用于肿瘤诊断和治疗的氯毒素剂的系统性给药的制作方法

专利名称：：用于肿瘤诊断和治疗的氯毒素剂的系统性给药的制作方法用于肿瘤诊断和治疗的氯毒素剂的系统性给药相关申请信息本发明要求2007年10月12日提交的美国临时专利申请60/979，714的权益和优先权，其全部内容引入本文以供参考。
背景技术：
：氯毒素(chlorotoxin)，在巨型以色列黄蝎LeiurusQuinquestriatus的毒液中发现，已经显示出呈现作为用于诊断和治疗癌症的试剂的巨大潜力。起初被描述为氯离子通道阻断剂的36-氨基酸氯毒素肽已经临床前开发作为靶向具有131碘的胶质瘤的候选物(J.A.DeBinetal.,Am.J.Physiol.(CellPhysiol.)，1993，264，33:C361_C369；L.Soroceanuetal.,CancerRes.,1998,584871-4879；S.Shenetal.,Neuro-Onco1.,2005,71:113-119)。用于诊断和治疗神经外胚层肿瘤(例如胶质瘤和脑膜瘤)的组合物(见美国专利号5，905，027和6，429，187，其各自全文合并于此以供参考)和方法(见美国专利号6，028，174和6，319，891，其各自全文合并于此以供参考)已经进行了研发，其基于氯毒素结合神经外胚层起源的肿瘤细胞的能力(Soroceanuetal.，CancerRes.，1998,584871-4879；Ullrichetal.,Neuroreport,1996,7:1020_1024；Ullrichetal.，Am.J.Physiol.，1996,270:C1511_C1521)。TM-601，天然产生的氯毒素的合成版，已经显示出穿越血脑和组织阻碍物。临床前研究已经证明放射性碘标记的TM-601的免疫原性的稳定性、安全性、有效性和缺乏。基于这些数据，临床研究(I/II期)已经进行以评价具有复发性高级胶质瘤的成年患者腔内递送131I-TM-601的安全性、耐受性、生物分布以及剂量测定。2007年2月，在临床I期试验接受单腔内剂量mI-TM-601的18名患者中，从复发起5名生存12个月或更长；从复发起2名生存超过36个月；1名患者仍然还生存(从复发起超过4年)(见美国专利申请号No.11/731,661和2007年3月30日提交的国际专利申请PCT/US2007/08309，其各自全文合并于此以供参考)。在这些临床研究获得的结果是非常有前景的并证明氯毒素在诊断和治疗肿瘤方面的功效性。在上述临床研究中，氯毒素使用腔内途径进行给药。在肿瘤位于脑部的情况下，腔内递送在手术期间开始。因而，在不需要手术或不希望手术的情况下，腔内给药可能并不是最合适的递送途径。因此，存在用于诊断和治疗肿瘤的氯毒素或氯毒素基试剂给药的替代策略的需要。尤其希望比腔内递送侵入性小的给药方法。
发明内容本发明涵盖这样的发现，即经由系统性给药而不是局部给药(例如腔内)氯毒素能够有效递送至主体。具体而言，本申请已经证明氯毒素能够有效静脉内递送。根据本发明，系统递送给主体实现了氯毒素的肿瘤特异性定位并造成生存时间提高。在阅读了优选实施方式的以下详细描述后，本发明的这些和其他目的、优点以及特征将对本领域技术人员来说变得显而易见。图1是示出TM-601结合至各种培养细胞的总结的图示(见实施例1实验细节)。图2是示出使用平板结合分析(platebindingassay)生物素标记的TM-601与多种癌细胞类型的结合(见实施例1实验细节)。结合作图为链霉亲和素-HRP对照相对于其中没有加入TM-602的细胞的百分数。胶质瘤细胞D54，U251，U373，G26；乳腺肿瘤细胞2LMP,DY3672,LCC6,BT474,SK-BR-3,MCF-7，MDA-MB-231，MDA-MB-468，以及MDA-MB-453；非小细胞肺癌细胞A427，WI-62,以及H1466；黑色素瘤细胞SKM28；结肠直肠癌细胞SW948；以及前列腺癌细胞PC3，LNCaP,以及DU145。图3是示出TM-601与各种人体组织的结合的总结的表格。图4示出了TM-601与多形性胶质母细胞瘤肿瘤的特异性结合。人类正常脑部和多形性胶质母细胞瘤肿瘤组织用生物素标记的TM-601(左)或缓冲盐水(右)进行组织化学染色。在用生物素标记的TM-601或缓冲盐水(作为过氧化物酶试剂染色对照)初始培育后，组织用过氧化物酶标记的链霉亲和素然后是过氧化物酶基质培育，以在阳性样品中产生棕褐色，其结合生物素标记的TM-601。TM-601染色仅在肿瘤组织中看到(底部左侧)。图5举例说明了TM-601与人肿瘤组织的特异性结合对比正常组织。㈧示出了用生物素标记的TM-601(A，左)或缓冲盐水(A，右)进行组织化学染色人肿瘤组织的代表性实例。(B)示出了人正常组织与在㈧用生物素标记的ΤΜ-601Φ，左)或缓冲盐水(B，右)组织化学染色的人肿瘤组织相比的代表性实例。在用生物素标记的TM-601或缓冲盐水(作为过氧化物酶试剂染色对照)初始培育后，在(A)和(B)中的组织用过氧化物酶标记的链霉亲和素然后是过氧化物酶基质培育，以在结合生物素标记的TM-601的样品中产生棕褐色。指示阳性染色的强棕褐色仅在暴露给生物素标记的TM-601的肿瘤组织中看到(A，右)。图6㈧示出了在裸鼠模型中U251-MG脑癌异种移植中的131I_TM_601有效性。图表中的数据作图成卡普兰-梅尔生存图表(Kaplan-MeierSurvivalChart)。获得的结果显示，中位生存对于盐水组是29天，对于冷TM-601组为21天。在惊人的对比中，131I_TM_601组的中位生存是78天。图6(B)示出了在注射131I-TM-601后具有人类U251-MG胶质瘤的颅内异种移植瘤的两只小鼠(第一系小鼠006;第二系小鼠009)的γ相机图像。在小鼠植入肿瘤细胞二十一(21)天后，将131I-TM-601注射至肿瘤部位。在注射后二十四(24)和96小时后，将小鼠用Y相机成像。在24和96小时的图像显示在肿瘤部位的放射性保存很好。图7是总结在小鼠模型中静脉注射后通过mI-TM-601靶向的脑部结果的表格。图8示出了用TM-601处理的或未处理的移植有D54MG的小鼠的卡普兰-梅尔生存曲线。图9是示出TM-601和放射治疗(RT)对小鼠D54MG侧翼肿瘤(flanktumor)的作用的图表。图10是示出在通过静脉(IV)、腹膜内(IP)、皮下(SC)或口服(OP)给药单剂量的TM-601之后测量的小鼠血浆浓度的图表。图11是总结动物用TM-601处理GLP毒理学研究的结果的表格。图12是患有复发或难治转移性固体肿瘤的患者静脉131I-TM-601的I期中使用的剂量方案和安全性研究。图13是总结患有不同类型的固体肿瘤的患者静脉给药后mI-TM-601的肿瘤特异性吸收的表格。图14示出了在给患有前列腺癌的患者静脉注射mI-TM-601(30mCi/0.6mg)后3小时、24小时和7天所记录的Y相机图像。图15示出了在给患有非小细胞肺癌的患者静脉注射131I-TM-601(30mCi/0.6mg)后3小时、24小时和48小时所记录的Y相机图像。图16示出了在给患有恶性胶质瘤的患者静脉注射131I-TM-601(30mCi/0.6mg)后3小时、24小时和48小时所记录的γ相机图像。图17示出了在给黑色素瘤转移到脑、肺、肝、右腿上的皮下结节的患者静脉注射mI-TM-601(30mCi/0.6mg)后24小时和48小时所记录的全身Y相机图像。图18(A)示出了显示患有转移性黑色素瘤的患者脑左额叶转移的治疗前磁共振图像(MRI)(左)，给患者静脉注射131I-TM-BOl(30mCi/0.2mg)后24小时记录的SPECT图像(右)。图18(B)示出了显示患有转移性黑色素瘤的相同患者脑右枕部(rightoccipitalbrain)转移瘤的治疗前MRI(左)，给患者静脉注射mI-TM_601(10mCi/0.2mg)后24小时记录的SPECT图像(右)。图19示出了患有恶性胶质瘤的患者脑左额叶肿瘤的治疗前MRI(左)，给患者静脉注射131I-TM-601后48小时记录的SPECT图像(右)。图20示出了示出了患有恶性胶质瘤的患者的治疗前脑部MRI(左)，给患者静脉注射131I-TM-601(10mCi/0.2mg)后24小时获得的SPECT图像(右)。图21示出了患有恶性胶质瘤的患者(如图20所示的相同患者)的治疗之前(左)和给患者静脉注射131I-TM-601后3周(右)获得的SPECT图像。图22示出了静脉注射的非癌症小鼠PEG化的氯毒素(PEGylatedchlorotoxin)(TM-601-PEG)与未修饰的TM-601相比的半衰期。PEG化提高TM-601的半衰期大约32倍。图23示出了在小鼠CNV模型中与未修饰的TM-601相比PEG化的氯毒素能够实现增加AUC(在曲线下的区域)，如用更少剂量频率增加抗血管生成作用所示那样。在CNV模型中微血管密度对未修饰的TM-601或PEG化的氯毒素的各种剂量方案作图。定义在整个说明书中，采用如下文所限定的几个术语。如在本文所使用的术语“大约”和“约”是指数值通常包括落在该数值任意方向(大于或小于该数值)10%的范围内的数值，另外指明或另外上下文明显的除外(这样的数值将超过可能值100%除外)。术语“生物活性”，当在本文用于表征多肽时，是指与患者多肽具有足够的氨基酸序列同源性，以与多肽呈现出相似或相同的性能(例如，能够特异性结合治癌细胞和/或内化至癌细胞和/或杀死癌细胞)的一种分子。如本文所使用的，术语“癌(症)，，是指或描述典型特征为无节制细胞生长的哺乳动物的生理情况。癌(症)的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、白血病。更具体地，这样的癌的实例包括肺癌、骨癌、肝癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈部癌症、皮肤或眼黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、生殖器官的癌症、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织的肉瘤、膀胱癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、神经外胚层癌、脊髓肿瘤(spinalaxistumor)、胶质瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤。如本文所使用的，术语“癌细胞”是指经历不期望的或无节制的细胞生长或异常存留或异常组织入侵的哺乳动物(例如人类)体内的细胞。在体外，该术语还指这样的细胞系恒久永生的构建细胞培养物，其将无限增殖并以无节制的方式产生合适的新培养物和空间。如本文所使用的，术语“癌患者”是指患有或易患癌症的个体。癌患者可以已经诊断或没有诊断患有癌症。该术语还包括先前经受过癌症治疗的个体。术语“化学疗法”和“抗癌药剂或药物”在本文中可交换使用。它们指用于治疗癌或癌瘤症状的药物。抗癌药物通常分类到下组中的一种烷化剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、植物碱、插入抗生素(intercalatingantibiotic)、芳香酶抑制剂、抗代谢药物、有丝分裂抑制剂、生长因子抑制剂、细胞循环抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素药物以及抗雄激素药物。这样的抗癌剂的实例包括但不限于BCNU、顺钼、吉西他滨、羟基脲、紫杉醇、替莫唑胺、拓扑替康、氟脲嘧啶、长春新碱、长春碱、甲基苄胼、氮烯咪胺、六甲蜜胺、甲氨蝶呤、锍基嘌呤、硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、克拉屈滨(cladribine)、喷妥司汀(pentostatin)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊昔(teniposide)、伊立替康(irinotecan)、多西紫杉醇(docetaxel)、阿霉素(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、放线菌素(dactinomycin)、伊达比星(idarubicin)、普卡霉素(plicamycin)、丝裂霉素(mitomycin)、博莱霉素(bleomysin)、三苯氧胺(tamoxifen)、氟他胺(flutamide)、亮丙瑞林(Ieuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)、氨鲁米特(aminogluthimide)、阿那曲唑(anastrozole)、安吖啶(amsacrine)、天冬酉先月安(asparaginase)、米托惠酉昆(mitoxantrone)、米托坦(mitotane)以及氨磷汀(amifostine)。术语“毒性”，当在本文用于表征部分(moiety)、化合物、药物或药剂时是指抑制或阻止细胞功能和/或导致细胞破坏的部分、化合物、药物或药剂。如本文所使用的，术语“有效量”是指组织或主体中足以实现其预期作用(例如，所需的生物或药物响应)的化合物或组合物的任何量。例如，在本发明的某些实施方式中，该作用可以是特异性结合至靶组织，以减慢或停止癌症症状的进展、加重或恶化，以产生癌症症状的改善，和/或治愈癌症。术语“融合蛋白”是指包含经由它们各自的肽骨架通过共价键连接的两种或更多种蛋白或其片段的分子，最优选通过编码这些蛋白的多核苷酸分子的基因表达产生。术语“同源”(或“同源性”)，如本文所使用的，是指两个多肽分子之间或两个核酸分子之间相同的程度。当两个比较的序列的位点被相同的碱基或氨基酸单体亚单位占据时，那么相应的分子在该位点是同源的。两个序列之间的同源性的百分比对应于两个序列所共有的匹配或同源性位点的数目除以所比较的位点的数目，然后乘以100。通常，当两个序列对准时进行比较以获得最大同源性。同源的氨基酸序列具有(共有)相同或相似的氨基酸残基。相似的残基是在参考序列中相应氨基酸残基的保守性取代基(conservativesubstitution)或“允许点突变(allowedpointmutation)，，。