专利名称：一种生物物质微量吸取贮存器的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种生物物质微量吸取贮存器，具体涉及一种能够 精确转移生物物质的微量吸取贮存器。
背景技术：
随着生物冷冻技术的发展，越来越多的生物物质能够被长时间的
保存，如人卵冻存技术的发展为人类剩余能力的保存提供了可能；卵巢 组织的保存为那些由于各种原因必须切除卵巢的女性带来了福音。这一 系列的成果在很大程度上归功于冷冻培养液配方的改进，但冷冻物质承 载器及相关吸取技术的改进也起到了 一定的促进作用。
经过数十年的研究和改进，慢速冷冻技术相对比较成熟，但其也 存在着非常严峻的瓶颈亟待突破，就是慢速冷冻过程中冰晶的形成以及 冷冻保护剂毒性渗透对生物物质特别是胚胎及卵母细胞的损伤。玻璃化 冷冻作为 一种新兴的冷冻技术，其操作的简便性以及较高的成功率越来 越受到人们的青睐。目前用于生物物质玻璃化冷冻的承载器有多种，如 Cryoloop、 Cryoleaf、 electron microscopic grid等。在应用上，这
些承载器均取得了不错的冷冻效果。这些成果的获得取决于对样品的准 确吸取，因为伴随样品一起进入承载器的液体量与冷冻效果密切相关， 这也是冷冻效果因人的熟练程度以及发挥状态不同而存在差异的原因之
目前所用的玻璃化冷冻细胞吸取器主要为经酒精灯拉制的巴斯德滴 管或毛细管，在吸取生物物质时不可避免的会将大量的液体伴随样品一 起吸入管内，给下一步的操作带来了不便。
发明内容
3针对以上技术缺陷，本实用新型提供了一种使用安全便捷的、控制精确的生物物质微量吸取贮存器。
本实用新型生物物质微量吸取贮存器包括内管1、外管3、 口吸管2、手控注射器4和乳胶管5;其中，所述内管1下端伸入外管3内部，内管1上端通过乳胶管5与口吸管2连接，手控注射器4通过乳胶管5与外管3粗端开口连接。
本实用新型中，所述伸入外管3的内管1下端的管口内径比所要吸取生物物质的直径大10 ~ 40微米，从而微量控制所吸生物物质以及液体的量；其外管3细端部分的管口内径稍大于内管1下端的管口外径，且小于内管1下端的管口外径与生物物质两倍外径之和，主要用以控制主体生物物质的聚集，其中内管1下端的管壁厚度为1-50微米。
本实用新型中，所述手控注射器4为本领域常规的普通注射器，包括但不限于例如lml 、 5ml注射器或本领域常规的微控制注射器，包括但不限于例如Narishige、印pendorf注射器等。
本实用新型中，所述口吸管2为本领域常规的口吸管，如各种商品化口吸管，也可以为含滤器的由滤器、软管组成的自制口吸管。
本实用新型中，所述的内管1、外管3的制作材料是本领域常规的透明、耐超低温或具有高热传导性的材料，包括但不限于，例如聚氟管，聚碳酸酯管。
本实用新型中，所述生物物质为各种类型细胞、胚胎、组织块或小型生物个体，其中该生物物质的直径为10~ 1000微米。
本实用新型微量吸取贮存器在使用时，首先通过口吸管2在内管1中吸取一定的玻璃化冷冻液，将含有一定量冷冻液的内管1嵌入外管3之中，确保内管1与外管3之间密封不漏气；然后调节与外管3相连的手控注射器4,将预先转移至冷冻液中的生物物质连同适量的冷冻液吸入外管3中，冷冻液进入外管3的同时，生物物质被阻挡在内管1下端开口处；此时通过与内管1相连的口吸管2轻微施加少许负压，便能将所需的生物物质及极少量的冷冻液吸入内管1较细部位，该部分含生物物质的液体与预先吸取的冷冻液之间存在一段空气柱；然后拔出内管1，将生物物质取出进行冷冻即可，或进行其它操作；本实用新型的内管1 也可以直接作为冷冻保存管。
本实用新型中，本领域技术人员可以根据不同的生物物质，选择 不同材料和不同内径的内管、外管，从而选择适于该生物物质的本发明 实用新型。
本实用新型微量吸取贮存器具有操作筒单、安全方便的特点，且能 够精确控制伴随生物物质进入承载器中的液体的量，提高了冷冻效果。
