专利名称：氯毒素多肽和结合物及其应用的制作方法
氯毒素多肽和结合物及其应用
背景技术：
氯毒素是来自蝎以色列金蝎(Leiurius quinquestriatus)的毒液的肽成分,其已表明可以特异性地结合于肿瘤细胞。氯毒素已用作靶向剂来将细胞毒性剂和/或成像剂递送到各种肿瘤，包括转移性瘤和脑瘤如恶性胶质瘤。例如，氯毒素已被结合于放射性同位素碘-131，并且这样的氯毒素结合物已表明是有效的抗肿瘤治疗剂。其它氯毒素结合物，包括融合蛋白，如连接于皂草素的氯毒素-GST融合蛋白也已表明，可以显著和选择性地杀伤肿瘤细胞。
发明内容
氯毒素可以潜在地结合于各种各样的任何制剂，包括细胞毒性剂和/或成像剂。虽然当前可用的氯毒素结合物已经证明具有抗肿瘤特性，但本发明包括确认更多的氯毒素结合物可以提供许多优点。仅举ー个例子，不同的氯毒素结合物可以具有它们自己的若干药物动力学特性，其可以特别适用于给定肿瘤类型和/或患者。另外，本发明确定了某些 类型的氯毒素结合物的潜在问题的先前未记载的来源，其源于以下事实野生型氯毒素多肽(和上述多肽的许多变体)包含超过ー个的在此处可以发生结合(或共轭)的位点。因而本发明提供了以下见解用来产生与氯毒素的结合物的化学反应经常产生结合物物质的混合物。至少在ー些实施方式中，上述不同物质可以具有不同的特性。另外，重现用上述氯毒素结合物混合物获得的发现的努力可以受阻于以下挑战在制备中再现不同物质的分布。质量控制、以及甚至分析可以是困难或不可能的。本发明提供了新类型的氯毒素结合物，并确定了对于其它氯毒素结合物可能遇到的问题的来源。即，本发明认识到，许多先前的氯毒素结合物是通过将感兴趣的部分或实体化学結合于氯毒素多肽来制备。根据本发明，认识到，至少在ー些情况下，上述方式产生结合物的混合群体，其中多个感兴趣的部分或实体在不同的点或位置结合于氯毒素。本发明包括以下确认上述混合物可能难以表征和/或重现，并且可以显示不同的特性(例如，药物动力学特性)，这些差异可以是不可预测的。本发明包括以下确认例如，在治疗和/或诊断应用中，可以更期望仅包含单ー氯毒素结合物的制剂而不是包含结合物的混合物的制齐 。本发明还提供了对于已确定的问题来源的解决方案。例如，本发明提供了赖氨酸減少的氯毒素多肽，其可以产生单ー种类的结合物。在某些实施方式中，提供了赖氨酸減少的氯毒素多肽。在多个方面，提供了氯毒素结合物，其包含具有不超过ー个可用作结合位点的赖氨酸的氯毒素多肽(“单ー赖氨酸氯毒素结合物”)，包含上述结合物的药物组合物，以及应用上述结合物的方法。在一些实施方式中，提供了没有赖氨酸残基的赖氨酸減少的氯毒素多肽。在某些实施方式中，本发明提供了制备和应用赖氨酸減少的氯毒素多肽和其结合物的方法。在一些实施方式中，提供的赖氨酸减少的氯毒素多肽和/或其结合物可以用于医药(例如，在各种治疗和/或诊断背景中)。
定义如在本文中所使用的，在提及数目吋，术语“约”和“大約”，在本文中用来包括这样的数目，其是在任一方向(大于或小于)20%、10%、5%、或1%的范围内，除非另有说明或根据上下文明显的(除非这样数目将超过可能值的100%)。如在本文中所使用的，术语“特征序列元件”或“序列元件”是指相邻氨基酸的一段序列，通常至少5个氨基酸，例如，至少5-50、5-25、5-15或5-10个氨基酸，其显示与另ー个多肽至少约80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的同一性。在一些实施方式中，特征序列元件參与或赋予多肽功能。在一些实施方式中，赖氨酸減少的氯毒素多肽包含特征序列元件。在一些这样的实施方式中，赖氨酸減少的氯毒素多肽包含一个特征序列元件，为 TTDHQMAR(SEQ ID NO:29)。