专利名称：从银杏叶中提取的三种双黄酮单体成分在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及从银杏叶中提取银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮 的方法，经药理实验证明均具有新的医药用途。具体的说是银杏双黄酮、异银杏双黄酮及 7_去甲基银杏双黄酮作为α-葡萄糖苷酶抑制剂，在制备降血糖药物中的应用。属于医药 技术领域。
背景技术：
糖尿病是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合征，系因胰岛素分泌 不足或胰岛素作用受损引起机体糖、脂肪、蛋白质、水和电解质等一系列代谢紊乱，临床以 高血糖为主要共同标志。其表现为血液及尿液中葡萄糖浓度异常升高，血糖、尿糖过高时可 出现典型的三多一少症状。久病可引起多系统损害，病情严重或应激时可发生急性代谢紊 乱如酮症酸中毒等。由于α-葡萄糖苷酶抑制剂，可与α-葡萄糖苷酶上的碳水化合物的 结合点相结合，其亲和力远大于酶的正常底物，因此，当与膳食一起进食后，α -葡萄糖苷酶 抑制剂可与小肠上皮细胞刷缘处的寡糖相竞争，占据α-葡萄糖苷酶上寡糖结合位点，使 寡糖吸收受阻，减少寡糖在小肠上部的消化，未被消化的碳水化合物被运送至小肠中下段 及结肠，导致碳水化合物在消化吸收发生在整个小肠中，延缓和延长了餐后葡萄糖的吸收， 从而降低餐后血糖增高。目前已被批准用于临床糖尿病治疗的α-葡萄糖苷酶抑制剂主要 有3种阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇，他们都是含氮的生物碱。他们通过降低餐后血 糖浓度而减少蛋白糖基化，延迟或阻止肾、视网膜神经病变发生以及缺血性心肌病的发展。 文献报道主要α -葡萄糖苷酶抑制剂有多糖、生物碱、苷类、多肽、糖苷类、黄酮类、皂苷和 酚类等。银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮是从银杏科植物银杏的干燥 叶中提取纯化分离而得。银杏树又称白果树、公孙树，是我国古老的树种之一，具有“活化 石”的美称，由于其生长规律特殊，抗病能力强而受到国内外的重视。银杏叶的化学成分有 黄酮类、萜类、内酯类、酚酸类以及生物碱、聚异戊二烯等化合物。黄酮类为银杏叶的主要有 效成分之一。黄酮类化合物有优异的抗氧化、抗病毒、防治心血管疾病、增强免疫力等作用 而受世人瞩目。谢德隆等公开了高含量银杏叶黄酮内酯浸膏对心、脑血管具有明显的保护 机体、改善功能作用(专利公开号CN1145230)。黄酮类化合物主要包括单黄酮、双黄酮和 儿茶素类物质，其中单黄酮类化合物主要是由山萘素、槲皮素和异鼠李素与各种糖基形成 的苷。文献报道提取银杏叶中黄酮类化合物主要有有机溶剂提取法、酶提取法、超声波 提取法、微波提取法等(董雯雯等报道银杏叶黄酮类化合物的研究进展，山东化工，2008年 第37卷，24-26)。此四种方法提取的银杏叶黄酮收率低，纯度不高。应国清等报道了银杏 叶用热水提取，树脂柱分离的方法可以得到纯度高达70%黄酮类化合物(中国生化药物杂 志，2006年第27卷第1期43-44)，但是得到的化合物都是极性大的单黄酮苷。专利申请号为200710052157. 9的专利公开了银杏双黄酮等双黄酮类化合物具有抑制黄嘌呤和次黄嘌 呤氧化成尿酸的能力，有明显的抗氧化活性，能有效地缓解高尿酸血症及其继发性炎症，预 防和治疗痛风症。田中忍等报道银杏叶类黄酮对大鼠食后血糖升高的抑制作用[日]/田中 忍…//YAKUGAKUZASSHI. 2004，124(9). 605-611 (国外医学中医中药分册2005年第27卷第 5期第305页)，此实验中利用的原料是从干燥银杏叶以甲醇提取，去溶剂后干燥得提取物， 银杏叶类黄酮糖苷的含量为24.8%。虽然实验表明此提取物具有抑制α-淀粉酶及α-葡 萄糖苷酶的活性，但是黄酮糖苷含量只有24. 8%，其余的成分并不清楚，是一种含有黄酮糖 苷的混合物，而不是本发明所述银杏叶双黄酮类成分。本发明的特点是首先将银杏叶利用热水浸提，除去极性大的单黄酮糖苷及水溶 性杂质，获得银杏双黄酮、异银杏双黄酮、7-去甲基银杏双黄酮三种双黄酮化合物，不含 黄酮糖苷。与文献报道银杏提取物具有α-葡萄糖苷酶的活性的是黄酮糖苷(含量只有 24.8%)的混合物具有本质的不同和显著的技术进步。我们从吸收、代谢途径入手，以现代 医学理论解释中医机理，开发有效成分明确、作用靶点清晰的天然降糖药物。本发明的突出 贡献是经实验证明了银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮具有抑制α -葡萄 糖苷酶的活性。我们经过热水浸泡1-3次，除去水溶性成分(包括单糖苷类黄酮)，然后用乙醇提 取，乙醇提取液不经过浓缩直接通过大孔树脂柱分离，得到高纯度脂溶性的双黄酮化合物， 操作简单，并且解决了浓缩后有效成分部分析出，溶液浑浊不利于上柱纯化、有效成分流失 的问题。这也是与以往公开的技术有本质的区别和进步。