用于增加骨强度的可食用脂肪组合物的制作方法

专利名称：：用于增加骨强度的可食用脂肪组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用于在人中，尤其是在儿童人群中，增加骨强度的组合物和方法，以及用于在人中改善骨状态的方法。
背景技术：
：在整个本申请中提到的所有出版物均全部以引用方式合并入本文中，包括其中引用的所有参考文献。骨强度传统的双能X线吸收测量法(DEXA)粗略地表示指定区域的骨矿物质浓度。该方法限于仅测量骨的一种特性，骨矿物质密度(BMD)，也称为骨量。DEXA不考虑诸如骨大小或骨结构的许多特性。BMD还受体重和生长的影响。骨强度反映了几种改变的骨特性，并与骨密度相比，提供了更全面的骨脆性的骨强度图。声速(SOS)是测量骨强度的最适宜的技术。声波在骨中的传播[声速(SOS)]由许多因素来决定，包括矿物质密度、皮质厚度、弹性和微结构；因此，可能提供比单独骨密度的测量更全面的骨强度图。骨结构由小梁和相关结构的模式来决定。骨结构也由称为“沃尔夫定律(Wolffslaw)，，的定律来决定，该定律表明“骨的形态和功能的每一变化，或仅其功能变化，都紧接着在其内部结构中发生某些确定的改变，并在其外部构造中发生继发改变”。MM今天骨质疏松症被医护专业人员定义为“具有老年人转归的儿童疾病”。这种状态使得人们更加关注婴儿、儿童和青少年时期健康骨的发育，并且期望有利于减少未来成人中骨质疏松症的发生率。研究者同意这样的观点，S卩，在儿童和青少年时间没有达到最佳峰值骨强度的个体在其人生中较晚的时候可能会发生骨质疏松症，即使他没有发生骨丢失加速。许多儿童由于缺少体育运动、营养差或其他危险因素而处于骨发育不佳的风险中，因此，婴儿和儿童的骨测量对于确保到成年时儿童发育为最佳峰值骨强度是非常重要的。处于骨发育不良的风险的特殊人群包括早产的儿童、肥胖的儿童和其他人，他们尤其可受益于骨发育的早期评价。大量汇集的临床证据显示儿童的生活方式可影响其骨发育并影响其未来几年的骨骼健康。在骨骼发育和生长期间生活方式和营养都对骨有显著的影响。在青春期结束时，成人已经积累了几乎全部的骨，将使他达到最大峰值骨强度。此峰值决定了在后面的成年期中骨强度下降的起始点。连同随后的骨丢失一起，其将决定一个人在以后的生活中发生骨质疏松症的危险性。所有这些生活方式因素对骨健康的影响都强调了增加骨强度或状态的积极因素在婴儿和儿童的这些关键岁月期间的重要性。卫生专业人员不断地呼吁儿童和青少年采用所有的健康生活方式以帮助骨达到其最大强度峰值。早产儿尽管过去20年中在美国总出生率(livebirthrate)稳定的下降，但早产儿的发生率(在妊娠37周前出生的婴儿)在不断地增加。代谢性骨病是早产儿中相对常见的事件，因为骨矿物质增加的主要时期通常发生在妊娠的最后三个月内，并且其在子宫外环境中难以再生。早产儿，或未成熟儿，根据其重量被分类为AGA(适合孕龄)或SGA(孕龄小)。另夕卜，婴儿还分类为LBW(低出生重量，出生时小于2.5kg)，VLBW(极低出生重量，出生时小于1.5kg)，或超低VLBW(出生时小于Ikg)。未成熟儿，尤其是很小的(孕龄小)未成熟儿，易于发生早产儿代谢性骨病(MBDP)。骨质减少的程度与体重和孕龄负相关。有数据显示在出生重量小于l，500g且孕龄小于34周的新生儿中有10-20%检测到骨折。极低出生重量(VLBW)婴儿具有增加的骨质减少风险，因为在子宫内的骨量增加有限并且骨营养素的需求较大。在以超低出生重量(ELBff)出生的婴儿中骨质减少的患病率估计为50%，且具有很高的骨折率。在新生儿期的高死亡率、发生支气管肺发育不良、利尿剂和类固醇的长期治疗、长时间不动以及需要全胃肠外营养增加了骨健康受损的风险。这就突出了高质量和骨强度改善配方的必要性和极大重要性。早产发生率的不断增加，以及由于技术的高度进步而获得的其生存率的提高都增加了为早产儿的新生儿期和以后的生活开发出更具有创新性和成本有效的治疗方式的需求。早产儿在妊娠的第三个三个月期间骨强度不会正常地增加，并且经常出生时骨强度很低。早产儿，由糖尿病母亲生的婴儿和接触皮质类固醇的婴儿被认为具有骨健康受损的风险。预防早产儿骨质减少的大多数治疗努力已经集中在钙和维生素D含量的营养变化。然而，尽管使用富含矿物质的专用配方，但这些努力仅部分地成功用于改善早产儿骨矿化。此外，这可能反映出这样的事实这些努力集中于定量而非定性的变化。尽管预防骨质减少是最终的目标，但鉴别已存在有骨缺损的婴儿将便于早期干预，诸如饮食调整、运动计划或药物治疗。骨强度随访能够追踪新生儿的骨。基于此追踪的结果，儿科医生/营养学家可对发育不全的婴儿/学步幼童/儿童推荐质量配方或其他食物以便达到或保持更强壮的骨。遞骨强度的大部分在18岁之前自然增加的，使得儿童和青春期期间的骨生长成为关键过程。而且，在此关键时间内不能达到峰值骨强度在以后的时间中无法补偿。这导致未来骨质减少和骨折的风险增加。儿科医生处于影响其患者的骨发育并防止其患者的长期会导致骨折风险和骨质疏松症的行为和习惯的关键位置。骨强度和骨发育受一些重要因素的影响，这些因素对于保持骨健康也是很重要的。钙是骨的主要矿物质成分之一，为骨骼提供密度和刚度，并且因此在保持骨健康中是重要的因素。建议儿童和青少年应该将其钙摄入大大地增加至目前平均水平之上，以确保骨充分的发育。许多大概健康的儿童的饮食中乳制品、青菜和其他富钙食品的含量不足。规律的体育运动是骨发育中的另一重要因素。研究已经显示规律的锻炼有助于强化骨。锻炼使肌肉收缩牵拉骨，在骨上施加力，并且使其强化。目前的建议包括在一周的大多数时间内适度的体育运动。