专利名称：妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法
技术领域：
本发明属于薄层色谱检测技术领域，具体涉及一种利用薄层色谱检测山茱萸中熊 果酸的方法。
背景技术：
妇康丸是一种中成药，具有益气养血，行气化瘀的作用，用于产后气血不足，虚中 加瘀，寒热错杂的肋腹胀痛，腹痛，头身疼痛，恶露不绝，血晕昏迷，大便秘结，无乳等症。山 茱萸是方中臣药，含有熊果酸、齐墩果酸，山茱萸苷、苹果酸、没食子酸等，能固经止血，可用 治妇女体虚、月经过多等症。现行的质量标准采用双波长扫描法测定山茱萸中熊果酸的含 量，操作复杂，重复性差。《中国药典》采用薄层扫描法测定山茱萸药材熊果酸的含量，操作 时间长，步骤烦琐，显色误差大，稳定性和重复性相对较差。
发明内容
本发明要解决的技术问题是山茱萸药材熊果酸鉴定比较复杂，提供一种操作简 单，可行性强的检测方法。本发明的内容为妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，检测过程按如下步骤操 作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品，加甲醇制成每Iml甲醇含Img熊果酸 的溶液；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸5 10g，粉碎，加乙醇20 30ml，加热回流 1 2h，过滤，滤液蒸干，残渣加水15 20ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙 醚层，用正丁醇洗涤水层2 4次，每次20 30ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤2 4次， 每次15 20ml，倾去水层，将正丁醇层蒸干，残渣加乙醇1 2ml使之溶解，加入0. 5 Ig 中性氧化铝，水浴上拌勻，干燥，装入一预先装填好的中性氧化铝柱顶部，以甲醇40 50ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0. 5 Iml乙酸乙酯使之溶解，作为供试品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤 (2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤(1)、(2)、(3)制备的溶液在硅胶板上点样，在展开剂中展 开，喷以硫酸乙醇溶液显色，根据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶 液与步骤(1)制备的对照品溶液斑点同一 Rf值处，作对比分析。所述步骤(3)中性氧化铝柱内径为10 15mm，填充的中性氧化铝为1 2g，200 300 目。所述步骤(4)对照品溶液的点样量为2 3μ 1，供试品溶液和阴性对照溶液的点 样量为4 6μ 1，展距为6 10cm。所述展开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=(2O 3O) (6 10) 1。
所述硅胶板为硅胶G板。所述的硫酸乙醇溶液浓度为30%，制备方法为在烧杯中加入70ml乙醇，量取 30ml浓硫酸沿烧杯壁缓慢加入，边加边搅拌。所述的显色是将30%硫酸乙醇溶液喷于板上，90 110°C加热至紫红色斑点清 晰，日光下检视。本发明中，山茱萸的鉴定作了阴性对照试验，结果表明，妇康丸中其他药品不干扰 山茱萸中熊果酸的鉴定。本发明的有益效果是操作简单，价格低廉，可行性强，重复性好，有利于推广。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明作详细说明，但并不以任何方式限制本发明。实施例1妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，检测过程按如下步骤操作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品10mg，加入甲醇10ml，摇勻；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸8g，粉碎，加乙醇25ml，加热回流lh，过滤， 滤液蒸干，残渣加水15ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙醚层，用正丁醇洗涤 水层3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，每次15，倾去水层，将正丁醇层蒸 干，残渣加乙醇Iml使之溶解，加入0. 5g中性氧化铝，水浴上拌勻，干燥，装入一预先装填好 的中性氧化铝柱顶部，中性氧化铝柱内径为10mm，填充的中性氧化铝为lg，200目，以甲醇 40ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作为样品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤 (2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤⑴、(2)、(3)制备的溶液在硅胶G板上点样，对照品溶液 的点样量为2μ 1，供试品溶液和阴性对照溶液的点样量为4μ 1，展距为6cm，在展开剂中展 开，喷以体积分数为30%硫酸乙醇溶液，105°C热风加热至紫红色斑点清晰，日光下检视，根 据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶液与步骤(1)制备的对照品溶 液斑点同一 Rf值处，作对比分析。所述展开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=20 6 1。实施例1妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，检测过程按如下步骤操作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品10mg，加入甲醇10ml，摇勻；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸8g，粉碎，加乙醇25ml，加热回流lh，过滤，滤 液蒸干，残渣加水15ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙醚层，用正丁醇洗涤水 层3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，每次15ml，倾去水层，将正丁醇层蒸 干，残渣加乙醇Iml使之溶解，加入0. 5g中性氧化铝，水浴上拌勻，干燥，装入一预先装填好 的中性氧化铝柱顶部，中性氧化铝柱内径为10mm，填充的中性氧化铝为lg，200目，以甲醇 40ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作为样品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤(2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤(1)、(2)、(3)制备的溶液在硅胶G板上点样，对照品溶液 的点样量为2μ 1，供试品溶液和阴性对照溶液的点样量为4μ 1，展距为6cm，在展开剂中展 开，喷以体积分数为30%硫酸乙醇溶液，105°C热风加热至紫红色斑点清晰，日光下检视，根 据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶液与步骤(1)制备的对照品溶 液斑点同一 Rf值处，作对比分析。