使用半胱胺制品治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法

专利名称：使用半胱胺制品治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法
技术领域：
本发明一般地涉及使用半胱胺制品治疗脂肪肝疾病的材料和方法。
背景技术：
脂肪肝疾病(或脂肪性肝炎)常常与过度的酒精摄入或肥胖有关，但是也有其他 原因，例如代谢缺陷，包括胰岛素抵抗和糖尿病。脂肪肝起因于肝脏细胞液泡内甘油三酯脂 肪积累，这导致肝功能的降低，并且可能导致肝硬化或肝癌。非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)代表在没有酒精滥用情况下的一系列疾病。当前还 没有可用的对于脂肪肝疾病，例如NAFLD和NASH的满意治疗。

发明内容
本公开提供治疗患有脂肪肝疾病的受试者的方法，包括施用治疗有效量的半胱胺 组合物。在一个实施方案中，脂肪肝疾病选自非酒精性脂肪酸肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂 肪性肝炎(NASH)、肝炎引起的脂肪肝疾病、肥胖症引起的脂肪肝疾病、糖尿病引起的脂肪肝 疾病、胰岛素抵抗引起的脂肪肝疾病、高甘油三酯血症引起的脂肪肝疾病、无β脂蛋白血 症、糖原贮积病、韦-克病、沃尔曼病、妊娠急性脂肪肝和脂肪营养不良。在另一实施方案 中，半胱胺组合物的总日剂量是大约0. 5-1. Og/m2。在又一实施方案中，半胱胺组合物以每 天4次或更少次数的频率施用(例如每天1次、2次或3次)。在一个实施方案中，组合物是 向小肠提供增加递送半胱胺或半胱胺衍生物的缓释或控释剂型。缓释或控释形式可提供这 样的半胱胺或半胱胺衍生物或其生物学活性代谢物Cmax，其比由包含相同量半胱胺或半胱 胺衍生物的立即释放剂型所提供的Cmax高至少大约35%、50%或75%。在又一实施方案中， 缓释或控释剂型包含当组合物到达受试者的小肠或者胃肠道中PH大于大约4. 5的区域时 释放半胱胺组合物的肠溶衣。例如，包衣可以选自聚合明胶、虫胶、甲基丙烯酸共聚物类型 C NF、丁酸纤维素邻苯二甲酸酯、邻苯二甲酸氢纤维素(cellulose hydrogen phthalate)、 丙酸纤维素邻苯二甲酸酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、乙酸纤维素邻苯二甲酸酯 (CAP)、1，2，4-苯三甲酸醋酸纤维素(CAT)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基 纤维素醋酸酯、二氧丙基甲基纤维素琥珀酸酯、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、羟丙基甲基纤维 素醋酸琥珀酸酯(HPMCAS)、和通常从丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或甲基 丙烯酸乙酯与丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的共聚物形成的丙烯酸聚合物和共聚物。组合物可 以经口或肠胃外施用。在另一实施方案中，所述方法导致与施用半胱胺组合物之前的水平 相比肝纤维化改善。在又一实施方案中，所述方法导致肝脂肪含量减少、肝硬化发病率或进展降低或肝细胞癌发病率降低。在一个实施方案中，所述方法导致与施用半胱胺组合物之 前的水平相比肝脏氨基转移酶水平降低。在再一实施方案中，施用导致与治疗前水平相比 肝脏转氨酶降低近似10%至40%之间。在又一实施方案中，施用导致所治疗患者中丙氨酸 或天冬氨酸氨基转移酶水平降低至高于正常ALT水平近似30 %、20 %或10 %，或处于正常 ALT水平。在仍然另一实施方案中，施用导致与使用半胱胺组合物的治疗前水平相比血清铁 蛋白水平降低。本公开的方法和组合物还可以包括施用与半胱胺组合物组合的第二试剂以 治疗脂肪肝疾病。受试者可以是成人、青少年或儿童。在一个方面中，本公开提供治疗患有脂肪肝疾病——包括NAFLD或NASH——的患 者的方法，包括施用治疗有效量的包含半胱胺制品的组合物。本公开方法还包括半胱胺制 品在制备治疗脂肪肝疾病的药物中的用途，和半胱胺制品在制备用于与治疗脂肪肝疾病的 第二试剂组合施用的药物中的用途。还包括用于治疗脂肪肝疾病的第二试剂在制备用于与 半胱胺制品组合施用的药物中的用途。还提供试剂盒，包含用于治疗脂肪肝疾病的半胱胺 制品和任选的用于治疗脂肪肝疾病的第二试剂、和在治疗脂肪肝疾病中使用的说明书。术 语“脂肪肝疾病”可包括或排除NASH。


图1显示在喂食高脂肪食物(HFD)达8天的动物中，以0、75和250mg/kg/天腹膜 内递送半胱胺的治疗对天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平的影响。也显示了没有喂食HFD的 对照动物的AST水平。该图描述了来自在研究第-1天(“pre”)和在研究第8天(SD8)收 集的血液样品的平均AST值。图2显示在喂食HFD达8天的动物中，以0、75和250mg/kg/天腹膜内递送半胱胺 的治疗对胆固醇水平的影响。也显示了没有喂食HFD的对照动物的胆固醇水平。该图描述 了来自在研究第-1天(“pre”)和在研究第8天(SD8)收集的血液样品的平均胆固醇值。图3显示在喂食HFD达8天的动物中，以0、75和250mg/kg/天腹膜内递送半胱胺 的治疗对低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-胆固醇)水平的影响。也显示了没有喂食HFD的 对照动物的LDL-胆固醇水平。该图描述了来自在研究第-1天(“pre”)和在研究第8天 (SD8)收集的血液样品的平均LDL-胆固醇值。图4显示在喂食HFD达8天的动物中，以0、75和250mg/kg/天腹膜内递送半胱胺 的治疗对乳酸脱氢酶(LDH)水平的影响。也显示了没有喂食HFD的对照动物的LDH水平。 该图描述了来自在研究第-1天(“pre”)和在研究第8天(SD8)收集的血液样品的平均 LDH 值。图5显示在喂食HFD达8周的动物中，以0、25、75和250mg/kg/天的靶剂量通过饮 水递送半胱胺的治疗对AST水平的影响。也显示了没有喂食HFD的对照动物的AST水平。 该图描述了来自在研究第-1天(“第0周”)和所指出周数(第2、4、6或8周)的最后一 天收集的血液样品的平均AST值士SEM。图6显示在喂食HFD达8周的动物中，以0、25、75和250mg/kg/天的靶剂量通过饮 水递送半胱胺的治疗对LDH水平的影响。也显示了没有喂食HFD的对照动物的LDH水平。 该图描述了来自在研究第-1天(“第0周”)和所指出周数(第2、4、6或8周)的最后一 天收集的血液样品的平均LDH值士SEM。
图7显示在喂食HFD达8周的动物中，以0、25、75和250mg/kg/天的靶剂量通过 饮水递送半胱胺的治疗对高密度脂蛋白胆固醇(HDL-胆固醇)水平的影响。也显示了没有 喂食HFD的对照动物的HDL-胆固醇水平。该图描述了来自在研究第-1天(“第0周”)和 所指出周数(第2、4、6或8周)的最后一天收集的血液样品的平均HDL-胆固醇值士SEM。发明详述如本文和后附权利要求书中所使用，单数形式“一 (a) ”、“一 (an) ”和“该(the) ” 包括复数形式，除非上下文另外明确指出。因此，例如当提到“一衍生物”时包括多种此类 衍生物，并且当提到“一受试者”时指一个或一个以上受试者，等等。同样，除非另外说明，“或”意思是指“和/或”。同样，“包含”和“包括”可互换并 且不旨在是限制性的。应更进一步地理解，当多个实施方案的描述使用术语“包含”时，本领域技术人 员应理解，在一些特定实例中，实施方案可以备选地使用短语“基本上由...组成”或者 “由...组成”加以描述。除非另外指出，本文所使用的所有技术术语和科学术语具有与该公开所属领域普 通技术人员通常理解的含义相同的含义。虽然与本文所述的那些方法和材料相似的或等效 的方法和材料可以用于实施所公开的方法和组合物，但是在本文描述了示例性的方法、装 置和材料。上面以及通篇讨论的出版物被提供，仅仅是因为它们在本申请申请日前公开。在 此不能解释为承认发明人由于在先公开而没有权利占先于此类出版物。本公开提供可缓解患有这些疾病的患者的与脂肪肝疾病相关症状的新治疗剂。本 公开提供半胱胺组合物，其为需要治疗的患者提供有效的治疗。下列文献向技术人员提供了在本公开中所使用诸多术语的一般定义Singleton 等，DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY(第2版，1994) ；THE CAMBRIDGE DICTIONARY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(Walker编，1988) ；THE GLOSSARY OF GENETICS, 5TH ED.，R. Rieger，等(编者)，SpringerVerlag (1991)；以及 Hale 和 Marham，THE HARPER COLLINS DICTIONARY 0FBI0L0GY(1991)。半胱胺是蛋白质谷胱甘肽(GSH)前体的前体，并且当前经FDA批准用于治疗胱氨 酸贮积症、溶酶体内胱氨酸贮积症。在胱氨酸贮积症中，半胱胺通过将胱氨酸转变成半胱 氨酸和半胱氨酸_半胱胺混合性二硫化物起作用，然后半胱氨酸和半胱氨酸_半胱胺混合 性二硫化物分别通过半胱氨酸转运体和赖氨酸转运体离开溶酶体(Gahl等，N Engl J Med 2002；347(2) :111_21)。在胞质溶胶内，混合性二硫化物可以通过其与谷胱甘肽反应而被 还原，并且所释放的半胱氨酸可以用于进一步的GSH合成。从半胱氨酸合成GSH由两个酶 催化，即Y-谷氨酰半胱氨酸合成酶和GSH合成酶。该途径存在于几乎所有细胞类型中，肝 脏是GSH主要的生产者和输出者。还原的半胱氨酸-半胱胺混合性二硫化物也将释放半 胱胺，其之后在理论上能够再进入溶酶体、结合更多的胱氨酸并且重复该过程(Dohil等，J Pediatr 2006 ； 148 (6) 764-9)。在患有胱氨酸贮积症的儿童中的最新研究中，肠内施用半 胱胺导致血浆半胱胺水平增加，这随后导致在降低白细胞胱氨酸水平中有效性延长(Dohil 等，J Pediatr 2006 ； 148 (6) 764-9)。这可能还源于当足够量的药物到达溶酶体时半胱胺 的“再循环”。如果半胱胺以该方式起作用，则GSH的产生也可显著增加。