已知还有多种其他的因素与对骨状态的负面影响和骨质疏松症的最终形成有关。在这些因素中，有导致神经性厌食的反复节食、吸烟、饮酒、和摄入含二氧化碳的软饮料。导致闭经的过度运动、一些职业运动员的常见问题，也可降低骨强度。此外，早产或以低出生重量出生的儿童在出生后至少6年内骨强度都很低，表明婴儿期后弱骨的风险增加。这可能是在未成熟儿中早产儿骨质减少症的高患病率的结果。现有技术出版物提出了用于增加骨密度和峰值骨量的特殊组合物和方法。例如，以引用方式合并入本文的W005/036978公开了一种用酶制备的包括特殊植物来源的甘油三酯的脂肪基组合物，其制备和在婴儿配方领域中用于预防钙和能量损失的各种用途。美国专利申请第2004/0062820号公开了一种采用脂肪掺合物增加骨矿化的方法，该掺合物的棕榈酸含量很小。然而，如上所述，为了提供健康骨和骨骼的发育，重要的是确保足够的骨强度，不仅仅确保足够的钙吸收，而且确保骨密度和骨量。骨密度、峰值骨量和/或骨矿化不一定与骨强度相一致，并且改变前者(即，骨密度、峰值骨量和/或骨矿化)的任意一个或全部不一定导致后者(骨强度)的相应变化。此看法已经得到了许多作者的支持，包括Majumdar[MajumdarS(2003)Curr.Osteoporos.Rep.1(3)105-9]、Turner[TurnerC.H.(2002)0steoporos.Int.13(2):97_104]禾口Gilsanz[GilsanzV.(1998)Eur.J.Radiol.26(2)177-82]。在报道骨密度和骨矿化以及骨强度之间缺少关联的研究中，可引用的研究，例如，Takeda及其同事的研究[Takeda等人，(2004)J.Amer.Coll.Nutr.23(6):712S_714S]，他们说明了在肥胖大鼠中骨强度和骨矿物质浓度之间的关系并得出结论，元素浓度的变化与骨强度不相关。Riggs及其同事表明在绝经后女性中，氟化物治疗增加骨量并伴有骨骼脆性增力口，尤其是非脊椎骨[Riggs等人，(1990)N.Engl.J.Med.322(12):802_9]。Divittorio等人得出了类似的结论[Divittorio等人，(2006)Pharmacotherapy26(1)104-14]相反，雷洛昔芬，一种选择性雌激素受体调节剂，显著地增加脊椎骨强度，其不依赖骨矿物质密度[Allen等人，(2006)Bone39:1130-1135]。骨强度的增加反映了骨折和其他机械性骨缺陷的易发性较低。因此本发明的目的是提供用于在新生儿、婴儿、学步幼童、儿童和青少年中增加和保持骨强度的组合物和方法。本发明的进一步目的是提供在人中改善和保持骨状态的组合物和方法。
发明内容因此，在第一个方面，本发明提供了一种在人中增加骨强度和/或提高骨抗弯曲性和/或改善骨结构和/或保持骨状态的方法，包括将包含脂肪源的组合物施用于所述人，其中所述脂肪源是甘油三酯脂肪源，所述甘油三酯脂肪源包括在总脂肪酸中有15-55%是棕榈酸部分的甘油三酯，并且其中在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30%(w/w)0具体地，所述脂肪源的特征在于具有以下参数(i)总棕榈酸残基的至少30%，优选33%，更优选40%位于甘油主链的sn-2位；(ii)在甘油主链的sn_l和sn-3位处的脂肪酸部分的至少50%，优选70%是不饱和的；(iii)在sn-Ι和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少35%，优选至少40%是油酸部分，以及(iv)在sn-Ι和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少4%，优选至少6%是亚油酸部分。在本发明的所述方法的一个实施方案中，所述人是新生儿、婴儿、学步幼童、儿童或青少年。在本发明的所述方法的另一实施方案中，所述组合物包括与植物油混合物掺合的如上所限定的脂肪源，其中所述混合物包括选自豆油、棕榈树油、油菜油、椰子油、棕榈仁油、向日葵油、玉米油和菜籽油的油类。在本发明的所述方法的进一步实施方案中，所述人处于骨强度受损的风险中。在本发明的进一步实施方案中，所述脂肪源包括在任意一种食品和婴儿配方中，其中所述食品选自焙烤食品，包括面包，尤其是饼干和糕点，乳制品，包括奶和乳饮料，冰淇淋，谷类制品，调味汁，涂抹食品，包括人造黄油，油脂，大豆制品，肉制品，油炸食品，糖果食品，块状糖，糖果和巧克力，点心，饮料和奶昔(shakes)，速溶饮料产品，用于婴儿和幼儿的预制食品，包括预制的熟制蔬菜泥和/或水果泥，调味品产品和食用油脂。在本发明的所述方法的更进一步实施方案中，所述婴儿配方包含所述脂肪源，以及蛋白源、碳水化合物源、矿物质、维生素，和任选地包括载体、稀释剂、添加剂或赋形剂中的至少一种。在另一个方面，本发明提供了一种用于在人中增加骨强度和/或提高骨抗弯曲性和/或改善骨结构和/或维持骨状态的可食用脂肪源，其中所述脂肪源是甘油三酯脂肪源，所述甘油三酯脂肪源包括在总脂肪酸中有15-55%是棕榈酸部分并且其中在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30%(w/w)的甘油三酯。具体地，所述脂肪源的特征在于具有(i)总棕榈酸残基的至少30%，优选33%，更优选40%位于甘油主链的sn-2位；(ii)在甘油主链的sn-Ι和sn-3位处的脂肪酸部分的至少50%，优选70%是不饱和的；(iii)在sn-Ι和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少35%，优选至少40%是油酸部分，以及(iv)在sn-Ι和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少4%，优选至少6%是亚油酸部分。