专利名称：水痘、带状疱疹人免疫球蛋白及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，涉及一种生物免疫制品，特别是涉及一种能同 时预防水痘和治疗带状疱瘆的特异免疫球蛋白及其制备方法。
背景技术：
水痘-带状疱疹病毒(VZV)属于人类单纯疱疹病毒3型，其原发感染为水 痘。水痘是儿童常见的一种急性、高传染性，可经呼吸道和接触传播的感染性 疾病， 一般预后良好，但某些人群(长期应用放、化疗病人，外科手术病人，器 官移植病人等)及成人感染VZV后症状甚为严重， 一旦在易感人群中出现水痘病 人，就很难预防水痘在该群体中爆发。VZV潜伏后再激活则引起带状疱疹。近年 来，带状疱疹(HZ)的发病率明显增高，且引起的后遗神经痛(PHN)用抗病毒 药物治疗无明显疗效。水痘、带状疱疹及相关性后遗症逐渐成为重要的公共卫 生问题而日益受到国家重视。
目前我国水痘的预防主要是应用水痘疫苗进行主动免疫，但个体水痘的预 防接种不能改变水痘的爆发及流行病学特征。目前常用的抗病毒药物一般为化 学合成药、中草药以及干扰素等生物制剂，但其特异性差，疗效也不能充分肯 定。
特异性免疫球蛋白是由病毒等病原体感染机体或主动接种疫苗后，在机体 内产生的具有特异性、高活性及中和作用的球蛋白。使用特异性免疫球蛋白以 可针对性的预防病毒等病原体的感染及其感染后所发生疾病的治疗，这种方法 称为被动免疫。被动免疫是控制感染性疾病暴发及治疗的有效途径。
发明内容
水痘、带状疱疹人免疫球蛋白(VZIg)是从含有高效价水痘带状疱疹病毒
抗体的血浆中提取的具有特异性的高效价免疫球蛋白，可以用于预防水痘的发 生和进行带状疱疹的治疗。
4因此，本发明的目的就在于提供一种水痘、带状疱疹人免疫球蛋白及其制 备方法。
本发明提供的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，含有高效价的水痘带状疱疹
病毒抗体，其免疫球蛋白纯度不低于总蛋白的92%,水痘带状疱疹病毒抗体效价 不小于100IU/mL,蛋白质含量不大于175g/L。
本发明提供的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白仅与抗人血清产生沉淀线，与 抗马、牛、猪、羊的血清均不产生沉淀线。
本发明提供的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白与正常人血清比较，主要沉淀 线应为IgG，且其IgG单体及二聚体的含量之和不低于92。/。。
本发明将水痘、带状疱疹人免疫球蛋白制成常规的液体型或冻干剂型使用。 本发明的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白的制备方法是将原料血浆经常规的 低温乙醇蛋白分离法分级沉淀，提取免疫球蛋白组分，经加压过滤、离心、病 毒灭活处理等必要的工序制成免疫球蛋白液体或冻干剂型。其制备方法的关键 在于原料血浆的制备，具体方法是
1) 选择身体健康，符合血液制品原料血浆规定要求的供血浆者，接种国家 批准的水痘疫苗，末次接种10 20天后检测被免疫接种者血清或血浆中的水痘
带状疱渗病毒抗体效价；
2) 以固相酶联免疫法(ELISA)定量检测供血浆者血浆或血清的水痘带状 疱瘆病毒抗体，抗体效价不低于5IU/mL,其它符合"血液制品原料血浆规程" 要求，釆集为水痘带状疱疹人免疫球蛋白原料血浆；
3) 混合釆集的水痘带状疱瘆人免疫球蛋白原料血浆，混合后血浆的水痘带 状疱渗病毒抗体效价不低于8IU/mL。
本发明釆集得到的原料血浆应低温冰冻储存，其保存期不超过2年。作为 制备水痘、带状疱瘆人免疫球蛋白原料的混合原料血浆，每批次需由不少于ioo 名供血浆者的原料血浆混合而成。
5本发明的水痘、带状疱渗人免疫球蛋白适用于预防易感人群水痘的发生、
发展和带状疱疹及其后遗神经痛的治疗。具体是包括无水痘感染史的易感人 群、正在接受免疫抑制剂治疗的患者、住院早产儿及母亲在产前5d内或产后2d 发生水痘感染的新生儿、带状疱疹及后遗神经痛患者。