半胱胺是潜在的胃酸促泌素，其已经用于在实验室动物中诱导十二指肠溃疡；在 人和动物中的研究已经显示，半胱胺诱导的胃酸分泌过多最有可能通过高胃泌素血症介 导。在先前对患有经历常规上胃肠道症状的胱氨酸贮积症儿童开展的研究中，显示单口服 剂量的半胱胺(ll-23mg/kg)引起高胃泌素血症并且胃酸过量分泌增加2至3倍，并且血清 促胃液素水平增加50%。这些个体经受的症状包括腹痛、胃灼热、恶心、呕吐、和食欲缺乏。 均要求于2006年1月26日提交的美国临时专利申请号60/762，715的优先权的美国专利 申请号11/990，869和公布的国际公布号WO 2007/089670 (它们均全部通过弓|用并入本文) 表明，半胱胺诱导的高胃泌素血症部分地因为对敏感个体中胃窦占优势的G细胞的局部影 响而出现。数据还表明，这也是由半胱胺引起的全身性促胃液素释放效应。取决于施用途 径，血浆促胃液素水平通常在胃内递送之后30分钟内达到峰值，而血浆半胱胺水平峰值较 迟。患有胱氨酸贮积症的受试者需要在整天中每6小时摄入口服半胱胺 (CYSTAG0N )。当定期服用时，半胱胺可以减少细胞内胱氨酸高达90% (如在循环白细胞中 所测量)，并且这已经证明降低进展至肾衰竭/移植的速率，并且也避免甲状腺替代治疗的 需要。由于服用CYSTAG0N 的难度，减少所需要的剂量改善对治疗方案的依从性。国际公 布号WO 2007/089670证明，半胱胺向小肠的递送减少了胃不适和溃荡，增加了 Cmax并且增 加了 AUC。半胱胺向小肠内递送是有用的，这是因为从小肠的吸收速率提高和/或当通过小 肠吸收时更少半胱胺经历肝脏的首过清除。在治疗一小时内观察到白细胞胱氨酸的降低。本公开提供用于治疗脂肪肝疾病和病症的半胱胺制品。半胱胺制品通常指半胱 胺、胱胺、或其生物学活性代谢物、或半胱胺或胱胺的组合，并且包括半胱胺或胱胺盐、酯、 酰胺、烷基化化合物、前体药物、类似物、磷酸化化合物、硫酸化化合物、或者通过诸如标记 (例如以放射性核素或多种酶标记)、或共价聚合物附着如聚乙二醇化(以聚乙二醇衍生) 的技术对它们进行化学修饰的其它形式。半胱胺制品包括半胱胺、胱胺、生物活性代谢物、通过诸如酯化、烷基化(例如Cl、 C2或C3)、标记(例如以放射性核素或多种酶标记)、共价聚合物附着如聚乙二醇化(以聚 乙二醇衍生)的技术化学修饰的化合物的形式、或其混合物。在一些实施方案中，半胱胺制 品包括，但不限于，盐酸盐、酒石酸氢盐、磷酸化衍生物、和硫酸化衍生物。其它半胱胺制品 的实例包括2-氨基丙硫醇-1、1-氨基丙硫醇_2、N-和S-取代半胱胺、AET、氨基烷基衍生 物、磷硫酰、氨磷汀(美国专利4，816，482)。在一个实施方案中，半胱胺制品明确排除N-乙
酰半胱氨酸。在一个实施方案中，半胱胺制品包括，但不限于，下述结构
H2N-^⑴
X1
S(CH2)PINHCNR1R2
I(Π)
SeCHzJnNHeNR^z
X1
7
其中η代表2或3，R1和R2每一个代表氢原子、或任选由羟基、氨基、烷氨基或二 烷氨基取代的烷基，或代表环烷基或芳基，并且X1代表选自=N-CN、= N-NO2, = N-C0R3、= N-NR-COOR3、= N-NR-CONH2、= N-SO2R3、= CH-NO2、-CH-SO2R3、= C (CN)2, = C (CN) COOR3 和= C(CN)CONH2的基团，其中R3是烷基或芳基。在另一个方面，半胱胺制品可包含连接至任意
数量如下所述非毒性基团的半胱胺基 其中R1代表氢原子或者具有1至10个碳原子的直链或支链烷基。半胱胺制品的药物可接受的盐也包括在内，并且包括药物可接受的阴离子和/或 阳离子。除了其它，药物可接受的阳离子包括碱金属阳离子(例如Li+、Na+、K+)、碱土金属 阳离子(例如Ca2+、Mg2+)、非毒性重金属阳离子和铵(NH4+)和取代铵(N(R' )4+，其中R'是 氢、烷基、或取代烷基，即包括甲基、乙基或羟乙基，特别是三甲基铵、三乙铵和三乙醇铵阳 离子)。除了其它，药物可接受的阴离子包括卤化物(例如Cl_、Br_)、硫酸盐、乙酸盐类(例 如乙酸盐、三氟乙酸盐)、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐和乳酸盐。半胱胺制品可以是肠溶衣包被的。肠溶衣包被的药物或片剂通常指用这样的物质 (肠溶衣)包被的药物或片剂，其使得药物或片剂经过胃时保持完整或者基本完整但是在 小肠中溶解和释放药物。肠溶衣可以是包住药物核心(例如胱胺、半胱胺、CYSTAG0N 或其它半胱胺制品) 的聚合材料或者多种聚合材料。通常，在药物或治疗活性剂从剂型释放之前相当大量的或 者全部的肠溶衣材料溶解，以便实现药物核心的延缓释放或递送。适宜的PH敏感聚合物是 一种在更高PH水平( !1大于4.5)的肠环境中(例如小肠内)溶解的材料，并且因此允许 药物活性物质在小肠区释放，并且在GI道的上面部分，例如胃中不消化。半胱胺制品还可包括额外的药物可接受的载体或赋形剂。药物可接受的载体或赋 形剂通常指适宜向受试者施用的材料，其中载体或赋形剂不是生物有害性的，或者以另外 的方式导致不良作用。此类载体或赋形剂通常是药物的惰性成分。通常，载体或赋形剂连 同活性成分一起向受试者施用，而不会导致任何不良生物作用或者不会以有害的方式与包含它的药物组合物的其它成分相互作用。半胱胺制品或者其它活性成分可包含药物可接受的盐、酯或其它衍生物。例如， 盐、酯或其它衍生物包含与母体化合物具有相似生物学作用的生物活性形式。示例性盐包 括盐酸盐和酒石酸氢盐。本公开的活性成分、药物或其它成分可包含稳定剂。稳定剂通常指降低储藏环境 条件下药物降解速率，特别是口服药物制剂的降解速率。如本文所使用，“治疗有效量”或者“有效量”指足以导致症状改善，例如相关医学 状况治疗、治愈、预防或改善，或者此类状况的治疗、治愈、预防或改善速率增加的化合物的 量，通常在所治疗的患者群体中提供统计学显著的改善。当提到单独施用的各个活性成分 时，治疗有效剂量指该单独成分的治疗有效剂量。当提到组合时，治疗有效剂量指产生治疗 效果的活性成分的组合量，而不论是否组合施用，包括连续或同时施用。在一个实施方案 中，治疗有效量的半胱胺制品改善症状，包括但不限于，肝纤维化、肝脂肪含量、肝硬化发生 或进展、肝细胞癌发生、提高的肝脏氨基转移酶水平如ALT和AST、提高的血清铁蛋白、提高 水平的Y-谷氨酰转移酶(Y-GT)、和提高水平的血浆胰岛素、胆固醇和甘油三酯。非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)代表在缺乏酒精滥用情况下发生的一系列疾病。其 特征为存在脂肪变性(肝脏中的脂肪)并且可表现为代谢综合征的肝脏表现(包括肥胖 症、糖尿病和高甘油三酯血症)。NAFLD与胰岛素抵抗相联系，其引起成人和儿童肝疾病， 并且可最终导致肝硬化(Skelly 等，J Hepatol 2001 ；35 195-9 ；Chitturi 等，H印atology 2002 ；35 (2) :373-9)。NAFLD的严重性覆盖从相对良性的孤立的占多数的大液泡脂肪变性 (即非酒精性脂肪肝或NAFL)至非酒精性脂肪性肝炎(NASH) (Angulo等，J Gastroenterol Hepatol 2002 ； 17Suppl :S186_90)。NASH特征在于组织学上存在脂肪变性、细胞学上膨胀、 分散的炎症和细胞外周纤维化(Contos等，Adv Anat Pathol 2002 ；9 :37_51)。由NASH引 起的肝脏纤维化会进展成肝硬化或肝衰竭，并且在一些情况下会导致肝细胞癌。胰岛素抵抗(和高胰岛素血症)的程度与NAFLD的严重性相关，在患有NASH的 患者中比患有单纯脂肪肝的患者中更显著(Sanyal等，Gastroenterology2001 ； 120 (5) 1183-92)。结果，发生脂解的胰岛素介导抑制并且循环脂肪酸水平增加。与NASH有关的两 个因素包括胰岛素抵抗和增加的游离脂肪酸向肝脏的递送。胰岛素阻断线粒体脂肪酸氧 化。用于肝脏再酯化和氧化的游离脂肪酸的产生增加导致肝内脂肪的积累并且增加肝脏对 二次损伤的易伤性。谷胱甘肽(Y谷氨酰_半胱氨酰_甘氨酸；GSH)是主要的内源抗氧化剂并且其耗 竭涉及肝细胞损伤的发展(Wu等，J Nutr 2004； 134 (3) :489_92)。一种此类损伤是醋氨 酚中毒，其中在试图缀合和失活药物的肝毒性代谢物时，降低的GSH水平变得耗竭。在给 于毒性剂量的醋氨酚之后，过多的代谢物(N-乙酰-苯醌亚胺)共价结合至肝脏蛋白质和 酶，导致肝脏损伤(Wu 等，J Nutr2004 ； 134 (3) :489_92 ；Prescott 等，Annu Rev Pharmacol Toxicoll983 ；23 :87_101)。因此，增加的谷胱甘肽水平似乎通过ROS还原具有一些保护 作用。谷胱甘肽本身不易进入细胞内，甚至当以大量提供时亦如此。然而，谷胱甘肽前体 的确进入细胞，并且已经证明一些GSH前体，例如N-乙酰半胱氨酸通过减慢或防止GSH耗 竭在治疗一些病症如醋氨酚毒性中是有效的(Prescott等，Annu Rev Pharmacol Toxicol 1983 ；23 87-101)。