在所述脂肪源的一个实施方案中，所述人是新生儿、婴儿、学步幼童、儿童或青少年。在本发明的所述脂肪源的另一实施方案，所述人处于骨强度受损的风险中。在进一步的方面，本发明提供了一种食品，其中所述食品包括如本发明中所述的脂肪源，并且其是用于在人中增加骨强度和/或维持骨状态的食品，其中所述食品选自焙烤食品，包括面包，尤其是饼干和糕点，乳制品，包括奶和乳饮料，冰淇淋，谷类制品，调味汁，涂抹食品，包括人造黄油，油脂，大豆制品，肉制品，油炸食品，糖果食品，块状糖，糖果和巧克力，点心，饮料和奶昔，速溶饮料产品，用于婴儿和幼儿和成人的预制食品，包括预制的熟制蔬菜泥和/或水果泥，调味品产品和食用油脂。在一个优选的实施方案中，所述食品用于保持和/或增加骨强度，其中所述人是新生儿、婴儿、学步幼童、儿童或青少年，尤其是当所述人处于骨强度受损的风险中。最后，本发明提供了一种商业包装，该商业包装包括a)经肠内施用于人后增加骨强度的脂肪源；b)任选地可食用的生理学可接受的蛋白质、碳水化合物、维生素、矿物质和活性或无活性添加剂中的至少一种；c)任选地至少一种用于运载a)和b)中所限定的一种或多种组分的可食用的生理学可接受的载体或稀释剂；d)用于混合a)、b)和/或C)中所限定的(多种)组分的设备和容器；以及e)使用说明书。在本发明的商业包装的一个优选实施方案中，所述脂肪源是甘油三酯脂肪源，所述甘油三酯脂肪源包括在总脂肪酸中有15-55%是棕榈酸部分的甘油三酯并且在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30%(w/w)。具体地，所述脂肪源的特征在于⑴总棕榈酸残基的至少30%，优选33%，更优选40%位于甘油主链的sn-2位；(ii)在甘油主链的sn-Ι和sn-3位处的脂肪酸部分的至少50%，优选70%是不饱和的；(iii)在sn-Ι和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少35%，优选至少40%是油酸部分，以及(iv)在sn-Ι和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少4%，优选至少6%是亚油酸部分。图1使用最大负荷的极限刚度参数测量。表示饲以三种膳食的大鼠的极限刚度的测定的直方图。饲以膳食A的大鼠显示较高的抗弯曲性，抗弯曲性在图中表示为极限刚度(u.s.)。在饲以膳食A(H2P)和膳食B(HP)(P=0.004)或膳食C(LP)(ρ=0.038)的大鼠组之间的明显差异可能是由于骨矿物质添附的速率增加引起的。A、B和C分别代表膳食A、膳食B和膳食C。图2表示在饲以三种膳食的大鼠中刚度(u.s.η.)对体重和椎骨高度的标准化的直方图。刚度(u.s.η.)对体重和椎骨高度的标准化产生了在饲以膳食Α、Β(ρ=0.007)和C(0.031)的大鼠的结构刚度之间的显著差异。A，B和C分别表示膳食A，膳食B和膳食C。发明详述为了寻找在新生儿、婴儿、学步幼童、儿童、青少年或成人中用于增加骨强度和/或改善骨状态和/改善骨结构的组合物，本发明人已经发现包括适当的脂肪源的可食用组合物，尤其是富含棕榈酸残基的甘油三酯组合物，可达到这些所需的目的。在此要理解，骨状态指骨健康，并且其取决于受试者的年龄和性别，但通常包括骨矿物质含量、骨矿物质密度、结构刚度、骨微结构、弹性、皮质厚度等。因此，本发明的组合物(InFat，以浓缩基质或掺合物的形式)特别地用于在遭受骨强度减小或易于发生骨强度减小的人中保持和/或增加骨强度。骨强度通常被定义为在特定负荷条件下导致材料失效所需的负载力的量[Turner&Burr(1993)Bone14595-608；Currey&Butler(1975)JBoneJointSurgAm57:810-814]。Petit及其同事提出了骨强度的进一步定义，即骨强度为“导致材料弯曲所需的负荷”[Petit等人，(2005)JMusculoskeletNeuronalInteract5(3):213_224]。此进一步的定义考虑了当使用小棒形状的骨片完成骨材料强度检测时在该检测中评价的参数，其中在检测中该骨片在末端逐渐被牵拉从而被拉长。直至某个点，骨可承受应力(力)而没有过多的应变(变形)。因此，骨可被拉伸至某个点并弹性地恢复至其初始长度。此特性也被定义为弹性模量(或杨氏模量)，并且也被称为“材料刚度”。超过该点，发生损害并且材料开始弯曲，使得当将其放松时，其不能完全地恢复至其初始长度。最终，该材料不能弯曲，并且在该点，发生骨折[Petit(2005)编号同上]。其他骨强度参数，尤其是通过使用超声骨密度计尤其是定量超声，使用轴向传播技术通过测量获得的那些参数，为矿物质密度、弹性、皮质厚度和微结构。椎体标本的生物力学性能可在材料试验机中进行分析，该试验机提供负荷和变形值。这些通常仅能在动物模型中完成，因为需要收集标本(骨)以便进行该分析。负荷变形曲线提供了用于计算极限负荷时的应变、极限负荷、极限刚度和极限负荷时的能量吸收的参数。这些参数反映了椎体的强度。骨量密度是骨密度的指标。骨密度是一定体积的骨的骨组织量。其可使用定量计算层析X射线照相术来测定。本发明人已经表明，尤其是实施例4中所示的结果，包括本发明所述的InFat掺合物的改良膳食与饲以对照膳食的大鼠相比，诱导被治疗大鼠的骨强度增加。