在本文中可互換使用术语“化疗剤”、“抗癌剂”和“抗癌药物”。它们是指药物，其用来治疗癌症或癌性病症。传统上将抗癌药物分类为放射性同位素(例如，碘-131、镥-177、铼-188、钇-90)、毒素(例如，白喉、假单胞菌、蓖麻蛋白、白树素)、酶、用来激活药物的酶、 辐射增敏药物、干扰RNA、超抗原、抗血管生成剂、烷化剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、植物生物碱、插入抗生素(intercalating antibiotics)、芳香酶抑制剂、抗代谢物、有丝分裂抑制齐U、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素、和抗雄激素药。上述抗癌剂的实例包括但不限于BCNU、顺钼、吉西他滨、羟基脲、紫杉醇、替莫唑胺、托泊替康、氟尿嘧啶、长春新碱、长春碱、丙卡巴肼、氨烯咪胺、六甲蜜胺、甲氨蝶呤、巯嘌呤、硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、克拉屈滨、喷司他丁、阿糖胞苷、阿扎胞苷、依托泊苷、替尼泊苷、伊立替康多西他赛、多柔比星、柔红霉素、放线菌素D、伊达比星、普卡霉素、丝裂霉素、博来霉素、他莫昔芬、氟他胺、亮丙立德、戈舍瑞林、氨鲁米特、阿那曲唑、安吖啶、天冬酰胺酶、米托蒽醌、米托坦和氨磷汀。如在本文中所使用的，术语“氯毒素”是指长度为36个氨基酸并且具有氨基酸序列(SEQ ID NO: I)的肽。如在本文中所使用的，术语“氯毒素”包括分离自蝎Leiuriusquinquestriatusr或其它生物体(其中可以发现氯毒素)的毒液的氯毒素、以及重组和合成
的氯毒素。 如在本文中所使用的，词组“氯毒素结合物”是指共价键结合感兴趣的ー个或多个实体或部分的氯毒素多肽。在一些实施方式中，感兴趣的实体不是多肽，和/或并不连接在多肽链内。在一些实施方式中，感兴趣的实体连接于氨基酸侧链。在一些实施方式中，经由赖氨酸残基，感兴趣的实体连接于氯毒素多肽。如在本文中所使用的，词组“氯毒素多肽”是指多肽，其显示与氯毒素(SEQ IDNO: I)至少45%的整体序列同一性(overall sequence identity),并具有24至40个氨基酸的长度。在一些实施方式中，氯毒素多肽与SEQ ID NO: I具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的整体序列同一性。在一些实施方式中，氯毒素多肽与SEQ ID NO: I具有至少65%的整体序列同一性。在一些实施方式中，氯毒素多肽与SEQ ID N0:1具有至少91%的整体序列同一性。在一些实施方式中，氯毒素多肽与SEQ ID NO: I具有至少94%的整体序列同一性。在一些实施方式中，氯毒素多肽与SEQ ID NO: I具有至少97%的整体序列同一性。在一些实施方式中，氯毒素多肽进一歩与SEQ ID NO: I共享至少一个特征序列元件。在一些实施方式中，特征序列元件是TTDHQMAR(SEQ ID NO: 29)。在一些实施方式中，氯毒素多肽具有24至40个氨基酸的长度。在一些实施方式中，“氯毒素多肽”包括ー个或多个另外的氨基酸序列段(stretch)，通常在C端和/或N端，和/或作为插入在序列内的不连续的区组(block)。通常，上述另外的序列段的长度为约3至约1000个氨基酸。在一些实施方式中，另外的序列段的长度为约3-100、3-90、3-80、3-70、3-60、3-50、3-40、3-30或3-20个氨基酸。