图1为生物物质^f效量吸^i贮存器的结构示意图； 图2为生物物质微量吸取贮存器的使用状态图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型作进一步的说明，但本实用 新型并不受限于此。
如图1所示，本实用新型生物物质微量吸取贮存器，包括内管1、 外管3、 口吸管2、手控注射器4和乳胶管5;其中，内管1下端伸入 外管3内，内管1上端通过乳胶管5与口吸管2连接，手控注射器4通 过乳胶管5与外管3粗端开口连接，伸入外管3的内管1下端的管口 内径比所要吸取生物物质的直径大10~40微米，其中该生物物质的直径 为10 1000微米；外管3管口内径稍大于内管1下端的管口外径，且小 于内管1下端的管口外径与生物物质两倍外径之和，其中内管1下端的 管壁厚度为1-50微米。本实用新型生物物质微量吸取贮存器的使用状态 如图2所示，其中图2中的6为冷冻液、7为生物物质及适量冷冻液、 8为空气柱、9为生物物质及少量冷冻液。
实施例1人卵母细胞的吸取
(1)用聚乙烯管制作外径150、内径130的内管1，用玻璃材料制作 外径200、内径180的外管3;
5(2) 通过自制的口吸管2在内管1中吸取一定的玻璃化的冷冻液6，冷冻液6 (成分为改良人输卵管液(mHTF) +20%血清替代物(sss) +15%乙二醇(EG) + 15%二曱基亚砜(DMS0) +0. 5M蔗糖(Sucrose));
(3) 将含有一定量冷冻液6的内管1嵌入外管3之中，确保内管1与外管3之间密封不漏气；
(4) 将2~3枚人卵母细胞在成分为mHTF+20%SSS+7. 5 % EG +7. 5 %DMS0的液体中处理4 ~ 5分钟后，转移至最终冷冻液中；
(5) 半分种后调节与外管3相连的普通lml的手控注射器4中的负压，使卵母细胞及适量的冷冻液7 —起进入外管3之中；
(6) 冷冻液进入外管3的同时，卵母细胞被阻挡在内管1 口处，此时通过与内管1相连的口吸管2轻微施加少许负压便能将卵母细胞及极少量的冷冻液9吸入内管1较细部位，该部分含卵母细胞的液体与预先吸取的冷冻液之间存在一段空气柱8;
(7) 拔出内管1,将卵母细胞以及极少量的冷冻液9置于Cryoloop上，再浸入液氮进行冷冻保存。
实施例2:人8-细胞胚胎的吸取
(1) 用聚乙烯管制作外径150、内径130的内管1，用玻璃材料制作外径200、内径180的外管3;
(2) 通过商品化的口吸管2在内管1中吸取一定的玻璃化冷冻液，冷冻液成分为mHTF+20°/。sss+15%EG + 15%PROH+0. 5M Sucrose;
(3) 将含有一定量冷冻液的内管l嵌入外管3之中，确保内管1与外管3之间密封不漏气；
(4 )将2 ~ 3枚人8-细胞胚胎放入成分为mHTF+20%SSS+7. 5 % EG +7. 5 %PR0H的液体中处理4 ~ 5分钟后，转移至最终冷冻液中；
(5) 半分种后调节与外管3相连的螺旋注射器中的负压，使胚胎连同适量的冷冻液一起进入外管3之中；
(6) 冷冻液进入外管3的同时，胚胎被阻挡在内管1 口处，此时通过与内管1相连的口吸管2轻微施加少许负压便能将胚胎及极少量的冷冻液吸入内管1较细部位，该部分含胚胎的液体与预先吸取的冷冻液
之间存在一段空气柱；
(7)拔出内管1，将胚胎以及少量的冷冻液置于Cryoloop上，再浸 入液氮进行冷冻保存。
实施例3:牛MII期牛卵母细胞胚胎的吸取
(1) 用聚乙烯管制作外径180、内径150的内管1，用玻璃材料制作 外径220、内径200的外管3;
(2) 通过自制的口吸管2在内管1吸取一定的显微操作液，操作液 成分为G-M0Ps+5mg/mlBSA;
(3) 将含有一定量才喿作液的内管1嵌入外管3之中，确保内管1与 外管3之间密封不漏气；