在参考序列中残基的“保守性取代基”是这样的取代基物理或功能上类似于相应的参考残基，例如，具有类似的尺寸、形状、电荷、化学性能，包括能够形成共价键或氢键，或类似物。尤其优选的保守性取代基是满足DayhofT等的“接收位点突变”限定的标准的那些(“AtlasofProteinSequenceandStructure，，，1978,Nat.Biomed.Res.Foundation,Washington,DC,Supp1.3,22354-352)。术语“个体”或“主体”在本文中可互换使用。它们指人或其他哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、兔子、狗、猫、牛、猪、羊、马或灵长类)，其能患有或易患疾病或病症(例如癌)但是可以患有或没有患有疾病或病症。在许多实施方式中，主体是人类。除非另外指明，术语“个体”或“主体”并不指特定的年龄，因而包含成年人、儿童或新生儿。术语“标记的”和“用可检测试剂或部分标记的”在本文中可以互换使用，表示实体(例如，氯毒素或氯毒素结合物)可以是可见的，例如接着结合至其他实体(例如，肿瘤组织)。优选选择可检测试剂或部分使得其产生能够测量的信号且其强度与所结合的实体的量相关(例如，成比例)。用于标记和/或检测蛋白和肽的广泛种类的系统在本领域是已知的。标记的蛋白或肽可以通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学、化学或其他方式可检测的标记物的结合或轭合进行制备。标记物或标记部分可以是直接可检测的(即，并不需要进一步的反应或操作成可检测的，例如，荧光团是可检测的)或者是间接可检测的(即，通过反应或结合其他可检测的实体使得可检测，例如，半抗原在与包含诸如荧光团的报告物的合适抗体反应后通过免疫染色法是可检测的)。适合的可检测试剂包括但不限于放射性同位素、荧光团、化学发光试剂、微粒、酶、比色标记物(colorimetriclabel)、磁性标记物、半抗原、分子信标(MolecularBeacons)、分子信标识体(aptamerbeacon)，以及类似物。术语“正常”和“健康”在本文中可以互换使用。它们是指没有癌症的个体或个体的组。术语“正常”在本文中还用来描述从健康个体分离的组织样品。术语“药物组合物”在本文中限定为包含有效量的至少一种活性成分(例如，标记的或没有标记的氯毒素或氯毒素结合物)和至少一种药用载体的组合物。本文所使用的术语“药用载体”是指这样的载体介质其不影响活性成分的生物活性的有效性，并且在所给药的浓度不会对主体有过量毒性。该术语包括溶剂、分散介质、涂料、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂(isotonicagent)、吸收延迟剂，等。用于药物活性物质的这样的介质和试剂的使用在本领域是众所周知的(参见例如，“Remington，sPharmaceuticalSciences",Ε.W.Martin,18thEd.，1990，MackPublishingCo.:Easton，PA，其全部内容合并在此以供参考)。术语“蛋白”、“多肽”和“肽”在本文中互换使用，是指各种长度的氨基酸序列，任意以它们中性(无电荷)形式或作为盐，通过糖基化、侧链氧化或磷酸化任意未修饰或修饰的。在某些实施方式中，氨基酸序列是全长天然蛋白。在其他实施方式中，氨基酸序列是全长蛋白的较小片段。另外在其他实施方式中，氨基酸序列是由连接至氨基酸侧链的附加取代基修饰的，诸如糖基、脂、无机离子诸如磷酸根，以及涉及链的化学转化的改性，如巯基基团的氧化。因而，术语“蛋白”(或其等价术语)旨在包括全长天然蛋白的氨基酸序列，经受这些修饰而不改变其特定性能。尤其，术语“蛋白”涵盖蛋白亚型，即，由相同基因编码的变9异体，但是它们的Pl或MW不同或二者都不同。这样的亚型可以是它们的氨基酸序列不同(例如，替换剪切或有限的蛋白水解)，或可替换地，可以由不同的翻译后修饰(例如，糖基化，酰化，磷酸化)来产生。本文所使用的术语“蛋白类似物”是指具有母体多肽相似或相同功能但没有必要必需包括与母体多肽的氨基酸序列相似或相同的氨基酸序列的多肽，或者具有与母体多肽相似或相同结构的多肽。优选地，在本发明的上下文中，蛋白类似物具有与母体多肽的氨基酸序列至少30%(更优选至少35%，至少40%，至少45%，至少50%，至少55%，至少60%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少95%，至少99%)相同的氨基酸序列。另外，本领域普通技术人员理解，蛋白序列通常容忍一些取代而不破坏活性。因而，保留活性，并与母体多肽共有至少约30-40%的全部序列相同，经常大于约50%、60%、70%或80%，并且经常在包含至少3-4并经常高达20或更多氨基酸的一个或多个高保守性区域中包括至少一个更高相同性的区域，经常大于90%、96%、97%、98%、99%的任何多肽，涵盖在术语“多肽类似物”中。本文所使用的术语“蛋白片段”，是指包括第二多肽的氨基酸序列的至少5个氨基酸残基的氨基酸序列的多肽。蛋白的片段可以具有或不具有母体多肽的功能活性。术语“小分子”包括可以发生作用以影响生物过程的任何化学物或其他部分(moiety)。小分子可以包括迄今已知和使用的任何数量的治疗试剂，或者可以是为了筛选生物功能目的在这样的分子库中合成的小分子。小分子在尺寸上与大分子相区别。在本发明中适合使用的的小分子通常具有的分子量小于约5，000道尔顿(Da)，优选小于约2，500Da，更优选小于1，OOODa，最优选小于约500Da。本文所使用的术语“系统性给药”是给予药剂使得药剂经由脉管系统以显著的量广泛分布在体内，并具有在血液中具有生物效果，例如其所需效果，和/或达到其所需的作用位点。典型的系统性给药途径包括通过以下给药(1)将药剂直接引入到脉管系统或(2)口服、肺部给药、或肌肉给药，其中药剂被吸收，进入脉管系统，经由血液运载到一个或多个所需的作用位点。术语“治疗药剂”或“药物”在本文中互换使用。它们是指治疗疾病或临床症状有效的物质、分子、化合物、药剂、因子或组合物。术语“组织”在本文中以其最广义使用。组织可以是能够(但不是必需)包括癌细胞的任何生物实体。在本发明的上下文中，包括体外、体内、和间接体内组织。因而，组织可以是个体的一部分或从个体获得的(例如，通过活检)。组织还可以包括为了组织病理目的所获得的组织切片如冷冻切片或者具有已知诊断、治疗和/或疗效历史的档案样品。术语组织还涵盖通过处理组织样品所衍生的任何材料。衍生的材料包括但不限于从组织分离的细胞(或它们的后代)。组织的处理可以涉及一种或多种过滤、蒸馏、萃取、浓缩、干扰成分的灭活、加入试剂等。本文所使用的术语“治疗(treatment)”是表征目标如下的方法或过程(1)延迟或阻止疾病或病症的发生；(2)减慢或停止疾病或病症的一种或多种症状的进展、加重或恶化；(3)给疾病或病症的症状带来改善；(4)减小疾病或病症的严重程度或发生率；或(5)治愈疾病或病症。为了预防性或预防作用，治疗可以在发病前给予。可替换地或另外地，为了治疗性作用，治疗可以在疾病或病症开始后给予。具体实施例方式如上所提及的，本发明涉及用于治疗和诊断癌症的方法。本文所提供的方法通常包括系统性给予可以标记或没有标记可检测部分的氯毒素剂。在某些优选实施方式中，氯毒素剂是静脉给药的。根据本发明，可以采用本领域内的传统分子生物技术、微生物技术、重组DNA技术。这样的技术在文献中有完全的解释，参见，例如，Maniatis,Fritsch&Sambrook,“MolecularCloning:ALaboratoryManual，，，1982；“DNACloning:APracticalApproach,"VolumesIandII,D.N.Glover(Ed.),1985；“OligonucleotideSynthesis〃，M.J.Gait(Ed.)，1984；“NucleicAcidHybridization",B.D.Hames&S.J.Higgins(Eds.),1985;"TranscriptionandTranslation"B.D.Hames&S.J.Higgins(Eds.),1984;"AnimalCellCulture",R.I.Freshney(Ed.),1986；"ImmobilizedCellsAndEnzymes",IRLPress,1986；B.Perbal,“APracticalGuideToMolecularCloning"，1984。I.氯毒素剂本发明的治疗和诊断方法涉及对其需要的个体系统性给予有效量的至少一种氯毒素剂。本文所使用的术语“氯毒素剂”是指包括至少一个氯毒素部分的化合物。在某些实施方式中，氯毒素剂包括与至少一个治疗性部分(例如，抗癌药剂)联接的至少一个氯毒素部分。氯毒素部分(和/或治疗性部分)可以与至少一个标记部分相连。A.氯毒素部分(chlorotoxinmoity)本文所使用的术语“氯毒素部分”是指氯毒素、生物活性氯毒素亚单位(subimit)或氯毒素衍生物。在某些实施方式中，术语“氯毒素”是指天然衍生自以色列金蝎(Leiurusquinquestriatus)蝎毒素的全长、36个氨基酸多肽(DeBinetal.，Am.J.Physiol.，1993，264:C361-369)，其包括如在SEQIDN0..1中列出的天然氯毒素的氨基酸序列。术语“氯毒素”包括含有SEQIDNO.1的多肽，其已经合成或重组产生，如在美国专利No.6，319，891中所披露的那些(其全部内容合并于此以供参考)。“生物活性氯毒素亚单位”是包含少于氯毒素的36个氨基酸的多肽，并且其保留氯毒素的至少一种性能或功能。如本文所使用的，氯毒素的“性能或功能”包括但不限于阻止异常细胞生长的能力，相对于正常细胞特异性结合至肿瘤/癌症细胞的能力，内化至肿瘤/癌细胞的能力，和/或杀死肿瘤/癌细胞的能力。肿瘤/癌细胞可以是来自主体、培养细胞或细胞系体外的、间接体内、体内的、原始分离物。本文所使用的术语“生物活性氯毒素衍生物”是指氯毒素的任何范围广泛的衍生物、类似物、变异体、多肽片段或模拟物(mimetic)以及保持氯毒素至少一种性能或功能的相关多肽(如上所述)。氯毒素衍生物的实例包括但不限于氯毒素的肽变异体、氯毒素的肽片段，例如，包括或由SEQIDN0.1，2，3，4，5，6或7的邻接的10-mer肽组成的片段，或者包括SEQIDNO.1的残基10-18或21-30的片段，核心结合序列(corebindingsequences),以及肽模拟物(参见国际专利申请号No.PCT/US03/17410,公开号WO2003/101474,其全部内容结合于此以供参考)。氯毒素衍生物的实例包括具有在SEQIDNO.1列出的氨基酸序列的片段的肽，具有至少约7、8、9、10、15、20、25、30或35个邻接氨基酸残基，其与氯毒素的活性相关。这样的片段可以含有氯毒素肽的功能区域，识别为对应于已知肽区(peptidedomain)的氨基酸序列区域，以及明显亲水性的区域。这样的片段还包括彼此连接的核心序列，以任何顺序，具有移除的或被连接子替代的介入氨基酸(interveningaminoacid)。当衍生序列和氯毒素序列最大程度对齐时，氯毒素的衍生物包括包含至少一种氨基酸残基的保守性或非保守性取代基的多肽。取代基可以是提高氯毒素的至少一种性能或功能，呈现氯毒素的至少性能或功能，或对氯毒素的至少一种性能或功能为中性的取代基。适合在本发明的实践中使用的氯毒素衍生物的实例描述于国际申请WO2003/101474中(其全部内容结合于此以供参考)。具体的实例包括包含或由SEQIDNO.8或SEQIDNO.13组成的多肽，以及其变异体、类似物和衍生物。氯毒素衍生物的其他实例包括含有通过例如基因重组、定点突变或PCR突变的预定突变的那些多肽，以及肽家族的等位基因或其他天然产生的变异体；以及衍生物，其中肽通过取代、化学、酶或其他合适的方式用不是天然产生的氨基酸部分(例如可检测部分诸如酶或放射性同位素)共价修饰。氯毒素和其肽衍生物可以使用各种各样的方法来制备，包括标准固相(或液相)肽合成方法，其在本领域是已知的。另外，编码这些肽的核酸可以使用商购寡核苷酸合成装置来合成，蛋白可以使用标准重组生产系统重组生产。其他合适的氯毒素衍生物包括模拟氯毒素的三维结构的肽模拟物。这样的肽模拟物具有相对于天然产生的肽的显著优点，包括，例如生产更经济、化学稳定性更高、药理学性能提高(半衰期、吸收、效能、功效)、特异性可变(例如，宽谱生物活性、抗原性减小以及其他)。在某些实施方式，模拟物是氯毒素肽二级结构的模拟元素。蛋白的肽骨架存在主要定位氨基酸侧链以这种方式以有利于分子相互作用，诸如那些抗体和抗原。肽模拟物被期望使分子相互作用类似于天然分子。肽类似物通常用于药物产业作为具有与那些模板肽类似性能的非肽药物。这种类型的化合物还指作为肽模拟物(ρ印tidemimetic)或拟月太类(peptidomimetic)(参见，例如，Fauchere，Adv.DrugRes.，1986，1529-69；Veber&Freidinger,1985,TrendsNeurosci.,1985,8:392_396；Evansetal.,J.Med.Chem.,1987,30=1229-1239)并通常用计算机分子模型辅助进行研发。通常，肽模拟物结构上类似于范型多肽(paradigmpolypeptide)(即，具有生物化学性能或药理学活性的多肽)，但是具有可选地被非肽键代替的一个或多个肽键(peptidelinkage)。通过使用组合化学产生药物库可以提高肽模拟物的使用。通过确定提高或降低肽与例如肿瘤细胞的结合的氨基酸突变来辅助肽模拟物的设计。可以使用的途径包括酵母双杂交法(参见，例如，Chienetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1991,88:9578_9582)以及使用相位显示法(phasedisplaymethod)。双杂交法检测酵母中的蛋白-蛋白相互作用(Fieldetal.,Nature，1989，340:245-246)。相位显示法检测固定蛋白与表达在噬菌体如λ(lambda)和M13的表面上表达的蛋白之间的相互作用(Ambergetal.