专利名称：：博落回提取物在经济动物兽药中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及到从含节基异喹啉类生物碱U柳^/^^/wo/f"e^汰a/oW)的植物博落回(Mflc/e《戸coWa似(W//《兄5a:)得到的提取物在促进经济动物生长和提高饲料转化率的饲料药物添加剂和兽药方面的应用。提取物中主要含苄基异喹啉总生物碱，其中包含血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱、别隐品碱、二氢血根碱、二氢别隐品碱等。
背景技术：
：长期以来，由于动物饲料和兽药中广泛的使用抗生素、化学合成药物、激素等促生长保健剂，这类添加剂在促进畜牧业发展的同时，也带给了人类很多危害。抗生素的滥用的弊端越来越突出。主要表现在内源性感染和二重感染、微生物产生抗药性、机体的免疫力下降、残留毒副作用和环境污染。在这种形势下，世界各国都纷纷制定了与饲料药物添加剂相关的法律、法规和标准，规范和监管药物饲料添加剂的使用，从而维护国家和消费者的利益。欧盟各成员国执行最为严格的饲料药物使用制度。欧盟2003年公布了最新的《饲料添加剂准则》，迫于消费者和医学方面的压力，该准则规定，除了球虫抑制剂和滴虫抑制剂以外的药物于2006年1月1日起全部停止使用。当今，人类迫切希望回归自然，返璞归真，顺应这一世界潮流，围绕"健康动物、安全食品、健康人类"这一主题，世界各国纷纷开始研究抗生素安全替代品。天然植物源药物结构独特，不易产生耐药性，在环境中可自行降解，不至于在农产品、畜产品中长期残留或通过食物链富集，不引起对环境的不可逆破坏，对人畜相对低毒，符合绿色生态畜牧业对药品的要求，是未来兽药的重要发展方向。我国有极其丰富的植物及天然产物资源，从天然产物资源中寻找新的抗生素替代物质，确定其活性骨架，发掘先导化合物，筛选其更有效的化合物，具有极其广阔的发展前景和十分重要的意义。博落回(Macleayacordata(Willd.)R.Br.)，又名号筒草、号筒杆、泡桐杆、勃勒回是罂粟科博落回属多年生高大草本，最早记载博落回的本草文献为《本草拾遗》。现统一命名为博落回。博落回提取物，主要分布在罂粟科、芸香科、小檗科等天然植物中，落回总生物碱中主要含有血根碱(S""gm'"fln'"e)、白屈菜红碱(C/w/eo^""e)、博落回碱(5occo"/"e)、博落回宁碱(Boccow//"e)、甲氧基白屈菜红碱(C7eWw""e)、二氢血根碱(D/Zj;^myfl"g"f朋n77e)、二氢白屈菜红碱(Z)/Zz;^rac/^/eo^W"e)等苯并菲啶型生物碱及原阿片碱(iVoto;!'恥)、a-别隐品碱(a-J//oco^o;!'"e)、J3-别隐品碱(y9-J//oco^ojw'we)等原托品型生物碱和iVorsflwgw'mjrme、CbQ^a"gM/"ar/"e、/^0附0仁/^//60附>^、Co/rt>e、5e/"6en.we、C/^/Wom'恥、C/^/n/6/"e等原生物碱。现代药理研究表明博落回具有明显的抗菌、杀虫、改善肝功能、提高免疫力及抗肿瘤等作用。在博落回的应用方面，农业部兽药质量标准中收录的博落回注射液是由博落回果经提取、分离制成的生物碱硫酸盐的灭菌水溶液，其具有抗菌消炎的功能，主治仔猪的白痢、黄痢；郁建生(2007)将博落回果荚和根中经提取的有效成份总生物碱制成注射液、口服液用以治疗仔猪白痢、禽霍乱疾病取得较好效果；郁建生等将博落回与穿心莲配合制成复方博落回注射液已申请专利(专利号ZL200510020409.0)，其具有广谱清热解毒消肿、抗菌抗病毒消炎功效，主要用于治疗畜禽患流行性感冒、腹泻痢疾、仔猪白痢和黄痢等。综合文献可以得出博落回提取物的应用现主要是以治疗畜禽动物消化道疾病的兽药，且给药方式多以注射为主。本发明的所提到的博落回提取物，是60%以上的总生物碱作为兽药原料添加在饲料中进行日常饲喂，用以促进经济动物的生长和提高饲料转化率，这种作为兽药和药物饲料添加剂的应用尚未见相关报道。今年来，随着畜禽养殖业迅速发展和集约化水平的提高，养殖密度越来越大，导致了一些疾病的发生率越来越高。病原微生物对畜禽养殖业的危害性十分严重，常引起消化道、呼吸道的疾病，使幼畜幼禽生长发育迟缓，成年畜禽育肥困难。给畜禽养殖业造成严重的经济损失。选择高效低毒、使用方便的药剂来防治，成了人们普遍关心的问题。
