专利名称：：治疗骨质疏松的口服液的制作方法
技术领域：
：本发明涉及治疗骨质疏松的药物
技术领域：
，特别涉及一种治疗骨质疏松的口刀良液。
背景技术：
：骨质疏松是以低骨量和骨组织微结构退行性改变为主，伴有骨脆性增加的一种全身性代谢性骨骼疾病。骨痛及功能障碍是骨质疏松临床最常见症状，而骨质疏松最严重的后果是骨质疏松性骨折，尤其是髋部骨折，骨质疏松病人一旦发生髋部骨折，一年内死亡率高达15%-20%,永久病残率达50%,这一切给个人、家庭、社会和国家均会造成严重的危害。骨质疏松在西医治疗中，通过刺激成骨细胞增殖而促进骨形成的最强的药物是氟化物，其余大多数用于治疗骨质疏松的药物均抑制破骨细胞。而治疗骨质疏松症的理想药物应该是既抑制骨吸收又刺激骨形成。目前治疗骨质疏松症主要是用雌激素以及其他药物辅助治疗，可改善骨质疏松病人的骨密度及其相关症状。近年来人们发现西药在治疗骨质疏松方面有毒副作用大、远期疗效不肯定、价格昂贵等缺点，西药仅能阻止和延緩病情的进一步发展。因此，需要发明一种新的治疗骨质疏松的中药口服液以解决上述问题。
发明内容本发明的主要目的在于基于现有技术的不足而提供一种毒副作用小、疗效肯定、价格适宜的治疗骨质疏松的中药口服液。本发明提供一种治疗骨质疏松的口服液，所述的治疗骨质疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿1215、熟地15~20、黄芪15~20、杜仲15~20、补骨脂2030、骨碎补20~30、水适量。作为本发明优选实施方式，治疗骨质疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿15、熟地20、黄芪20、杜仲20、补骨脂30、骨碎补30、水适量。本发明将淫羊藿、熟地、黄芪、杜仲、补骨脂、骨碎补6味中药用于治疗骨质疏松，功能主要为补肝益肾，强筋健骨，活血止痛。中医认为，肾为先天之本，主生长发育。"肾藏精，主骨生髓。"肾藏精,精生髓，髓生骨，故骨者肾之所合也。肾精充足，骨髓化生有源，骨髂得养，则骨质致密。随着年龄渐老，身体渐衰，精亏髓少，骨骼枯萎，引起骨质疏松。骨质疏松涉及的主要脏器在肾，基本病理以肾亏虚，精血不足为主。将其分型为肝肾两虚，阴虚火旺，阳虚督寒，阴阳两虚。肝肾亏虚，精血不能濡养筋骨以脉，当给予滋补肝肾，强筋壮骨类中药。阴虚则肝血不足，肾精不充，治疗以滋阴清热，补肾强筋为主。采用补肾填精为主，辅以健脾养血、活血化瘀、祛风除湿、强筋壮骨诸法治疗骨质疏松，其辨证施治和综合治疗手段的运用，能迅速有效地改善患者的临床症状，且相对于西药而言，成本低、毒副作用小，可有效地防治骨质疏松。所以，原发性骨质疏松症相当于中医学中的肾虚骨萎，补肾是中医治疗骨质疏松症的主要方法。现代中医对骨质疏松症作了大量研究，郭氏等在比较肾气虚证、肾阴虚证和肾阳虚证的骨密度情况时，发现肾阳虚证的骨密度低于肾气虚证和肾阴虚证。比较肾精不足、肾阴虚、肾阳虚和肾阴阳俱虚四种证型的骨质疏松程度，发现肾阳虚和肾阴阳俱虚者骨质疏松程度最严重。中医认为肾虚发展到该阶段，不仅造成肾中物质基础匮乏，而且肾的脏腑功能严重受损，故在治疗方面温补肾阳、阳中求阴显得格外重要。本发明所用组方是经过前期筛选，临床疗效良好的组方，在组方中着重温补肾阳、调补肾阴。本发明中补骨脂、淫羊藿、杜仲具有补肾固精、强筋壮骨之功效；黄芪具有强心、抗心肌缺血、提高免疫力、降糖、抗衰老、保护脏器等多种药理作用；骨碎补具有补肝肾强筋骨的传统功效，现代研究发现，它具有一定的改善软骨细胞的功能，推迟细胞退行性变，降低骨关节病变率的作用；熟地具滋肾填精之功。六药均归肾经，共达补肾填精、生髓健骨的作用。具体实施例方式为使本发明更加容易理解，下面将进一步阐述本发明的具体实施例。实施例1本发明药物对去卵巢大鼠作用机制的研究1、动物的选择和分組选用6月龄雌性SD大鼠，在水合氯醛麻醉下，行双侧卵巢切除术26只，假手术组8只。并将卵巢切除的大鼠分为病理对照组8只、雌二醇组9只和本发明药物治疗组9只。2、方剂配制按淫羊藿12~15、熟地1520、黄芪15~20、杜仲15~20、补骨脂20~30、骨碎补2030比例以20倍蒸馏水浸泡、煎煮，过滤液离心浓缩；用75°/乙醇沉淀，回收乙醇；调pH至7.0;加活性碳脱色；制成含生药2g/m1的药液。(注，下述实施例2、3、4也采取同样的方法配置本发明药物。)3、给药方法及取材雌二醇组40jLig/kg,三天一次，本发明药物治疗组12g/kg,每天一次；假手术组、模型组每天灌生理盐水。