，Strategies，1993,62-4；Hogrefeetal.，Gene,1993，128119-126)。这些方法允许肽-蛋白相互作用的阳性和阴性选择以及确定这些相互作用的序列的识别。在某些实施方式中，氯毒素剂包括显示出与上述氯毒素相似或相关活性的其他蝎种多肽毒素。如本文所使用的，术语“氯毒素相似或相关活性”尤其指对肿瘤/癌细胞的选择性/特异性结合。合适相关蝎毒素的实例包括但不限于蝎源的毒素和相关肽，其显示出与氯毒素相同的氨基酸和/或核苷酸序列。相关蝎毒素的实例包括但不限于Mesobuthusmartenssi的CT神经毒素(基因库编号(GenBankAccession)No.AAD473730)，东亚钳竭(Buthusmartensiikarsch)的神经毒素BmK41—2(基因库编号No.A59356)，Buthusmartensii的神经毒素Bml2-b(基因库编号No.AAK16444)，Leiurusquinquestriatushebraeu的可能毒素(ProbableToxin)LGH8/6(基因库编号No.P55966)，Mesubutustamulussindicus的小毒素(Smalltoxin)(基因库编号No.P15229)。适合于在本发明使用的相关蝎毒素包括与在SEQIDNo.1列出的全部氯毒素序列具有至少约75%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约99%序列相同的氨基酸序列的多肽。在某些实施方式中，相关蝎毒素包括具有与SEQIDNO.8或SEQIDNO.13同源的序列的那些蝎毒素。在某些实施方式中，在氯毒素剂中的氯毒素部分是标记的。标记方法和标记部分(labelingmoiety)的实例描述如下。B.治疗性部分(TherapeuticMoiety)如上所述，在某些实施方式中，氯毒素剂包括与至少一个治疗性部分相连的至少一个氯毒素部分。合适的治疗性部分包括治疗疾病或临床病症有效的任何各种各样的物质、分子、化合物、试剂或因子。在某些优选实施方式中，治疗性部分是化疗剂(即，抗癌药物)。合适的抗癌药物包括对癌细胞直接或间接毒性或伤害的各种各样的物质、分子、化合物、试剂或因子。本领域普通技术人员应该明了，治疗性部分可以是合成或天然化合物单个分子、不同分子的混合物或不同分子的络合物。合适的治疗性部分可以属于化合物各种分类中的任一种，包括但不限于小分子、肽、蛋白、糖类、留族化合物、抗体(包括其片段和变异体)、融合蛋白、反义多核苷酸、核酶、小干扰RNA、拟肽类、放射性同位素，以及类似物。当治疗性部分包括抗癌药物时，抗癌药物可以在例如以下抗癌药物分类中找到烷化剂、抗代谢药物、抗有丝分裂抗生素、生物碱抗肿瘤药剂、激素和抗激素、干扰素、非甾族抗炎药物、各种其他抗肿瘤药剂诸如激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂以及NF-κB抑制剂。抗癌药物的实例包括但不限于烷化药物(氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑(Melphalan)、异环磷酰胺(Ifosfamide))、抗代谢药物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(Cytarabile)、吉西他滨)、纺锤体毒剂(长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼白毒素(依托泊苷、伊立替康、拓扑替康)、抗生素(阿霉素、博莱霉素、丝裂霉素)、亚硝基脲(卡氮芥、洛莫司汀)、无机离子(顺钼、卡钼)、酶(天冬酰胺酶)、以及激素(三苯氧胺、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)和甲地孕酮(Megestrol))，来列举几种。对于更新的癌症治疗的更综合性的讨论，参见http//www,cancer,gov/,FDA批准月中瘤学药物的列表在http://www,fda.rov/cder/cancer/druRlistframe.htm,TheMerckManual,SeventeenthEd.1999，其全部内容合并于此，以供参考。在某些实施方式中，治疗性部分包括细胞毒性剂。细胞毒性剂的实例包括毒素、其他生物活性蛋白、传统化疗剂、酶、放射性同位素。合适的细胞毒性毒素的实例包括但不限于细菌和植物毒素诸如多花白树毒蛋白、蓖麻毒素、皂苷、绿脓杆菌外毒素(Pseudomonasexotoxin)、美洲商陆抗病毒蛋白、白喉毒ο合适的细胞毒性生物活性蛋白的实例包括但不限于补体系统的蛋白(或补体蛋白)。补体系统是帮助器官清除病原体并促进健康的复杂生化连锁反应(B.P.Morgan，Crit.Rev.Clin.Lab.Sci.，1995，32:265)。补体系统由超过35个可溶细胞结合蛋白组成，其中12个直接涉及补体途径。合适的细胞毒性化疗剂的实例包括但不限于紫杉烷类(例如，多西紫杉醇，紫杉酉享)、美登素类(maytansines)、duocarmycins、CC_1065、auristatins、calicheamincins以及其他烯二炔抗癌抗生素。其他实例包括抗叶酸类(anti-folates)(例如，氨蝶呤、甲氨蝶呤、培美曲塞、雷替曲塞(raltitrexed))、长春花生物碱(例如，长春新碱、长春碱、依托泊苷、长春地辛、长春瑞滨)、以及蒽环类(例如，柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、伊达比星、米托I酉昆、&￥比(valrubicin))ο合适的细胞毒性酶的实例包括但不限于溶核酶(nucleolyticenzyme)。合适的细胞毒性放射性同位素的实例包括任何α-，β-或γ-放射体，当位于肿^^^W^itj^iffllfiiW(S.Ε.Order,“Analysis,Results,andFutureProspectiveoftheTherapeuticUseofRadiolabeledAntibodyinCancerTherapy",MonoclonalAntibodiesforCancerDetectionandTherapy,R.W.Baldwinetal.(Eds.),AcademicPress,1985)0这样的放射性同位素的实例包括但不限于碘-131(131I)、碘-125(125I)、铋-212(212Bi)、铋-213(213Bi)、砹-211(211At)、铼-186(186Re)、铼-186(188Re)、磷-32(32P)、钇-90(90Y)、钐-153(153Sm)以及镥-177(117Lu)。可替换地或另外地，适合用于本发明的治疗性部分可以是标题为“ChlorotoxinsasDrugCarriers”(USSN60/954，409)、提交于2007年8月7日的共同拥有临时申请所描述的任何治疗性部分，其全部内容结合于此以供参考。这样的治疗性部分的种类的实例包括但不限于水溶性差的抗癌药剂、与药物抗性相关的抗癌剂、反义核酸、核酶、三联剂(triplexagent)、短干扰RNA(siRNA)、光敏剂、放射增敏剂、超抗原、前药转换酶(prodrugactivatingenzyme)、抗血管生成剂。C.标记部分(labelingMoiety)在某些实施方式中，氯毒素剂标记有至少一个标记部分。例如，在氯毒素中的一个或多个氯毒素部分和/或一个或多个治疗性部分可以标记有标记部分。标记部分的作用是有利于在结合于组织后检测氯毒素剂。优选地，标记部分选择成使得其产生能够被测量并且其强度与结合至组织的诊断剂的量相关(例如成比例)的信号。优选地，标记基本不干扰氯毒素的所需生物或药学活性。在某些实施方式中，标记涉及一个或多个标记部分连接或结合至氯毒素部分，优选连接或结合至氯毒素部分的肽序列上的非干扰位点。这样的非干扰位点是不参与氯毒素部分与肿瘤细胞的特异性结合的位点ο标记部分可以是在结合至相关组织和系统后允许检测氯毒素剂的任何实体。可以使用任何各种各样的可检测试剂作为本发明氯毒素剂中的标记部分。标记部分可以是直接可检测的或间接可检测的。标记部分的实例包括但不限于各种配体，放射性同位素(例如，3H，14C，18F，19F，32P，35S，135I，125I，123I，64CU，187Re，mIn，9°Y，99mTC，177LU)，荧光染料(对于特定的示例性荧光染料，见下文)，化学发光剂(诸如，像吖啶酯、稳定的二氧环丁烷等)，生物荧光剂，光谱可解析无机荧光半导体纳米晶体(即，量子点)，金属纳米颗粒(例如，金、银、铜和钼)或纳米簇，顺磁金属离子，酶(对于酶的特定实例，见下文)；比色标记物(诸如，像染料、胶态金等)，生物素，地高辛，可获得抗血清或单克隆抗体的蛋白。在某些实施方式中，标记部分包括荧光标记物。具有各种各样的化学结构和物理特性的许多已知荧光标记部分适合用于本发明的方法和诊断的实践中。合适的荧光染料包括但不限于荧光素和荧光素染料(例如，异硫氰酸荧光素或FITC，萘并荧光素，4'，5'-二氯-2'，7'-二甲氧基荧光素，6-羧基荧光素或FAM)，碳菁，份菁(merocyanine)，苯乙烯型染料，氧醇染料(oxonoldyes)，藻红素，赤藓红，曙红，罗丹明染料(rhodaminedye)(例如，羧基四甲基-罗丹明或TAMRA，羧基罗丹明6G，羧基-X-罗丹明(ROX)，丽丝胺罗丹明B，罗丹明6G，罗丹明绿(rhodamineGreen)，罗丹明红(rhodamineRed)，四甲基罗丹明或TMR)，香豆素和香豆素染料类(例如，甲氧基香豆素，二烷基氨基香豆素，羟基香豆素(hydroxycoumarin)和氨基甲基香豆素(aminomethylcoumarin)或AMCA)，俄勒冈绿染料(OregonGreendye)(例如，俄勒R绿488，俄勒R绿500，俄勒R绿514)，德克萨斯红(TexasRed)，德克萨斯红-X，SpectrumRed,SpectrumGreen，菁染料(例如，Cy-3,Cy-5,Cy-3.5,Cy-5.5),AlexaFluor染料(例如，AlexaFluor350,AlexaFluor488，AlexaFluor532,AlexaFluor546,AlexaFluor568,AlexaFluor594,AlexaFluor633，AlexaFluor660andAlexaFluor680)，BODIPY染料(例如，BODIPYFL，BODIPYR6G,BODIPYTMR,BODIPYTR,BODIPY530/550，BODIPY558/568，BODIPY564/570，BODIPY576/589，BODIPY581/591,BODIPY630/650,B0DIPY650/665)，IRD染料(例如，IRD40,IRD700,IRD800)等。对于合适的荧光染料的更多实例以及用于将荧光染料连接至其他化学实体诸如蛋白禾口月太的方法，参见，例如，“TheHandbookofFluorescentProbesandResearchProducts",9thEd.，MolecularProbes,Inc.，Eugene,OR。荧光标记剂的有利性能包括高摩尔吸收系数、高荧光量子产率以及光稳定性。在某些实施方式中，标记荧光团如愿地在光谱的可见光(即，400至750nm之间)而不是紫外范围(S卩，低于400nm)呈现吸收和发射波长。在某些实施方式中，标记部分包括酶。合适酶的实例包括但不限于在ELISA中使用的那些，例如，辣根过氧物酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶以及碱性磷酸酶。其他实例包括β-葡糖苷酸酶、β-D-葡萄糖苷酶、脲酶、葡糖氧化酶合过氧化物(glucoseoxidaseplusperoxide)以及碱性磷酸酶。酶可以使用连接子基团诸如碳化二亚胺、二异氰酸酯、戊二醛等连接至氯毒素部分。在某些实施方式中，标记部分包括通过单光子发射计算机断层显像(SPECT)和正电子发射断层显像(PET)可检测的放射性同位素。这样的放射性同位素的实例包括但不限于碘-131(131I)、碘-125(125I)、铋-212(212Bi)、铋-213(213Bi)、砹-221(211At)、铜-67(67Cu)、铜-64(64Cu)、铼-186(186Re)、铼-188(188Re)、磷-32(32P)、钐-153(153Sm)、镥-177(117Lu)、锝-99m(99mTc)、镓-67(67Ga)、铟-111(111In)以及铊-201(201Tl)。在某些实施方式中，标记部分包括通过Y照相机可检测的放射性同位素。这样的放射性同位素的实例包括但不限于碘-131(131I)和锝-99m(99mTc)。在某些实施方式中，标记部分包括在核磁共振(MRI)中为良好的对比增强剂的顺磁金属离子。这样的顺磁金属离子包括但不限于钆III(Gd3+)、铬III(Cr3+)、镝III(Dy3+)、铁III(Fe3+)、锰II(Mn2+)、和镱III(Yb3+)。在某些优选的实施方式中，标记部分包括钆III(Gd3+)。钆是用于MRI的FDA批准的对比剂，其在异常组织中积累导致这些异常区域在核磁共振成像中变得非常明亮(增强)。钆已知在身体的不同区域尤其在脑中正常和异常组织之间提供强对比。在某些实施方式中，标记部分包括通过核磁共振光谱(MRS)可检测的稳定顺磁同位素。合适的稳定顺磁同位素的实例包括但不限于碳-13(13C)和氟-19(19F)。D.氯毒素剂的形式在某些实施方式中，氯毒素剂包括与至少一个治疗性部分联接(associate)的至少一个氯毒素部分。因而，由至少两个其他分子的联接(例如，键合、相互作用、融合或连接)产生氯毒素剂。在氯毒素剂中的氯毒素部分与治疗性部分之间的联接可以是共价的或非共价的。无论键合、相互作用、融合或连接的特性如何，在氯毒素部分与治疗性部分之间的联接优选是选择性的、特异性的并足够强使得氯毒素剂在传送/递送至肿瘤之前和期间不会离解。在氯毒素剂中的氯毒素部分与治疗性部分之间的联接可以通过本领域技术人员已知的化学、生物化学、酶或基因连接来实现。在某些实施方式中，氯毒素部分与治疗性部分之间的联接是非共价的。