因此，本发明人惊奇地发现，通过轴向传播技术测定，饲以富含sn-2位棕榈酸的膳食的动物显示骨强度增加。因此，本发明的组合物还特别适合用于治疗易于发生骨疾病和缺陷，例如，早产儿代谢性骨病(MBDP)的未成熟儿，尤其是很小的未成熟儿；具有极低出生重量(VLBW)的婴儿，尤其是骨量减少风险较大的婴儿；骨折率很高的出生时具有超低出生体重(ELBW)的婴儿；患有支气管肺发育异常的新生儿；接受利尿剂和类固醇长期治疗或接触类固醇的新生儿；由糖尿病母亲生的婴儿；和其他情况。受累于这些状况的任意一种的受试者处于骨强度受损的风险中。骨质减少是骨矿物质密度的减少，其可以是骨质疏松症的前驱病症。骨质减少的诊断反映了低于正常峰值BMD但不足以低至被分类为骨质疏松症的骨矿物质密度(BMD)。因此，本发明的目标是提供一种用于在人中增加骨强度和/或提高骨抗弯曲性和/或改善骨结构和/或维持骨状态的方法，包括将包括富含棕榈酸的脂肪源的组合物施用于所述人，其中所述脂肪源是甘油三酯脂肪源，其中在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30%(w/w)，并且总棕榈酸含量为总脂肪酸的15-55%。在本发明的具体实施方案中，脂肪源包括总脂肪酸的15-55%为C16:0脂肪酸的甘油三酯。因此，所述脂肪源的棕榈酸含量可以为总脂肪酸的15%、16%、17%、18%、19%、20%,21%,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31%,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%,40%,41%,42%,43%,44%,45%,46%,47%,48%,49%,50%、51%、52%、53%、54%或55%。浓缩脂肪基质组合物的基本特征为(i)总棕榈酸残基的至少30%，优选33%，更优选40%位于甘油主链的sn-2位；(ii)在甘油主链的sn-Ι和sn-3位处的脂肪酸部分的至少50%，优选70%是不饱和的；(iii)在sn-Ι和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少35%，优选至少40%是油酸部分，以及(iv)在sn-Ι和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少4%，优选至少6%是亚油酸部分。更具体地，脂肪源包括总脂肪酸的0-20%的C12:0脂肪酸，优选5-15%；总脂肪酸的0-15%的C140脂肪酸，优选2-10%；总脂肪酸的15-55%的C160脂肪酸，其30%以上在甘油主链的sn-2位处被酯化；总脂肪酸的1-7%的C18:0脂肪酸，优选2_5%；总脂肪酸的25-75%的C18:1脂肪酸，优选28-45%；总脂肪酸的2-40%的C18:2脂肪酸，优选5-20%；总脂肪酸的0-8%的C183脂肪酸，优选1_3%；其他脂肪酸各自以小于总脂肪酸的8%，优选小于5%的水平存在。具体的脂肪源描述在W005/036987中。这些脂肪源包括脂肪浓缩物(脂肪基质)、脂肪掺合物、包括浓缩物/掺合物的婴儿配方以及其他食物和食品。特别感兴趣的是基于模拟人母乳脂肪的甘油三酯组成的合成油(可通过化学和优选酶学的方法产生)的脂肪源。此类油优选地具有在甘油三酯的sn-2位处的高水平的棕榈酸，以及在sn-Ι和sn-3位处的高水平的不饱和脂肪酸。该成分在此也称为InFatTM(酶学技术有限公司，米格达勒埃梅克(EnzymotecLtd.，MigdalHaEmeq)，以色列)，并且在表IA中定义。更具体地，本发明使用的脂肪源可以是浓缩物，尤其是酶学制备的脂肪基质组合物，其包括植物来源的甘油三酯的混合物，总棕榈酸残基含量至多为总脂肪酸残基的38%；并且在甘油主链的sn-2位处的脂肪酸部分的至少60%为棕榈酸残基。InFat是用于生产在婴儿营养和婴儿配方中使用的脂肪制剂的先进的脂肪基质成分。其是一种专用脂肪基质，以特殊的甘油三酯组成和结构进行设计和制造，现在已经发现其能有效地增加骨强度，尤其是在易于出现骨发育问题的婴儿人群以及其他此类人群中。在一个优选的实施方案中，所述脂肪源包括这样的甘油三酯总脂肪酸的0-20%，优选5-15%为C12:0脂肪酸；总脂肪酸的0-15%，优选2-10%为C14:0脂肪酸；总脂肪酸的15-55%为C16:0脂肪酸，其30%以上在甘油主链的sn-2位处被酯化；总脂肪酸的1-7%，优选2-5%为C180脂肪酸；总脂肪酸的25-75%，优选28-45%为C181脂肪酸；总脂肪酸的2-40%，优选5-20%为C182脂肪酸；总脂肪酸的0_8%，优选1_3%为C183脂肪酸；其他脂肪酸各自以小于总脂肪酸的8%，优选小于5%的水平存在。因此，脂肪源可包括总脂肪酸的0%，1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%的C12:0脂肪酸；总脂肪酸的0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%或15%的C14:0脂肪酸；总脂肪酸的15%,16%,17%,18%,19%,20%,21%,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31%,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39%,40%,41%,42%,43%,44%,45%,46%,47%,48%,49%,50%,51%,52%,53%,54%或55%的C16:0