发明内容发明人从博落回植物中提取出博落回总生物碱对其进行生物活性研究发现具有广泛的抑菌，促进经济动物生长和提高饲料转化率作用，具体试验见后。本发明所提到的博落回提取物用于制备促进经济动物生长兽药中的药物饲料添加剂或对畜禽常见病原菌巴氏杆菌、李氏杆菌和嗜血杆菌有较好的抑制作用和杀灭作用的兽药。本发明是通过将博落回提取物用于制备成兽药或药物饲料添加剂。博落回提取物中主要有效成份为天然活性成分苄基异喹啉类生物碱类可用于抑制和杀灭体内的病原微生物，促进经济动物生长和提高饲料转化率；或者是作为制备兽药的原料。所述博落回提取物来源于罂粟科植物博落回植物，将其成熟的果荚或叶或两者的混合体经提取制备而成。因本发明博落回提取物包含血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱、别隐品碱、二氢血根碱、二氢别隐品碱等。本发明所提到的博落回提取物是从博落回植物中提取分离、精制获得高纯度博落回提取物组分；采用酸水提取，碱水沉淀后，将沉淀后用醇提取，浓縮后用浓酸沉盐制备总生物碱的在60%以上。其博落回提取物含量是通过HPLC方法检测，以血根碱和白屈菜红碱的合计含量来计算博落回提取物中总生物碱原碱的含量。博落回提取物主要含苄基异喹啉生物碱，并可以以苄基异喹啉生物原碱、它的盐酸盐、硫酸氢盐或磷酸二氢盐的形式存在。本发明是将博落回提取物作为有效成分制成的抑制和杀灭病原微生物，促进经济动物生长和提高饲料转化率作用有良好效果。博落回提取物的应用是包括单独使用，或者与其他抗菌药物共同使用。在与其他抗菌兽药配合使用时也具有良好抗寄生虫作用。博落回提取物在兽药或药物饲料添加剂中的给药浓度优选为0.1-30ppm。作为药物饲料添加剂添加到猪、鸡饲料中的浓度以总生物碱计为较为优选的是0.1-5ppm。作为药物饲料添加剂添加到猪、鸡饲料中的浓度以总生物碱计最为优选的是l-5ppm。本发明所述的兽药可以通过混饲、饮水等形式给药。将博落回提取物加稀释剂相应的辅料可制成的各种剂型-预混剂或水剂等，应用于抑制和杀灭病原微生物，促进经济动物猪、鸡生长、提高饲料转化率等方面具有良好的市场前景。具体实施例方式以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。实施例l博落回提取物的制备方法取博落回果荚，用20倍量的0.5%硫酸水溶液提取，然后用碱调pH到8-10，分离沉淀后，再用90%乙醇提取，部分浓縮提取液过滤后，加浓硫酸析出大量桔红色沉淀物，干燥后得到博落回提取物，经过HPLC测定总生物含量约为66.4。/。(以原血根碱和白屈菜红碱的含量合计，以下同)，其中血根碱约为46.4%，白屈菜红碱约为20%。实施例2博落回提取物预混剂的制备实施例1方法制得的博落回提取物称取100g,，使用药物粉碎机粉碎，过120目筛，备用；再称取药用淀粉3900g。将博落回提取物与药用淀粉使用小型混合机充分混合15分钟，检查变异系数<0.5，得到博落回提取物预混剂4000克。实施例3博落回提取物对畜禽常见病原菌体外抑制试验选用博落回提取物，并测定其含量为进行试验研究,将实施例l制得博落回提取物配制的溶液分别对嗜血杆菌、李氏杆菌、巴氏杆菌、链球菌等畜禽常见的动物致病菌进行体外抑菌试验。按无菌操作规程，在无菌条件下，倾倒相应的菌种对应的培养基平板，上面涂布相应的菌种接种物，待平板凝固后，贴加药敏试纸片，用无菌镊子使纸片和平板结合紧密。同时用浸有金霉素的滤纸片做对照。每份样品做3份，结果取平均值。37'C倒置培养，并于24hH察抑菌效果，测定抑菌圈的直径，判断敏感度。判断标准抑菌环直径大于7mm者判断为有抑菌作用，抑菌环直径小于或等于7mm无抑菌作用，抑菌直径越大说明抑菌效果越好。结果检测表明博落回提取物和金霉素的浓度均为100ug/ml条件下，嗜血杆菌、李氏杆菌、及巴氏杆菌和链球菌4种畜禽常见病原菌的抑菌直径均大于7mm，显示出很好的的抑菌作用表(1)。