在一些实施方式中，另外的序列段的长度为约或小于20个氨基酸、约或小于15个氨基酸、或约或小于10个氨基酸。在一些实施方式中，另外的序列段包含ー个或多个已知标记。在一些实施方式中，另外的序列段包含细胞毒性剂。如在本文中所使用的，词组“联合治疗”是指将两种或更多种活性剂给予相同主体，以致主体同时暴露于两种制剂。本领域技术人员将明了，可以期望地以单剂量、或以多剂量，例如相隔预定间隔，或预定模式，来给予任何单种制剂。联合治疗并不需要同时给予两种或更多种活性剂的各自剂量，只要接收剂量的主体同时暴露于两种制剂。联合治疗也不需要通过相同途径来给予两种或更多种活性剤。在一些实施方式中，与単 独给予时的剂量或频率相比，以降低的剂量和/或频率，给予在联合治疗中给予的至少两种活性剂的ー种或两种。当用来描述在氨基酸或核苷酸序列内的位置或部位(位点)时，在本文中，如在本领域中所理解的那样来使用词组“对应干”。如本领域中众所周知的，可以利用标准的生物信息学工具，包括程序如BLAST、ClustalX, Sequencher等，来对比两个或更多氨基酸或核苷酸序列。即使两个或更多序列不能完全匹配和/或并不具有相同长度，但仍然可以进行序列对比，并且，如果需要的话，可以产生“共有”序列。确实，用于序列对比的程序和算法通常容忍可限定水平的差异，包括插入、缺失、倒位、多态性、点突变等。这样的序列对比可以有助于确定在一个核苷酸序列中的哪些位置对应于在其它核苷酸序列中的哪些位置。如在本文中所使用的，词组“给药方案”是指多个单位剂量(通常大于ー种)的组合，单位剂量相隔一段时间单独给予。用于特定药剂或组合物的推荐的ー组剂量(即，量、定时、给予途径等)构成其给药方案。如在本文中所使用的，术语“有效量”和“有效剂量”是指任何量或剂量的化合物或组合物，其足以以可接受的效益/风险比来实现其预期目的，即，在组织或主体中所期望的生物或药物反应。例如，在本发明的某些实施方式中，目的可以是抑制血管生成，引起新生血管的消退，干扰另ー种生物活性分子的活性，引起肿瘤的消退，抑制转移，降低转移的程度等。有关预期目的可以是客观的(即，可以通过某个测试或标记加以测量)或主观的(即，主体(受试者)产生ー个指征或感到效果)。通常以可以包括多个单位剂量的给药方案来给予治疗有效量。对于任何特定药剂，治疗有效量(和/或在有效给药方案中的适当的单位剂量)可能会有所不同，例如，取决于给予途径，取决于和其它药剂的组合。在ー些实施方式中，用于任何特定患者的具体治疗有效量(和/或单位剂量)可以取决于各种因素，包括待治疗的障碍和障碍的严重性；所采用的具体药剂的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体药剂的给予时间、给予途径、和/或排泄或代谢的速率；治疗的持续时间；和如在医疗领域中众所周知的类似因素。如在本文中所使用的，在本文中可互換使用术语“荧光团”、“荧光部分”、“荧光标记”、“荧光染料”和“荧光标记部分”。它们是指在溶液中并在用适当波长的光激发以后，发射光的分子。各种各样的结构和特性的许多荧光染料适用于本发明的实施。类似地，用于荧光标记核酸的方法和材料是已知的(參见,例如，R. P. Haugland, “MolecularProbes:Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals 1992-1994，7，5thEd. ,a 1994，Molecular Probes, Inc.) 0在选择荧光团时，往往可取的是，荧光分子高效率地吸收光和发射荧光(即，分别高摩尔吸光系数和荧光量子产率)并且是不感光的(即，在光激发以后，在进行分析所需的时间内，它并不经历显著降解)。