脂肪酸；总脂肪酸的1%>1.2%U.4%U.6%U.8%,2%,2.2%,2.4%,2.6%,2.8%,3.2%,3.4%,3.6%,3.8%A%A.2%A.4%A.6%A.85.2%,5.4%,5.6%、5.8%、6%、6.2%、6.4%、6.6%、6.8%或7%的C18:0脂肪酸；总月旨肪酸的25%、27%、28%、30%、32%、33%、35%、37%、39%、40%、42%、43%、44%、45%、47%,49%,50%,52%,53%,55%,57%,59%,60%,62%,63%,65%,67%,69%,70%,72%、74%或75%的C18:l脂肪酸；总脂肪酸的2%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%>12%,13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%,22%,23%,25%,27%,28%,30%、32%、33%、35%、37%、39%、40%的C182脂肪酸；总脂肪酸的O%、0.5%、1%、1.2%U.4%U.6%U.8%,2.2%,2.4%,2.6%,2.8%,3.2%,3.4%,3.63.8%A%A.2%A.4%A.6%A.8%,5.2%,5.4%,5.6%,5.8%,6.26.4%,6.6%,6.8%,7%,7.2%,7.5%,7.8%或8%的C18:3脂肪酸。本发明使用的脂肪源也可以是包括至少25%的所述脂肪基质与至多75%的至少一种植物油的掺合物的人乳脂肪代用品组合物。下面的实施例给出了8种掺合物，InFat1、InFat2、InFat3、InFat4、InFat5、InFat6、InFat7和InFat8，其中使用不同用量的脂肪基质浓缩物(InFat)，其用量为掺合物含量的30%至83%。在制备掺合物中使用的植物油可以是大豆油、棕榈树油、油菜油、椰子油、棕榈仁油、向日葵油、玉米油和菜籽油，以及其他植物油脂及其混合物中的至少一种。最重要地，本发明的脂肪源可以用于婴儿配方的制备中。本发明使用的婴儿配方除了所述脂肪源以外还包括至少一种蛋白质成分和任选地碳水化合物源、维生素、矿物质、核苷酸和氨基酸中的至少一种。术语“脂类”和“脂肪”在本文中作为同义词使用。除了包括在婴儿配方中以外，本发明使用的脂肪源可包括在以下中食品，诸如但不限于焙烤食品，包括面包，尤其是饼干和糕点，乳制品，包括奶和乳饮料，冰淇淋，谷类制品，调味汁，涂抹食品，包括人造黄油，油脂，大豆制品，肉制品，油炸食品，糖果食品，块状糖，糖果和巧克力，点心，饮料和奶昔，速溶饮料产品，用于婴儿和幼儿和成人的预制食品，包括预制的熟制蔬菜泥和/或水果泥，调味品产品和食用油脂。本发明的方法通过将婴儿配方或食品施用于需要的受试者而发挥作用，上述婴儿配方或食品用本发明所述的浓缩基质或掺合物形式的脂肪源制备并包括该脂肪源。浓缩基质的非限制性例子为InFatA、B、C或D，并且掺合物的非限制性例子为InFat1、2、3、4、5、6、7或8。施用通常经口或肠内，其可包括应用采用胃饲管、探针(sonda)等的管饲法，尤其是适于婴儿喂养的方法。本发明进一步提供了如本发明中所述的富含棕榈酸的脂肪源在制备用于在人中增加骨强度和/或提高骨抗弯曲性和/或改善骨结构和/或保持骨状态的组合物中的应用，其中所述脂肪源是其中在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30%(w/w)并且总棕榈酸含量为总脂肪酸的15-55%的甘油三酯。该组合物优选地经口或肠内施用于处于骨强度受损的风险中的受试者。在进一步的方面，本发明涉及用于制备可食用脂肪源或食品的商业包装，根据本发明，该可食用脂肪源或食品被推荐用于在人中增加骨强度和/或提高骨抗弯曲性和/或改善骨结构和/或保持骨状态。除了活性和无活性成分以外，该商业包装包含使用说明书。这些包括储存条件，对用于施用的脂肪源或食品的制备、必要的稀释、用药量、施用的频次等的说明。根据本发明的商业包装还包含随时可用形式的脂肪源，以及使用说明。用药量通常根据受试者的年龄、体重、性别和健康状况、根据主治医师和其他医务人员所知晓的良好医疗实践来确定。本发明由权利要求限定，权利要求的内容要作为包括在本说明书的公开书之内的内容来阅读。要理解的是本发明不限于具体的实施例、加工步骤以及在此所公开的各种材料，因为这些加工步骤和材料可进行一些变化。还要理解的是在此所使用的术语仅用于说明具体实施方式的目的，并不是限制性的，因为本发明的范围将仅受附带的权利要求及其等同形式限定。必须注意的是，除非上下文另外清楚地指明，如在本说明书和附带的权利要求中所使用的单数形式“一个”和“该”包括复数指代物。在整个本说明书和随后的权利要求中，除非另外上下文需要，词“包括”以及其各种变形，要被理解为是指包含所指的整数或步骤或一组整数或步骤，但不排除任意其他的整数或步骤或一组整数或步骤。下面的实施例是本发明人在实现本发明的各个方面时所采用的技术的代表。应该理解的是尽管这些技术是用于实施本发明的优选实施方案的示例，但按照本公开内容，本领域专业技术人员要认识到在不背离本发明的精神和目标范围的前提下可作出大量的变型。实施例实施例1InFat的组成和InFat掺合物下表IA详述了本发明优选使用的脂肪源(InFat，也称为“浓缩物质”)和也适合用作本发明的方法和组合物中的脂肪源的8种InFat掺合物的含量。这些脂肪源的制备在W005/036987中说明。