表l博落回提取物对抑菌直径的影响(单位mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>采用试管稀释法，以金霉素作对照，测定有抑菌活性的药液的最低抑菌浓度(MIC)。博落回提取物为试验组，每组取无菌试管13支，排成一排，除第l管加入1.8mlMH用肉汤稀释1000倍的菌液，其余每管加入MH肉汤lml,在第l管加入由实例l所得博落回提取物配制的溶液原液0.21111混匀，然后吸取lml至第2管，混匀后再吸取lml至第3管，如此连续倍比稀释至第12管，并从第12管中吸取lml弃去，第13管为不含药物的生长对照。37'C培养24h，以无细菌生长的最低浓度为最小抑菌浓度(MIC)。最小抑菌浓度的检测结果表明博落回提取物对嗜血杆菌、李氏杆菌、巴氏杆菌、链球菌4种畜禽常见病原菌菌株的均有良好的抑菌效果，对革兰氏阳性和革兰氏阴性菌均有良好的抑菌效果。可见博落回提取物具有广谱的抑菌作用。试验结果表明虽然博落回提取物的最小抑菌效果浓度高于金霉素组(表2)，作为替代抗生素的药物，其来源天然、降解快、残留低、副作用小等优点，良好的市场前景。表2博落回提取物对最小抑菌浓度MIC(单位ug/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>实施例4博落回提取物对断奶仔猪生长性能的影响试验试验设计本试验采用单因素设计。选取28土2日龄体重相近(8.3±0.26kg)断奶长白x大约克二元杂交健康仔猪120头。试验开始前先用基础日粮饲喂3天，然后按初始重、公母各半原则分为12栏，分为3个处理，每个处理4栏，每栏10头猪。处理一空白对照组；处理二添加100mg/kg的金霉素；处理三添加45mg/kg的实施例2制备的博落回提取物预混剂产品。本试验在湖南新五丰股份有限公司永安分公司猪场进行。饲养管理所有试验仔猪于封闭式畜舍进行饲养，保育栏为高床金属漏缝地板铁笼，乳头式饮水器，自由饮水。消毒、免疫等其他管理照常规进行。人工添料，每天于7:00、11:00、15:00和19:00伺喂，在保证没有消化不良的前提下自由采食，出现重度腹泻或者疾病及时治疗或淘汰。记录指标平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、饲料转化率(FCR)。腹泻率=腹泻仔猪头次/仔猪总头次><100%表3博落回提取物对仔猪生长性能的影响项目_空白对照组阳性对照组博落回提取物始重(kg)8.26±0.208.29±0.238.33±0.18末重(kg)20.45±0.73a21.49±0.85ab22.59±0.58b平均采食量(g/d)656.90±20.59a706.15±39.05ab737.78±14.87b平均日增重(g/d)406.25±17.54a440.25±23.33b475.25±14.43c料肉比1.62±0.02a1.60±0.01a1.55±0.02b注标中同行字母完全不相同者表示差异显著(尸<0.05)。下同。如表3所示，3个处理组的平均日采食量和平均日增重由高到低依次为博落回提取物组、阳性对照组(金霉素)，空白对照组。与空白对照组相比，日粮中添加博落回提取物提高了平均采食量12.3%;平均日增重16.9%;料肉比下降了4.32%(p<0.05)。结果表明日粮中添加博落回提取物显著的提高了仔猪的采食量和日增重，料肉比的降低有效的改善了仔猪的生长性能。与抗生素金霉素的对照组相比较效果相当。表4博落回提取物对仔猪腹泻情况的影响指标空白对照组阳性对照组博落回提取物腹泻率(％)謹±0.72a3.01±0.26b2.64±0.80b如表4所示，阳性对照组、博落回提取物与对照组相比显著降低了腹泻率(P0.05)。本试验显示在仔猪日粮中添加博落回提取物具有促进生长和预防腹泻的作用，具有与金霉素相当效果。实施例5博落回提取物对肉猪生长性能的影响试验试验设计本试验采用单因素设计。选取长白x大约克二元杂交健康仔猪60头。试验开始前先用基础日粮饲喂3天，然后按初始重、公母各半原则分为6栏，分为2个处理，每个处理3栏，每栏10头猪。处理一空白对照组；处理二添加5ppm的实施例1制备的博落回提取物预混剂产品。