如在本文中所使用的，术语“抑制”是指防止某事发生、拖延某事发生、和/或降低某事发生的程度或可能性。因此，“抑制血管生成”和“抑制新生血管的形成”用来包括预防、延迟、和/或降低发生血管生成的可能性以及降低新血管的数目、生长速率、大小等。在本文中，术语“标记的”和“用可检测剂或部分标记的”可互換地用来指明，可以可视化ー种实体(例如，赖氨酸減少的氯毒素多肽或氯毒素结合物)，例如在结合于另ー种 实体(例如，新生肿瘤组织)以后。可以选择可检测剂或部分，以致它产生信号，其可以加以测量并且其強度与结合实体的量有关(例如，正比)。用于标记和/或检测蛋白质和肽的各种各样的系统在本领域中是已知的。可以通过掺入标记、或结合于标记来制备标记蛋白和肽，其中上述标记可以通过光谱方式、光化学方式、生化方式、免疫化学方式、电子方式、光学方式、化学方式或其它方式来检测。标记或标记部分可以是直接可检测的(即，它并不需要任何进ー步的反应或操作以成为可检测的，例如，荧光团是直接可检测的)，或它可以是间接可检测的(即，通过反应或结合于可检测的另ー种实体，其是可检测的，例如，半抗原在与适当的包含报道子如荧光团的抗体反应以后，通过免疫染色是可检测的)。适宜的可检测剂包括但不限于放射性核素、荧光团、化学发光剂、微颗粒、酶、比色标记、磁性标记、半抗原、分子标灯、适体标灯等。如在本文中所使用的，术语“黄斑变性”是指这样的病况，其导致在视野中心(斑)视カ的丧失，这是由于对视网膜的损害。已知存在若干形式的黄斑变性，并且除另有指明，术语“黄斑变性”包括所有形式。“湿性黄斑变性”(还称作新生血管性或滲出性形式)是指这样的黄斑变性，其涉及来自在视网膜后面的脉络膜的血管生长。在湿性黄斑变性中，视网膜有时可以脱离。在“干性黄斑变性”(还称作非滲出性形式)中，称作玻璃疣的细胞碎片累积在视网膜和脉络膜之间，但没有发生血管形成。“年龄相关性黄斑变性” (ARMD)是指黄斑变性的最常见形式，其通常在生命后期开始于在斑中的典型的黄色沉积物。可以以黄斑变性的湿性或干性形式来发生ARMD。如在本文中所使用的，术语“转移”是指肿瘤细胞从ー个器官或组织扩散到另ー个位置。该术语还指肿瘤组织，由于转移的结果，其形成在新的位置。“转移性癌症”是扩散自它的最初、或初始位置的癌症，并且还可以称作“继发性癌症”或“继发性肿瘤”。通常，转移性肿瘤是以它们源自的原发性肿瘤的组织来命名。因此，已转移到肺的乳癌还可以被称作“转移性乳癌”，即使ー些癌细胞位于肺中。如在本文中所使用的，词组“单ー赖氨酸氯毒素多肽”是指ー种氯毒素多肽，其仅具有一个赖氨酸残基可用作结合位点(或结合部位)。在一些实施方式中，单ー赖氨酸氯毒素多肽仅具有一个赖氨酸残基。在一些实施方式中，单ー赖氨酸氯毒素多肽具有超过ー个的赖氨酸残基，但仅其中一个赖氨酸残基可用作用于结合的部位。在一些这样的实施方式中，在一些赖氨酸上的ー个或多个阻挡基团使它们不能用作用于结合的部位。如在本文中所使用的，术语“新生血管”是指新形成的尚未完全成熟的血管，S卩，并不具有完全形成的具有紧密的细胞连接的内皮村里或围绕平滑肌细胞的完全层。如在本文中所使用的，术语“新血管”用来指在新生血管中的血管。在本文中，可互換使用术语“药剤”、“治疗剂”和“药物”。它们是指可有效地治疗、抑制、和/或检测疾病、障碍、或临床状况的物质、分子、化合物、制剂、因子或组合物。在本文中，“药物组合物”定义为组合物，其包含有效量的至少ー种活性组分(例如，可以或不能加以标记的赖氨酸減少的氯毒素多肽或氯毒素结合物)、和至少ー种药用载体。如在本文中所使用的，当在与过程有关的ー种或多种症状或特征的发展以前给予制剂(例如，治疗剂如氯毒素结合物)时，当用来指制剂对过程(例如，血管生成、转移、癌 症进展等)的作用吋，术语“预防”是指降低上述过程的程度和/或延迟上述过程的发作。