专利名称：：一种防治畜禽温热病药物组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明属于一种防治畜禽发热为主要特征的温病药物组合物及其制备方法。
背景技术：
：随着我国集约化养殖业的迅速发展及饲养管理水平的不断提高，各种畜禽普通病的发病率有所降低，而以发热为特征的温病(也包括西兽医学的多种急性传染病与感染性疾病)发病率却呈上升趋势，如猪流感、蓝耳病、猪链球菌病、禽流感、疯牛病、口蹄疫、血吸虫病等病严重损害畜牧养殖业的健康发展，给畜牧业生产造成了严重的经济损失，同时对人类健康和公共卫生也造成了极大的威胁。疫苗的使用虽然能控制该类疾病的传播和爆发，但由于疫苗产品研发周期长、部分产品质量有待提高、病菌(毒)株变异加快和新的温病往往无苗可用等具体现状，使疫苗预防动物传染性温病增加了很多不确定因素。用中药防治发热为特征的温病(现代医学所说的病毒和细菌等引起的感染性疾病)在我国具有悠久历史，在临床应用中显示出了独特的疗效。因此，开发新型具有抗温热疾病的中兽药及其制剂，将对动物温病的防治带来新的突破。另一方面，由于中草药保持了各种物质的自然形态和生物活性，极少有毒副作用。近年来许多国家都非常重视从中草药或植物药中研究新药。国内的动物用药也正向疗效高、耐药性低、效果持久、低毒、低残留等方向发展，中草药在某些领域有逐渐取代抗生素类药物的趋势。但由于中药在动物体内作用机理的复杂性和复方成分难以定量化，研制和筛选一种非常有效的并能够在临床大规模应用的、技术附加值较高的有效药物仍十分困难，目前市场上仍以中西结合药物为主，而且功能单一。
发明内容基于当前各种畜禽以发热为特征的温病发病率呈上升趋势和国内外对防治温病中药产品开发的需求，本发明以祖国传统医学理论为指导，研制了一种防治畜禽温热病药物组合物。本发明的另一目的是提供防治畜禽温热病药物组合物的制备方法。药物组合物以纯中药为主兼备敷料，经水提、醇沉，将其制成注射剂，用于治疗和预防畜禽温热疾病，尤其是以上呼吸道感染为主要特征的疾病，有十分良好的治疗效果。本发明的目的是通过以下技术方案来实现—种防治畜禽温热病药物组合物，以1500ml药液计算，含各味中药以生药材计算的重量以及敷料重量配比为连翘350450g，板兰根150250g，金银花150250g，黄吝150250g，黄连150250g，鸭趾草150250g，甘草75125g，苯甲醇2-3g，其余为蒸馏水。本发明的制备方法是①水提取连翘350450g，板兰根150250g，金银花150250g，黄吝150250g，黄连150250g，鸭趾草150250g，甘草75125g入罐，第一次加药物10倍量的蒸馏水浸泡稍片刻，加热至沸腾，保持沸腾1.5小时；过滤取滤液；滤渣再加入8倍水量，加热至沸腾提取1小时，过滤收集滤液；合并两次滤液，加热浓縮至5000ml;②醇沉将①得到浓縮滤液冷却至4(TC以下，加入95%乙醇，使药液的乙醇浓度含量为75%，静止1248小时，抽滤，滤液回收乙醇至无醇味。再加入95%乙醇，使溶液中的含醇量为80%，静止1248小时，抽滤，滤液回收乙醇并浓縮，得浓稠液。加入注射用水至1300ml，加入1%的活性炭，加热沸腾30分钟，过滤得溶液；③药液配制在②得到溶液中加入0.1X的苯甲醇，定容至1500ml，用3号垂熔玻璃漏斗过滤至澄明，灌封，IO(TC灭菌30分钟即得产物。产物的剂型注射液理化参数pH值6.5士0.5;比重1.05±0.05;性状棕红色液体，味微苦。鉴别取药液作为供试品溶液，另取绿原酸对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中华人民共和国药典附录VIB)试验，吸取供试品溶液10ia20ia、对照品溶液i0ia，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以乙酸丁脂-甲酸-水(7:2.5:2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。含量测定照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇_水_冰醋酸(20:80:1)为流动相；检测波长324nm。理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于6000。对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加水制成每lml含40iig的溶液，即得。供试品溶液的制备取药液lml，加入2M的HC1溶液2滴，使其pH值调整为4.0-5.0。