表5博落回提取物对肉猪腹泻情况的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表5中可知，实验表明，为与空白对照组相比较，博落回提取物组平均采食量提高了2.2%，日增重提高了9.3%((p<0.05)差异显著，料肉比降低了6.6%(户<0.05)差异显著。可见在日粮重添加5ppm的博落回提取物对肉猪日增重和饲料利用率等生长性能指标改善有良好的效果。实施例6博落回提取物对肉鸡生长性能的影响试验试验设计本试验采用单因素试验设计，选用450只1日龄黄鸡。供试鸡生长良好，健康无病。体重基本一致。将试鸡随机分为3组，每组6个重复，每个重复25只鸡。试验期为49天。实验分为3个组组l为对照组(不添加抗生素和博落回提取物)；组2添加30mg/kg金霉素；组3添加100mg/kg实施例2制备的博落回预混剂。饲养管理试验鸡舍为开放式，自然通风，光照为14L:10D。每天记录鸡舍内的温、湿度。试鸡采用高床平养，计量不限量饲喂；自由饮水，饲喂量按推荐营养需要量结合实际采食量而定。按常规方法进行卫生清理和消毒。试验期保持食槽、水槽清洁卫生。记录指标平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、饲料转化率(FCR)。表6博落回提取物对肉鸡生长性能的影响结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表6所示结果表明3个处理组的平均日采食量和平均日增重由高到低依次为博落回提取物组、阳性对照组(金霉素)，空白对照组。与空白对照组相比，日粮中添加博落回提取物提高了平均采食量0.3%;平均日增重8.12%;料肉比下降了9.52%。在日粮中添加博落回提取物有效降低肉鸡死亡数同时，能显著的改善黄鸡的生长性能，在日粮中添加博落回提取物有与金霉素相当的效果。实施例7博落回提取物对副猪嗜血杆菌病的防治试验某实验猪场12头2月龄仔猪发生高热病，病猪表现有体温升高(4(TC以上)，精神沉郁，食欲下降，呼吸困难，被毛粗乱，皮肤发红甚至发紫，消瘦，呼吸困难，关节肿大，跛行等。经染色后均可见到革兰氏阴性的细小杆菌，细菌形态多样，以纤细杆菌者居多，间有长而弯曲丝状菌体。个别呈两极浓染的球杆状，鉴定为副猪嗜血杆菌。所有病猪日常饮用博落回提取物配制成的浓度为30ppm的水剂，连用6天。在治疗的同时，对猪舍和周围环境进行彻底消毒进行喷洒，每天一次，连用7d。2周后猪群逐渐恢复健康。权利要求1、博落回提取物在经济动物兽药中的应用，其特征在于博落回提取物用于制备促进经济动物生长和提高饲料转化率的兽药中的药物饲料添加剂或对畜禽常见病原菌李氏杆菌、嗜血杆菌和巴氏杆菌有较好的抑制作用和杀灭作用的兽药。2、根据权利要求1所述的博落回提取物在经济动物兽药中的应用，其特征在于所述博落回提取物由来源于罂粟科植物博落回，从其成熟的果荚或叶或两者的混合物中提取制备而成。3、根据权利要求1或2所述的博落回提取物在经济动物兽药中的应用，其特征在于博落回提取物中主要含有苄基异喹啉类生物碱，在提取物中以苄基异喹啉类生物碱原碱或它的盐酸盐、硫酸氢盐或磷酸二氢盐的任何一种形式存在。4、根据权利要求1所述的博落回提取物在经济动物兽药的应用，其特征在于作为药物饲料添加剂添加到猪、鸡饲料中的浓度以总生物碱计为0.1-5ppm，作为兽药添加到猪、鸡饲料中的浓度以总生物碱计为0.1-30ppm。5、根据权利要求1所述的博落回提取物在经济动物兽药的应用，其特征在于作为药物词料添加剂添加到猪、鸡饲料中的浓度以总生物碱计为l-5ppm。6、根据权利要求1所述博落回提取物在经济动物饲料中兽药的应用，其特征在于，所述的药物饲料添加剂或兽药以饲料拌喂口服的方式给药。7、根据权利要求1所述的博落回提取物在经济动物兽药的应用，其特征在于所述的药物饲料添加剂或兽药是以预混剂或水剂的使用方式。全文摘要博落回提取物在经济动物兽药中的应用，博落回提取物用于制备促进经济动物生长和提高饲料转化率的兽药中的药物饲料添加剂或对畜禽常见病原菌李氏杆菌、嗜血杆菌和巴氏杆菌有较好的抑制作用和杀灭作用的兽药。文档编号A61P31/00GK101530475SQ20091004314公开日2009年9月16日申请日期2009年4月17日优先权日2009年4月17日发明者曾建国,鹏蔡,华饶申请人:湖南美可达生物资源有限公司