表IAInFat-浓缩基质<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>表IB:InFat掺合物<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>C16表示总棕榈酸含量。Sn-2C16表示总sn-2位脂肪酸的棕榈酸百分数。比率是指按照公式Ksn-2的棕榈酸％)/(3x%总棕榈酸MxlOO对每个位点标准化的总棕榈酸的sn-2棕榈酸百分数。除了比率规定为％以外，所有数字表示为％(w/w)0实施例2基于InFat的婴儿配方如下制备包括InFat和模拟人母乳脂肪组成的其他油脂的婴儿配方选择的制剂(例如，表IA的那些中的一种)与适当的植物油或植物油的混合物掺合/混合。所得脂质混合物为与其他组分(蛋白质、碳水化合物、矿物质、维生素等)混合在一起形成婴儿配方的脂质成分。浆料通过高压均质机以得到稳定的乳液。然后被均质的产物在喷雾干燥机中干燥以获得最终产物。其他添加剂例如，益生元(prebiotics)和/或益生菌(probiotics)(如LGG、BB12、G0S/F0S)可加入至该干燥的粉末中以获得最终制剂。通过InFat与如上所述的其他油脂的掺合而产生的脂肪成分进一步与其他营养素诸如蛋白质、矿物质、维生素和碳水化合物掺合以得到食品，该食品提供给婴儿以也存在于人乳中的主要营养素。营养素和脂肪使用高压均质机进行均质化，并被喷雾干燥以得到均质的粉末。该粉末在水(每60ml水约9g粉末)中进一步再分散，从而得到随时可食的配方。随时可食配方的脂肪含量为约3.5g/100ml，对应于人母乳的脂肪含量范围为30-40g/L0InFatA(30%)与用于生成婴儿配方的其他油脂的掺合物的示例性脂肪酸组成在表2中给出，并且在下面的表3中规定了该配方的成分和性质的详情。表2=InFat的掺合物的脂肪酸组成<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表3与InFat的掺合物制备的配方的成分和性质<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>可对脂肪水平和精确组成进行改动以得到被设计成模拟不同泌乳期的婴儿配方。实施例3基于InFat的饼干和糕点为婴儿和幼儿设计营养饼干或糕点产品，该饼干或糕点具有数个百分比的油脂，所有或大部分为InFat。该产品可包括115%的脂肪或油，优选39%。在具体的配方中，由包括下列成分的生面团生产饼干小麦粉(41%)、蔗糖(20.5%)、水(25.8%)、InFat(8.2%)、玉米淀粉(2.9%)和膨松剂(1.6%)0另一配方包括小麦粉(42.2%)、蔗糖(21.)、水(16.8%)、InFat(8.4%)、玉米淀粉(11.0%)、膨松剂(0.3%)和盐(0.2%)。实施例4基于InFat6掺合物(InFat6)的婴儿膳食对大鼠骨强度的作用在动物模型研究中研究InFat掺合物6的作用。该研究评价与饲以富含sn_l和sn-3位棕榈酸的膳食的动物相比，饲以富含sn-2位棕榈酸的膳食(InFat6掺合物)的动物的骨矿化和骨强度。进行一系列试验以表征接受受控饲养方案的刚断奶大鼠的椎体的生物力学性能，上述受控饲养方案采用期望改变(增加)骨形成速率的先进脂质化学设计。研究设计断奶后立即从HarlanLaboratories(Rehovot,以色列)获取48只21日龄，体重为40_50g的雄性Sprague-Dawley大鼠。将大鼠随机分配以接受三种不同的膳食，饲养2周(每组12只动物)。供应的膳食的脂肪含量不同1.膳食A具有含高含量的sn-2位棕榈酸的油的膳食2.膳食B具有含高含量的sn-Ι和sn-3位棕榈酸的油的膳食3.膳食C:具有含低含量棕榈酸的油的膳食在试验结束(饲养第15天)时，麻醉并处死动物，尸体在-80°C下冷冻直至进行骨强度试验那天。膳食由HarlanTekledLtd，USA制造的标准大鼠饲料，Teklad通用18%蛋白啮齿动物膳食(TekladGlobal18%ProteinRodentDiet)(目录#2018)用作对照膳食。定制的大鼠膳食由HarlanTekledLtd;USA制造。所有定制的膳食营养素含量相似，仅在油的种类方面不同(表5)。表4补充的油类的脂肪酸组成(％总脂肪酸)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表5:膳食组成(wt<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>骨强度分析进行一系列试验以表征刚断奶大鼠椎体的生物力学性能。生物力学表征包括通过单轴压缩第5腰椎体进行的骨小梁力学性能的敏感性功能测定。所有试验均采用万能试验机(Zwick1456，Ulm德国)和专为研究应用特别制造的定制夹具进行。从被测骨的负荷位移曲线和负荷变形曲线的线性部分计算骨刚度。使用Omnipath,SunlightOmnisense的轴向传播技术(也称为A-QUS(轴向定量超声))进行骨强度测定。结果骨强度测定如图2中所示，膳食A组(高sn-2位棕榈酸膳食)的结构刚度显著高于膳食B组(高sn-Ι和sn-3棕榈酸膳食)(ρ=0.004)，并显著高于膳食C组(低棕榈酸膳食)(ρ=0.038)。刚度对体重和椎体高度的标准化也产生了在膳食A和膳食B或膳食C之间结构刚度的显著差异(分别为P=0.007,0.031)(图3)，其中结构刚度提供骨抗断裂性。弹性模量、极限刚度/mm2反映了骨组织对抗弯曲的能力。表6大鼠L5椎骨的生物力学分析<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>总之，断奶大鼠骨的力学性能似乎对施加的膳食干预敏感。