非共价相互作用的实例包括但不限于疏水相互作用、静电相互作用、偶极相互作用、范德华相互作用、氢键。在某些实施方式中，氯毒素部分与治疗性部分之间的联接是共价的。本领域技术人员将明了，这些部分可以彼此直接或间接相连(例如，通过连接子，如下文所述的)。在某些实施方式中，氯毒素部分与治疗性部分是彼此直接共价连接的。直接共价键合可以通过诸如酰胺、酯、碳-碳、二硫、氨基甲酸、醚、硫醚、脲、胺、碳酸键的键联进行。共价键合可以通过利用存在于氯毒素部分上和/或治疗性部分上的官能团来实现。可替换地，非关键氨基酸可以被会引入用于连接目的的有用基团(氨基，羧基或锍基)的其他氨基酸所替代。可替换地，附加的氨基酸可以添加至氯毒素部分以引入用于连接目的的有用基团(氨基，羧基或锍基)。能够用于将这些部分连接在一起的合适基团包括但不限于胺基、酐、羟基、羧基、硫醇等。活化剂如碳二亚胺可以用来形成直接键联。各种各样的活化剂在本领域是已知的，并且适合于连接治疗性试剂和氯毒素部分。在其他实施方式中，在氯毒素剂中的氯毒素部分和治疗性部分通过连接子基团间接彼此共价连接。这可以通过使用在本领域已知的任何数量的稳定双官能团试剂来完成，e括均官能i式齐Ll(homofunctionalagent)或杂官能i式齐[J(heterofunctionalagent)(S样的试剂的实例，参见，例如，PierceCatalogandHandbook)。使用双官能连接子与使用活化剂的不同在于，前者造成在所产生的氯毒素剂中存在的连接(linking)部分，而后者造成在反应中所涉及的两个部分之间的直接联结(coupling)。双官能连接子的作用可以使得两个不同惰性部分之间的反应。可替换地或附加地，成为反应产物的一部分的双官能连接子可以选择成使得其赋予氯毒素剂一定程度的构象灵活性(例如，双官能连接子包括含有数个原子的直链烷基链，例如，直链烷基链含有2至10个碳原子)。可替换地或附加地，双官能连接子选择成使得在氯毒素部分与治疗性部分之间形成的键联是可解离的，例如，可水解的(例如，这样的连接子，参见例如美国专利号5，773，001；5,739,116和5，877，296，其各自全部内容合并于此以供参考)。当结合物(conjugate)水解后观测到较高活性的氯毒素部分和/或治疗性部分时例如优选使用这样的连接子。治疗性部分可以从氯毒素部分解离的典型机理包括在溶酶体(腙、缩醛以及类顺式乌头酸酰胺(cis-aconitate-likeamide)的酸性pH下的水解，通过溶酶体酶的肽解离(组织蛋白酶和其他溶酶体酶)，以及二硫键的还原。治疗性部分可以从氯毒素部分解离的其他机理包括在细胞外或细胞内生理PH下的水解。当用于连接治疗性部分与氯毒素部分的交联剂是生物可降解/生物蚀解实体如葡聚糖凝胶时应用该机理。例如，含腙氯毒素剂可以用引入的、提供所需释放性能的羰基来制得。氯毒素剂还可以用包括在一端具有二硫基团在另一端具有胼衍生物的烷基链的连接子制得。含有非腙官能团的连接子还具有在溶酶体的酸性环境下解离的潜能。例如，氯毒素剂可以由硫醇反应性连接子制得，该连接子含有分子内可解离的非腙基团，诸如酯、酰胺、缩醛/缩酮。pH敏感性连接子类型的另一实例是顺式乌头酸(cis-aconitate)，其具有并联(juxtapose)至酰胺基的羧酸基团。在酸性溶酶体中羧酸加速酰胺水解。用其他数种类型的结构达到相似类型水解速率加速度的连接子也可以使用。另一种潜在用于氯毒素剂释放的方法是通过酶溶体酶的肽的酶水解。在一种实施方式中，肽毒素通过酰胺键连接至对氨基苯甲醇，然后氨基甲酸酯或碳酸酯在苯甲醇与治疗性部分之间产生。肽的解离导致氨基甲酸苯甲酯或碳酸苯甲酯的瓦解。在另一个实例中，酚可以取代氨基甲酸酯由连接子的瓦解而解离。在另一种变型中，二硫还原用来引发对巯基苯甲醇氨基甲酸酯或碳酸酯的瓦解。在其中氯毒素剂内的治疗性部分是蛋白的实施方式中，多肽或肽、氯毒素剂可以是融合蛋白。如上已经限定的，融合蛋白是包含经由其各自肽骨架通过共价键连接的两个或多个蛋白或肽的分子。在本发明的方法中使用的融合蛋白可以通过本领域已知的任何合适的方法生产。例如，他们可以通过使用多肽合成器的直接蛋白合成法来生产。可替换地，基因片段的PCR放大可以使用产生在两个保守基因片段之间的互补突出部(complementaryoverhang)的锚定引物来进行，其随后淬灭并再放大以产生嵌合基因。融合蛋白可以通过标准重组方法获得(参见，例如，Maniatisetal."MolecularCloning=ALaboratoryManual，，,2ndEd.,1989,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpring,N.Y.)。这方法通常包括(1)构建编码所需融合蛋白的核酸分子；(2)将核酸分子插入到重组表达载体；(3)用表达载体转化合适的宿主细胞；以及(4)在宿主细胞中表达融合蛋白。由这样的方法产生的融合蛋白可以或者直接从培养介质，或者通过细胞的溶解收集并分离，这在本领域是已知的。通过转化的宿主细胞生产纯化蛋白的许多方法在本领域是众所周知的。这些方法包括但不限于，沉淀、离心、凝胶过滤以及(离子交换、反相、亲和)柱色谱。已经描述了其他纯化方法(参见，例如，Deutscheretal."GuidetoProteinPurification”inMethodsinEnzymology,1990,Vol.182,AcademicPress)。本领域技术人员容易理解，在本发明方法中的氯毒素剂可以包含许多数量的氯毒素部分和许多数量的治疗性部分，通过任何数量的不同方式彼此联接。结合体的设计将受到其所需目的以及其使用的具体上下文所希望的性能的影响。将氯毒素部分联接或结合至治疗性部分以形成氯毒素剂的方法的选择在本领域技术人员的知识中，并通常取决于在这些部分之间所需的相互作用的特性(即，共价对非共价和/或可解离对非可解离)，治疗性部分的特性，在所涉及的部分上的功能性化学基团的存在和特性等。在标记的氯毒素剂中，在氯毒素部分(或治疗性部分)与标记部分之间的联接可以是共价的或非共价的。在共价联接的情况下，氯毒素(或治疗性部分)与标记部分的可以直接或间接彼此连接，如上所述。在某些实施方式中，在氯毒素部分(或治疗性部分)与标记部分之间的联接是非共价的。非共价联接的实例包括但不限于疏水相互作用、静电相互作用、偶极相互作用、范德华相互作用、氢键。例如，标记部分可以通过螯合(例如，金属同位素可以螯合到与氯毒素部分相连例如融合的PolyHis区域上)连接至氯毒素部分(或治疗性部分)。在某些实施方式中，氯毒素部分(或治疗性部分)是同位素标记的(例如，其含有被具有与通常天然发现原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的原子所替代一个或多个原子)。可替换地或附加地，同位素可以连接至氯毒素部分和/或治疗性部分。本领域技术人员容易理解，在本发明的某些方法中使用的标记的氯毒素剂可以包括任何数量的氯毒素部分，任何数量的治疗性部分以及任何数量的标记部分，通过任何不同的方式彼此联接。标记的氯毒素剂的设计将受到其所需目的以及其使用的具体上下文所希望的性能以及检测所选择的方法的影响。II.治疗方法本发明治疗方法包括系统性(例如，静脉内)给予有效量的氯毒素剂，或其药物组合物，至其需要的个体(即，患有肿瘤的个体)。从而，本发明的治疗方法可以用于减小固体肿瘤的尺寸，抑制肿瘤生长和/或转移，治疗淋巴癌，和/或延长患有癌症或癌病症的哺乳动物(包括人类)的生存时间。A.适应症根据本发明可以治疗的癌症或癌病症的实例包括但不限于脑或中枢神经的肿瘤(例如，脑膜、脑、脊髓、颅神经、以及CNS其他部分的肿瘤，诸如胶质母细胞瘤或髓母细胞瘤)；头和/或颈癌，乳腺癌，循环系统的癌症(例如，心脏、纵隔和胸膜以及其他胸内器官、血管肿瘤，肿瘤相关的血管组织)；血管和淋巴系统的肿瘤(例如，霍奇金病，非霍奇金病淋巴瘤，伯基特淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)，艾滋病相关淋巴瘤，恶性免疫增生病，多发性骨髓瘤，恶性浆细胞瘤，淋巴细胞白血病，髓系白血病，急性或慢性淋巴细胞白血病，单核细胞白血病，特异性细胞类型的其他白血病，非特异性细胞类型的白血病，淋巴、造血和相关组织的非特异性恶性肿瘤，诸如弥漫性大细胞性淋巴瘤、T细胞淋巴瘤或皮肤T细胞淋巴瘤)；排泄系统(例如，肾、肾盂、输尿管、膀胱、其他泌尿器官)的肿瘤；胃肠道(例如，食管、胃、小肠、直肠、大肠、直肠乙状结肠交界部、直肠、肛门、肛管)的癌症；涉及肝脏和肝内胆管、胆囊以及胆道其他部分、胰腺以及其他消化器官的肿瘤，口腔(例如，唇、舌、牙龈、口底、腭、腮腺、涎腺、扁桃体、口咽、鼻咽、脓样窦(puriformsinus)、下咽以及口腔的其他部位)的肿瘤；生殖系统(例如，外阴、阴道、子宫颈、子宫、卵巢以及雌性生殖器官相关其他部位、胎盘、阴茎、前列腺、睾丸以及雌性生殖器官相关其他部位)的肿瘤；呼吸道(例如，鼻腔、中耳、鼻窦、喉、气管、支气管和肺、小细胞性肺癌以及非小细胞性肺癌)的肿瘤；骨骼系统(例如，肢体的骨骼和关节软骨、骨关节软骨和其他部位)的肿瘤；皮肤的肿瘤(例如，皮肤的恶性黑色素瘤、非黑素性皮肤癌、皮肤的基底细胞癌、皮肤的鳞状细胞癌、间皮瘤、卡波西肉瘤)；涉及其他组织的肿瘤包括外周性神经和自主神经系统，结缔和软组织，腹膜后腔和腹膜，眼和附件，甲状腺，肾上腺，内分泌腺以及相关结构，淋巴结的继发性和非特异性恶性肿瘤，消化系统和呼吸系统的继发性恶性肿瘤，其他部位的继发性恶性肿瘤。在本发明的某些实施方式中，本发明的组合物和方法用于肉瘤的治疗。在一些实施方式中，本发明的组合物和方法用于治疗膀胱癌、乳腺癌、慢性淋巴瘤白血病、头和颈部癌症、子宫内膜癌、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌以及前列腺癌。在本发明的某些实施方式中，组合物和方法用于治疗神经外胚层起源的肿瘤。在人类患者中存在的神经外胚层起源的任何肿瘤通常使用本发明的组合物和方法治疗。在某些实施方式中，影响患者的神经外胚层起源的肿瘤为以下构成的组的成员胶质瘤、脑膜瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、神经节瘤、嗜铬细胞瘤、黑色素瘤、外周性原始神经外胚层瘤、肺小细胞癌、尤文瘤(Ewing'ssarcoma)、脑中神经外胚层起源的转移瘤。在某些实施方式中，神经外胚层起源的肿瘤影响患者的脑部。在某些实施方式中，脑肿瘤是胶质瘤。约一半的原发性脑肿瘤是胶质瘤。有4种主要类型的胶质瘤星形细胞瘤(其在成人和儿童中均是最常见类型的胶质瘤)，室管膜瘤，少突神经胶质瘤，混合性胶质瘤。胶质瘤可以根据他们的位置分类幕下(即，脑的下部，在儿童患者中最常见)或幕上(即，位于脑的上部，在成人患者中最常见)。胶质瘤进一步根据他们等级分类，其由肿瘤的病理学评价来确定。世界卫生组织(WHO)已经开发了分级系统，由I级胶质瘤(其趋于最小侵袭性)到VI级胶质瘤(其趋于最大侵袭性和恶性)。低等级(即，I级或II级)胶质瘤的实例包括但不限于毛细胞型星形细胞瘤(也称为青少年毛细胞型星形细胞瘤)、纤维性星形细胞瘤、多形性黄色星形细胞瘤、以及胚胎发育不良性神经上皮瘤。高等级胶质瘤包括III级胶质瘤(例如，间变性星形细胞瘤，AA)以及IV级胶质瘤(多形性胶质母细胞瘤，GBM)。间变性星形细胞瘤在其30s-50s的男性和女性中最频发，占所有脑肿瘤的4%。多形性胶质母细胞瘤，最具侵蚀性类型的胶质肿瘤，在其50s-70s的男性和女性中最频发，占所有原发性脑肿瘤的23%。预后型是IV级最糟的，平均生存时间为12个月。在某些实施方式中，本发明的方法用于治疗高等级胶质瘤。不考虑侵蚀性治疗，胶质瘤通常复发，经常具有较高等级并有时具有不同的形态。当复发改变时，IV级胶质瘤不变地复发。因而，在某些实施方式中，本发明的方法用于治疗复发性胶质瘤，尤其复发性高等级胶质瘤。可以用本发明的组合物和方法治疗的肿瘤还包括用其他化疗难治的肿瘤。术语“难治”，当用于本文中指肿瘤是，意味着该肿瘤(和/或其转移瘤)，用不是本发明组合物的至少一种化疗治疗，在用这样的化疗药剂治疗后没有显示或仅显示出微弱的抗增殖响应(即，没有或仅微弱地抑制肿瘤生长)"也就是说，肿瘤用其他(优选标准)化疗根本不能治疗或仅具有不满意的结果。本发明，当提及治疗难治(性)肿瘤或类似物时，应理解为不仅包括⑴其中在治疗患者期间一种或多种化疗已经失败的肿瘤，而且包括(ii)在化疗剂存在的情况下通过其他方式例如活检和培养物显示出难治的肿瘤。根据本发明能够接受治疗的患者通常包括任何诊断患有肿瘤的患者。本领域技术人员将会明了，可以采用不同的诊断方法，取决于肿瘤的位置和特性，包括成像，活检等。B.剂量和给药在根据本发明的治疗方法中，氯毒素剂或其药物组合物，通常以这样的量和这样时间给药必须或足以达到至少一种所需结果。例如，氯毒素剂可以以这样的量和这样的时间给药其杀死癌细胞，减小肿瘤的大小，抑制或延迟肿瘤生长或转移，延长患者的生存时间，或产生其他临床优点。根据本发明的治疗可以由在一段时间单剂量或多计量构成。给药可以每天、每周(或以一些其他多天间隔)或以间歇时间表进行一次或多次。待给药的氯毒素剂或其药物组合物的准确量会随着主体与主题之间而变化，并且取决于数种因素(见下文)。氯毒素剂或其药物组合物可以采用用于达到所需治疗效果有效的任何系统性给药途径来给药。典型的系统性给药途径包括但不限于肌肉、静脉、肺以及口服途径。给药也可以例如通过灌注注射或推注注射，或通过上皮或皮肤粘膜层吸(例如，口服、粘膜(mucosa)、直肠和肠粘膜)收来进行。在某些优选实施方式中，氯毒素剂是静脉给药的。用于在人患者中氯毒素剂静脉给药的示例性步骤描述于实施例9中。取决于给药的途径，有效剂量可以根据待治疗主体的体重、体表面积或器官/肿瘤尺寸来计算。合适剂量的优化可以有在人临床试验中所获得的药物动力学数据的引导下由本领域技术人员容易地进行。最终计量方案将由主治医师来决定，要考虑到改变药物作用的各种因素，例如，药物的特定活性，患者的伤害严重性和反应性，患者的年龄、病症、体重、性别以及饮食，任何现症感染的严重性，给药时间，其他疗法的使用(或没有)，以及其他临床因素。随着使用氯毒素剂研究的进行，将会出现关于合适计量水平和治疗持续时间的进一步信息。