其中，预防水痘的使用量以10~15IU/kg体重计算，且最大给药剂量为 625IU,最小给药剂量为125IU。治疗带状疱瘆及其后遗神经痛的参考剂量为 1000 ~ 5000IU，可多点肌肉或局部注射，并在尽可能短的时间内注射完毕。
本发明提供的水痘、带状疱渗人免疫球蛋白可以针对性的对水痘、带状疱 渗病原体的感染及其感染后所发生的疾病进行治疗，是控制水痘、带状疱疹暴 发及治疗的有效途径，具有较大的社会效益和经济效益。同时，本发明免疫球 蛋白的原料血浆制备方法简单，免疫球蛋白制备成本低。
具体实施例方式
实施例1
1、 供血浆者的免疫
选择身体健康，符合血液制品原料血浆规定要求的供血浆者，在0、 28天 分别接种国家批准的水痘疫苗1~2，并建立详细的免疫记录。
2、 供血浆者的血浆筛选釆集
选择固相酶联免疫法(ELISA)分别定量检测供血浆者血清或血浆中的水痘 带状疱疹病毒抗体，其效价应不低于5IU/mL，蛋白质含量(双缩脲法)不低于 55g/L,丙氨酸氨基转移酶(赖氏法)不高于25单位，乙型肝炎表面抗原阴性， 梅毒阴性，HIV-l/HIV-2抗体阴性，HCV抗体阴性等符合国家要求的血浆为特免 血浆，按血液制品原料血浆规程要求釆集为水痘、带状疱疹人免疫球蛋白原料 血浆，低温冰冻储存，保存期不超过2年。
3、 水痘、带状疱瘆人免疫球蛋白的制备
(l)将100名以上供血浆者的血浆融化混合，混合后血浆水痘带状疱渗病毒抗体效价不低于8IU/mL为合格原料血浆；
(2) 分离后的无菌血浆，在0 4。C下离心去除冷沉淀；
(3) 去除冷沉淀后的血浆用醋酸缓冲液调节pH值至6. 8 ~ 7. 2,加95%乙醇至 反应液最终浓度为8~10%,反应液温度至-1~-3°C,离心得沉淀；
(4) 在上清液中加95%乙醇至反应液最终浓度为19~21%,以醋酸缓冲液调节 pH值至6. 5-6. 8，反应液温度至-4 -5。C，分离得沉淀；
(5) 将步骤(4)的沉淀以15 ~ 20倍沉淀量的溶解液搅拌溶解；
(6) 在上清液中加95%乙醇至反应液最终浓度为14 ~ 17%，以醋酸缓冲液调节 pH值至5. 0~5. 2，反应液温度至-4~-5°C，分离得沉淀；
(7) 在上清液中加95%乙醇至反应液最终浓度为24 ~ 26%，以碳酸氢纳缓冲液 调节pH值至7. 0~7. 2,反应液温度至-5 -7。C,分离得沉淀；
(8) 将步骤(7)的沉淀用10倍沉淀量的溶解液搅拌溶解，调节pH值为7. 0~ 7.2，温度至0 2。C，蛋白浓度在1.5-2. 5%，离心得沉淀；
(9) 将步骤(8)的沉淀用溶解液搅拌至溶解，经超滤、脱醇、脱盐、浓缩，得
到含有高效价的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白原液；
(10) 调整上述原液的pH值为3. 8~4. 2，蛋白浓度5%,经24 - 25。C孵放21天
和纳米膜过滤的双病毒灭活处理；
(11) 调整灭活的原液，使蛋白浓度不超过17.5%,水痘带状疱瘆病毒抗体效价 不低于100IU/mL， pH值为6.6~7. 2,并加入一定比例的甘氨酸及适量麦芽糖作
为保护剂制成半成品；
(12) 分装为成品，检定合格。 4、检定
(l)活性
以酶联免疫法或中和抑制蚀斑法检测，水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于 100IU/ml。
7(2) 鉴别
免疫双扩散法仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛、抗猪、抗羊
的血清不产生沉淀线。
免疫电泳法与正常人血清比较，主要沉淀线应为IgG。
(3) 蛋白质含量 不高于175g/L。
(4) 纯度
免疫球蛋白含量不低于蛋白质总量的92%。
(5) 分子大小分布
IgG单体与二聚体含量之和不低于92%。
(6) 外观
应为无色或淡黄色澄清液体，可带乳光，不应出现浑浊。
(7) 热稳定性