以2ml的乙酸乙酯提取5次，合并乙酸乙酯并挥干，残渣以的甲醇溶解并定容至25ml，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液10ii1与供试品溶液1020ii1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每lml含金银花以绿原酸(C16H1809)计，不得少于0.Olmg。本发明的优点和产生的有益效果是本发明选用植物药为原料，兼备敷料，属于清热解毒类药物。通过大量的临床使用，证明该药物以发热为主要特征的温病具有十分良好的治疗效果，药物剂型为注射液，使用方便，操作简单，其应用对于防治畜禽急性传染病与感染性疾病，推动我国畜禽业的发展将产生积极作用；本产品主要治疗和预防畜禽以发热为主要特征的感染性温病，可取代现有的抗生素类药物，临床使用具有高效、安全、无毒、使用方便的优点。具体实施例方式下面，结合药理药效试验、临床试验，以治疗猪呼吸道综合症疗效试验为例，对本发明再作进一步的说明实施例1①称取连翘400g，板兰根200g，金银花200g，黄芩200g，黄连200g，鸭趾草200g，甘草100g入罐，第一次加药物10倍量的蒸馏水浸泡稍15分钟，加热至沸腾，保持沸腾1.5小时；过滤取滤液；滤渣再加入8倍水量，加热至沸腾提取1小时，过滤收集滤液；合并两次滤液，加热浓縮至5000ml;②将①得到浓縮滤液冷却至40°C以下，加入95%乙醇，使药液的乙醇浓度含量为75%，静止16小时，抽滤，滤液回收乙醇至无醇味。再加入95%乙醇，使溶液中的含醇量为80%，静止16小时，抽滤，滤液回收乙醇并浓縮，得浓稠液。加入注射用水至1300ml，加入1%的活性炭，加热沸腾30分钟，过滤得溶液；③在②得到溶液中加入0.1%的苯甲醇，定容至1500ml，用3号垂熔玻璃漏斗过滤至澄明。灌封，IO(TC灭菌30分钟即得棕红色溶液产品。实施例2①水提称取连翘400g，板兰根200g，金银花200g，黄芩200g，黄连200g，鸭趾草200g，甘草100g入罐，第一次加药物7倍量的蒸馏水浸泡稍片刻，加热至沸腾，保持沸腾1.5小时；过滤取滤液；滤渣再加入6倍水量，加热至沸腾提取1小时，过滤收集滤液；合并两次滤液，加热浓縮至4000ml;②醇沉冷却至4(TC以下，加入95%乙醇，使药液的乙醇浓度含量为75%，静止24小时，抽滤，滤液回收乙醇至无醇味。再加入95%乙醇，使溶液中的含醇量为80%，静止24小时，抽滤，滤液回收乙醇并浓縮，得浓稠液。加入注射用水至至1300ml，加入0.5%的活性炭，加热沸腾30分钟，过滤得溶液；③药液配制在②得到溶液中加入0.1%的苯甲醇，定容至1500ml，用3号垂熔玻璃漏斗或其他滤器过滤至澄明。灌封，IO(TC灭菌30分钟即得棕红色溶液产品。上述两种方案均符合产品质量要求，但从制备过程实际操作来看，实施例1更简单，花费时间短，适于生产。试验例1药理药效试验(1)药物组合物抑菌效果采用牛津杯法进行抑菌试验。无菌条件下在培养基上加入0.lmL(2X107个/mL)菌液，用灭菌L棒涂匀，在室温下干燥35分钟，将培养基分为6个区域，用无菌镊子将无菌牛津杯微烧放在各区域。最后在牛津杯中加入200iiL(2g/mL)药液，将培养皿小心的移入恒温培养箱中，37t:培养1820h，测量抑菌圈直径。设3个平行实验组，并设药物对照和空白对照。表1复方中药注射剂抑菌效果单位mm<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>(2)抗炎试验对二甲苯所致小鼠耳廓炎症的影响方法取小鼠70只，体重1822，雌雄各半，按体重随机分为7组，每组10只。即①为生理盐水组，②为阳性对照药组，③⑥为中药注射液组。①组小鼠每日腹腔注射等容量生理盐水(NS);②组小鼠每日腹腔注射双黄连注射液30g/kg;③⑥组分别腹腔注射药物组合物注射液(见表1)，每日1次，连续给药5d。末次给药lh后，每只小鼠左耳两面均涂布二甲苯0.03ml致炎，30min处死动物，剪下耳壳，用6mm打孔器取双侧耳对称处的圆耳片称重，以左右耳片重量差异表示肿胀度。并求出抑肿率。抑肿率=(空白对照组肿胀均值_用药组肿胀均值)/空白对照组肿胀均值X100%。数据处理SPSS统计分析。