具体地，膳食A组饲养的大鼠中较高的结构刚度表明骨结构增强的速率加快。实施例5InFat7对喂配方的中国足月儿的骨强度的作用双盲、随机化、安慰剂对照的试验InFat掺合物7的功效通过6个月的双盲、随机化、安慰剂对照的试验在中国足月儿中研究InFat掺合物7(InFat7)的功效。该研究证明了与基于标准植物油的配方相比，具有高比例的sn-2位棕榈酸的配方(本发明，来自表IB中列举的InFat掺合物的InFat7)对中国足月儿的骨强度结果的作用。本研究的目的是通过测量超声波沿骨的声速(SOS)来评价婴儿的骨强度。声速(SOS)测定由定量超声技术，Sunlight公司(SunlightMedicalInc.，萨默塞特，NJ)产品SunlightOmnisense7000P(Omnisense7000P)来完成。Omnisense7000P是被专门开发用来评价儿童群体的骨强度的基于超声的诊断装置。临床研究已经显示该装置能够检测由体重超重和钙消耗水平所引起骨强度的变化。Sunlight已经基于性别和人种起源开发了许多用于儿童群体的骨评价的参考数据库。现有的数据库为男性和女性数据库，这些数据库也包括中国人群。SunlightMedical的新的中国儿童参考数据库是在中国的许多城市收集的，提高了SunlightOmnisense7000P对全世界中国儿童群体的应用性。研究设计经筛选后，80名婴儿被随机地分至两个治疗组中之一，每个治疗组40名婴儿1.配方A含InFat掺合物7的配方(表7)。2.配方B含标准植物油的对照配方(表7)。表7脂肪酸组成(总脂肪酸重量％)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>在出生后8-10天内合格的婴儿入选至研究中。婴儿被随机分至两组中之一治疗组(配方A)或对照(配方B)。两组均接受配方6个月，并且在基准日以及6和12周后的研究期间测量他们的骨强度。方法胫骨SOS的QUS(定量超声)测量使用进行SunlightOmnisense7000Pqus进行胫骨中段的sos测量。结果预期结果是在喂养6周和12周后，在以配方AdnFat7掺合物)喂养的婴儿中使用定量超声技术测量的骨SOS显著地高于在以配方B(对照配方)喂养的婴儿中测量的SOS。与以配方B喂养的婴儿相比，以配方A喂养的婴儿的骨SOS测量值以更为显著的速度随时间增加。这些结果有可能表明与配方B相比，将sn-2位棕榈酸添加至婴儿配方中将产生明显较高的全身骨量。实施例6InFat8产品对配方喂养早产儿的骨强度的作用双盲、随机化、安慰剂对照的试验InFat掺合物8的功效通过持续3个月的双盲、随机化、安慰剂对照的试验在早产儿中研究InFat掺合物8的功效。该研究证明了与标准植物油配方相比，具有高比例的sn-2位棕榈酸的配方(来自表IB中列举的InFat掺合物的InFat8)对早产儿的骨强度结果的作用。本研究的目的是通过测量超声波沿骨的声速(SOS)来评价婴儿的骨强度。由SunlightPremiereQUS装置进行的定量超声测量在实施例4中说明。早产儿(在妊娠37周前出生的婴儿)发生率的不断增加，以及由于技术的高度进步而获得的其生存率的提高都增加了为早产儿的新生儿期和以后的生活开发出更具有创新性和成本有效的治疗方式的需求。如在
背景技术：
中所提到的，在早产儿中代谢性骨病是一种相对常见的事件，因为骨矿物质增加的最快时期通常发生在妊娠的最后三个月内，并且其在子宫外环境中难以再生。研究设计经筛选后，60名健康成长的早产儿被随机地分至两个治疗组中之一，每个治疗组30名婴儿1.配方A具有表8中所示的脂肪酸组成的含InFat掺合物8的治疗配方。2.配方B含标准植物油的对照配方(表8)。表8脂肪酸组成(总脂肪酸重量％)___脂肪酸配方A(InFat)配方B(对照)99C12:0C14:033C16:02121sn-2位C16:04910C18:0ΓδΓδC18:l4343C18:21616C18:31~51~5在孕龄为32-36周之间出生的合格早产儿被随机分至两组中之一治疗组(配方A)或对照(配方B)。两组均接受配方3个月，并且在基准日以及4、8和12周后的研究期间测量他们的骨强度。方法胫骨SOS的QUS测量使用SunlightPremiereQUS进行胫骨中段的SOS测量。结果在喂养4周、8周和12周后，在以配方A(本发明的InFat8配方)喂养的早产儿中使用定量超声技术测量的骨SOS预期显著地高于在以配方B(对照配方)喂养的婴儿中测量的SOS。与以配方B喂养的婴儿相比，以配方A喂养的婴儿的骨SOS测量值有可能以更为显著的速度随时间增加。预期的结果有可能表明与配方B相比，将sn-2位棕榈酸添加至婴儿配方中会产生明显较高的全身骨强度。权利要求一种在人中增加骨强度和/或提高骨抗弯曲性和/或改善骨结构和/或保持骨状态的方法，包括将包含脂肪源的组合物施用于所述人，其中所述脂肪源是甘油三酯脂肪源，所述甘油三酯脂肪源包括在总脂肪酸中有15-55％是棕榈酸部分的甘油三酯，并且其中在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30％(w/w)。2.如权利要求1所述的方法，其中在所述脂肪源中(i)所述总棕榈酸残基的至少30%，优选33%，更优选40%位于所述甘油主链的sn-2位；(ii)在所述甘油主链的sn_l和sn-3位处的脂肪酸部分的至少50%，优选70%是不饱和的；(iii)在sn-1和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少35%，优选至少40%是油酸部分；以及(iv)在sn-1和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少4%，优选至少6%是亚油酸部分。