GSH前体实例包括半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、甲硫氨酸和其他含硫化合物，例如半胱胺(Prescott 等，J Int Med Res 1976 ；4(4Suppl) 112-7) 半胱氨酸是GSH合成的主要限制因子并且刺激细胞摄取半胱氨酸的那些因子(例 如胰岛素和生长因子)通常导致细胞内GSH水平增加(Lyons等，Proc NatlAcad Sci U S A 2000 ；97 (10) 5071-6 ；Lu SC.Curr Top Cell Regul2000 ；36 :95_11)。N-乙酰半胱氨酸已经施于患有NASH的患者。在来自土耳其的报告中，患有NASH 的肥胖个体以N-乙酰半胱氨酸治疗4-12周表现出氨基转移酶水平和、-GT得以改善，即 使没有报告受试者体重指数发生变化(Pamuk等，J GastroenterolHepatol 2003 ；18 (10) 1220-1)。半胱胺(HS-CH2-CH2-NH2)因其体积小的原因能够跨过细胞膜。在当前，半胱胺经 FDA批准仅用于治疗胱氨酸贮积症，即一种溶酶体内的胱氨酸贮积病症。在胱氨酸贮积症 中，半胱胺通过将胱氨酸转变成半胱氨酸和半胱氨酸_半胱胺混合性二硫化物而起作用， 然后它们均能够分别通过半胱氨酸和赖氨酸转运体离开溶酶体(Gahl等，N Engl J Med 2002 ；347 (2) :111_21)。使用半胱胺的治疗已经表明导致循环白细胞内的细胞内胱氨酸水 平降低(Dohil 等，J. Pediatr2006 ;148(6) :764_9)。在小鼠和人中的研究显示半胱胺在预防醋氨酚诱导的肝细胞损伤中是有效的 (Prescott 等，Lancet 1972 ；2 (7778) 652 ；Prescott 等，Br Med J1978 ；1(6116) :856_7 ； Mitchell 等，Clin Pharmacol Ther 1974 ；16 (4) :676_84)。已经报道胱胺和半胱氨酸减少 由数种肝脏毒素诱导的肝细胞坏死(Toxicol AppIPharmaco 1. 1979Apr ；48 (2) :221_8)。已 经证明，胱胺通过抑制组织转谷氨酰胺酶来改善由四氯化碳诱导的肝纤维化(Qiu等，World J Gastroenterol. 13 :4328_32，2007)。NAFLD在儿童中的患病率未知，这是因为需要肝脏的组织学分析以证实诊断 (Schwimmer等，Pediatrics 2006 ； 118 (4) 1388-93) 然而，发病率的估计可以从使用肝 脏超声影像和提高的血清转氨酶水平的儿科肥胖症数据以及患有NAFLD的儿童的85%是 肥胖这一知识推断出来。来自国民健康与营养调查(theNational Health and Nutrition Examination Survey)的数据已经显示，在儿童期和青少年肥胖症中的发病率在过去的35 年中增加3倍；来自2000年的数据表明，14-16%的6-19岁儿童是肥胖的，其中BMI >95% (Fishbein 等，J PediatrGastroenterol Nutr 2003 ；36(1) :54_61)，并且也表明 了患有 NAFLD的儿童中85%是肥胖的这一事实。在经组织学证明患有NAFLD的患者中，血清肝脏氨基转移酶，特别是丙氨酸氨基 转移酶(ALT)水平从正常值的上限提高至该水平的10倍(Schwimmer等，JPediatr 2003 ； 143(4) 500-5 ；Rashid 等，J Pediatr Gastroenterol Nutr2000 ；30(1) :48_53)。ALT/ AST (天冬氨酸氨基转移酶)比> 1(范围为1.5-1. 7)，这不同于酒精性脂肪性肝炎，在酒精 性脂肪性肝炎中比率通常< 1。在NASH中会异常提高的其他异常血清学检验包括γ-谷氨 酰转移酶(Y-GT)和空腹血浆胰岛素、胆固醇和甘油三酯水平。由NAFLD发展成NASH的确切机制仍然不明了。由于胰岛素抵抗与NAFLD和NASH 均相关，所以推测对于NASH的出现还需要其他另外因子。这被称为“两次打击(two-hit)” 假设(Day CP. Best Pract Res Clin Gastroenterol2002 ； 16 (5) :663_78)并且包括首先月旨 肪在肝脏内积累，其次是具有增加的氧化应激的大量自由基的存在。大液泡脂肪变性代表 甘油三酯的肝脏积累，并且这反过来是由于游离脂肪酸向肝脏的递送和利用之间的不平衡引起。在增加的热卡摄取量期间，甘油三酯将积累并充当储备能源。当饮食热卡不足时，储 存的甘油三酯(在脂肪中)被脂解并且脂肪酸被释放进入循环并被肝脏吸收。脂肪酸的氧 化将产生用于利用的能量。当前的NASH治疗围绕着两个主要发病因子的降低，即肝脏内的 脂肪积累和引起氧化应激的自由基的过度积累。脂肪积累通过减少脂肪摄入以及增加热消 耗来减少。一种治疗方法是持续地并且稳定地减轻体重。虽然没有最终证明，但是> 10 %的 体重损失在一些情况下已经证明减少肝脏的脂肪积累，使肝脏转氨酶正常并且改善肝脏炎 症和纤维化(Ueno 等，Jifepatol 1997 ；27(1) 103-7 ；Vajro 等，J Pediatr 1994 ；125(2) 239-41 ；Franzese 等，Dig Dis Sci 1997 ；42 (7) 1428-32)。通过使用抗氧化剂治疗对氧化应激的降低也已经在一些研究中证明是有效的。 例如，具有脂肪变性的肥胖儿童以维生素E(400-1000IU/天)治疗4-10个月(Lavine J Pediatr 2000 ； 136 (6) :734_8)。无论 BMI 的任何明显变化，平均 ALT 水平从 175士 106IU/ L 降低至 40士26IU/L(P < 0. 01)并且平均 AST 水平从 104士61IU/L 降低至 33士 11IU/L(P < 0.002)。在被选择中断维生素E治疗的那些患者中肝脏转氨酶增加。使用维生素E对成 人治疗一年的研究证明了肝脏转氨酶以及纤维化标志物TGFii水平的相似降低(Hasegawa 等，Aliment PharmacolTher 2001 ；15(10) 1667-72) 脂肪变性还会通过源于活性氧物质(reactive oxygen species，R0S)和降低 的抗氧化剂防御的氧化应激而发展成脂肪性肝炎(Sanyal等，Gastroenterology 2001 ； 120(5) 1183-92). ROS可以在肝脏中通过几个途径产生，包括线粒体、过氧化物酶体、细胞 色素P450、NADPH氧化酶和脂氧化酶(Sanyal 等，Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2005 ；2(1) 46-53)。已经证明，胰岛素抵抗和高胰岛素血症通过增加肝脏CYP2EI活性而 增加肝脏氧化应激和脂质过氧化作用(Robertson等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol2001 ；281 (5) :G1135_9 ;Leclercq 等，J Clin Invest 2000 ； 105 (8) 1067-75) 当前，从动物研究中增加了对NAFLD发病机制的了解。存在表现为脂肪变性/脂 肪性肝炎的大量小鼠模型，并且包括遗传改变的瘦蛋白缺陷(ob/ob)或瘦蛋白抵抗(db/ db)和饮食甲硫氨酸/胆碱缺陷(MCD)模型。在不同品系(Wi star、Sprague-Dawley、 Long-Evans)雄性和雌性大鼠与作为NASH模型的小鼠品系(C57BL/6)之间开展比较研究。 这些动物用MCD饮食喂养4周；虽然在Wistar大鼠中ALT增加和脂肪变性更显著，但是小 鼠肝脏中总体组织学变化与由于NASH引起的变化更加恒定。最近，对动物使用超营养饮食 产生了生理上更像人表型的NAFLD模型。通常与NAFLD最相关的医学病症是肥胖症、II型 糖尿病和血脂异常症。这些病症可以通过以高脂肪或蔗糖食物喂食小鼠和大鼠诱导。以 > 70%的富含脂肪食物喂食3周的大鼠产生全叶脂肪变性、斑块炎症、增强的氧化应激和 提高的血浆胰岛素浓度，表明胰岛素抵抗。NASH小鼠已经通过胃内喂养过度诱导。将小鼠 喂养超过标准摄食直到85%达9周。小鼠变成肥胖的，最终体重增加71% ；经证明它们增 加了白脂肪组织、高血糖症、高胰岛素血症、高瘦蛋白血症、葡萄糖耐受不良和胰岛素抵抗。 在这些小鼠中，46%发展成提高的ALT(121+/-27对13+/-1U/L)以及暗示NASH的组织学特 征。过量喂食小鼠的肝脏是预期的大约两倍大，颜色为灰棕色，显微镜下观察到脂滴、细胞 质液泡和炎症簇的证据。通过特定食物(甲硫氨酸胆碱缺乏，MCD)或者胃内过量喂食产生NASH小鼠模型。 这些小鼠发展成NASH的血清学和组织学特征。NASH小鼠在筛选和测量半胱胺对NASH相关