治疗12周，行骨密度测定后，取血并分离血清，股骨用40%多聚曱醛固定。4、骨密度测定使用双能X线骨密度检测仪，应用小动物软件，测定并分析大鼠左后肢股骨和胫骨的骨密度。表l各组大鼠的骨密度变化(X±S，g/cm2)组别鼠数股骨胫骨平均假手术组80.285±0.0330.256±0.0300.271±0.032模型组80.250±0.0140.233±0.0120.242±0.013雌二醇组90.261±0.0150.278±0.0100.270±0.013药物治疗组90.268±0.0190.273±0.0130.270±0.016注模型组与假手术组相比，差异有显著性意义P<0.01;雌二醇组与模型组相比，差异有显著性意义P<0.01。结果本发明药物可提高去卵巢大鼠股骨和胫骨平均骨密度，本发明药物中的有效成分与雌激素受体结合后，通过抑制破骨细胞的过度活动，促进小梁骨生成及其向编织骨转化。5、骨形态计量学股骨石蜡包埋后，选择股骨中点切片1-2张，HE染色后光镜观察，计算骨髓腔与骨小梁面积百分比，并对骨小梁的宽度进行测量。表2各组大鼠股变化(X土S)组另'J鼠数髓腔面积/骨小梁面积骨小梁宽度Um)假手术组80.269±0.0270.250±0.028模型组80.238±0.0110.227±0.009雌二醇组90.257±0.0160.297±0.013药物治疗组90.257±0.0190.290±0.015注模型组与假手术组相比，差异有显著性意义P<0.05;雌二醇组与模型组相比，差异有显著性意义P<0.05,药物治疗组与病理对照组相比，差异有显著性意义P<0.05。结果手术组骨小梁多而完整，排列规则；卵巢切除组骨小梁明显稀疏，排列不规则，骨髓腔增大；补肾中药和雌二醇治疗与模型组相比见骨小梁明显致密，骨髓腔缩小。6、骨生化检测检测血清中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、孕酮(PR0G)、皮质醇(C0R)、睾酮(T)的水平变化。表3各组大鼠血清激素水平测定结果(X±S)M~~~~^~~E2(pg/ml)~~LH(mlu/ml)FSH(mlu/ml)PROG(ng/ml)C0R(ng/ml)T(ng/ml)假手术组821.93±13.243.78±0.550.35±0.3432.44±18.3714.11±8.880.70±0.09模型组811.12±6.604.92±0.630.59±0.433.51±1.614.90±2.440.66±0.73雌二醇组957.12±0.0304.77±1.220.60±2.543.34±1.553.66±2.330.59±0.2中药治疗组928.83±16.925.89±0.231.11±1.352.44±0.6811.65±8.680.03±0.01注模型组与假手术组相比，差异有显著性意义P<0.05;中药治疗组与模型组相比，差异有显著性意义P<0.05。结果本发明药物可提高实验动物的雌二醇水平，但睾酮水平下降，提示本发明药物促进了睾酮向雌二醇的代谢转化过程。实施例2本发明药物对大鼠骨tt质干细胞增殖与分化的影响(1)试剂胎牛血清(杭州四季青公司产品)，DMEM培养基(美国Gibco公司产品)，胰酶及四曱基偶氮唑盐(MTT试剂为Sigma公司产品)，i咸性磷酸酶(ALP)试剂盒。(2)仪器倒置显微镜(Nikon公司)，C02培养箱、细胞培养板(美国Gibco公司产品)，723型分光光度仪、ELX808酶标仪(美国BioTek/^司产品)。(3)MSCs分离与培养:取大鼠股骨，去两端沖出骨髓。力口10%培养基，置37。C，5%C02，以约(2~5)x107cm2密度种于培养瓶中，放入5%0)2培养箱内培养，待细胞长满后进行传代。(4)不同浓度的本发明药物对ALP活性的影响表l不同浓度本发明药物对ALP活性的影响(x±s)注a与对照组相比P復Ol。