在制备银杏双黄酮、异银杏双黄 酮及7-去甲基银杏双黄酮时利用常压或中低压ODS柱层析分离纯化，可根据需要设计柱的 规格，可大量制备银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮，分离柱具有可反复 使用，操作简单、成本低，纯度高的特点。三种双黄酮含量均在95%以上。特别适合产业化 大量生产。经药理实验研究证明银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮均具有 很强的抑制α-葡萄糖苷酶的作用。在本专利申请之前还未有文献报道银杏双黄酮、异银 杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮具有抑制α-葡萄糖苷酶的作用。也未发现银杏双黄酮、 异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮在制备α -葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用的报 道。我们通过对银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮的进一部研究证 明银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮具有α -葡萄糖苷酶抑制剂的活性。本发明完成前未发现有关银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮作 为α-糖苷酶抑制剂、在预防和治疗降血糖方面应用的报道。本发明具有广泛的应用前景。银杏双黄酮(Ginkgetin)的结构式
权利要求
银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7 去甲基银杏双黄酮在制备α 葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用其特征在于银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银 杏双黄酮是从银杏科植物银杏(Ginkgo bilobaL)干燥叶中提取纯化分离而得。银杏双黄 酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮含量均在95%以上。
3.根据权利要求1及2所述的银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮制备 方法为取干燥银杏叶，加入40-95°C水浸泡1-3次，过滤，滤液弃去。水浸泡后的银杏叶加入 6-10倍的70-95%乙醇或甲醇回流提取1-3次，过滤，合并滤液，直接通过已经处理好的大 孔树脂柱或聚酰胺树脂柱，收集流出液，再用60-90%乙醇或甲醇洗脱3-5BV，合并流出液 与洗脱液，回收溶剂，干燥，粉碎，得银杏叶双黄酮粗品，加入石油醚提取1-3次，过滤，弃去 滤液，滤饼用60-95%乙醇或甲醇溶解，重结晶，干燥，得银杏叶总双黄酮粗晶。取银杏叶总 双黄酮，用含0. 1 %醋酸的甲醇水溶液溶解，在常压或中低压C-18反相柱上分离纯化，用含 0. 醋酸的甲醇水溶液为洗脱剂，分别收集含有三种双黄酮流分，薄层鉴定后合并，挥去 部分溶剂，分别得银杏双黄酮，异银杏双黄酮和7-去甲基银杏双黄酮。含量均在95%以上。
4.根据权利要求3所述的应用其特征在于所选用的大孔树脂为D101、D201、AB-8。
5.根据权利要求3所述的应用其特征在于热水浸泡药材用量为6-10倍量，浸泡时间 为2-5小时；乙醇提取时间为1-3小时。
6.根据权利要求1所述的应用其特征在于在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的 应用是指含有有效治疗剂量银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮和一种或 多种药学上可接受的药用赋形剂，或用银杏双黄酮、异银杏双黄酮及7-去甲基银杏双黄酮 组方的其它药物制剂中的应用。
全文摘要
从银杏(Ginkgo biloba L)干燥叶中提取制备了银杏双黄酮(Ginkgetin)、异银杏双黄酮(Isoginkgetin)及7-去甲基银杏双黄酮(Bilobetin)三种双黄酮化合物。经药理实验证明三种双黄酮化合物均具有抑制α-葡萄糖苷酶活性，本发明公开了银杏双黄酮(Ginkgetin)、异银杏双黄酮(Isoginkgetin)和7-去甲基银杏双黄酮(Bilobetin)在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂药物中的新用途，同时也公开了三种双黄酮化合物新的制备方法。
文档编号A61P3/10GK101991567SQ200910067430
公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月24日 优先权日2009年8月24日
发明者南敏伦, 张瑜, 王婵, 赫玉芳, 赵全成, 赵文杰, 陈声武, 马吉胜 申请人:赵全成