11疾病和病症的效应中是有用的。例如，治疗效果可以通过将NASH小鼠分成其中动物将仅持 续接受MCD食物的对照组和其中小鼠将接受MCD食物以及抗氧化治疗的三个其他治疗组来 测量。三个治疗组将接受半胱胺50mg/kg/天、100mg/kg/天和sAME。半胱胺是能够容易地跨过细胞膜的小分子(HS-CH2-CH2-NH2)。半胱胺是已经用于 实验室动物中诱导十二指肠溃疡的有效胃酸促泌素；在人和动物中的研究已经表明半胱胺 诱导的胃酸分泌过多最有可能通过高胃泌素血症介导。此外，巯基(SH)化合物如半胱胺、胱胺和谷胱甘肽是当中最重要的并且是有效的 细胞内抗氧化剂。半胱胺保护动物不患骨髓和胃肠道放射综合征。对于SH化合物重要性的 理论通过在有丝分裂细胞中的观察进一步得到支持。在细胞生殖死亡期中，这些对放射性 损伤最敏感，并且注意到具有最低水平的SH化合物。相反，证明使用同一标准对放射损伤 抵抗最强的S期细胞具有最高水平的固有SH化合物。此外，当有丝分裂细胞用半胱胺处理 时，它们变得对放射有极大的抵抗。还已经注意到，半胱胺可直接保护细胞对抗诱发突变。 该保护被认为源于或者直接或者通过蛋白质所结合GSH的释放对自由基的清除。已经报道 了鸟类肝脏和猪肾脏中的从辅酶A释放半胱胺的酶。最近，研究似乎证明了半胱胺针对肝 脏毒剂醋氨酚、溴苯和鬼笔环肽的保护作用。此外，胱胺就其作为放射防护剂的作用而言，已经发现在具有亨廷顿病(HD)基因 突变的小鼠中能减轻震颤和延长生命。药物可通过增加保护神经细胞或神经原不变性的蛋 白质的活性而起作用。胱胺表现出使称作转谷氨酰胺酶的酶失活并且因此导致亨廷顿蛋白 减少(Nature Medicine 8，143-149，2002)。此外，发现胱胺增加某些神经保护性蛋白质的 水平。然而，由于当前胱胺递送方法和制剂的原因，降解和摄取差需要过量的剂量方案。目前，半胱胺被FDA批准仅用于治疗胱氨酸贮积症。患有胱氨酸贮积症的患者通 常需要每6小时摄入半胱胺一次。理想情况下，具有大概每天施用两次的半胱胺的有效控 制释放制剂将改善这些患者的生活质量。本公开不限于特定的半胱胺或胱胺盐或酯或衍生物；本公开的组合物可以包含任 何半胱胺或胱胺、半胱胺或胱胺衍生物、或半胱胺或胱胺的组合。组合物中的活性剂，即半 胱胺或胱胺，可以以药物可接受的盐、酯、酰胺、前体药物或类似物的形式施用或者作为其 组合施用。活性剂的盐、酯、酰胺、前体药物和类似物可以使用合成有机化学领域技术人员 已知的并描述于例如 J. March, “ Advanced Organic Chemistry !Reactions, Mechanisms and Structure,“第 4 版(New York =Wiley-Interscience, 1992)的标准方法制备。例如， 碱加成盐使用常规方法从中性药物制备，包括一个或一个以上活性剂游离羟基与适宜碱的 反应。通常，药物的中性形式溶解于极性有机溶剂，例如甲醇或乙醇中，并且向其中加入碱。 所得到的盐或者沉淀出或者通过加入极性较小的溶剂被带出溶液。用于形成碱加成盐的适 宜的碱包括，但不限于，无机碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、三甲胺等。酯 的制备涉及可在药物分子结构中存在的羟基的官能化。酯通常是游离醇基——即来源于具 有式R-C00H的羧酸的部分，其中R是烷基，并且通常是低碳烷基——的酰基取代衍生物。如 果需要，酯可以通过使用常规氢解或者水解方法再转变成游离酸。酰胺和前体药物的制备 可以以类似的方式开展。活性剂的其他衍生物和类似物可以使用合成有机化学领域技术人 员已知的标准技术制备，或者可以参考相关文献推导出。本公开的方法或组合物进一步提供肠溶衣组合物，所述肠溶衣组合物导致较少频率的给药(2X/天对4X/天)、提高的患者依从性和较少的胃肠副作用(例如疼痛、胃灼热、 产酸、呕吐)和其他副作用(例如患者味道类似臭鸡蛋——达到青春期的受试者的一个特 殊的依从性问题)。本公开提供肠溶衣半胱胺组合物(2充基/ CYSTAG0N )和胱胺组合物。本公开提供用于治疗脂肪酸肝疾病的方法，包括但不限于非酒精性脂肪酸肝疾病 (NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝炎引起的脂肪肝疾病、肥胖症引起的脂肪肝疾病、 糖尿病引起的脂肪肝疾病、胰岛素抵抗引起的脂肪肝疾病、高甘油三酯血症引起的脂肪肝 疾病、无β脂蛋白血症、糖原贮积病、韦-克病、沃尔曼病、妊娠急性脂肪肝和脂肪营养不 良ο本文所述方法或组合物的有效性可以例如通过测量白细胞胱氨酸浓度评价。对 本公开方法有效性的另外的量度包括评估脂肪肝疾病相关症状的缓解，包括但不限于肝纤 维化、肝脂肪含量、肝硬化的发生或进展、肝细胞癌发生、提高的肝脏氨基转移酶水平、增加 的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、增加的天冬氨酸氨基转移酶(AST)、和提高的血清铁蛋白。根 据例如脂肪肝疾病严重性和/或胱氨酸浓度，医学专科医生可以调整剂量和做出治疗。例 如，脂肪肝疾病的治疗可以导致与治疗前水平相比肝脏转氨酶减少近似10%至40%之间。 在相关实施方案中，治疗导致所治疗患者中丙氨酸氨基转移酶水平降低至高于正常ALT水 平近似30%、20%或10%，或者在正常ALT水平(彡40iu/L)。在另一实施方案中，以半胱 胺制品治疗导致患者天冬氨酸氨基转移酶水平降低至高于正常AST水平近似30%、20%或 10%或回到正常AST水平。在一个实施方案中，本公开提供使用半胱胺制品通过减少脂肪性肝炎中由活性氧 物质(ROS)引起的氧化应激而治疗NAFL的方法。半胱胺可以通过其直接或间接增加肝脏 内谷胱甘肽水平的能力达到该种治疗。谷胱甘肽具有针对氧化损伤的保护性作用，但是其 自身不能容易地进入细胞内，甚至当给予大量治疗时亦如此。然而，谷胱甘肽前体的确进入 细胞，并且包括半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、S-腺苷甲硫氨酸(SAMe)和其他含硫化合物，例 如半胱胺。本公开的组合物可以与第二试剂或用于治疗NAFLD或NASH或其他脂肪酸肝脏病 症的治疗剂组合使用。例如，半胱胺制品组合物可以与药物例如治疗胰岛素抵抗的格列酮 类/噻唑啉二酮类，包括甲磺酸溴隐亭(曲格列酮(REZULIN ))、罗格列酮(Avandia )、口比 格列酮(ACT0S )、以及其他试剂，包括但不限于，二甲双胍、磺酰脲、α -葡糖苷酶抑制剂、美 各里替尼、维生素Ε、里卜斯他丁(XENICALTM)、奶蓟蛋白(SILIPH0S )、和抗病毒剂一起施 用。减少半胱胺制品副作用的其他治疗可以与本公开的方法和组合物组合使用，以治 疗归于或源于NAFLD或NASH的疾病和病症。尿磷损失例如造成佝偻病，并且补充磷是必须 的。卡尼汀在尿中损失，并且血液水平低。卡尼汀使得脂肪被肌肉利用以提供能量。激素 补充有时是必须的。有时，甲状腺不能产生足够的甲状腺激素。这可给与甲状腺素(滴剂 或片剂)。当胰腺不能产生足够的胰岛素时，如果出现糖尿病则胰岛素治疗有时是必须的。 在用半胱胺制品治疗的儿童中，这些治疗很少是必须的，因为治疗保护了甲状腺和胰腺。如 果一些男青少年的青春期推迟的话，需要睾酮治疗。尽管具有良好的水电解质平衡，如果生 长不足，表明可以进行生长激素治疗。因此，此类治疗可以与本公开的半胱胺制品组合物和 方法组合。包括使用奥美拉唑(PRILOSEC )的另外的治疗能够减少影响消化道的不良症状。
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本公开提供用于治疗脂肪肝疾病和病症的半胱胺制品。为了向人或测试动物施 用本公开的半胱胺制品，优选将半胱胺制品配制在包含一种或一种以上药物可接受的载体 的组合物中。如上所述，药理学上可接受的或药物可接受的载体或赋形剂指这样的分子实 体和成份，即如下所述当使用众所周知途径施用时不产生过敏反应或其他不利反应，或者 其被美国食品和药品管理局或者相对应的外国监管当局批准作为经口或肠胃外施用药物 的可接受添加物。药物可接受的载体包括任何和全部的临床上有用的溶剂、分散介质、包衣 剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等等。药物载体包括药物可接受的盐，特别是当碱性基或酸性基存在于化合物中时。例 如，当酸性取代基例如-COOH存在时，考虑施用铵、钠、钾、钙等盐。另外，当酸基团存在时， 考虑化合物的药物可接受的酯(例如甲酯、叔丁酯、新戊酰氧甲酯、琥珀酰酯等等)作为化 合物的优选形式，此类酯在本领域中已知用于修改溶解和/或水解特性，以用作缓释制剂 或前体药物制剂。当碱性基(例如氨基或碱性杂芳基，例如吡啶基)存在时，则考虑酸性盐，例如盐 酸盐、氢溴化物、乙酸盐、马来酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐等等作为 施用形式。此外，化合物可以与水或普通有机溶剂形成溶剂合物。此类溶剂合物同样也被考
^^ ο半胱胺制品组合物可经口、肠胃外、经眼、鼻内、经皮、经黏膜、通过吸入喷雾、经阴 道、经直肠、或者通过颅内注射施用。术语肠胃外，如本文所使用，包括皮下注射、静脉内、肌 内、脑池内注射、或灌注技术。也考虑了静脉内、真皮内、肌内、乳房内、腹膜内、鞘内、眼球 后、肺内注射和/或在特定部位的手术植入施用。通常，对于通过任何上述方法施用的成分 基本上无热原，以及会对接受者有害的其他杂质。此外，对于肠胃外施用的成分是无菌的。包含作为活性成分的半胱胺制品的本公开药物组合物取决于施用途径可包含药 物可接受的载体或添加剂。此类载体或添加剂的实例包括水、药物可接受的有机溶剂、胶 原、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯聚合物、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸钠、海藻酸钠、水 溶性葡聚糖、羧甲淀粉钠、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、黄原胶、阿拉伯胶、酪蛋白、明胶、 琼脂、双甘油、甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蜡、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白(HSA)、 甘露醇、山梨糖醇、乳糖、药物可接受的表面活性剂等等。取决于本公开的剂型，在适当情况 下所使用的添加物选自但不限于上述或其组合。药物组合物的制剂将根据所选择的施用途径而变(例如溶液、乳剂)。包含待施 用半胱胺制品的适宜组合物可以在生理学上可接受的赋形剂或载体中制备。对于溶液或 乳剂，适宜的载体包括例如水性或醇性/水性溶液、乳液或混悬液，包括盐和缓冲介质。肠 胃外赋形剂可以包括氯化钠溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发 油。静脉内赋形剂可以包括多种添加物、防腐剂、或流体、营养物或电解质补充剂。多种水性载体，例如水、缓冲水、0. 4%盐水、0. 3%甘氨酸、或水性混悬液可包含与 适宜制造水性混悬液的赋形剂混合的活性化合物。