(4) 调节与外管3相连的普通lml注射器中的负压，使10~20枚 牛MII期牛卵母细胞胚胎连同适量的培养液一起进入外管3中，培养液 成分Gl. 5+5mg/mlBSA;
(5) 培养液进入外管3的同时，胚胎被阻挡在内管1 口处，此时通 过与内管1相连的口吸管2轻孩i施加少许负压便能将牛卵及极少量的培 养液液吸入内管1较细部位，该部分含胚胎的液体与预先吸取的操作液 之间存在一段空气柱；
(6 )拔出内管1，将牛卵以及少量的培养液吹入含操作液的核移植皿 中，并进行核移植才喿作。
实施例4:人卵母细胞的贮存
(1)制作外径150、内径130的内管1以及外径200、内径180的 外管3;
(2 )用内管1吸取一定的最终冷冻液，冷冻液成分为mHTF+20°/。sss+ 15%EG +15%DMSO+0. 5M Sucrose;
(3)将含有一定量冷冻液的内管1嵌入外管3之中，确保内管1与 外管3之间密封不漏气；
7(4 )将2 - 3枚人卵母细胞在成分为mHTF+20%SSS+7. 5 % EG + 7. 5 % DMS0的液体中处理4 - 5分钟后，转移至最终冷冻液中；
(5) 半分种后调节与外管3相连的注射器中的负压，使卵母细胞连 同适量的冷冻液一起进入外管3之中；
(6) 冷冻液进入外管3的同时，卵母细胞被阻挡在内管1 口处，此 时通过与内管l相连的口吸管2 (图1-2)轻微施少许负压便能将卵母 细胞及极少量的冷冻液吸入内管1较细部位，该部分含卵母细胞的液体 柱与预先吸取的冷冻液之间存在一段空气柱；
(7 )拔出内管1，将含有卵母细胞的液体柱通过负压使其上升一段距 离，并用经酒精灯消毒的镊子将内管l开口处捏紧从而使其封闭；
(8)随后，立即将含有卵母细胞的内管1细长部分浸入液氮中，去 除口吸管2并将细管的另一端用塞子塞住，并将整个内管1浸入液氮中 进行保存。
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权利要求1. 一种生物物质微量吸取贮存器，其特征在于，所述贮存器包括内管(1)、外管(3)、口吸管(2)、手控注射器(4)和乳胶管(5)，所述内管(1)下端伸入外管(3)内部，内管(1)上端通过乳胶管(5)与口吸管(2)连接，手控注射器(4)通过乳胶管(5)与外管(3)粗端开口连接。
2. 根据权利要求1所述的生物物质吸取贮存器，其特征在于，所述内管(1)下端的管口内径比所要吸取生物物质的直径大10~40微米，其中生物物质的直径为10~ 1000微米。
3. 根据权利要求2所述的生物物质吸取贮存器，其特征在于，所述外管(3)细端的管口内径稍大于内管(1)下端的管口外径，且小于内管(1)下端的管口外径与生物物质两倍外径之和，其中内管(1)下端的管壁厚度为1-50微米。
4. 根据权利要求3所述的生物物质吸取贮存器，其特征在于，所述手控注射器(4)为普通注射器或者微控制注射器。
5. 根据权利要求4所述的生物物质吸取贮存器，其特征在于，所述口吸管(2)为含滤器的自制口吸管或者商品化口吸管。
6. 根据权利要求5所述的生物物质吸取贮存器，其特征在于，所述内管(1)、外管(3)为具有透明、耐超低温或高热传导性的材料。
专利摘要本实用新型涉及一种生物物质微量吸取贮存器，包括内管(1)、外管(3)、口吸管(2)、手控注射器(4)和乳胶管(5)；其中，内管(1)下端伸入外管(3)内，内管(1)上端通过乳胶管(5)与口吸管(2)连接，手控注射器(4)通过乳胶管(5)与外管(3)粗端开口连接。本实用新型能够在带有极少量液体的情况下将生物物质进行转移或冷冻保存，具有控制精确、使用安全方便的特点。
文档编号A61B17/425GK201282994SQ20082013421
公开日2009年8月5日 申请日期2008年9月12日 优先权日2008年9月12日
发明者吴克良, 陈子江 申请人:陈子江