如在本文中所使用的，术语“原发性肿瘤”是指这样的肿瘤，其是在肿瘤首次出现的原始部位，即，相对于已扩散的肿瘤。术语“前药”是指化合物，在体内给予以后，其被代谢或以其它方式转化成化合物的生物、医药或治疗上的活性形式。可以设计前药以改变化合物的代谢稳定性或转运特性，掩蔽副作用或毒性，改善化合物的香味，和/或改变化合物的其它特性或性能。借助于体内药效学过程和药物代谢的知识，在确定了药物活性化合物以后，制药领域的技术人员通常可以设计化合物的前药(Nogrady, “Medicinal Chemistry A BiochemicalApproach”，1985, Oxford University Press :N. Y. , pages 388-392)。用于选择和制备适宜前药的程序在本领域中也是已知的。在一些实施方式中，前药是ー种化合物，其到它的活性形式的转化(在体内给予以后)涉及酶催化。术语“蛋白质”、“多肽”和“肽”在本文中可互換使用，并且是指各种长度的氨基酸序列，处于它们的中性(不带电荷)形式或作为盐，未修饰的或通过糖基化、侧链氧化、或磷酸化加以修饰的。在某些实施方式中，氨基酸序列是全长天然蛋白质。在其它实施方式中，氨基酸序列是全长蛋白质的较小片段。在另外的实施方式中，通过连接于氨基酸侧链的另外的取代基，如糖基単位、脂质，或无机离子如磷酸盐，以及与链的化学转化有关的修饰，如硫氢基的氧化，来修饰氨基酸序列。因而，术语“蛋白质”(或它的等效术语)用来包括全长天然蛋白质的氨基酸序列，其受到那些并不改变其特定性能的修饰。尤其是，术语“蛋白质”包括蛋白质同种型(isoform)，即，由相同基因编码的变体，但其差异在于它们的pi或匿、或两者。上述同种型可以在它们的氨基酸序列上有差异(例如，由于可变剪接或有限的蛋白水解)，或可替换地，可以产生自有差别的翻译后修饰(例如，糖基化、酰化或磷酸化)。如在本文中所使用的，词组“赖氨酸減少的氯毒素多肽”是指具有比氯毒素(SEQID NO: I)更少的赖氨酸残基和/或具有比氯毒素更少的可用作结合部位(site，位点)的赖氨酸残基的氯毒素多肽。在某些实施方式中，赖氨酸減少的氯毒素多肽具有不超过ー个赖氨酸残基。在一些实施方式中，赖氨酸減少的氯毒素多肽仅具有一个赖氨酸残基。在某些实施方式中，赖氨酸減少的氯毒素多肽具有不超过一个赖氨酸残基可用作用于结合的部位。在一些实施方式中，在赖氨酸減少的氯毒素多肽中，除一个赖氨酸残基以外，所有其它赖氨酸残基已被修饰，以致它们不可用作用于结合的部位。在一些实施方式中，在赖氨酸减少的氯毒素多肽中的所有赖氨酸残基已被修饰，以致它们不可用作用于结合的部位。在一些实施方式中，赖氨酸減少的氯毒素多肽包含可用于结合的单个部位。当用来指血管和/或脉管系统(包括新生血管和/或新血管)吋，术语“消退(regress)”在本文中用来指退缩、收缩等。术语“主体”和“个体”在本文中可互換使用。它们是指人或另ー种哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、免、狗、猫、牛、猪、羊、马或灵长类)，其可以患有或易受疾病或障碍(例如，癌症、黄斑变性等)，但可以或可以不患有疾病或障碍。在许多实施方式中，主体是人。在许多实施方式中，主体是患者。除非另有说明，术语“个体”和“主体”并不指明特定年龄，因而包括成年人、儿童、和新生儿。如在本文中所使用的，术语“易感的”是指对于某事，S卩，疾病、障碍、或病症(如，例如，癌症、转移性癌症、黄斑变性、类风湿性关节炎等)，和在一般群体中所观测到的相比，具有増加的风险和/或倾向(通常基于遗传倾向性、环境因素、个人史、或它们的组合)。该 术语考虑到，对于病症“易感的”个体可以从没有被确诊为患有病症。如在本文中所使用的，术语“全身给予”是指给予制剂，以致制剂变得以显著量广泛分布于体中并在血液中具有生物效应，例如，它的预期的效果，和/或经由血管系统达到它的所期望的作用部位。典型的全身给予途径包括通过(I)将制剂直接引入血管系统或