此类赋形剂是助悬剂，例如羧甲基纤维 素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶; 分散剂或湿润剂可以是天然存在的磷脂如卵磷脂，或者烯化氧与脂肪酸的缩合产物如聚氧 乙烯硬脂酸酯，或者环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物如十七碳乙烯氧基鲸蜡醇，或者环氧乙烷与从脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或者环 氧乙烷与从脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物如聚乙烯山梨醇酐单油酸酯。水性混 悬液还可包含一种或一种以上的防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、 一种或一种以上的着色剂、一种或一种以上的调味剂和一种或一种以上的甜味剂，例如蔗 糖或糖精。在一些实施方案中，本公开的半胱胺制品可以被冻干以便保存，并且在使用前重 构于适宜载体中。任何适宜的冷冻干燥和重构技术可以采用。本领域技术人员认识到，冷 冻干燥和重构可导致不同程度的活性丧失以及使用水平将不得不调整以便补偿。适宜通过加入水制备水性混悬液的可分散粉末和颗粒提供了与分散剂或湿润剂、 助悬剂和一种或一种以上防腐剂混合的活性化合物。适宜的分散剂或湿润剂和助悬剂已经 通过上述那些例证。另外的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂也可以存在。在一个实施方案中，本公开提供肠溶衣半胱胺制品组合物的用途。肠溶衣延长释 放直至半胱胺制品到达肠道，通常是到达小肠。由于肠溶衣的存在，向小肠的递送得以改 善，由此改善了活性成分的吸收同时降低了胃的副作用。在一些实施方案中，包衣材料如此选择以致于当剂型到达小肠或者pH大于4. 5的 区域时治疗活性剂被释放。包衣可以是PH敏感性材料，其在胃的较低pH环境中保持完整， 但是在通常发现于患者小肠内的PH下崩解或溶解。例如，肠溶衣材料在大约4. 5至大约 5. 5之间pH时开始在水性溶液中溶解。例如，在剂型从胃排空之前，PH敏感材料不会遭受 明显的溶解。小肠PH逐渐地从大约4. 5提高至十二指肠球部的大约6. 5，再至小肠远端部 分的大约7. 2。为了提供对应于大约3小时(例如2-3小时)的小肠通过时间的可预测溶 解并且允许重现性地释放它们，包衣应该在小肠内的PH范围下开始溶解。因此，肠聚合物 包衣的量应该在小肠如前肠和中肠内在近似3小时的通过时间期间足以基本溶解。肠溶衣已经用于阻止药物从经口可摄取剂型的释放多年。取决于组成和/或厚 度，在肠溶衣开始分解并允许药物在胃下部或者小肠上部释放之前，肠溶衣保持对胃酸具 有抵抗力一段所需要的时间。一些肠溶衣的实例公开于美国专利号5，225，202，其通过引 用全部并入本文。如在美国专利号5，225，202中所述，先前采用的一些包衣实例是蜂蜡和 单硬脂酸甘油酯；蜂蜡、虫胶和纤维素；以及鲸蜡醇、乳香胶和虫胶，以及虫胶和硬脂酸(美 国专利号2，809，918)；聚乙酸乙烯酯和乙基纤维素(美国专利号3，835，221)；和聚甲基丙 烯酸酯的中性共聚物(Eudragit L30D) (F. W. Goodhart 等，Pharm. Tech.，第 64-71 页，1984 年4月)；甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的共聚物(Eudragits)，或者包含金属硬脂酸盐的 聚甲基丙烯酸酯的中性共聚物(Mehta等，美国专利号4，728，512和4，794，001)。此类包衣 包含脂肪和脂肪酸、虫胶和虫胶衍生物以及纤维素酸式苯二酸盐如具有游离羧基含量的那 些纤维素酸式苯二酸盐的混合物。见，Remington' s，第1590页，和Zeitova等(美国专 利号4，432，966)对于适宜肠溶衣组合物的描述。因此，由于半胱胺制品肠溶衣的原因所导 致的增加的半胱胺制品组合物小肠吸收可以导致有效性改善。通常，肠溶衣包含这样的聚合材料，所述聚合材料阻止半胱胺制品在胃的低pH环 境中释放，但是在稍微较高的PH时、通常在pH 4或5时离子化，并且因此在小肠中充分溶 解以逐渐释放其中的活性剂。因此，最有效的肠溶衣材料之一是具有大约3至5范围pKa的 多元酸。适宜的肠溶衣材料包括，但不限于，聚合明胶、虫胶、甲基丙烯酸共聚物类型C NF、
15丁酸纤维素邻苯二甲酸酯、邻苯二甲酸氢纤维素、丙酸纤维素邻苯二甲酸酯、聚醋酸乙烯邻 苯二甲酸酯(PVAP)、乙酸纤维素邻苯二甲酸酯(CAP)、1，2，4-苯三甲酸醋酸纤维素(CAT)、 羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素醋酸酯、二氧丙基甲基纤维素琥珀酸 酯、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、羟丙基甲基纤维素醋酸琥珀酸酯(HPMCAS)、和通常从丙烯 酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或甲基丙烯酸乙酯与丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯 的共聚物形成的丙烯酸聚合物和共聚物(Eudragit NE, Eudragit RL, Eudragit RS)。例如， 肠溶衣可包含Eudragit L30D、三乙基柠檬酸酯、和羟丙基甲基纤维素(HPMC)，其中包衣占 终产物的10%至13%。在一个实施方案中，半胱胺制品组合物以片剂形式施用。片剂通过首先对半胱胺 制品进行肠溶包衣制造。形成此处所述片剂的方法是通过将包含任选地与稀释剂、粘合剂、 润滑剂、崩解剂、着色剂、稳定剂等组合的肠溶衣半胱胺制品的粉末直接压片。作为直接压 片的替代方法，所压制的片剂可以使用湿法制粒或干法制粒过程制备。片剂还可以以包含 适宜水溶性润滑剂的湿材料开始的模制，而不是压制。在一些实施方案中，半胱胺制品组合物是这样的缓释或控释剂型，即其提供的半 胱胺制品的Cmax比包含相同量半胱胺制品的立即释放剂型所提供的Cmax高至少大约35%、 40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,^； 100%。在一些实施方案中， Cmax比立即释放剂型的Cmax高出可达大约75%、100%、125%或150%。Cmax指在给药后血液 中的半胱胺制品的最大剂量，并且提供了药物被全身吸收的指示量度。在一些实施方案中，缓释或控释剂型的AUC与立即释放剂型相比也增加至少大约 20%、25%、30%、35%、40%、45%、或 50%，或可达大约 50%、60%、75% 或 100%。AUC 或 “曲线下面积”涉及当在给药后测量血浆药物浓度对时间时导出的动力学曲线。具有期望药物代谢动力学特征的延缓释放、控制释放或者持续/延长释放形式的 药物组合物的制备在本领域是已知的并且可以通过多种方法实现。例如，口服控制释放系 统包括溶解控制释放(例如胶囊化溶解控制或基质溶解控制)、扩散控制释放(储存库装 置或基质设备)、离子交换树脂、渗透控制释放或胃滞留系统。溶解控制释放可以通过例如 减慢药物在胃肠道中的溶解速度、将药物掺入到可溶性聚合物中、和用不同厚度的聚合材 料将药物微粒或颗粒包衣来获得。扩散控制释放可以通过例如控制经过聚合膜或聚合基质 的扩散来获得。渗透控制释放可以通过例如控制溶剂的跨半渗透性膜的内向通量来获得， 其再携带药物通过激光钻取的孔到外面。在膜任一侧的渗透压差和流体静力压差控制着 流体转运。延长的胃滞留可以通过例如改变制剂的密度、对胃粘膜的生物黏附或者增加在 胃内的漂浮时间来获得。对于进一步的细节见Handbook ofPharmaceutical Controlled Release Technology, Wise 编，Marcel Dekker, Inc.，New York, NY(2000)，其全部内容通 过引用并入本文，例如第 22 章("AnOverview of Controlled Release Systems”)。半胱胺制品在这些制剂中的浓度可以很大程度上变化，例如按重量计从小于大 约0.5%、通常为大约或至少大约至高达15%或20%，并且主要基于流体体积、 制造工艺特点、粘度等依照所选择的特定施用模式来选择。用于制备可施用组合物的实 际方法是本领域技术人员已知或显而易见的，并且更加详细地描述于例如Remington' s Pharmaceutical Science，第 15 片反，Mack PublishingCompany, Easton, Pa. (1980)。半胱胺制品以治疗有效量存在于组合物中；通常，组合物是单位剂型。当然，所施
16用的半胱胺制品的量将依赖于受试者的年龄、体重和一般情况、待治疗病症的严重性和处 方医师的判断。适宜的治疗量将是本领域技术人员已知的和/或描述于相关的教科书和 文献中。当前的非肠溶衣剂量是大约1.35g/m2体表面积，并且每天施用4-5次。在一个方 面中，剂量或者以每天一次施用或者以每天多次施用。半胱胺制品可以每天1次、2次或3 次或4次或5次施用。在一些实施方案中，半胱胺制品的有效剂量可以在每天每kg体重
0.Olmg 至 IOOOmg(mg/kg)范围内。此外，有效剂量可以是 0. 5mg/kg、lmg/kg、5mg/kg、IOmg/ kg、15mg/kg、20mg/kg/25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、 6 Omg/kg > 7 Omg/kg > 7 5mg/kg > 8 Omg/kg > 9 Omg/kg >100mg/kg、125mg/kg、150mg/kg、175mg/kg、 200mg/kg，并且可以以25mg/kg的增量增加直到1000mg/kg，或者可以在任何两个上述数值 之间的范围。在一些实施方案中，半胱胺制品以从近似0. 25g/m2至4. Og/m2体表面积的总日 剂量施用，例如至少大约 0. 5,0. 6,0. 7,0. 8,0. 9,1. 0,1. 1、1. 2,1. 3,1. 4,1. 5,1. 6,1. 7,1. 8、