典型计量包括1.Opg/kg体重至100mg/kg体重。例如，对于系统性给药，剂量可以是100.Ong/kg体重至10.0mg/kg体重。更具体地，在其中氯毒素剂是静脉给药的某些实施方式中，药剂的计量给药可以包括给予包括以下的一个或多个剂量例如约0.OOlmg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约4mg/kg、约0.02mg/kg至约3mg/kg、约0.03mg/kg至约2mg/kgor约0.03mg/kg至约1.5mg/kg的氯毒素。例如，在某些实施方式中，可以给予一个或多个剂量的氯毒素剂，其各自含有约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.09mg/kg、约1.0mg/kg或超过1.0mg/kg的氯毒素。在其他实施方式中，可以给予一个或多个剂量的氯毒素剂，其各自含有约0.05mg/kg、约0.10mg/kg、约0.15mg/kg、约0.20mg/kg、约0.25mg/kg、约0.30mg/kg、约0.35mg/kg、约0.40mg/kg、约0.45mg/kg、约0.50mg/kg、约0.55mg/kg、约0.60mg/kg、约0.65mg/kg、约0.70mg/kg、约0.75mg/kg、约0.80mg/kg、约0.85mg/kg、约0.90mg/kg、约0.95mg/kg、约1.0mg/kg或超过约lmg/kg的氯毒素。还在其他实施方式中，可以给予一个或多个剂量的氯毒素剂，其各自含有约1.0mg/kg、约1.05mg/kg、约1.IOmg/kg、约1.15mg/kg、约1.20mg/kg、约1.25mg/kg、约1.3mg/kg、约1.35mg/kg、约1.40mg/kg、约1.45mg/kg、约1.50mg/kg或超过约1.50mg/kg的氯毒素。在这样的实施方式中，治疗可以包括给予单剂量的氯毒素剂或给予2剂量、3剂量、4剂量、5剂量、6剂量或多于6剂量。两个连续剂量可以以1天间隔、2天间隔、3天间隔、4天间隔、5天间隔、6天间隔、7天间隔、或大于7天间隔(例如，10天、2周或大于2周)给药。C.联合疗法应当明了，本发明的方法可以与另外的疗法联合使用(即，根据本发明的治疗可以与一种或多种所需疗法或医疗程序同时、之前或之后给予)。以这样的联合方案采用疗法(治疗或程序)的具体联合会考虑所需治疗和/或程序的相容性以及所要达到的所需治疗效果。例如，本发明的治疗方法可以与其他程序一起使用，包括手术、放射疗法(例如，Y_辐射、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近距离放射疗法、系统性放射同位素)、内分泌疗法、热疗、冷冻疗法，取决于待治疗的肿瘤。在脑肿瘤的许多情况中，本发明的治疗在手术后将会非常频繁给予。在脑肿瘤的治疗中，手术的主要目标是实现全切除，即，去除所有可见肿瘤。实现这样的目标的困难之一是这些肿瘤是浸润性的，即，他们趋于在正常脑结构内外穿织(weave)。另外，在从患者脑安全去除的肿瘤的量方面存在很大的可变性。如果所有或一部分肿瘤位于控制关键功能的脑区域中，去除通常是不可能的。在脑肿瘤的许多情况下，本发明的治疗将经常与放射疗法联合(即，同时，之前，或之后)给予。在传统治疗中，放射疗法通常在手术后。辐射通常在数周进行一系列的每天治疗(称为分次剂量(fraction))。对给予辐射的这种“分次”方式是重要的以使对肿瘤细胞的破坏最大化对正常相邻脑部的副作用最小化。给予辐射的区域(称为辐射区域)仔细计算以避免包括可能很多的正常脑。可替换地或附加地，本发明的治疗方法可以与其他治疗剂诸如减弱任何不良作用(例如，止吐药)药剂和/或与其他批准的化疗药物联合给药。化疗药的实例包括但不限于烷化药物(氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑(Melphalan)、异环磷酰胺)、抗代谢药物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷(Cytarabile)、吉西他滨)、纺锤体毒剂(长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼白毒素(依托泊苷、伊立替康、拓扑替康)、抗生素(阿霉素、博莱霉素、丝裂霉素)、亚硝基脲(卡氮芥、洛莫司汀)、无机离子(顺钼、卡钼)、酶(天冬酰胺酶)、以及激素(三苯氧胺、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)、和甲地孕酮(Megestrol))，来命名几种。对于更新的癌症治疗的更综合性的讨论，参见http://www.cancer,rov/,FDA批准肿瘤学药物的列表在http//www,fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm,TheMerckManual,SeventeenthEd.1999，其全部内容合并于此，以供参考。本发明的方法还可以与一种或多种进一步联合的细胞毒素剂的作为治疗方案的一部分一起采用，其中进一步联合的细胞毒素剂选自CH0PP(环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，泼尼松，以及甲基苄胼)；CHOP(环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，以及泼尼松)；COP(环磷酰胺，长春新碱，以及泼尼松)；CAP-BOP(环磷酰胺，阿霉素，甲基苄胼，博莱霉素，长春新碱，以及泼尼松)；m-BAC0D(甲氨蝶呤，博莱霉素，阿霉素，环磷酰胺，长春新碱，地塞米松，以及醛氢叶酸(leucovorin))；ProMACE-MOPP(泼尼松，甲氨蝶呤，阿霉素，环磷酰胺，依托泊苷，醛氢叶酸，氮芥，长春新碱，泼尼松，以及甲基苄胼)；ProMACE-CytaBOM(泼尼松，甲氨蝶呤，阿霉素，环磷酰胺，依托泊苷，醛氢叶酸，阿糖胞苷，博莱霉素，以及长春新碱)；MACOP-B(甲氨蝶呤，阿霉素，环磷酰胺，长春新碱，泼尼松，博莱霉素，以及醛氢叶酸)；MOPP(氮芥，长春新碱，泼尼松，以及甲基苄胼)；ABVD(多柔比星/阿霉素，博莱霉素，长春碱，以及氮烯咪胺)；MOPP(氮芥，长春新碱，泼尼松以及甲基苄胼)交替ABV(多柔比星/阿霉素，博莱霉素，以及长春碱)；MOPP(氮芥，长春新碱，泼尼松，以及甲基苄胼)交替ABVD(多柔比星/阿霉素，博莱霉素，长春碱，以及氮烯咪胺)；ChlVPP(苯丁酸氮芥，长春碱，甲基苄胼，以及泼尼松)；IMVP-16(异环磷酰胺，甲氨蝶呤，以及依托泊苷)；MIME(丙咪腙，异环磷酰胺，甲氨蝶呤，以及依托泊苷)；DHAP(地塞米松，高剂量阿糖胞苷，以及顺钼)；ESHAP(依托泊苷，甲泼尼龙，高剂量阿糖胞苷，以及顺钼)；CEPP(B)(环磷酰胺，依托泊苷，甲基苄胼，泼尼松，以及博莱霉素)；CAMP(洛莫司汀，米托蒽醌，阿糖胞苷，以及泼尼松)；CVP-I(环磷酰胺，长春新碱，以及泼尼松)，ESHOP(依托泊苷，甲泼尼龙，高剂量阿糖胞苷，长春新碱以及顺钼)；EPOCH(依托泊苷，长春新碱，以及阿霉素96小时随单次剂量的环磷酰胺以及口服泼尼松)，ICE(异环磷酰胺，环磷酰胺，以及依托泊苷)，CEPP(B)(环磷酰胺，依托泊苷，甲基苄胼，泼尼松，以及博莱霉素)，CHOP-B(环磷酰胺，阿霉素，长春新碱，泼尼松，以及博莱霉素)，CEPP-B(环磷酰胺，依托泊苷，甲基苄胼，以及博莱霉素)，以及P/D0CE(表阿霉素或阿霉素，长春新碱，环磷酰胺，以及泼尼松)。本领域技术人员将会明了，选择与本发明的方法联合给药的一种或多种治疗剂将取决于待治疗的肿瘤。例如，用于脑肿瘤的化疗药物包括但不限于替莫唑胺(Temodar)，甲基苄胼(Matulane)，以及洛莫司汀(CCNU)，其是口服的；长春新碱(Oncovin或Vincasarpps)，顺钼(Platinol)，卡氮芥(BCNU，BiCNU)，以及卡钼(Paraplatin)，其是静脉给药的；以及甲氨蝶呤(Rheumatrex或ivexaii)，其可以口服、静脉或销内给药(即，直接注射到脊液中)。BCNU也可以在手术期间以聚合物薄片移植物的形式给予(Giadel薄片)。用于脑肿瘤的最常用的前述联合疗法之一是pcv(甲基苄胼，ccnu,and长春新碱)，其通常每六周给予。在其中待治疗的肿瘤是神经外胚层起源的脑肿瘤的实施方式中，本发明的方法可以与用于控制诸如癫痫发作或脑水肿的症状的药剂联合使用。成功地给予控制与脑肿瘤相关的癫痫发作的抗惊厥药包括但不限于苯妥英(Dilantin)、卡马西平(Tegretol)以及双丙戊酸钠(Depakote)。脑的水肿可以用留族化合物治疗(例如，地塞米松(Decadron))。D.药物组合物如上所述，本发明的治疗方法包括给予氯毒素本身或以药物组合物的形式给予。药物组合物通常包含有效量的至少一种氯毒素剂和至少一种药用载体或赋形剂。药物组合物可以采用本领域熟知的传统方法配制。最佳药物制剂可以根据给药途径和所需剂型而改变。这样的制剂可以影响所给予的化合物的物理状态、稳定性、体内释放速率、体内清除速率。制剂可以产生固体、液体或半液体药物组合物。药物组合物可以配置成易于给药的单位剂量形式或均一剂量。本文所使用的表达“单位剂量形式”是指用于待治疗的患者的氯毒素剂的物理离散单位。每个单位含有计算产生所需治疗效果的预定量的活性物质。然而，应当理解，组合物的总剂量将由主治医生在有力医疗判断的范围内确定。如上所述，在某些实施方式中，氯毒素剂通过注射或灌注静脉给药。适合于通过注射或灌注给药的药物组合物可以根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂以及悬浮剂来配制。药物组合物也可以是在无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如，作为在2，3_丁二醇中的溶液。在可以采用的可接受载体和溶剂中，可以是水、林格氏液、U.S.P.、等渗氯化钠溶液。另外，无菌、固定油(fixedoil)常规地采用作为溶液或悬浮液介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成的单甘油酯或双甘油酯。脂肪酸诸如油酸也可以用于制备可注射制剂。可注射制剂可以无菌化，例如，通过经由除菌过滤器(bacterial-retainingfilter)过滤，或者通过并入在使用前可以溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式的灭菌剂。为了延长药物的效果，经常希望减慢来自注射的药物的吸收。这可以通过将活性组分溶解或悬浮在油载体中实现。可注射存储形式(injectabledepotform)可以通过形成在生物可降解聚合物诸如聚乳酸-聚乙交酯中药物微胶囊化基质来制备。取决于药物与聚合物的比率以及所采用的具体聚合物的特性，可以控制药物释放的速率。可注射存储制剂也可以通过将药物包裹在与身体组织相容的脂质体或微乳中。III.诊断方法A.给药在另一方面，本发明提供肿瘤体内诊断的方法。更具体地，提供用于将患者内肿瘤组织与非肿瘤组织区分的方法。这样的方法包括系统性(例如，静脉)给予患者有效量的本文所述的标记的氯毒素剂，或其药物组合物，使得如果组织是肿瘤，会发生标记的氯毒素剂与患者体内的组织特异性结合。通常，标记的氯毒素剂的剂量会取决于考虑因素诸如患者年龄、性别、体重，待检查的身体区域，以及给药途径而改变。诸如禁忌症、同步治疗以及其他变量的因素也可以考虑以调节待给予的标记的氯毒素剂的剂量。然而，这可以通过经训练医师容易地实现。通常，标记的氯毒素的合适剂量对应足以使得患者体内的肿瘤检测的最低量。例如，在氯毒素剂用131I标记并静脉给药的实施方式中，标记的氯毒素的剂量可以包括给予一个或多个剂量，各自包含约5mCi至约IOOmCi,例如，约5mCi至约80mCi，约IOmCi至约80mCi,或约IOmCi至约50mCi131I。例如，可以给予一个或多个剂量的131I标记的氯毒素剂，其各自包含约IOmCi,约20mCi，约30mCi131I，约40mCimI，约50mCi131I，约60mCi131I，约70mCi131I，约80mCi131I，约90mCi131I，or约IOOmCi131I。在这样的实施方式中，诊断程序可以包括给予单剂量的131I标记的氯毒素剂或给予多剂量，例如，2剂量、3剂量或4剂量。两个连续剂量可以以1天间隔、2天间隔、3天间隔、4天间隔、5天间隔、6天间隔、7天间隔、或大于7天间隔给药。在其中使用131I标记的氯毒素剂的实施方式中，患者优选在给予131I标记的氯毒素之前给予超饱和的碘化钾(例如，根据本发明在治疗之前的1天、2天或3天)。超饱和碘化钾的给予阻止甲状腺对131I的吸收，从而防止副作用如甲状腺功能减退症。随着给予标记的氯毒素剂并在特异性结合发生已经过了足够时间之后，进行结合的标记氯毒素剂的检测。B.肿瘤检测和定位本领域技术人员将意识到，检测标记的氯毒素剂与感兴趣组织的结合可以通过各种各样的方法进行，包括但不限于光谱法、光化学、生物化学、免疫化学、电子、光学或化学方式。检测方法的选择通常基于试剂标记部分(即，荧光部分、放射性同位素、顺磁金属离子等)的特性。在某些优选实施方式中，患者体内肿瘤的检测和定位使用成像技术进行。根据标记部分的特性可以使用不同的成像技术。例如，如果标记部分包含顺磁金属离子(例如，Gd3+)可以使用核磁共振成像(MRI)检测该结合。如果标记部分包含放射性同位素(例如，mI)单光子发射计算机断层显像(SPECT)和/或正电子发射断层显像(PET)可以用于结合检测。其他成像技术包括Y照相机成像。C.诊断根据本发明的诊断方法，如果标记的氯毒素与感兴趣组织的结合水平与标记的氯毒素剂与正常组织的结合水平相比是提高的，那么该组织就鉴定为肿瘤组织。如上所述，正常组织在本文中定义为非肿瘤组织。例如，当体内实施该方法时，在感兴趣器官(例如，脑)区域中测量的标记的氯毒素剂的结合水平可以与相同器官正常区域测量的标记的氯毒素剂的结合水平相比。在某些实施方式中，如果所测量的结合水平高于正常组织的结合水平，将该感兴趣组织鉴定为肿瘤组织。