、L-赖氨酸盐酸盐组成，葛根所占重量百分比为18-53％，混合核苷酸所占重量百分比为20-55％，杜仲所占重量百分比为5-15％，L-赖氨酸盐酸盐所占重量百分比为10-14％，将杜仲和葛根分别置在60℃-70℃下干燥；将杜仲和葛根粉碎并过120目筛，加入相应重量的混合核苷酸、L-赖氨酸盐酸盐混合均匀，将均匀混合物料置于60-70℃下干燥5小时灭菌，最后填充胶囊。2、根据权利要求1所述的一种混合核苷酸、氨基酸与中药保健胶囊的配方及制作工艺，其特征在于它由葛根、混合核苷酸、杜仲、L-赖氨酸盐酸盐组成，采用葛根380g、混合核苷酸350g、杜仲150g、L-赖氨酸盐酸盐120g混合制作成1000g成品。全文摘要一种混合核苷酸、氨基酸与中药保健胶囊的配方及制作工艺，它涉及一种中药保健品，具体涉及一种混合核苷酸、氨基酸与中药的保健胶囊。本发明是采用以下技术方案它由葛根、核苷酸、杜仲、L-赖氨酸盐酸盐组成，葛根所占重量百分比为18-53％，核苷酸所占重量百分比为20-55％，杜仲所占重量百分比为5-15％，L-赖氨酸盐酸盐所占重量百分比为10-14％。由于人体吸收核酸是以核蛋白形式存在，由DNA的基本组成单位脱氧核苷酸、RNA酶解制得的核苷酸及氨基酸组成的科学配方不仅解决了外援性核酸在人体吸收转换率低的难题，而且解决了DNA、RNA、蛋白质三项补充的难题。文档编号A61K31/7088GK101322739SQ20081013290公开日2008年12月17日申请日期2008年7月1日优先权日2008年7月1日发明者李光伟申请人:李光伟