所述展开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=20 6 1。实施例2妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，检测过程按如下步骤操作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品10mg，加入甲醇10ml，摇勻；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸6g，粉碎，加乙醇20ml，加热回流lh，过滤，滤 液蒸干，残渣加水16ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙醚层，用正丁醇洗涤水 层2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，每次20ml，倾去水层，将正丁醇层蒸 干，残渣加乙醇2ml使之溶解，加入0. 5g中性氧化铝，水浴上拌勻，干燥，装入一预先装填好 的中性氧化铝柱顶部，中性氧化铝柱内径为12mm，填充的中性氧化铝为lg，200目，以甲醇 40ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作为样品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤 (2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤⑴、(2)、(3)制备的溶液在硅胶G板上点样，对照品溶液 的点样量为2μ 1，供试品溶液和阴性对照溶液的点样量为5μ 1，展距为6cm，在展开剂中展 开，喷以体积分数为30%硫酸乙醇溶液，95°C热风加热至紫红色斑点清晰，日光下检视，根 据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶液与步骤(1)制备的对照品溶 液斑点同一 Rf值处，作对比分析。所述展开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=25 6 1。实施例3妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，检测过程按如下步骤操作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品10mg，加入甲醇10ml，摇勻；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸5g，粉碎，加乙醇20ml，加热回流lh，过滤，滤 液蒸干，残渣加水15ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙醚层，用正丁醇洗涤水 层2次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，每次15ml，倾去水层，将正丁醇层蒸 干，残渣加乙醇Iml使之溶解，加入0. 5g中性氧化铝，水浴上拌勻，干燥，装入一预先装填好 的中性氧化铝柱顶部，中性氧化铝柱内径为10mm，填充的中性氧化铝为lg，250目，以甲醇 42ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作为样品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤 (2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤⑴、(2)、(3)制备的溶液在硅胶G板上点样，对照品溶液 的点样量为2μ 1，供试品溶液和阴性对照溶液的点样量为6μ 1，展距为6cm，在展开剂中展开，喷以体积分数为30%硫酸乙醇溶液，100°C热风加热至紫红色斑点清晰，日光下检视，根 据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶液与步骤(1)制备的对照品溶 液斑点同一 Rf值处，作对比分析。所述展开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=24 8 1。实施例4妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，检测过程按如下步骤操作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品20mg，加入甲醇20ml，摇勻；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸9g，粉碎，加乙醇30ml，加热回流2h，过滤，滤 液蒸干，残渣加水20ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙醚层，用正丁醇洗涤水 层3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，每次15ml，倾去水层，将正丁醇层蒸 干，残渣加乙醇Iml使之溶解，加入Ig中性氧化铝，水浴上拌勻，干燥，装入一预先装填好 的中性氧化铝柱顶部，中性氧化铝柱内径为15mm，填充的中性氧化铝为lg，300目，以甲醇 45ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作为样品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤 (2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤⑴、(2)、(3)制备的溶液在硅胶G板上点样，对照品溶液 的点样量为2μ 1，供试品溶液和阴性对照溶液的点样量为6μ 1，展距为8cm，在展开剂中展 开，喷以体积分数为30%硫酸乙醇溶液，105°C热风加热至紫红色斑点清晰，日光下检视，根 据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶液与步骤(1)制备的对照品溶 液斑点同一 Rf值处，作对比分析。所述展开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=30 8 1。实施例5妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，检测过程按如下步骤操作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品20mg，加入甲醇20ml，摇勻；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸8g，粉碎，加乙醇28ml，加热回流2h，过滤，滤 液蒸干，残渣加水18ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙醚层，用正丁醇洗涤水 层4次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，每次20ml，倾去水层，将正丁醇层蒸 干，残渣加乙醇Iml使之溶解，加入Ig中性氧化铝，水浴上拌勻，干燥，装入一预先装填好 的中性氧化铝柱顶部，中性氧化铝柱内径为15mm，填充的中性氧化铝为lg，300目，以甲醇 45ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作为样品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤 (2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤(1)、(2)、(3)制备的溶液在硅胶G板上点样，对照品溶液 的点样量为3 μ 1，供试品溶液和阴性对照溶液的点样量为6 μ 1，展距为10cm，在展开剂中 展开，喷以体积分数为30%硫酸乙醇溶液，105°C热风加热至紫红色斑点清晰，日光下检视， 根据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶液与步骤(1)制备的对照品 溶液斑点同一 Rf值处，作对比分析。