例如，结合水平可以比正常组织结合水平高至少约2倍、高至少约3倍、高至少约4倍、高至少约5倍、高至少约10倍、高至少约25倍、高至少约50倍、高至少约75倍、高至少约100倍、高至少约150倍、高至少约200倍、或超过200倍。实施例以下实施例描述制造和实践本发明的某些优选模式。但是，应当了解这些实施例仅用于示例目的而非意在限制本发明的范围。此外，除非实施例中的描述以过去时态呈现，正文，如说明书的剩余部分，并不是要暗示实验已实际完成或数据已实际获得。实施例1:TM-601和生物素化TM-601(TM-602)的体外细胞结合已经研究了TM-601，原始分离自以色列金蝎(Ieiurusquinquestriatus)蝎毒的36个氨基酸的肽，结合至肿瘤细胞系和正常原代细胞培养物。获得的结果进一步确证先前的初步观察，TM-601选择性结合至多种不同的肿瘤类型。对人、大鼠、以及小鼠胶质瘤(glioma，或神经胶质瘤)细胞系、原代培养细胞、以及非胶质瘤细胞系，包括来自于人、猴、大鼠、仓鼠、及小鼠的那些，针对TM-601结合进行测试。此外，也发现多种非胶质瘤肿瘤系，包括例如源自肺、结肠、前列腺和黑色素瘤肿瘤的肿瘤系，结合TM-601。相比之下，在应用的实验条件下，发现许多原代培养细胞(大鼠和人星形细胞)和非胶质瘤细胞系(人肺成纤维细胞、人皮肤成纤维细胞、人脐带血管内皮细胞、人神经元细胞、以及3T3小鼠成纤维细胞)对于TM-601结合是阴性的。获得的所有数据总结在图1中。平板结合中及通过FACS分析的细胞上TM-601结合的证明在平板结合分析中使用生物素化TM-601(TM-602)以证明表现多种肿瘤类型的多种肿瘤细胞系的靶向。测试的人癌细胞系包括转移的和原发的乳腺、肺、前列腺、脑、结肠直肠、以及黑色素瘤。更具体地，测试的胶质瘤细胞包括D54、U251、U373、以及G26；乳腺肿瘤细胞2LMP、DY3672、LCC6、BT474、SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468、以及MDA-MB-453；非小细胞肺癌A427、WI-62、以及H1466；黑色素瘤SKM28；结肠直肠癌SW948；以及前列腺癌细胞PC3、LNCaP,24及DU145。通过向活细胞中加入TM-602随后通过添加链霉亲和素-HRP以显影彩色底物，分析96-孔板中的分汇合(Subconfluent)培养物的结合。将结合测定为相对于其中没有加入TM-602的细胞的百分比链霉亲和素-HRP对照。发现测试的所有肿瘤细胞系结合TM-602，但结合至三种人乳腺癌细胞系少于测试的其他肿瘤细胞(见图2)。荧光激活细胞分类(FACS)用于证明TM-601与血液学癌症(或血液肿瘤，hematologicalcancer)的反应性。生物素化TM-601(TM-602)用于染色人非霍奇金淋巴瘤、T-细胞白血病、以及骨髓瘤细胞系。通过FACS分析，所有血液学肿瘤细胞系结合至TM-602(两种淋巴瘤、一种T-细胞白血病、以及一种髓细胞白血病)。实施例2未标记的TM-601不降低体外肿瘤细胞生长包含表现白血病、黑色素瘤和肺、结肠、脑、卵巢、乳腺、前列腺及肾的癌症的56种不同的人肿瘤细胞系的体外细胞系筛选由国家癌症研究院完成。提交TM-601至筛选服务。获得的结果表明TM-601对于测试的任何细胞系没有细胞毒性。作为后续实验，以一定范围的血清浓度(10%、5%、2%、1%)测试单个细胞系，Panc-Ι，以确定在低血清生长条件下细胞毒性活性是否明显。没有观察到氯毒素的显著细胞毒性，表明针对氯毒素作用的主要机制并非通过肿瘤细胞上的直接细胞毒性作用。实施例3生物素化TM-601的体外组织结合进行应用生物素化TM-601(TM-602)的组织化学染色研究从而在包埋于石蜡中的固定组织上或人活检(或活组织检查)和/或尸检(或尸体检查)样本的冰冻切片上定位TM-601结合部位。迄今，已经评估了超过200种脑肿瘤活检和尸检样本的TM-601结合。研究包括胶质瘤、其他恶性肿瘤、以及非_瘤性组织。这一研究以及后续研究的结果示于图3中。总之，几乎所有的胶质瘤表现出对于TM-601的显著染色活性，而正常的、非肿瘤组织则没有。在给定的肿瘤内TM-601阳性细胞的百分比在50-98%变动并随着WHO恶性等级(malignantgrade)升高而增大。用TM-601的胶质瘤特异染色的一个实例示于图4中。此外，来自于阶段I(phase)临床研究的所有患者脑肿瘤组织样品表现浓厚的生物素化TM-601染色，而非癌症脑组织表现出仅仅轻微的背景染色。本研究中的其他阳性组织包括具有类似于神经胶质肿瘤的胚胎起源(embryonicorigin)的外周性神经外胚层肿瘤(PNET)。用TM-601的PNET的组织化学染色的实例示于图5中。这些非神经胶质肿瘤中的染色的阐述暗示氯毒素剂，如TM-601可用于靶向除胶质瘤之外的多种肿瘤。进一步的研究扩宽了由TM-601靶向的肿瘤类型，包括例如乳腺、乳腺转移瘤(breastmetastases)、前列腺、卵巢、肺、肝脏、胰脏、以及淋巴瘤。实施例4具有肿瘤的小鼠中131I-TM-601的功效研究mI-TM-601在人胶质瘤异种移植小鼠模型中延长存活的能力。三组至少10只裸小鼠各自颅内移植人胶质瘤细胞系U251-MG。U251-MG细胞用盐水、未标记的(“冷的”)TM-601或1.65mCi131I-TM-601离体处理30分钟。然后用盐水清洗细胞并将大约1XIO6个细胞引入脑中。接受mI-TM-601的细胞上结合的放射活性的量仅为离体施加至细胞的总剂量的0.2%。这相当于0.5mCi的人脑剂量。在21和29天间，分别在未标记的TM-601和盐水处理的动物中达到中位存活(或中位存活期，mediansurvival)0相比之下，在此相同的时期内，131Ι_ΤΜ_601处理的动物中没有动物死亡(见图6(A))。在21天，各组中的剩余动物颅内注射它们各自的离体化合物(盐水、未标记的ΤΜ-601、或0.165mCi131I-TM-601)并在22天(处理后24小时)和25天(处理后96小时)对某些131I-TM-601处理动物进行伽玛照相机成像(gammacameraimaging)。伽玛照相机成像证明了脑中mI-TM-601的浓度，表明在注射部位放射活性已维持24小时。该成像进一步证明放射活性当连接至TM-601时特别维持在肿瘤区域中多于96小时，超过这一时期其他组织吸收少量(见图6(B))。在肿瘤移植后78天达到131I-TM-601处理组的中位存活，并且在90天终止研究时，14只131I-TM-601处理的动物中有五只仍然存活。在用131I-TM-601处理的动物组中有169%的存活。处理的小鼠良好耐受药物，没有记录到化合物相关的行为影响。这些结果证明标记的氯毒素剂如mI-TM-601在裸小鼠模型中的治疗功效和诊断潜力。考虑到U251-MG肿瘤细胞系的放射耐性以及仅两剂量辐射的给予，这(治疗功效和诊断潜力)是显著的，并进一步支持氯毒素剂用于治疗和成像高等级胶质瘤的临床应用。实施例5125I-TM-BOl静脉内给予具有肿瘤的小鼠进行一系列实验以评估125I-TM-601穿越血脑屏障的能力。这些实验由应用E54-MG/SCID小鼠模型的5项研究组成。在这些研究中，经由尾静脉注射125Ι_ΤΜ_601，且随后ΤΜ-601靶向脑肿瘤的能力在24小时后测量。一项实验也采用125I-EGF作为对照，因为已知EGF受体在这些肿瘤中被上调。EGF作为对照使用是重要的，因为EGFjBΤΜ-601，已被表明在颅内注射时结合胶质瘤细胞。如在图7中所见，125Ι-ΤΜ-601的静脉内注射特定地靶向移植在这些动物脑右半球中的D54-MG异种移植人胶质瘤肿瘤，证明静脉内给予的125I-TM-BOl穿越血脑屏障。并且，重要的是注意到，125I-EGF的静脉内注射未定位于脑肿瘤至任何明显的范围，表明其未穿越完整的血脑屏障。由实验推导出氯毒素剂如125Ι-ΤΜ-601穿越血脑屏障并以它们的生物活性状态到达定位于脑中的肿瘤。实施例6静脉内给予具有肿瘤的小鼠的ΤΜ-601的功效已知系统给予的125Ι-ΤΜ-601能够穿越血脑屏障并结合至颅内肿瘤，应用静脉内给予途径用未标记的ΤΜ-601进行一项实验以测试脑中的抗肿瘤活性。裸小鼠用D54MG胶质瘤细胞进行颅内移植。在移植(或灌输，implant)异种移植物后开始的14天给予盐水或两种不同剂量TM-601(每只小鼠每次注射0.2μg或2.0μg)一周两次持续尾静脉注射用于研究的持续期。来自这项实验的存活曲线证明，提高的存活发生在给予较高剂量TM-601的动物中(图8)。测量中位存活(当50%的动物存活时的时间)高剂量TM-601处理以剂量依赖方式将中位存活时间由34天(盐水组)延长至56天。较低的TM-601剂量不表现相同的生命延长。再一次地，这暗示未标记分子的持续系统性给药在小鼠模型中给予是有效的。对用D54MG脑肿瘤处理的动物的进一步的组织学分析，对于辨别存活延长是归因于肿瘤细胞上的直接作用还是与另一种作用有关，是必要的。支持未标记TM-601作为单一治疗(monotherapy)的治疗潜力的一项另外的初步研究是应用小鼠侧腹肿瘤模型持续系统性(静脉内)递送TM-601。应用这种异种移植肿瘤模型，在裸小鼠(每组7-8只动物)的侧腹中移植D54MG人胶质瘤细胞。在开始的14天后，经由尾静脉以每次注射每只小鼠0.26μg的剂量两次给予未标记的TM-601。一组动物接受TM-601处理，一组接受2Gy辐射(RT)每周两次，第三组接受RT和TM-601。在52天和53天之间，给予TM-601和/或RT的最后剂量，且对动物继续实验直到67天。在治疗以及随后治疗中断过程中，对于TM-601组和结合TM-601与RT组的肿瘤生长曲线非常紧密的对准(图9)。RT组的曲线暗示在仅应用RT的组中肿瘤生长较慢。然而，表明平均值的标准误差的误差棒证明特别在后来的时间点的差异水平。由于这一点以及较小的抽样大小(研究结束时对于仅RT为η=5且对于其他组为η=8)，肿瘤生长中的不同看起来并非是统计学上显著的。这一数据暗示在治疗的38-39天过程中ΤΜ-601和RT都避免了疾病进展并且在完成治疗后肿瘤开始生长。更加确定的，应当包括对照组以确立在没有治疗时肿瘤进展的速率，然而，历史性地这种D54MG侧腹模型中的肿瘤比在这项实验中观察到的生长更快。这项初步研究因而暗示了持续系统性递送ΤΜ-601作为单一治疗在这种侧腹肿瘤模型中可以是有效的。总之，应用氯毒素的体外研究证明特异结合至多种肿瘤细胞类型，包括胶质瘤、神经外胚层组织、以及多种其他肿瘤如乳腺和前列腺(肿瘤)。这种组织学结合用肿瘤细胞系得以确证。这种结合看起来对于肿瘤是选择性的，因为结合至正常组织的结合显著较弱。应用体内模型，已经表明颅内注射131Ι-ΤΜ-601和重复系统性注射未标记的ΤΜ-601都延长具有颅内胶质瘤异种移植的动物的生命。这些数据暗示放射标记的ΤΜ-601能够通过局部化递送放射活性标签影响肿瘤生长而未标记的ΤΜ-601能够通过尚未阐释的机制影响肿瘤生长。实施例7动物中ΤΜ-601的药代动力学和代谢裸小鼠中ΤΜ-601的药代动力学在静脉内(IV)、腹膜内(IP)、皮下(SC)或口腔管饲(P0，oralgavage)递送单一剂量的2μgTM_601至裸小鼠后测量TM-601的血浆和尿水平。应用使用与TM-601交叉反应的兔抗-TM-701抗体的ELISA分析检测TM-601。TM-701与TM-601由于一个氨基酸而不同(在残基29处酪氨酸取代)。单给药2μgTM-601后的血浆水平示于图10中。在静脉内注射后观察到最高的峰值血清水平(Cmax)，随后进行皮下给予、腹膜内给予和口腔管饲。当经由口腔管饲给予时，TM-601的血浆水平不可计量。血浆中TM-601的半衰期计算为静脉内给予17.7分钟以及皮下给予27.4分钟。在单一2μg腹膜内或皮下注射后30、60或240分钟时的动物尸体(sacrifices)的尿中测量TM-601o在肾清除过程中TM-601大量集中。由于关于随时间的总的尿生产没有更多的信息，经尿排泄的TM-601的总量以及排泄动力学不能确定。从药物给予后4小时内，当循环的TM-601减少低于分析检测的水平时，尿中的浓度也跌落低于检测水平。当经由IV、IP、SC或口腔管饲给予时TM-601的药代动力学可大体分类为三种不同的分布。在测量的最初的时间点静脉内注射导致血液中药物的大推注(bolus)峰值。药物随后衰退，半衰期为大约18分钟。相比之下，腹膜内或皮下递送导致较慢的动力学分布，可能因为TM-601较慢地由注射部位进入血液隔室(bloodcompartment)。此外，半衰期也延长至大约27分钟。半衰期的这种延长可通过较复杂的血液药代动力学分布解释，其中循环水平代表药物从皮下注射部位持续释放与排泄/代谢之间的平衡。口腔管饲后表现药代动力学分布的第三种类型。血浆水平仅微微高于分析背景并可以计算数量。因此，应用当前的剂型，口服途径给予不会有效地实现系统循环(或体循环，systemiccirculation)。总之，获得的体外和体内数据暗示TM-601以高特异性和敏感性结合肿瘤，并且TM-601能够穿越血脑屏障。在动物中，放射标记的TM-601的给予是良好耐受的并在肿瘤中表现出高选择性和优良的滞留。实施例8静脉内给予动物的TM-601的毒性如在图11中所总结的，已经在7项GLP毒学研究中在啮齿类和灵长类中评估了TM-601的毒学效应。在这7项研究中的6项中，静脉内给予TM-601。由于在7项研究的任意一项中没有观察到系统毒性的迹象，在各项研究中的系统NOAEL(即，无明显损害作用水平)等同于或大于给予的最大剂量。小鼠中单剂量静脉内毒性研究在CD-I小鼠中在以0(赋形剂，0.9%氯化钠)、0.64或6.4mg/kg(HED0.05和0.5mg/kg)静脉内(IV)给予后进行研究。将TM-601在无菌盐水(0.9%氯化钠)中复原用于注射并以单一IV剂量(10mL/kg)给予10只小鼠/性别/组。对于化合物相关效应的评估是基于临床观察、体重、食物消耗、眼科学、以及血液学和临床化学参数。在研究的第15天，处死所有存活的动物并使其进行包括器官重量的大体的(gross)尸体剖检以及显微尸体剖检。在这项研究过程中没有不按时间表的死亡。没有TM-601-相关效应作用于体重、食物消耗或对于血液学和临床化学参数。