(2)ロ服、肺途径、或肌内途径来给予制剂，进入血管系统，然后经由血液被携帯到一个或多个所期望的作用部位。如在本文中所使用的，术语“治疗”是指部分或完全地减轻、改善、缓解特定疾病、障碍、和/或病症的ー种或多种症状或特点，延迟它们的发作，抑制它们的进展，降低它们的严重性，和/或降低它们的发生率。例如，“治疗”癌症可以是指抑制肿瘤细胞的存活、生长、和/或扩散，预防、延迟、和/或降低发生转移和/或复发的可能性，和/或降低转移灶的数目、生长速率、大小等。可以对并不呈现疾病、障碍、和/或病症的体征的主体和/或对仅呈现疾病、障碍、和/或病症的早期体征的主体给予治疗，以降低发展与疾病、障碍、和/或病症有关的病理特征的风险。在一些实施方式中，治疗包括将药物组合物递送给主体。如在本文中所使用的，词组“单位剂量”是指离散量的药物组合物，其包含预定量的活性组分(例如，治疗剂)。活性组分的量通常等于将给予主体的活性组分的剂量和/或上述剂量的适宜份数如，例如，上述剂量的一半或三分之一。
具体实施例方式I.赖氨酸減少的氯毒素多肽如表I所示和如SEQ ID NO: I中所列，氯毒素是36个氨基酸肽，其在SEQ ID NO: I的位置15、23、和27具有三个赖氨酸残基。在某些实施方式中，本发明提供了氯毒素多肽，其具有数目減少的赖氨酸残基(“赖氨酸減少的氯毒素多肽”)。在某些实施方式中，赖氨酸減少的氯毒素多肽具有对应于SEQ ID NO: I的氨基酸序列，其中赖氨酸減少的氯毒素多妝具有与SEQ ID NO: I的至少45%的整体序列同一性(overall sequence identity)以及24至40个氨基酸残基的长度。在一些实施方式中，赖氨酸减少的氯毒素多肽与SEQ IDNO: I具有至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的整体序列同一性。在一些实施方式中，赖氨酸减少的氯毒素多肽与SEQ ID NO: I具有至少65%的整体序列同一性。在一些实施方式中，氯毒素多肽与SEQ ID NO: I具有至少91%的整体序列同一性。例如，在36个氨基酸残基中的33个处，赖氨酸減少的氯毒素多肽的氨基酸序列可以与氯毒素相同(即广91. 7%序列同一性)。在一些实施方式中，氯毒素多肽与SEQ ID NO: I具有至少94%的整体序列同一性。例如，在氨基酸序列方面，在36个氨基酸残基的34个处，赖氨酸減少的氯毒素多肽可以与氯毒素相同(即广94. 4%序列同一性)。在一些实施方式中，赖氨酸減少的氯毒素多肽与SEQ ID NO: I具有至少97%的整体序列同一性。例如，在氨基酸序列方面，在36个氨基酸残基的35个处，赖氨酸減少的氯毒素多肽可以与氯毒素相同(即，、7. 2%序列同一性)。在一些实施方式中，赖氨酸减少的氯毒素多肽是和/或包含33、34、35、36、37、或38个氨基酸的一段序列，该序列对应于氯毒素的序列或显示与氯毒素的序列至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的整体序列同一性。表I示出氯毒素的序列和典型的赖氨酸減少的氯毒素多肽的序列。表I并不是用 来限制而是用来说明由本发明提供的某些典型的赖氨酸減少的氯毒素多肽。表I :氯毒素和典型的赖氨酸減少的氯毒素多肽的序列