1.9 或 2g/m2，或者可达大约 0. 8,0. 9,1. 0,1. 1、1· 2,1. 3,1. 4,1. 5,1. 6,1. 7,1. 8,1. 9,2. 0、
2.2,2. 5,2. 7,3. 0、或3. 5g/m2。在一些实施方案中，半胱胺制品可以以大约1_1. 5g/m2体表 面积、或0. 5-lg/m2体表面积、或大约0. 7-0. 8g/m2体表面积、或大约1. 35g/m2体表面积的 总日剂量施用。同一活性成分的盐或酯的分子量会变化，这取决于盐或酯部分的类型和重 量。对于剂型如片剂或胶囊或包含肠溶衣半胱胺的其他口服剂型的施用，使用近似IOOmg 至IOOOmg范围的总重量。剂型经口施用至患有需要半胱胺制品治疗的脂肪肝疾病，包括但 不限于NAFLD和NASH的患者。施用会持续至少3个月、6个月、9个月、1年、2年、或更长。用于施用的组合物可与摄取或吸收促进剂一起配制以增加它们的有效性。此类 促进剂包括例如水杨酸盐、甘胆酸盐/亚油酸盐、羟乙酸盐、抑肽酶、杆菌肽、SDS、癸酸盐 等等。见例如 Fix(J. Pharm. Sci. ,85 1282-1285，1996)以及 oliyai 和 Stella (Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol.，32 :521_544，1993)。肠溶衣半胱胺制品可以包含药物领域众所周知的各种赋形剂，只要此类赋形剂没 有表现出使组合物中任何成分不稳定即可。因此，赋形剂例如粘合剂、膨胀剂、稀释剂、崩解 剂、润滑剂、填充剂、载体等等可以与半胱胺制品组合。对于固体组合物，通常需要稀释剂以 增加片剂的体积，以便提供用于压片的实际大小。适宜的稀释剂包括磷酸二钙、硫酸钙、乳 糖、纤维素、高岭土、甘露醇、氯化钠、干淀粉和糖粉。粘合剂用于给与片剂制剂以内聚特性， 并且因此保证片剂在压片后保持完整。适宜的粘合剂材料包括，但不限于，淀粉(包括玉米 淀粉和预胶化淀粉)、明胶、糖类(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖和乳糖)、聚乙二醇、蜡类、和天 然的和合成的胶类如阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素聚合物(包括羟丙基纤 维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素等等)和硅酸镁铝。润滑剂用于帮助 片剂制造；适宜润滑剂的实例包括，例如硬脂酸镁、硬脂酸钙和硬脂酸，并且通常以相对于 片剂重量不多于近似1重量百分比存在。崩解剂用于促进片剂在施用后的崩解或“瓦解”， 并且通常是淀粉类、粘土、纤维素、藻胶类、胶类或者交联的聚合物。如果期望的话，待施用 的药物组合物还可以包含少量的非毒性辅助物质，例如湿润剂或乳化剂、PH缓冲剂等等，例 如乙酸钠、山梨醇酐单月桂酸酯、三乙醇胺、醋酸钠、三乙醇胺油酸酯等等。如果期望的话， 调味剂、着色剂和/或甜味剂同样可以加入。对于加入至此处所述口服制剂的其它任选成 分包括，但不限于，防腐剂、助悬剂、增稠剂等等。填充剂包括，例如不溶性材料，例如二氧化 硅、氧化钛、氧化铝、滑石、高岭土、粉状纤维素、微晶纤维素等等，以及可溶性材料，例如甘露醇、尿素、蔗糖、乳糖、右旋糖、氯化钠、山梨糖醇等等。药物组合物还可以包含稳定剂，例如如在美国专利号4，301，146中所述的羟丙基 甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮。其它稳定剂包括，但不限于，纤维素聚合物例如羟丙基纤 维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素、邻苯二甲酸醋酸纤维素、1，2， 4-苯三甲酸醋酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠； 和乙烯聚合物和共聚物，例如聚乙酸乙烯酯、聚乙烯乙酸邻苯二甲酸酯、乙酸乙烯酯巴豆酸 共聚物、和乙烯-醋酸乙烯酯共聚物。稳定剂以有效量存在以提供期望的稳定作用；通常， 这意味着半胱胺制品与稳定剂之比至少大约1 500w/w、更通常大约1 99w/w。片剂通过首先对半胱胺制品进行肠溶包衣制造。形成此处所述片剂的方法是通过 将包含任选地与稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、稳定剂等组合的肠溶衣半胱胺制 品的粉末直接压片。作为直接压片的替代方法，所压制的片剂可以使用湿法制粒或干法制 粒过程制备。片剂还可以以包含适宜水溶性润滑剂的湿材料开始进行模制，而不是压制。在一个备选实施方案中，肠溶衣半胱胺制品被造粒，并且颗粒被压成片剂或者填 充在胶囊内。胶囊材料可以或者是硬的，或者是软的，并且通常以例如明胶带等密封。对于 口服使用的片剂和胶囊将通常包括如本文所讨论的一种或一种以上常用的赋形剂。对于剂型即包含肠溶衣半胱胺制品的片剂或胶囊的施用，使用近似IOOmg至 IOOOmg范围的总重量。剂型经口施用至患有需要半胱胺制品治疗的病症——包括但不限于 NAFLD和NASH-的患者。本公开组合物可以与用于治疗NAFL和NASH的其它治疗组合使用。例如，抗氧化 剂如甘草皂苷、五味子提取物、抗坏血酸、谷胱甘肽、水飞蓟素、硫辛酸、和d-α -生育酚、以 及肠胃外施用至受试者的甘草皂苷、抗坏血酸、谷胱甘肽、和维生素B-复合物可以组合施 用(或者在单一组合物中同时施用或者在分开的组合物中施用)。备选地，治疗剂的组合可 以相继施用。本公开方法或组合物的有效性可以通过测量肝脏中脂肪酸含量和代谢评价。临床 专科医生可以依赖于例如NAFL的严重性进行剂量调整和治疗。此外，多种前体药物可以被肠溶衣半胱胺的使用“活化”。前体药物是药理学惰性 的，它们本身不能在体内发挥作用，但是前体药物一旦被吸收则分解。前体药物方法已经成 功用于多种治疗领域，包括抗生素治疗、抗组胺药治疗和溃疡治疗。使用前体药物的优势是 活性剂被化学性保护，并且没有活性剂被释放，直到药物已经从肠道中出来并且进入身体 的细胞内。例如，许多前体药物使用S-S键。弱的还原剂，例如半胱胺，还原这些键并释放 药物。因此，本公开的组合物可用于与前体药物组合，用于药物的时控释放。在该方面中， 可以在施用前体药物之后施用本公开的肠溶衣半胱胺组合物(在预期的时间)以活化前体 药物。应当理解，虽然本公开已经结合其特定实施方案作了描述，但是前述的描述以及 下面的实施例旨在举例说明本公开，并且不限制本公开的范围。处于本公开范围内的其它 方面、优势和修改对于本公开所属领域技术人员而言是显而易见的。
实施例实施例1
肠溶衣半胱胺制剂国际公布号WO 2007/089670描述了使用鼻肠管向胱氨酸贮积症患者施用半胱胺 以确定肠施用对胱氨酸贮积症患者改善的有效性。WO 2007/089670显示，半胱胺的肠施用 提高了半胱胺的吸收速率和提高血浆半胱胺水平。肠施用还降低白细胞内的胱氨酸水平。 这些结果表明，半胱胺的肠施用比半胱胺的口服施用更有效。为了更有效和更易施用，建立了半胱胺肠溶衣制剂(Cystagon-EC)。CYSTAG0N 胶 囊(Mylan Laboratories Inc.，PA, USA)使用具有 4/6” 包衣室的 600 型 Wurster 包衣部 件进行肠溶衣包衣。包衣材料是Eudragit L30D-55 (RohmGmbH & Co KG，Darmstadt，德国) 并且 EC 化合物被包入胶囊内(The Coating Placelnc, Verona, WI, Federal facilities establishment number 2126906)。使用FDA批准的设备和材料产生胶囊。体外测试肠溶衣以证实胶囊在胃酸中的不溶解性。通过在37°C将胶囊置于IOOmL 0. IN HCL溶液中2小时中开展测试。如果少于10%的半胱胺被释放，则认为胶囊是可以 接受的。在2小时之后，用NaHCO3缓冲液将溶液pH增加至pH 6.8。如果在2小时内至少 80%的半胱胺被释放，则认为胶囊是可以接受的。使用Cystagon-EC研究了 6名成人对照受试者和6名胱氨酸贮积症患者。当患者 摄入Cystagon-EC时的血浆半胱胺水平高于当他们摄入常规半胱胺(CYSTAG0N )制剂时的 血浆半胱胺水平。此外，当胱氨酸贮积症患者摄取Cystagon-EC时，12小时低谷白细胞胱氨 酸水平保持在大约< 0. 2，并且通常低于Inmol半胱氨酸/mg蛋白质，表明该新的半胱胺制 剂当每天两次给药时是有效的。实施例2半胱胺向患有脂肪肝疾病的患者施用已经证明，半胱胺的施用通过降低损伤性胱氨酸的水平来减轻胱氨酸贮积症症 状。为了确定半胱胺对引起NASH患者中肝脏损伤的纤维化的作用，开展了以肠溶衣半胱胺 治疗12名患有非酒精性脂肪疾病的儿童和青少年的开放标记的、非随机的先导研究。已经经受生活方式改变(例如饮食和锻炼)至少3个月的明确诊断为NASH的患 者用于研究。开展全部病史及身体检查。使用了对于酸-消化疾病设计的并且先前用于摄 入半胱胺的儿童的症状分值。抽血进行肝功化验，包括肝脏转氨酶、碱性磷酸酶、胆红素和 Y -GT0还取血用于全血液计数、ESR、CRP、空腹胰岛素和空腹脂质和胆固醇水平、氧化应激 和肝纤维化的标志物(总共15ml)。记录患者重量。对于ALT的研究入口水平定义为彡60iu/L，并且对治疗的成功响应是肝脏转氨酶 水平正常化或者>35%的降低。正常ALT水平定义为40iu/L。受试者以肠溶衣半胱胺每 日两次，总日剂量lg/m2体表面积开始，最大剂量lOOOmg，每日两次。胱氨酸贮积症患者正 常摄入1-1. 5g/m2体表面积/天。主诉胃肠道症状的任何受试者的半胱胺日剂量减少10%。如果虽然剂量降低 10%胃肠道症状仍然持续3天，则允许剂量进一步降低10% (至原始剂量的50%的最大降 低)。