在尸体剖检上没有观察到化合物相关的改变。在尸检时，没有观察到可归因于TM-601给予的明显和细微损伤，在器官重量中也没有任何改变。小鼠中急性静脉内毒性研究TM-601的急性毒性在以0(赋形剂，0.9%氯化钠)，0.5或5.Omg/kg静脉内(IV)给予后在⑶-1小鼠中评估。活性化合物为化合物重量的82%。TM-601在无菌盐水(0.9%氯化钠)中复原用于注射并以单一IV剂量(10mL/kg)给予5只小鼠/性别/组。对于化合物相关的效应的评估是基于临床观察和体重。在第15天，处死所有存活的动物并使其进行大体的尸体剖检。分析剂量溶液(dosesolution)以验证剂量的准确。来自于0.5mg/kg组，在第6天发现一只雌性和一只雄性死亡且另一只雄性触摸上去是冷的并在这一天活动性减弱。看起来这些动物不能充分饮水，这导致脱水。以5.Omg/kg剂量没有动物死亡。对于体重没有TM-601相关的效应并且在研究过程中或在末期尸检时死亡的任何动物中没有观察到明显的损伤。基于来自小鼠中单剂量静脉内毒性研究的发现，认为在0.64和6.4mg/kg单一IV剂量后TM-601是非毒性的。IVNOAEL剂量因而在小鼠中为至少6.4mg/kg(HED0.5mg/kg)。重复剂量毒性通过静脉内给予狨的氯毒素最大耐受剂量研究在连续式(pyramiding)研究设计中在狨猴(棉耳狨猴，Callithryxjacchus)中评估TM-601的急性毒性。在这个范围寻找研究(rangefinderstudy)中，以0·020,0.20、和2.0mg/kg(HED分别为0.003,0.03和0.3mk/kg)静脉内给予一只雄性和一只雌性狨猴TM-601，每剂量之间有3-天的清洗(washout)期。将TM-601溶解在0.9%的氯化钠中并针对3次剂量分别以0.4,0.4和2.0mL/kg体重静脉内给予。对于化合物相关效应的评估是基于临床观察、体重、食物消耗和血液学、凝固、以及临床化学参数。在给予最后剂量后一天，使动物安乐死，称量器官重量，在任何观察到的组织异常和注射部位进行大体的和显微的病理学。在这项研究过程中没有不按时间表的死亡并且在检查的任何参数中没有任何TM-601相关的发现。通过静脉内给予狨猴3天随后14-天观察期的氯毒素毒性研究IV给予连续3天后在狨猴中评估TM-601的毒性。狨(3只/性别/剂量)以0(0.9%无菌盐水)、0.20或2.Omg/kg/天(HED分别为0.03和0.3mg/kg)给予TM-601。对于化合物相关效应的评估是基于临床观察、体重、食物消耗和血液学、凝固、以及临床化学参数。在最后(第三次)给药之后处安乐死之前观察动物14天，并称量器官重量。对所有组织进行大体的和显微的病理学。在这项研究中没有不按时间表的死亡。在临床观察、体重、食物消耗以及血液学、凝固、以及临床化学参数上没有化合物相关效应。此外，在器官重量上没有TM-601相关效应，在尸检时没有化合物效应的迹象，没有可归因于化合物的组织病理学发现。连续3天静脉内给予狨的TM-601的无效应剂量(或无影响剂量，no-effectdose)为至少2.Omg/kg(HED0.3mg/kg)。通过静脉内注射每周一次给予小鼠的TM-601的7-周毒学研究系统性给予的TM-601的慢性毒性，当通过静脉内注射递送时，在小鼠中实现。8个总剂量，通过推注注射在尾静脉中每周一次给予7周，以5mL/kg的剂量体积给予三组Gri:CD-l(ICR)BR小鼠。并行的对照组以相当的(相似的)方案接受赋形剂。在给药7周后，使10只小鼠/性别/组安乐死；在14-天非-剂量(恢复)期后将对照中剩余的3-5只小鼠/性别和高剂量组安乐死。每天两次观察动物的死亡率和发病率、并每天进行临床检查。在初步(研究第7周)和恢复(研究第9周)尸检之前进行临床病理学评估(血液学和血清化学)。对所有动物进行完全尸检，并在按时间表的尸检时称量所选的器官。这些研究的结果表明存活、体重、食物消耗、血液学以及血清化学参数和器官重量不受TM-601给予的影响。宏观和微观检查显示没有测试项目(testarticle)相关的损伤。可能的测试项目相关的临床发现包括在给药后1小时在2和5mg/kg/剂量组中低发生频率下的(上睑)下垂和活动减退。就一切情况而论，这些临床发现在没有给药的日子没有观察到并且不被认为是有害的。基于这项研究的结果，对于每周静脉内给予TM-601至小鼠7周(8总剂量)NOAEL为至少5mg/kg/剂量(HED0.4mg/kg)。通过借助于8次每周一次(Sweekly)注射静脉内(推注)给予狨随后2周恢复期的TM-601(氯毒素)毒性研究在7周时期内评估当通过静脉内注射每周一次给予时TM-601对于普通狨(Callithrixjaccus)的系统性慢性毒性潜力。剂量水平为0.06或0.2mg/kg。在给药7周后，使3动物/性别/组安乐死；在14-天非给药(恢复)期后使对照中剩余2动物/性别/组和高剂量组安乐死。对照组以相同的频率接受赋形剂(磷酸盐缓冲盐水)。没有采取临床条件、体重、食物消耗、毒性动力学、尿分析、器官重量、肉眼病理学和组织病理学研究。在给药部位处所见的迹象主要包括具有偶发加厚的瘀伤和疤痕，影响范围包括对照和以同样方式处理的动物，并认为与给予途径相关且并非TM-601处理的结果。体重改变是可变的，并表现狨典型的周期性波动。再次地，在对照和处理组之间没有一贯的不同，在处理组内没有不同，并且在这一参数中没有见到统计学显著性。在处理的和对照组中食物消耗是相似的。临床病理学表明在处理和对照组之间没有不同。尿分析类似地表现为没有不同。器官重量未表现任何处理相关的组间不同。微观检查表明在任何评估的器官中没有处理效应。这项研究的结论是以0.06和0.20mg/kg的给药TM-601的8次静脉内注射是非常好的耐受的，没有任何关于处理的负面效应或系统性毒性的证据。在活着观察时以及在宏观和微观检查时在给予部位见到的迹象与由于给予途径导致的低水平物理创伤相关并且不是暴露于氯毒素的结果。如本研究所确定的NOAEL被认为是至少0.2mg/kg(HED0.03mg/kg)。实施例9具有复发性或顽固性躯体和/或大脑转移性实体瘤的患者中静脉内131I-TM-BOl的阶段I成像和安全性研究阶段I成像实验在5个临床部位完成，静脉内给予TM-601至总共48位患者。这种多中心、开放标记、非随机化、连续性“对象体内”逐级研究包括具有组织学证实的原发实体恶性肿瘤，复发性(recurrent)或顽固性(refractory，难治)的患者，其证明不响应于标准治疗的可检测转移相关性(involvement)的明确证据。该阶段I研究的目的是a)评估静脉内131I-TM-601是否在患有复发性或顽固性(或难治)转移性(包括脑转移)实体瘤的患者体内提供肿瘤_特异性定位；b)确定静脉内给予的131I-TM-601的分布和计量学；以及c)确定静脉内给予的131I-TM-601的安全性和耐受性。患者和治疗方案大约50位对象参与这项研究，经受2至3次逐渐增加的静脉内剂量的mI-TM-601，随后进行一系列的全身扫描以确定mI-TM-601是否已定位于目标(或靶，target)肿瘤细胞，并且证明肿瘤特异性吸收131I_TM_601的TM-601的一次静脉内治疗剂量。图12中的图示出了给药安排。研究患者通过静脉内(IV)灌注接受多达三次逐渐增加剂量的131I-TM-601(从10mCi/0.2mg至30mCi/0.6mg变动)。只有在给予10或20mCi剂量后通过进行24小时成像表现为肿瘤特异性吸收131I-TM-601的患者接受应用30mCi剂量131I_TM_601的处理。mI-TM~601的制备最终的TM-601药物产品是无菌的、冻干的白色至灰白色粉末，装瓶在闭塞的玻璃小瓶中。在这一实验中使用的成像和治疗剂量是放射标记的TM-601的剂量。131I-TM-BOl的制备和使用TM_601最终药物产品在0.56mL的放射标记缓冲液中复原以产生由mI放射标记的lmg/mL溶液，并递送至临床部位。注射器含有大约4mL的溶液用于灌注并按照放射活性的含量和用量进行近似标记。一旦在该部位被接受，辐射安全官员(radiationsafetyofficer)或其他适当场所的人员证实mI-TM_601的辐射计量在规定的规格内。遮蔽含有最终放射标记的药物产品的注射器然后转移至适当的医院区域用于给予患者。在2-8°C下避光保存并遮蔽131I-TM-601溶液直到使用时。在用131I放射标记后，在24小时内使用产品。mI-TM~601的给予和成像研究所有接受放射标记的测试剂量，131I-TM-601的患者以300mg/天的剂量接受过饱和碘化钾(SSKI)，在放射标记的131I-TM-601灌注当天或恰好之前开始并持续最少三天以阻断吸收131I至甲状腺和其他器官。在使用提供给患者的，当患者不在诊所/医院期间药物正确使用的说明来研究药物给予之前将SSKI配给至患者。“背驮(piggy-back)”方式将含有131Ι_ΤΜ_601的注射器插入在6英寸静脉注射针/管内的灌注口中。在以IOOmL/小时流注0.9%氯化钠期间，通过“缓慢IV推注”在大约5-10分钟给予产品。如果以下情况中的任一种出现则终止131Ι-ΤΜ-601灌注(1)心脏收缩血压的降低>25mmHg，⑵调查者记录的显著的呼吸窘迫，(3)温度>102°F，(4)(疾病)发作，(5)意识水平的改变或新的神经缺陷发作，或其他原因，如临床医师的判断或患者的要求。通过伽玛照相机成像并在某些情况下在131I-TM-601给予后24小时进行SPECT以确定定位以及用于接受30mCi剂量131I-TM-601的合适性。安全件结果到2007年4月17日为止，17位患者接受至少两剂量的IV给予治疗(高达30mCi/0.6mg)，其中没有急性负面经历。仅7位患者经历总共7种严重负面效应(SeriousAdverseEffects,SAE)。没有一种SAE被调查者评估为与研究药物“可能”或“很可能相关”。一位患者在给药30天内死亡。该患者为60岁男性，具有转移性小细胞肺癌病史，其参与本研究并在2006年10月25日和2006年11月1日接受两次IV剂量的131I_TM_601。该患者对于治疗不具有任何急性反应，也没有任何肿瘤特异性吸收，且随后继续接受减轻的辐射至脊骨。患者在收容所中被招收并在2006年11月24日死于家中。调查者将该患者的死亡评估为“不可能相关”于研究药剂且较为可能相关于累进的疾病。两位患者各自在给药前经历一种SAE(分别为两侧肺栓和UTI，CTCAE4和3级)；一位患者在给药后一天经历腹部疼痛和腹胀(CTCAE4级)；一位患者在给药后10天不能走路并发现其具有推测继发于基本疾病进展的脊髓压缩(CTCAE3级)；以及2位患者在给药后18-20天经历DVT(都为CTCAE3级)。功效结果在多种肿瘤类型中发现静脉内给予后的肿瘤特异性吸收，包括8位具有恶性胶质瘤患者中的7位，7位具有转移黑色素瘤患者中的7位，2位具有前列腺癌症患者中的2位，4位具有非小细胞肺癌患者中的3位，以及7位具有转移结肠癌患者中的5位(如图13所总结的，也见于图14-20)。所有患者静脉内接受测试剂量的10mCi(0.2mg肽)131I-TM-601。在131I-TM_601注射后立即、3小时、24小时、48-72小时、以及168小时获取五份连续的、全身伽玛照相机图像用于肿瘤定位和剂量测定分析。通过伽玛照相机或SPECT成像表现肿瘤定位的患者在一周后接受第二治疗剂量的30mCi(0.6mg肽)131I-TM-BOl0没有表现吸收的患者在一周后用20mCi(0.4mg肽)再治疗以确定在较高剂量下可能的定位。包括在剂量测定亚群分析(subsetanalysis)中具有胶质瘤的所有7位患者在IV给予131I-TM-601后在后续的伽玛照相机或SPECT成像中证明肿瘤特异性定位。没有观察到剂量限制性毒性。平均辐射剂量为对于全身0.23cGy/mCi(在0.15-0.31cGy/mCi变动)且对于肿瘤0.81cGy/mCi(在0.36-1.51cGy/mCi变动)，计算得到大约3.5的治疗比例(肿瘤/身体)。在初步成像分析后，具有恶性胶质瘤的一位患者在治疗后3周表现增大肿瘤体积的显著减少和水肿(图21)。在21天评估时对这位患者的MRI成像表现为Tl增大体积和T2体积的减少。具有恶性胶质瘤的另一位患者，其也表现肿瘤特异性吸收mI-TM-601并且其随后接受静脉内治疗剂量，在没有成像改进的情况下呈现明显的临床改进。这些结果证明体内系统性递送的氯毒素剂如TM-601的治疗效果。这些结果也证明静脉内给予的131I-TM-601将穿越血脑屏障并能够导致具有手术不能治疗的胶质瘤的患者MR成像改进。实施例10提高和/或改变氯毒素剂的治疗效果本实施例证明对象暴露于氯毒素剂的总量(即，增大给药后观察到的曲线下的面积)的增加能够提高和/或改变药剂的治疗效果。如在提交于2008年9月17日的国际专利申请序列号PCT/US08/76740中所描述的，氯毒素剂的聚乙二醇化能够延长其在血液中的半衰期并进一步能够提高其抑制血管形成的能力。不希望被任何特定的理论所束缚，本发明提出应用聚乙二醇化氯毒素剂所获得的这些观察结果可代表曲线效应下的面积。例如，众所周知不同的治疗剂以不同的方式激发生物效应。一些要求实现特定的阈值水平，例如在一定的时间量内；一些要求一定水平的总暴露；一些具有这些要求的结合。本发明提出氯毒素剂的某些效应(例如，特异结合，可能是细胞吸收)可以以低剂量或暴露水平实现，但可要求较高的总暴露(例如，曲线下的面积)以抑制血管形成和/或获得其他的治疗效果。材料和方法聚乙二醇化TM-601应用多分散、线性、40kDaPEG-丙醛(DowPharma)经由还原性胺化在肽的N端聚乙二醇化。TM-601的半衰期测量不具有肿瘤的C57BL/6小鼠用TM-601(以大约2mg/kg的剂量)通过单尾静脉注射进行静脉内注射。血液样品以各种时间点获得，且TM-601水平通过ELISA使用抗TM-601抗体进行测定。小鼠基质胶塞MatrigelMatrixHighConcentration(基质胶基质高浓度，来自BD生物科学)与100ng/mlVEGF、100ng/mlbFGF、以及3ng/ml肝素在4°C下混合。8周大小的雌性C57BL/6小鼠随机分为每组中6只小鼠的各个组。每只小鼠接受在皮下组织中两侧注射的两个500μ1基质胶塞。