57°C±0. 5。C水洛中保温4小时后，用可见异物检查装置，肉眼观察无凝胶
化或絮状物。
(8) pH值
用生理氯化钠溶液将供试品蛋白质含量稀释成10g/L, pH值为6. 6~7. 2。
(9) 其它符合人免疫球蛋白要求。
权利要求
1、水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，含有高效价的水痘带状疱疹病毒抗体，其免疫球蛋白纯度不低于总蛋白的92％，水痘带状疱疹病毒抗体效价不小于100IU/mL，蛋白质含量不大于175g/L。
2、 根据权利要求l所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其特征是所述免 疫球蛋白仅与抗人血清产生沉淀线，与抗马、牛、猪、羊血清不产生沉淀线。
3、 根据权利要求l所述的水痘、带状疱渗人免疫球蛋白，其特征是所述免 疫球蛋白与正常人血清比较，主要沉淀线为IgG。
4、 根据权利要求l所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其特征是所述免 疫球蛋白的IgG单体及二聚体含量之和不低于92%。
5、 根据权利要求l所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其特征是所述免 疫球蛋白的剂型为液体型或冻干剂型。
6、 权利要求l所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白的制备方法，其特征是 其原料血浆的制备方法是1) 选择身体健康，符合血液制品原料血浆规定要求的供血浆者，接种国家 批准的水痘疫苗，末次接种10 20天后检测被免疫接种者血清或血浆中的水痘 带状疱疹病毒抗体效价；2) 定量检测供血浆者血浆或血清的水痘带状疱瘆病毒抗体，抗体效价不低 于5IU/mL，其它符合"血液制品原料血浆规程"要求，釆集为水痘带状疱瘆人 免疫球蛋白原料血浆；3) 混合采集的水痘带状疱疹人免疫球蛋白原料血浆，混合后血浆的水痘带 状疱渗病毒抗体效价不低于8IU/mL。
7、 根据权利要求6所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白的制备方法，其特 征是每批次的混合原料血浆由不少于IOO名供血浆者的原料血浆混合而成。
8、 权利要求l所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白作为预防易感人群水痘 发生、发展制剂的应用。
9、 根据权利要求8所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白作为易感人群水痘发生、发展制剂的应用，其特征是其使用量以10~15IU/kg体重计算，且最大 给药剂量625IU，最小给药剂量125IU。
10、 权利要求1所述的水痘、带状疱疹人免疫球蛋白作为治疗带状疱疹及 其后遗神经痛制剂的应用。
11、 根据权利要求10所述的水痘、带状疱渗人免疫球蛋白作为治疗带状疱 疹及其后遗神经痛制剂的应用，其特征是其参考剂量为1000 ~ 5000IU。
全文摘要
一种水痘、带状疱疹人免疫球蛋白，其的水痘带状疱疹病毒抗体效价不小于100IU/mL，蛋白质含量不大于175g/L，免疫球蛋白纯度不低于总蛋白含量的92％。其原料血浆的制备方法是选择供血浆者接种水痘疫苗，以获取水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于5IU/mL的原料血浆，且应保证混合后原料血浆水痘带状疱疹病毒抗体效价不低于8IU/mL。本发明的免疫球蛋白可以用于预防易感人群水痘的发生、发展和进行带状疱疹及其后遗神经痛的治疗，是控制水痘、带状疱疹暴发及治疗的有效途径。
文档编号A61P31/22GK101502652SQ20091007395
公开日2009年8月12日 申请日期2009年3月16日 优先权日2009年3月16日
发明者凯 周, 孙思才 申请人:山西康宝生物制品股份有限公司