如果尽管EC-半胱胺剂量最大量降低症状仍然持续，则将受试者从研究中去除。如果症状严重，则受试者将在任何点退出研究。如果患者已经进行了酸抑制治疗， 例如质子泵抑制剂，则要求他们在开始EC-半胱胺之前中断治疗一周。患者用EC-半胱胺最 初治疗3个月，并且最多6个月。如果检测到肝脏转氨酶水平降低10-25%，则将治疗再延长3个月。然而，如果治疗3个月后ALT水平降低< 10%，则受试者将不再参加研究。如果 在治疗6个月后血清肝脏转氨酶水平改善(> 35 % )，则监测患者另外6个月，每两个月开 展一次身体检查和相同的血液检验。行经女性将在研究开始和每个月开展血液妊娠试验。 如果必要，建议患者使用双屏障方法采取避孕措施。要求患者保留症状日志，并且还可以GCRC/诊所中观察，以便得到关于所屏蔽身 份的患者研究药物的信息。使用了对于酸-消化疾病设计的并且先前在摄入半胱胺的儿童 中使用的症状分值。每4周对患者进行一次重复血液检验，包括肝功能检验、全血计数和血 浆半胱胺水平(10ml)。在研究结束时，重复患者的所有基线实验室试验。实施例3在非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)饮食动物模型中评估对半胱胺制品效应，如 Otogawa等，Am. J.Pathol.，170 (3) =967-980(2007)所述进行。给雄性新西兰白兔喂食包 含20%玉米油和1. 25%胆固醇的高脂肪食物(HFD)，以诱导NAFLD和非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)的临床和组织学特征。7天持续时间的先导研究如下开展，在两个剂量水平即75或 250mg/kg/天以每隔8小时的方案(Q8H)腹膜内(IP)给与半胱胺酒石酸氢盐。8周持续阶 段的更长研究以25、75或250mg/kg/天递送饮用水中的半胱胺酒石酸氢盐。如在下面所进一步详细讨论，来自两个研究的数据显示，半胱胺治疗与HFD治疗 的对照组相比肝脏转氨酶(天冬氨酸氨基转移酶或AST)水平改善。AST升高被认为是 NAFLD和NASH中肝脏炎症的最佳标志物之一。与HFD食物对照动物相比，用半胱胺治疗使 AST水平降低1.6-1. 9倍，即分别降低37%至47%。数据还显示，与HFD对照组相比，半胱 胺治疗与组织损伤的一般标志物LDH的有益变化相关，并且与脂类谱标志物，例如总胆固 醇、LDL-胆固醇和HDL-胆固醇的有益变化相关。在这些兔模型中观察到的改善支持了这 样一个结论，即人非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)——包括NASH——的半胱胺治疗将赋予临 床益处。先导研究在先导研究中，通过腹膜内(IP)途径每8小时(Q8H)向喂食高脂肪饮食(HFD)的 新西兰白兔递送两个不同剂量水平的半胱胺7天。将2. 5至3. 5kg之间的雄性兔分成下 列几组1)对照标准食物，2只动物，2)对照HFD，2只动物，3)低剂量半胱胺酒石酸氢盐， 75mg/kg/天，HFD, 4只动物，和4)高剂量半胱胺酒石酸氢盐，250mg/kg/天，HFD, 4只动物。 终点包括每日标准临床观察、定量的每日食物消耗、在研究第_1、2、5和8日(SD)(尸检日) 的体重和在SD-I和SD8收集的血液样本，所述血液样品用于评定所选择的临床化学(丙氨 酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、淀粉酶、脂肪酶、总胆固醇、甘油三酯、乳 酸脱氢酶(LDH)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-胆固醇)、和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-胆固 醇))和完全血液学组。在SD8杀死动物。关于临床观察、体重或者在SD-I和SD8得到的基线血液学数值，没有发现存在药 理学上的重要差异。对于所观察到的ALT、淀粉酶、脂肪酶、甘油三酯、和HDL-胆固醇的数 值，在研究的7天当中各个组之间不存在差异。然而，在喂食HFD的那些动物中观察到总胆 固醇、LDL-胆固醇和LDH值的升高。重要的是，与HFD对照组相比，以半胱胺处理的组显示四种血清化学数值，即AST、 总胆固醇、LDL-胆固醇、和LDH得到改善。
AST已经作为NASH中肝脏炎症的最佳标志物出现，并且被认为是优于ALT的标志 物。与HFD对照组相比，在高剂量半胱胺组(250mg/kg/天)中观察到在SD8的平均AST值 降低，如图1所示。对于对照HFD组的平均AST值是19. 0U/L，而对于接受250mg/kg/天的 半胱胺的兔该值降低1. 9倍至10. 0U/L，或者仅为对照HFD值的47%。由于在对照HFD组 中仅有2只动物，因此不可能进行统计学比较。然而，在SD8的75mg/kg/天组的AST结果 与250mg/kg/天半胱胺的动物的那些结果比较表明，经过Marm-Whitney U检验，高剂量半 胱胺组与低剂量组存在统计学差异，P = 0. 03。这些数据表明，在该方案中的250mg/kg/天 的半胱胺治疗对AST值具有积极影响。在所有组当中，基线(SD-I)平均血清总胆固醇值范围从42. 5至55. 25mg/dL，这处 于20-78mg/dL的正常兔的实验室历史范围内。如图2中所示，发现与对照HFD组相比，在 SD8，接受75或250mg/kg/天半胱胺的兔的平均总胆固醇增加较少。在给予HFD的组2中 的对照兔在SD8具有842mg/dL的平均总胆固醇值，这相对于它们的基线值增加近似20倍。 接受75mg/kg/天半胱胺的组3兔具有652mg/dL的平均值，这相对于它们的基线值增加仅 大约12倍，或者比HFD对照少增加23%。在接受250mg/kg/天半胱胺的组4中的兔在SD8 的平均值为347mg/dL，这相对于它们的基线值仅增加大约7. 5倍，或者比HFD对照值少增加 59%。这些数据显示半胱胺治疗导致由HFD饮食所致的血清总胆固醇增加产生明显的剂量 依赖性降低。LDL-胆固醇值似乎也受半胱胺给药的影响。如对于总胆固醇标志物所见，在对照 HFD组中观察到的LDL-胆固醇的增加在以75或250mg/kg/天的半胱胺治疗的那些兔中显 著减少，如图3中所示。在所有组当中，在基线的平均LDL-胆固醇值范围从9.5至18mg/ dL，其处于4至19mg/dL的实验室历史范围内。在SD8，对照HFD兔具有272. 5mg/dL的平均 值，这相对于基线增加大约29倍。在以75mg/kg/天半胱胺治疗的组3中的兔在SD8具有 210mg/dL的平均值，这相对于它们各自的基线值增加仅大约12倍，或者比HFD对照少增加 23%。以250mg/kg/天治疗的组4中的兔具有150. 5mg/dL的平均LDL-胆固醇值，这相对 于它们的基线值增加仅大约14倍，或者比HFD对照少增加45%。这些数据显示半胱胺治疗 导致由HFD饮食所致的LDL-胆固醇增加产生明显的降低。LDH值显示了相似的趋势接受75或250mg/kg/天半胱胺的兔相对于对照HFD兔 具有较少的LDH增加，如图4中所示。在组2中的对照HFD兔在SD8具有190U/L的平均LDH 值，这比它们的基线值增加1.7倍。在组3(75mg/kg/天)中的兔在SD8具有128U/L的平均 值，这相对于它们的基线值降低1. 2倍，或者在SD8时是对照HFD值的33%。在组4 (250mg/ kg/天)中的兔在SD8具有77. 5U/L的平均值，这相对于它们的基线值降低3. 1倍，或者在 SD8时是对照HFD值的59%。这些数据显示半胱胺治疗导致与饮食HFD的对照兔相比这些 LDH值产生剂量依赖性降低。数据显示，基于Q8H方案以75或250mg/kg/天的剂量IP施用半胱胺酒石酸氢盐 对喂食HFD的兔的治疗改善NAFLD中肝脏炎症和损伤的重要标志物肝脏转氨酶(AST)的水 平。半胱胺治疗还与生物化学血清标志物总胆固醇、LDL-胆固醇、和LDH的有益变化相关。 合起来看，这些数据支持这样一个结论，即半胱胺治疗可以赋予患有NAFLD例如NASH的人 患者以临床益处。8周研究
该研究的目的是评估半胱胺治疗在NAFLD和NASH的动物模型中的影响，其中给雄 性新西兰白兔喂食包含20%玉米油和1. 25%胆固醇的高脂肪食物(HFD)以产生NAFLD和 NASH特有的临床特征和组织学特征。研究设计包括8只兔的5个组。两个对照组在其饮用水中不接受半胱胺一个喂 食常规兔食物的对照组，和喂食HFD的另一对照组。在喂食HFD的兔的三个组中，将半胱胺 酒石酸氢盐以经计算递送25、75或250mg/kg/天的浓度加入到饮用水中。饮用水基于该浓 度范围的半胱胺酒石酸氢盐的室温稳定性信息而每天新鲜制备。在研究过程中的观察包括每周两次的体重，每日的食物和水消耗以及每日的临床 观察。在研究开始之前以及在第2、4、6和8周收集血液样品用于全组的血液学参数和选 择的血清化学组，包括ALT、AST、淀粉酶、脂肪酶、总胆固醇、甘油三酯、LDH、HDL-胆固醇和 LDL-胆固醇。在接受HFD的所有组中，在第8周中间左右开始临床观察，例如观察粗糙皮毛 (rough coats)和安静行为，而黄疸体征开始出现较早，在第6周的中期。一些动物在这些 相同的时限内显示出黑色或红色的尿，表明可能有胆汁堵塞(胆汁淤积)。在整个研究中， 与喂食标准食物的动物相比，喂食HFD的动物表现出软便的频率高得多。喂食HFD的动物 也表现出暗示NAFLD的组织学特征。在中间剂量半胱胺的组4中的三只动物在研究中死亡 或者在SD 51、55和56垂死时杀死。在高剂量的组5中的一只动物在SD55垂死时杀死。在 研究中的这些死亡表现出与晚期NAFLD相关。体重数据显示，喂食标准食物和HFD的动物在研究的前6周以近似相同的速率增 加体重。然而，从第7周开始，与喂食标准食物的动物相比，喂食HFD的动物开始减轻体重。 半胱胺治疗动物的体重似乎与对照HFD动物的体重平行。食物消耗数据显示，在研究的第 一周之后喂食HFD的动物比喂食标准食物的动物消耗更少的食物，这是预料之中的，其归 因于HFD的更高热焓。