权利要求
1.ー种氯毒素多肽，具有不超过ー个可用作结合位点的赖氨酸。
2.根据权利要求I所述的氯毒素多肽，具有对应于SEQID NO: I的氨基酸序列，其中所述多肽与SEQ ID NO: I具有至少65%的整体序列同一性并且所述多肽具有24至40个氨基酸的长度，包括端值。
3.根据权利要求I所述的氯毒素多肽，在对应于在氯毒素中存在赖氨酸的位置处包含赖氨酸。
4.根据权利要求3所述的氯毒素多肽，其中，所述赖氨酸的位置对应于选自由SEQIDNO: I的位置15、SEQ ID NO: I的位置23、和SEQ ID NO: I的位置27组成的组的位置。
5.根据权利要求3所述的氯毒素多肽，其中，所述赖氨酸是在对应于SEQID NO: I的位置27的位置处。
6.根据权利要求I所述的氯毒素多肽，其中，对应于SEQID NO: I的位置15、23、和27的氨基酸残基中的至少ー个不是赖氨酸。
7.根据权利要求6所述的氯毒素多肽，其中，对应于SEQID ΝΟ:1的位置15、23、和27的至少ー个氨基酸残基是丙氨酸。
8.根据权利要求6所述的氯毒素多肽，其中，对应于SEQID ΝΟ:1的位置15、23、和27的至少ー个氨基酸残基是精氨酸。
9.根据权利要求I所述的氯毒素多肽，缺少对应于SEQID ΝΟ:1的位置15、23、或27的至少ー个氨基酸。
10.根据权利要求I所述的氯毒素多肽，没有赖氨酸残基。
11.一种结合物，包含至少ー种与至少ー个治疗部分结合的氯毒素多肽，其中所述氯毒素多肽包含具有不超过一个赖氨酸的氯毒素多肽，以及其中，经由所述单ー赖氨酸或经由所述氯毒素多肽的N端，所述治疗部分共价结合于所述氯毒素多肽。
12.根据权利要求11所述的结合物，其中，所述氯毒素多肽和所述治疗部分是直接共价结合的。
13.根据权利要求11所述的结合物，其中，所述氯毒素多肽和所述治疗部分通过接头而共价结合。
14.根据权利要求11所述的结合物，其中，所述治疗部分包含抗癌剂。
15.根据权利要求14所述的结合物，其中，所述抗癌剂是由对癌细胞呈现差的选择性/特异性的抗癌剂、呈现癌细胞差的摄取的抗癌剂、在癌细胞中呈现差的保留的抗癌剂、呈现差的水溶性的抗癌剂、在癌细胞中经历过早失活的抗癌剂、在癌细胞中经历受损激活的抗癌剂、经历广泛的细胞降解的抗癌剂、以及伴有抗药性的抗癌剂组成的组中的成员。
16.根据权利要求15所述的结合物，其中，所述抗癌剂呈现差的水溶性。
17.根据权利要求16所述的结合物，其中，所述抗癌剂是紫杉烷。
18.根据权利要求17所述的结合物，其中，所述紫杉烷选自由紫杉醇、多西他赛、以及它们的组合组成的组。
19.根据权利要求14所述的结合物，其中，所述治疗部分是由放射性同位素、酶、前药激活酶、辐射敏化剂、干扰RNA、超抗原、抗血管生成剂、烷化剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、植物生物碱、插入抗生素、芳香酶抑制剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物反应调节剂、抗激素、和抗雄激素药组成的组中的成员。
20.根据权利要求11所述的结合物，其中，所述氯毒素多肽在对应于在天然氯毒素中存在赖氨酸的位置处包含赖氨酸。
21.根据权利要求20所述的结合物，其中，所述氯毒素多肽在与选自由SEQID NO: I的位置15、SEQ ID NO: I的位置23、和SEQ ID NO: I的位置27组成的组中的位置对应的位置处包含赖氨酸。
22.根据权利要求21所述的结合物，其中，所述氯毒素多肽在对应于SEQID ΝΟ:1的位置27的位置处包含赖氨酸。