所述展开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲苯乙酸乙酯冰醋酸=22 7 1。实施例6妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，检测过程按如下步骤操作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品20mg，加入甲醇20ml，摇勻；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸7g，粉碎，加乙醇28ml，加热回流2h，过滤，滤 液蒸干，残渣加水18ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙醚层，用正丁醇洗涤水 层3次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，每次15ml，倾去水层，将正丁醇层蒸 干，残渣加乙醇2ml使之溶解，加入Ig中性氧化铝，水浴上拌勻，干燥，装入一预先装填好 的中性氧化铝柱顶部，中性氧化铝柱内径为15mm，填充的中性氧化铝为lg，300目，以甲醇 42ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作为样品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤
(2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤(1)、(2)、(3)制备的溶液在硅胶G板上点样，对照品溶液 的点样量为2μ 1，供试品溶液和阴性对照溶液的点样量为6μ 1，展距为8cm，在展开剂中展 开，喷以体积分数为30%硫酸乙醇溶液，105°C热风加热至紫红色斑点清晰，日光下检视，根 据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶液与步骤(1)制备的对照品溶 液斑点同一 Rf值处，作对比分析。所述展开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=22 7 1。上述实施例中，浓度为30%的硫酸乙醇溶液的制备方法为在烧杯中加入70ml乙 醇，量取30ml浓硫酸沿烧杯壁缓慢加入，边加边搅拌。上述实施例中，色谱识别结果在步骤(1)制备的对照品溶液斑点Rf值处，步骤
(3)制备的阴性对照溶液无斑点，这说明妇康丸中其他药品不干扰山茱萸中熊果酸的鉴定， 步骤⑵制备的供试品溶液在Rf值处有斑点，证明妇康丸中熊果酸的存在，进而证明本发 明薄层色谱检测方法检测了妇康丸中的山茱萸。上述实施例中，熊果酸在中国药品生物制品检定所购买，硅胶G在青岛海洋化工 厂购买，妇康丸由郑州豫密药业股份有限公司，处方及处方量为白术12重量份，党参12重 量份，茯苓12重量份，苍术12重量份，川芎12重量份，熟地黄12重量份，川牛膝12重量份， 蒲黄12重量份，香附12重量份，山茱萸(蒸)28重量份。
权利要求
妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，其特征在于检测过程按如下步骤操作(1)对照品溶液的制备称取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml甲醇含1mg熊果酸的溶液；(2)供试品溶液的制备称取妇康丸5～10g，粉碎，加乙醇20～30ml，加热回流1～2h，过滤，滤液蒸干，残渣加水15～20ml使之溶解，用乙醚洗涤至乙醚层无色，倾去乙醚层，用正丁醇洗涤水层2～4次，每次20～30ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤2～4次，每次15～20ml，倾去水层，将正丁醇层蒸干，残渣加乙醇1～2ml使之溶解，加入0.5～1g中性氧化铝，水浴上拌匀，干燥，装入一预先装填好的中性氧化铝柱顶部，以甲醇40～50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0.5～1ml乙酸乙酯使之溶解，作为供试品分析液；(3)阴性对照溶液的制备按处方量药材同法制备妇康丸(不含山茱萸)，按步骤(2)制备阴性对照分析液；(4)色谱识别吸取步骤(1)、(2)、(3)制备的溶液在硅胶板上点样，在展开剂中展开，喷以硫酸乙醇溶液显色，根据步骤(2)制备的供试品溶液和步骤(3)制备的阴性对照溶液与步骤(1)制备的对照品溶液斑点同一Rf值处，作对比分析。
2.根据权利要求1所述的妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，其特征在于所述步 骤(3)中性氧化铝柱内径为10 15mm，填充的中性氧化铝为1 2g，200 300目。
3.根据权利要求1所述的妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，其特征在于所述步 骤⑷对照品溶液的点样量为2 3iU，供试品溶液和阴性对照溶液的点样量为4 6iU， 展距为6 10cm。
4.根据权利要求1所述的妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，其特征在于所述展 开剂为甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各组分的体积比例为甲苯乙酸乙酯 冰醋酸=(20 30) (6 10) 1。
5.根据权利要求1所述的妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，其特征在于所述硅 胶板为硅胶G板。
6.根据权利要求1所述的妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，其特征在于所述的 硫酸乙醇溶液浓度为30%，制备方法为在烧杯中加入70ml乙醇，量取30ml浓硫酸沿烧杯 壁缓慢加入，边加边搅拌。
7.根据权利要求1所述的妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，其特征在于所述的 显色是将30%硫酸乙醇溶液喷于硅胶板上，90 110°C加热至紫红色斑点清晰，日光下检 视。
全文摘要
本发明公开了妇康丸中山茱萸的薄层色谱检测方法，属于薄层色谱检测技术领域，检测过程按如下步骤操作(1)称取熊果酸，加甲醇制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备；(3)阴性对照溶液的制备；(4)色谱识别，吸取步骤(1)、(2)、(3)制备的溶液在硅胶板上点样，在展开剂中展开，喷以硫酸乙醇溶液显色，作对比分析。本发明操作简单，可行性强，重复性好。
文档编号A61P15/00GK101987154SQ20091006569
公开日2011年3月23日 申请日期2009年8月7日 优先权日2009年8月7日
发明者冯金河, 张春红, 张艳红, 李建彬, 段桂生, 魏朝阳 申请人:郑州豫密药业股份有限公司