治疗组和HFD对照组的食物消耗相似。基于曲线下面积(AUC)，在第 6周附近，喂食HFD的动物消耗的量仅是喂食标准食物的动物所消耗食物量的大约15%至 30%。水消耗数据遵循相似的模式。与喂食标准食物的动物相比，所有喂食HFD的动物 消耗更少的水，推测这归因于HFD中水分含量更高。基于AUC，对照HFD组消耗的水是喂食 标准食物的动物所消耗水的大约65%。饮用含半胱胺的水的组所消耗的水是HFD对照组所 消耗水的大约三分之二。这些数据将表明，对这些兔而言，含半胱胺的水比对照水多少有点 不可口。在研究中，血液学数据没有表现出药理学上的重要变化。存在一个趋势，即与标准 食物对照相比，喂食HFD的对照兔中的白细胞(WBC)计数稍微增加，这主要归因于淋巴细 胞。半胱胺治疗组与HFD对照组相似。血清化学数据反映出喂食HFD的对照动物与标准食物对照动物之间的差异。在研 究结束时(第8周)，与标准食物对照值(组1)相比，组2中HFD对照动物的AST(2.6倍)、 脂肪酶(6. 6倍)、胆固醇(64倍)、甘油三酯(3. 8倍)、LDH(3倍)、HDL-胆固醇(2. 3倍) 和LDL-胆固醇(55倍)增加。淀粉酶和ALT值没有变化。AST被认为是比ALT更好的肝脏炎症标志物。在8周时，喂食HFD的对照动物具 有117. 1U/L的平均AST值，这与喂食标准食物的对照动物相比增加2. 6倍，如图5中所示。然而，在低剂量(25mg/kg/天)和高剂量(250mg/kg/天)半胱胺治疗组两个组中的平均 AST值与对照HFD动物相比降低。组3动物(25mg/kg/天)具有仅62. 5U/L的平均AST值， 这相对于HFD对照组降低1. 9倍，即减少47%。类似地，组5动物(250mg/kg/天)具有仅 75. 7U/L的平均AST值，这相对于HFD对照降低1. 6倍，即减少35%。考虑到评估通过在饮 用水中提供半胱胺的药物递送存在困难，这些AST值降低与三个半胱胺治疗组中的两个相 关是显著的。在先导研究中也发现了 AST的相似降低。如在先导研究中所观察到的，在本研究中在以半胱胺治疗的动物中也观察到了 LDH的降低。如图6中所示，在第8周时，在组2的HFD对照动物中平均LDH值为375U/L。与 组2的HFD对照相比，在所治疗动物中接触半胱胺在所有三种剂量水平下都导致LDH值降 低。在高剂量(250mg/kg/天)的组5中，在第8周时的平均LDH值是140U/L，这与125.6U/ L的组1标准食物对照组平均LDH值几乎相同。经过Marm-Whitney U检验，HFD对照LDH 值与高剂量半胱胺(250mg/kg/天)值之间的该差异具有统计学显著性，ρ = 0. 03。这些数 据显示，半胱胺治疗明显降低由HFD引起的LDH增加。公认的是，HDL-胆固醇水平是健康脂类特性的正面指示物。已知兔是对于人脂质 特性的特别好的模型，因为它们具有类似于在人中发现的那些基线比率的基线比率，并且 它们被认为是人心血管疾病的好的模型。因此，值得注意的是，在该研究中，与标准食物对 照组以及HFD对照组相比，以高剂量半胱胺(250mg/kg/天)治疗的动物显示出HDL-胆固 醇的有益增加，如图7中所示。在第8周，250mg/kg/天半胱胺组中的平均HDL-胆固醇值是 58. 3mg/dL，这超过36. 9mg/dL的HFD对照平均值1. 6倍，并且超过15. 7mg/dL的对照标准 食物值的3. 7倍。合起来看，在该8周研究中收集的数据表明，喂食HFD的兔发展出了与NAFLD和 NASH —致的肝疾病相关临床和血清学特征。在水瓶中给与半胱胺可能使得向所治疗动物的 药物递送不定。虽然如此，发现在先导研究中得以改善的相同血清化学标志物中的两个在 半胱胺存在的情况下在该8周研究中也得以改善，即AST和LDH。这些被认为是重要的发 现，鉴于AST被认为是人NASH中炎症的最佳标志物，并且LDH的降低可能也反映出更少的 炎症和可能保护这些动物避免细胞毒性。在该更长期研究中的另一个值得注意的发现是，半胱胺治疗与血清HDL-胆固醇 水平的有益提高相关。预期本领域技术人员会想到在上面例证性实施例中所述本发明中的诸多修改和 改变。因此对本发明只能做出诸如后附权利要求书中所出现的限制。
权利要求
治疗患有脂肪肝疾病的患者的方法，包括施用治疗有效量的半胱胺制品。
2.权利要求1的方法，其中所述脂肪肝疾病选自非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精 性脂肪性肝炎(NASH)、肝炎引起的脂肪肝疾病、肥胖症引起的脂肪肝疾病、糖尿病引起的脂 肪肝疾病、胰岛素抵抗引起的脂肪肝疾病、高甘油三酯血症引起的脂肪肝疾病、无β脂蛋 白血症、糖原贮积病、韦_克病、沃尔曼病、妊娠急性脂肪肝和脂肪营养不良。
3.治疗患有非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的患者的方 法，包括施用治疗有效量的包含半胱胺或胱胺或其药物可接受的盐的组合物。
4.权利要求1或3的方法，其中半胱胺制品的总日剂量是大约0.5-2. Og/m2。
5.权利要求1或3的方法，其中半胱胺制品的总日剂量是大约0.5-1. Og/m2。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述组合物以每天4次或更少次数的频率施用。
7.权利要求6的方法，其中所述组合物每天2次施用。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述组合物是向小肠提供增加递送半胱胺或半 胱胺衍生物的缓释或控释剂型。
9.权利要求8的方法，其中所述缓释或控释剂型提供了这样的半胱胺或半胱胺衍生物 或其生物学活性代谢物的Cmax，即其比由包含相同量的半胱胺或半胱胺衍生物的立即释放 剂型所提供的Cmax高至少大约35%。
10.权利要求8的方法，其中所述缓释或控释剂型提供比立即释放剂型的Cmax高至少大 约 50% 的 Cmax。
11.权利要求8的方法，其中所述缓释或控释剂型提供比立即释放剂型的Cmax高可达大 约 75% 的 Cmax。
12.权利要求8的方法，其中所述缓释或控释剂型包含肠溶衣，当所述组合物到达受试 者的小肠或者胃肠道中PH大于大约4. 5的区域时所述肠溶衣释放所述半胱胺制品。
13.权利要求12的方法，其中所述组合物包含选自聚合明胶、虫胶、甲基丙烯酸共聚物 类型C NF、丁酸纤维素邻苯二甲酸酯、邻苯二甲酸氢纤维素、丙酸纤维素邻苯二甲酸酯、聚 醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、乙酸纤维素邻苯二甲酸酯(CAP)、1，2，4-苯三甲酸醋酸纤 维素(CAT)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素醋酸酯、二氧丙基甲基纤 维素琥珀酸酯、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、羟丙基甲基纤维素醋酸琥珀酸酯(HPMCAS)、和 通常从丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或甲基丙烯酸乙酯与丙烯酸酯和甲 基丙烯酸酯的共聚物形成的丙烯酸聚合物和共聚物的包衣。
14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述组合物经口施用。
15.权利要求1或3的方法，其中所述组合物肠胃外施用。
16.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致与施用所述半胱胺制品之前的水平相比 肝纤维化改善。
17.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致肝脂肪含量减少。
18.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致肝硬化发病率或进展降低。
19.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致肝细胞癌发病率降低。
20.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致与施用所述半胱胺制品之前的水平相比 肝脏氨基转移酶水平降低。
21.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致与治疗前水平相比肝脏转氨酶降低近似10%至40%之间。
22.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致所治疗患者中丙氨酸氨基转移酶水平降 低至高于正常ALT水平近似30%、20%或10%，或者在正常ALT水平(彡40iu/L)。
23.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致所治疗患者中天冬氨酸氨基转移酶水平 降低至高于正常AST水平近似30%、20%或10%或者降低至正常AST水平。
24.权利要求1或3的方法，其中所述施用导致与使用所述半胱胺制品治疗前水平相比 血清铁蛋白水平降低。
25.权利要求1-24中任一项的方法，其中所述半胱胺制品与用于治疗脂肪肝疾病的第 二制剂一起施用。
26.权利要求1-25中任一项的方法，其中所述患者是儿童或青少年。
全文摘要
本发明公开一般涉及脂肪肝病症的治疗，包括施用包含半胱胺制品的组合物。本发明公开提供肠溶衣半胱胺组合物的施用以治疗脂肪肝病症，例如非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
文档编号A61K31/095GK101932238SQ200880125923
公开日2010年12月29日 申请日期2008年11月28日 优先权日2007年11月30日
发明者兰詹·多希尔, 杰里·施奈德 申请人:加利福尼亚大学董事会