为了形成圆形塞，在常规的皮下插入后通过左右摆动针尖形成大的皮下袋(pockets)。用21-25G针快速进行注射以确保将全部含量递送至塞。在研究的当天(0天)植入基质胶塞并且治疗在第1天开始。动物通过静脉内注射赋形剂(盐水)、TM-601、或聚乙二醇化TM-601进行给药。应用三种给药方案一周一次给予两周(Dl—次且D8—次；“Q7Dx2”)，一周两次给予两周(于DUD4、D8及Dll；“Q3Dx2/2”)，以及一周五次给予两周(于D1、D2、D3、D4、D5、D8、D9、D10、D11、及D12;“QlDx5/2”)。在14天后收集塞。使小鼠安乐死并将塞上的皮肤向后拉。切开塞，固定并包埋在石蜡中用于组织学分析。来自每个可评估塞的5μm厚的3个切片用CD31抗体进行免疫染色并用苏木精&曙红进行对比染色。在显微镜下分析每个基质胶塞横截面积中血管数。结果/讨论如在图22中所示，聚乙二醇化TM-601与未修饰的TM-601相比呈现延长的体内半衰期。出人意料地，聚乙二醇化将TM-601的半衰期延长大约32倍，S卩，大约25分钟(TM-601)延长至大约16小时(TM-601-PEG)。延长的半衰期转化为在血管形成模型中较低频率地给药于动物的能力。在小鼠基质胶塞分析中，用TM-601或聚乙二醇化TM-601(TM-601-PEG)根据多种时间表给药于动物。测量微脉管密度并将这种密度的减小解释为象征抗血管形成效应。TM-601和TM_601_PEG应用测试的两种最频繁的给药时间表(一周两次给予两周，“Q3DX2/2”；以及一周五次给予两周，“QlDx5/2”)都具有抗血管形成效应(图23)。然而TM-601以所测试的最小频率的给药时间表(一周一次给予两周，“Q7DX2”)不呈现任何抗血管形成效应，而以这种给药时间表用TM-601-PEG治疗则导致微脉管密度的显著减小(图23)。不希望被任何特定的理论所束缚，较低频率地给药动物的能力可能是由于TM-601-PEG与TM-601相比更长时间的可用性。这种延长的可用性可导致在新血管形成部位更长时间的暴露，允许更加延长的治疗效应。进一步不希望被任何特定的理论所束缚，这种更长时间的暴露(即，曲线下增大的面积)实际实现一种治疗效应，该治疗效应在其他情况，甚至例如在允许TM-601(或另一种氯毒素剂)结合和/或吸收的情况下不会观察到。与TM-601相比用TM_601_PEG所观察到的改进的治疗效应尤其令人惊讶，因为氯毒素是相对小的肽，以至于人们预期较大的修饰如聚乙二醇化可能会改变或折衷功能。本文列出的数据令人惊讶地证明聚乙二醇化氯毒素剂不仅保持活性(例如，结合活性)，而且实际上表现出增强的和/或新的活性(例如，抗血管形成效应)。其他实施方式考虑到本文中披露的本发明的说明或实践，本发明的其他实施方式对于本领域中的技术人员是显而易见的。说明和实施例应当被认为仅仅作为示例性的，本发明的实际范围由所附权利要求表示。权利要求治疗患有肿瘤的个体的方法，所述方法包括以下步骤将有效量的氯毒素剂给药至所述个体，其中所述氯毒素剂是系统性给药的。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述氯毒素剂是静脉给药的。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述氯毒素剂相对于正常细胞选择性靶向癌细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述氯毒素剂包含选自由氯毒素、生物活性氯毒素亚单位，以及氯毒素衍生物构成的组的氯毒素部分。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述氯毒素剂包含与至少一个治疗性部分联接的氯毒素部分。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述氯毒素部分和所述治疗性部分是直接共价联接的。7.根据权利要求5所述的方法，其中所述氯毒素部分和所述治疗性部分是融合的以形成融合蛋白。8.根据权利要求5所述的方法，其中所述氯毒素部分和所述治疗性部分是通过连接子共价联接的。9.根据权利要求5所述的方法，其中所述治疗性部分包括抗癌剂。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述抗癌剂选自由以下组成的组烷化剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、植物碱、插入抗生素、芳香酶抑制剂、抗代谢药物、有丝分裂抑制剂、生长因子抑制剂、细胞循环抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素药物以及抗雄激素药物。11.根据权利要求5所述的方法，其中所述治疗性部分包括细胞毒性剂。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述细胞毒性剂选自由毒素、生物活性蛋白、化疗抗生素、溶核酶，以及放射性同位素构成的组。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述细胞毒性剂包括选自由多花白树毒蛋白、蓖麻毒素、皂苷、绿脓杆菌外毒素、美洲商陆抗病毒蛋白、白喉毒素，以及补体蛋白构成的组的成员。14.根据权利要求11所述的方法，其中所述细胞毒性剂包括放射性同位素。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述细胞毒性剂包括碘-131(131I)。16.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤是固体肿瘤。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤是难治肿瘤。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤是复发肿瘤。19.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤是转移性肿瘤。20.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤是以下肿瘤构成的组的成员肺癌、骨癌、肝癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈部癌症、皮肤或眼黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、性器官或生殖器官的癌症、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织的肉瘤、尿道癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肾细胞癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、神经外胚层癌、脊髓肿瘤、胶质瘤、脑膜瘤，和垂体腺瘤。21.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤是神经外胚层起源的肿瘤。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述神经外胚层起源的肿瘤是由以下构成的组的成员胶质瘤、脑膜瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、神经节瘤、嗜铬细胞瘤、黑色素瘤、外周性原始神经外胚层瘤、肺小细胞癌、尤文瘤、脑中神经外胚层起源的转移瘤。23.根据权利要求1所述的方法，其中所述给药步骤包括系统性给予至少一个剂量的氯毒素剂。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述氯毒素剂的剂量包括在大约0.001mg/kg至大约5mg/kg。25.根据权利要求1所述的方法，进一步包括在将所述氯毒素剂给药至所述个体之前检测所述肿瘤的步骤。26.根据权利要求25所述的方法，其中检测所述肿瘤包括以下步骤将有效量的一种标记的氯毒素剂给药至所述个体，其中所述标记的氯毒素剂是系统性给药的；以及测量所述标记的氯毒素剂与组织的结合，其中相对于正常组织结合水平的提高指示该组织是肿瘤组织。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述标记的氯毒素剂是静脉给药的。28.根据权利要求26所述的方法，其中所述标记的氯毒素剂标记有选自由荧光团、放射性同位素、顺磁金属离子构成的组的至少一个标记部分。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述标记部分包括碘-131(131I)或碘-125(125I)。30.根据权利要求28所述的方法，其中所述标记部分包括锝-99m(99mTc)。31.根据权利要求28所述的方法，其中所述标记部分包括铜-64(64Cu)。32.根据权利要求26所述的方法，其中测量所述标记的氯毒素剂与组织的结合的所述步骤使用选自由激光诱导荧光光谱、Y照相机、单光子发射计算机断层显像(SPECT)，和正电子发射断层显像(PET)构成的组的技术进行。33.根据权利要求1所述的方法，进一步包括给予所述个体化疗剂。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述化疗剂选自由以下构成的组烷化剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、植物碱、插入抗生素、芳香酶抑制剂、抗代谢药物、有丝分裂抑制剂、生长因子抑制剂、细胞循环抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素药物以及抗雄激素药物。35.检测个体中肿瘤组织的方法，所述方法包括以下步骤将有效量的一种标记的氯毒素剂给药至所述个体，其中所述标记的氯毒素剂是系统性给药的；以及测量所述标记的氯毒素剂与感兴趣组织的结合，其中相对于正常组织结合水平的提高指示该感兴趣组织是肿瘤组织。36.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记的氯毒素剂是静脉给药的。37.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记的氯毒素剂相对于正常细胞选择性靶向癌细胞。38.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记的氯毒素剂包含选自由氯毒素、生物活性氯毒素亚单位，和氯毒素衍生物构成的组的氯毒素部分。39.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记的氯毒素剂标记有至少一个标记部分，其中所述标记部分选自由荧光团、放射性同位素、和顺磁金属离子构成的组。40.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记部分包括碘-131(131I)或碘-125(125I)。41.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记部分包括锝-99m(99mTc)。42.根据权利要求35所述的方法，其中所述标记部分包括铜-64(64Cu)。43.根据权利要求39所述的方法，其中测量所述标记的氯毒素剂与组织的结合的所述步骤使用选自由激光诱导荧光光谱、Y照相机、单光子发射计算机断层显像(SPECT)，和正电子发射断层显像(PET)构成的组的技术进行。44.根据权利要求35所述的方法，其中所述肿瘤组织来自固体肿瘤。45.根据权利要求35所述的方法，其中所述肿瘤组织来自难治肿瘤。46.根据权利要求35所述的方法，其中所述肿瘤组织来自复发肿瘤。47.根据权利要求35所述的方法，其中所述肿瘤组织来自转移性肿瘤。48.根据权利要求35所述的方法，其中所述肿瘤组织来自选自由以下构成的组的肿瘤肺癌、骨癌、肝癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈部癌症、皮肤或眼黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、性器官或生殖器官的癌症、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织的肉瘤、尿道癌、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肾细胞癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、神经外胚层癌、脊髓肿瘤、胶质瘤、脑膜瘤，和垂体腺瘤。49.根据权利要求35所述的方法，其中所述肿瘤组织来自神经外胚层起源的肿瘤。50.根据权利要求49所述的方法，其中所述神经外胚层起源的肿瘤是由以下构成的组的成员胶质瘤、脑膜瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、神经节瘤、嗜铬细胞瘤、黑色素瘤、外周性原始神经外胚层瘤、肺小细胞癌、尤文瘤，和脑中神经外胚层起源的转移瘤。51.根据权利要求35所述的方法，其中所述给药步骤包括系统性给予至少一个剂量的标记的氯毒素剂。52.根据权利要求51所述的方法，其中所述给药步骤包括系统性给予第一和第二剂量的标记的氯毒素剂，其中所述第二剂量高于所述第一剂量。53.根据权利要求51所述的方法，其中所述给药步骤包括系统性给予第一、第二和第三剂量的标记的氯毒素剂，其中所述第二剂量高于所述第一剂量，所述第三剂量高于所述第二剂量。全文摘要本发明涉及用于肿瘤治疗和诊断的方法和组合物。本发明的方法通常包括系统性(例如静脉内)给予标记或没有标记的氯毒素剂。文档编号A61K51/08GK101918041SQ200880111242公开日2010年12月15日申请日期2008年10月10日优先权日2007年10月12日发明者艾利森·奥尼尔,道格拉斯·B·雅各比申请人:超分子有限公司