3.如权利要求1或2任意一项所述的方法，其中所述人是新生儿、婴儿、学步幼童、儿童或青少年。4.如权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中所述组合物包括与植物油混合物掺合的如权利要求1或2任意一项所限定的脂肪源，其中所述混合物包括选自豆油、棕榈树油、油菜油、椰子油、棕榈仁油、向日葵油、玉米油和菜籽油的油类。5.如权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中所述人处于骨强度受损的风险中。6.如权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中所述脂肪源包括在任意一种食品和婴儿配方中，其中所述食品选自焙烤食品，包括面包，尤其是饼干和糕点，乳制品，包括奶和乳饮料，冰淇淋，谷类制品，调味汁，涂抹食品，包括人造黄油，油脂，大豆制品，肉制品，油炸食品，糖果食品，块状糖，糖果和巧克力，点心，饮料和奶昔，速溶饮料产品，用于婴儿和幼儿的预制食品，包括预制的熟制蔬菜泥和/或水果泥，调味品产品和食用油脂。7.如权利要求6所述的方法，其中所述婴儿配方包含所述脂肪源以及蛋白源、碳水化合物源、矿物质、维生素，和任选地载体、稀释剂、添加剂或赋形剂中的至少一种。8.一种用于在人中增加骨强度和/或提高骨抗弯曲性和/或改善骨结构和/或维持骨状态的可食用脂肪源，其中所述脂肪源是甘油三酯脂肪源，所述甘油三酯脂肪源包括在总脂肪酸中有15-55%是棕榈酸部分的甘油三酯，并且其中在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30%(w/w)9.如权利要求8所述的脂肪源，其中在所述脂肪源中(i)所述总棕榈酸残基的至少30%，优选33%，更优选40%位于所述甘油主链的sn-2位；(ii)在所述甘油主链的sn_l和sn-3位处的脂肪酸部分的至少50%，优选70%是不饱和的；(iii)在sn-1和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少35%，优选至少40%是油酸部分；以及(iv)在sn-1和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少4%，优选至少6%是亚油酸部分。10.如权利要求8或9任意一项所述的脂肪源，其中所述人是新生儿、婴儿、学步幼童、儿童或青少年。11.如权利要求9或10所述的脂肪源，其中所述人处于骨强度受损的风险中。12.一种包括权利要求8-11中任意一项所述的脂肪源的食品，其用于在人中增加骨强度和/或维持骨状态，其中所述食品选自焙烤食品，包括面包，尤其是饼干和糕点，乳制品，包括奶和乳饮料，冰淇淋，谷类制品，调味汁，涂抹食品，包括人造黄油，油脂，大豆制品，肉制品，油炸食品，糖果食品，块状糖，糖果和巧克力，点心，饮料和奶昔，速溶饮料产品，用于婴儿和幼儿的预制食品，包括预制的熟制蔬菜泥和/或水果泥，调味品产品和食用油脂。13.如权利要求12所述的用于增加骨强度的食品，其中所述人是新生儿、婴儿、学步幼童、儿童或青少年。14.如权利要求12或13所述的食品，其中所述人处于骨强度受损的风险中。15.一种商业包装，包括a)经肠内施用于人后增加骨强度的脂肪源；b)任选地至少一种可食用的生理学可接受的蛋白质、碳水化合物、维生素、矿物质和活性或无活性添加剂；c)任选地至少一种用于运载a)和b)中所限定的一种或多种组分的可食用的生理学可接受的载体或稀释剂；d)用于混合a)、b)和/或c)中所限定的组分的设备和容器；以及e)使用说明书。16.如权利要求15所述的商业包装，其中所述脂肪源是甘油三酯脂肪源，所述甘油三酯脂肪源包括在总脂肪酸中有15-55%是棕榈酸部分的甘油三酯，并且其中在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30%(w/w)。17.如权利要求16所述的商业包装，其中在所述脂肪源中(i)所述总棕榈酸残基的至少30%，优选33%，更优选40%位于所述甘油主链的sn-2位；(ii)在所述甘油主链的sn-1和sn-3位处的脂肪酸部分的至少50%，优选70%是不饱和的；(iii)在sn-1和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少35%，优选至少40%是油酸部分；以及(iv)在sn-1和sn-3位处的所述不饱和脂肪酸部分的至少4%，优选至少6%是亚油酸部分。全文摘要本发明公开了一种在人中增加骨强度和/或提高骨抗弯曲性和/或改善骨结构和/或保持骨状态的方法，包括将包含脂肪源的组合物施用于所述人，其中所述脂肪源是甘油三酯脂肪源，所述甘油三酯脂肪源包括在总脂肪酸中有15-55％是棕榈酸部分的甘油三酯，并且其中在甘油主链的sn-2位处的棕榈酸部分的水平为总棕榈酸的至少30％(w/w)。所述方法特别地用于处于骨强度受损风险下的受试者。此外本发明还公开了所述脂肪源，以及包含所述脂肪源的食品和商业包装。文档编号A61P19/10GK101808633SQ200880109248公开日2010年8月18日申请日期2008年7月31日优先权日2007年8月1日发明者多里·佩莱德,法比亚纳·巴尔-约瑟夫,耶尔·利夫席茨申请人:酶学技术有限公司