结果低浓度组的a值在2、3d时明显高于对照组(P<0.05)，在1、2、5d时与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(5)不同浓度本发明药物对成骨细胞增殖的影响表2不同浓度本发明药物对成骨细胞增殖的影响(A,x±s)吸光度1d2d3d4d5d0.203±0.0120.337±0.021b0.452±0.023b0.522±0.0140.542±0.0140.326±0.020a0.046±0.032a0.580±0.051a0.661±0.033a0.661±0.033a0.521±0.035a0.605±0.028a0.693±0.228b0.802±0.045a0.802±0.045a0.166±0.0110.266±0.0430.365±0.0520.468±0.0550.468+0.055注与对照组相比aP<0.01，bP<0.05结果在l、2、3、4、5d时，中、高浓度组的A值明显高于对照组(p<0.01)。低浓度组的A值(6)不同浓度本发明药物对矿化结节数的影响表3不同浓度本发明药物对矿化结节数的影响(x±s)nId2d3d4d5d40.256±0.042a0.389±0.052a0.456±0.028a0.233±0.045a0.112±0.023a40.387±0.056a0.561±0.071a0.862±0.061a0.402±0.025a0.223±0.027a40.210±0.023a0.367±0.Olla0.488±0.053a0.325±0.014a0.214±0.042a40.136±0.0720.235±0.0260.468±0.0250.221±0.0130.108±0.036矿化结节1.23±0.35a1.45±0.28a1.56±0.33a0.22±0.12别度度度组浓浓浓照组低中高对n4444别度度度组浓浓浓昭w组低*高对444别度度度组组浓浓浓照低中高对8注a与对照组相比P<0.05。结果在2,3d时明显高于对照组(pW.05),在1、2、5d时与对照组比较差异无显著性(p〉0.05)。本实验显示，诱导分化培养出现矿化结节，茜素红染色阳性，ALP染色、骨钓素免疫组化染色均呈阳性，提示诱导培养液具有诱导MSCs定向分化成骨细胞具有成骨能力。实施例3本发明药物拮抗地塞米松促骨髄基质细胞向成脂细胞分化的研究(l)MSCs的分离与培养待细胞长满后进行传代，使用第3代细胞进行实验，分地塞米松(1x1(Tmol/L)组、地塞米松加本发明药物(80mg/L)组与对照组(常规血清培养)。倒置显微镜下观察细胞生长情况。(2)本发明药物与地塞米松对MSCs增殖的影响表1本发明药物与地塞米松对MSCs增殖的影响(x±s)~~n光吸收值(l，2，3d)123A~§0.166±0.0110.201±0.043*0.223±0.052*B30.145±0.0120.211±0.021*0.234±0.023*_g_30.253±0.0120.644±0.0211.232±0.023**与对照组相比P<0.05，A:地塞米+>组，B:地塞米松加本发明药物组，C:对照组。结果MTT检测显示，地塞米松可抑制MSCs的增殖，本发明药物不能干预地塞米^f^对MACs的抑制作用。(3)本发明药物与地塞米;^MSCs石威性》寿酸酶的影响表2本发明药物与地塞米松对MSCs碱性磷酸酶的影响(x±s)^~~ALP(mU/104细胞)(7，14，21d)123A30.134±0.2111.201±1.043*5.lll土l.223*B30.141±0.2351.223土0.021*6.234±2.023*C30.141±0.2350.532±0.0513.234±1.045*p復05，~~A:地塞米松组，B地塞米松加本发明药物组，C:对照组结果地塞米松可显著增强骨髓基质细胞的碱性磷酸酶活性。(4)本发明药物与地塞米松MSCs对三酰甘油含量的影响表3本发明药物与地塞米松对MSCs三酰甘油含量的影响(x±s)~n三酰甘油(txmol/104细胞)(7，14，21d)123A30.134±0.211"""0.201±1.0431.111±1.223*~B30.141±0.2350.223±0.0210.014±1.023C30.143±0.1230.153±0.0340.019±1.032p<0.05,A:地塞米松组，B地塞米松加本发明药物组，C:对照组。结果本发明药物可以逆转糖皮质激素的促成脂肪作用，诱导骨髓基质细胞向成骨细胞，促进骨髓基质细胞在体外向成骨细胞分化。实施例4本发明药物对骨髓细胞增殖的影响(1)分组对照组，喂水；对照组，喂药；假去势组(只切一刀)，喂水；假去势组(只切一刀)，喂药；单去势组只切一边卵巢)，喂水；单去势组(只切一边卵巢)，喂药；去势组(全去卵巢)，喂水；去势组(全去卵巢)，喂药；所有实验小鼠在手术后的第八天才喂药(每只150ul，每天一次)或喂水作对照，30天后取肝，骨髓,血，骨作测试之用。