23.根据权利要求11所述的结合物，其中，在所述氯毒素多肽中对应于SEQID ΝΟ:1的位置15、23、和27的氨基酸中的至少ー个不是赖氨酸。
24.根据权利要求23所述的结合物，其中，在所述氯毒素多肽中对应于SEQID ΝΟ:1的位置15、23、或27的所述至少一个氨基酸是丙氨酸。
25.根据权利要求23所述的结合物，其中，在所述氯毒素多肽中对应于SEQID ΝΟ:1的位置15、23、或27的所述至少一个氨基酸是精氨酸。
26.根据权利要求11所述的结合物，其中，所述氯毒素多肽缺少对应于SEQID ΝΟ:1的位置15、23、或27的至少ー个氨基酸。
27.根据权利要求11所述的结合物，其中，所述氯毒素多肽共价连接于包含聚合物的部分。
28.根据权利要求27所述的结合物，其中，所述聚合物是聚こニ醇。
29.根据权利要求28所述的结合物，其中，所述聚こニ醇经由所述氯毒素多肽的氨基端来连接。
30.ー种药物组合物，包含有效量的至少ー种根据权利要求11-29中任ー项所述的结合物、或其生理耐受盐，以及至少ー种药用载体。
31.ー种方法，包括以下步骤将包含根据权利要求11所述的结合物的组合物给予患有或怀疑患有肿瘤的个体，以致所述结合物特异性地结合于所述肿瘤。
32.根据权利要求31所述的方法，其中，所述肿瘤是神经外胚层肿瘤。
33.根据权利要求32所述的方法，其中，所述神经外胚层肿瘤是胶质瘤。
34.根据权利要求33所述的方法，其中，所述胶质瘤选自由多形性胶质母细胞瘤(WHO IV级)、间变型星形细胞瘤(WHO III级)、低级胶质瘤(WHO II级)、毛细胞型星形细胞瘤(WHO I级)、少突神经胶质瘤、神经节瘤、脑脊膜瘤、和室管膜瘤组成的组。
35.根据权利要求32所述的方法，其中，所述神经外胚层肿瘤选自由髓母细胞瘤、成神经细胞瘤、嗜铬细胞瘤、黑素瘤、周围性原始神经外胚层肿瘤、小细胞肺癌、尤因肉瘤、和脑转移瘤组成的组。
36.根据权利要求31所述的方法，其中，所述肿瘤选自由前列腺癌和乳癌组成的组。
37.根据权利要求31所述的方法，其中，所述肿瘤是皮肤黑素瘤或眼内黑素瘤。
38.根据权利要求31所述的方法，其中，所述肿瘤是转移性肿瘤。
39.根据权利要求38所述的方法，其中，所述肿瘤是转移性黑素瘤。
40.根据权利要求31所述的方法，其中，所述肿瘤是非小细胞肺癌。
41.根据权利要求31所述的方法，其中，所述肿瘤是结肠或结肠直肠癌。
42.根据权利要求31所述的方法，其中，所述肿瘤是胰腺癌。
43.ー种方法，包括以下步骤将包含根据权利要求11所述的氯毒素结合物的组合物给予患有或怀疑患有疾病或病症的个体，以致所述氯毒素结合物降低血管生成的程度，其中所述疾病或病症的特点在于异常的血管生成。
44.根据权利要求43所述的方法，其中，所述氯毒素结合物防止新生血管的形成。
45.根据权利要求43所述的方法，其中，所述氯毒素结合物引起现有的新生血管消退。
46.根据权利要求43所述的方法，其中，所述疾病或病症是黄斑变性。
47.根据权利要求43所述的方法，其中，所述疾病或病症是炎性疾病。
48.根据权利要求47所述的方法，其中，所述疾病或病症是类风湿性关节炎。
全文摘要
赖氨酸减少的氯毒素多肽，可以用来产生单一种类的氯毒素结合物。包含这样的氯毒素多肽的结合物及其药物组合物。使用这样的组合物和/或结合物的方法。
文档编号A61K38/16GK102844044SQ201180012427
公开日2012年12月26日 申请日期2011年2月4日 优先权日2010年2月4日
发明者阿卜杜拉·森蒂斯, 道格拉斯·B·雅各比 申请人:摩尔弗泰克有限公司