(2)测量指标LI-6，LI-6R，LI-7，LI-7R，gpl30，BMP—1，BMP-2,BMP-3,BMP—4,BMP-5，BMP-6BMP-7,及cbfal。结果(1)本发明药物可下调骨髓细胞IL-6/IL-7等细胞因子的表达。IL-6/IL-7是最强的骨吸收刺激因子，它对骨重建的调节破骨细胞前体细胞，使其分化为破骨细胞,发挥骨吸收重建的作用。(2)本上调BMP-7的表达。BMP-7具有强烈的骨诱导活性，在骨骼发育的不同阶段具有一定的调节作用，它可促进成骨细胞增殖和碱性磷酸酶的活性，表明BMP-7对成骨细胞的作用。实施例5本发明药物剂型的改造新剂型-一双骨汤(1)双骨汤组成淫羊藿15、熟地20、黄芪20、杜仲20、补骨脂30、骨碎补30适应症骨质疏松症、骨性关节炎。规格750ML/袋。用法每日一次，每次一袋，6-8周一个疗程。(2)双骨汤治疗骨质疏松骨折临床分析对60例不同部位骨质疏松性骨折的患者服用双骨汤后观察血清骨性碱磷酶、I型前胶原羧基端肽、骨钙素、骨强度和骨折愈合情况。(3)放射学表1两组骨折病例治疗后》文射学结果[例(％)]_§J|_^_n无骨痂少量骨痂骨痂明显未愈合~延缓愈合li73018卿11(37)1(3)1(3)6(20)23(77)306(20)18(60)6(20)01(3)29(97)60242971752注采用Mann-whitneyU检验，统计量6周，Z=-3.327，两侧概率P<0.001;12周，Z=-2.270,P<0.05,两组在6周与12周差异均有统计学意义。(4)生化指标ii经绍经、r验疗分对治合<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表2两组骨折病例治疗后骨形成生化指标结果(X±S)分组^T^<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注采用HotellingT才企-验，与骨折组比较，aP<0.05，bP<0.01。(5)骨强度表3两组骨折病例治疗后骨强度结果(例)注采用Mann-whitneyIU全'睑，统计量6周，Z=-3.327，两侧概率P〈0.001;12周，Z=-2.270，P<0.05,两组在6周与12周差异均有统计学意义。由上述实施例可知1、本发明药物可提高去卵巢大鼠股骨和胫骨平均骨密度2、本发明药物提取液可诱导培养液具有诱导MSCs定向分化为成骨细胞并具有成骨能力3、本发明药物可以逆转糖皮质激素的促成脂肪作用，并诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化。4、本发明药物萃取液可下调骨髓细胞IL-6/IL-7等细胞因子的表达，表明本发明药物对骨重建的调节破骨细胞前体细胞，使其分化为破骨细胞，发挥骨吸收重建的作用。5、本发明药物萃取液上调BMP-7的表达。表明本发明药物激活骨诱导活性,促进成骨细胞增殖和碱性磷酸酶的活性，具有成骨作用。6、本发明药物(双骨汤)治疗绝经后骨质疏松性骨折的肾虚症状有较好的緩解作用。最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。1权利要求1.一种治疗骨质疏松的口服液，其特征在于，所述的治疗骨质疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿12～15、熟地15～20、黄芪15～20、杜仲15～20、补骨脂20～30、骨碎补20～30、水适量。2.如权利要求l所述的治疗骨质疏松的口服液，其特征在于，所述的治疗骨质疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿15、熟地20、黄芪20、杜仲20、补骨脂30、骨碎补30、水适量。全文摘要本发明提供一种治疗骨质疏松的口服液，所述的治疗骨质疏松的口服液由下述重量配比的原料制成淫羊藿12～15、熟地15～20、黄芪15～20、杜仲15～20、补骨脂20～30、骨碎补20～30、水适量。本发明将淫羊藿、熟地、黄芪、杜仲、补骨脂、骨碎补6味中药用于治疗骨质疏松，功能主要为补肝益肾，强筋健骨，活血止痛。文档编号A61K36/185GK101485774SQ20081022034公开日2009年7月22日申请日期2008年12月24日优先权日2008年12月24日发明者涂平生申请人:涂平生