表2对二甲苯所致小鼠耳廓炎症的影响组别剂量(g/kg)肿胀度(g)抑肿率(％)空白对照组300.07040±0.021185双黄连注射液对照组200.007860±0.001527489.2药物组合物高剂量组400扁80士0扁215'90.3药物组合物中剂量组300.00700士0.006782'90.1药物组合物中剂量组200.02433±0.019506*65.4药物组合物低剂量组100扁32±0扁730*42.7从药物组合物中药注射液对二甲苯致小鼠耳廓炎症试验中可以看出，与空白对照组比较，药物组合物40g/kg、30g/kg、20g/kg、10g/kg剂量差异显著，且呈剂量相关性。与双黄连注射液比较，差异不显著，效果相当。表明药物组合物注射液有一定的抗炎作用。[OOM](3)镇痛试验疼痛模型醋酸致疼痛法方法分组给药同上。末次给药后30min，每鼠腹腔注射0.6X醋酸0.2ml，观察30min内各组动物由醋酸诱发的扭体次数。数据处理SPSS统计分析。表3中药注射液对醋酸所致小鼠疼痛的影响6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>从表3中可以看出，药物组合物注射液高、中、低(10g/kg)剂量镇痛作用较空白对照组差异极其显著。药物组合物注射液40g/kg和20g/kg较双黄连注射液组差异显著。表明药物组合物中药注射液有一定的镇痛作用。试验例2对小鼠的口服急性毒性试验对体重1822g的昆明系小白鼠70只，分7组灌服药物组合物注射液，各组剂量依次为10、20、30、50、60、80和250g/kg，观察小鼠的死亡情况并进行记录，实验期限为7天，试验中死亡小鼠及试验结束时存活小鼠进行剖检，观察病理变化。试验数据见表2。表4小鼠急性中毒试验<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>从上表可以看出，灌胃给药一次灌胃最大剂量1.Oml/只，即30g/kg，连续观察7天，也无死亡现象。腹腔注射给药小鼠腹腔注射，结果，一次注射0.8ml/只后，小鼠15分内后全部死亡，O.7ml/只的死亡1只。解剖小鼠观察各脏器均正常，药液充满腹腔。主要原因为单次给药量过大，导致腹腔水肿所致。后改为腹腔注射24小时内5次给药，药量达250g/kg仍无死亡。根据毒理学毒物分级标准，应为无毒。与临床推荐使用量相比，换算的单位体重用量非常小，由此可见，该药物组合物注射液安全范围大，无毒性，临床使用安全可靠。试验例3临床药效试验药物组合物注射液防治猪流感的试验结果选择猪流感自然发病病猪。选择的病例应经临床和实验室诊断，确诊为猪流感。猪流感的的症状特征为体温骤然升高达4041.5t:;患猪精神沉郁，食欲减退或废绝；常挤卧在一起，肌肉、关节疼痛，不愿活动，尖叫；呼吸迫促，咳嗽、流清涕，间有喷嚏；结膜潮红，两眼流泪；粪干，尿短赤。将每日新发病、符合条件的病猪按病症随机分别纳入到5个组中进行治疗，每组累积病例1520头。设(1)药物组合物高剂量组、(2)药物组合物中剂量组、(3)药物组合物低剂量组、(4)药物组合物中剂量肌肉注射对照组、(5)阳性药物对照组。给药途径与剂量1、2、3、5组采用穴位注射，1次/日，连续给药3日。4组采用颈部肌肉注射，10ml/次，2次/日，连续给药3日。详见表5。表5分组与剂量设置表组别注射部位注射剂量给药次数备注高剂量组穴位15ml/头1次/日，共3日后海穴注射中剂量组穴位10ml/头1次/日，共3日后海穴注射低剂量组穴位5ml/头1次/日，共3日后海穴注射肌肉注射对照组颈部肌肉10ml/头2次/日，共3日双黄连对照组穴位10ml/头1次/日，共3曰后海穴注射结果表6穴位注射药物组合物对猪流感的疗效组别痊愈数有效数无效数高剂量组1500<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>备注疗效判定标准痊愈治疗后，体温恢复正常，其他各项指标也恢复正常；有效治疗后，体温恢复正常，其他各项指标有改善或明显改善；无效治疗后，各项指标均未见改善或死亡。以上结果表明各用药组病猪在药物的作用下，大部分得到治愈，尤以高剂量和中剂量组最好，另外给药途径穴位给药较好。使用方法说明功能抗病毒，抗菌，消炎，清热解毒，增强免疫力。主治畜禽各种发热、发炎为主要特征的温病，尤其是上呼吸道和胃肠道感染性和传染性疾病。用量方法猪10-20ml，肌肉或后海穴注射，每日1_2次，连续使用3_5天。预防量减半。规格10ml/瓶。贮藏密闭，避光，置阴凉处。有效期二年。权利要求一种防治畜禽温热病药物组合物，其特征是以1500ml药液计算，含各味中药以生药材计算的重量以及敷料重量配比为连翘350～450g，板兰根150～250g，金银花150～250g，黄芩150～250g，黄连150～250g，鸭趾草150～250g，甘草75～125g，苯甲醇2-3g，其余为蒸馏水。2.如权利要求1所述的一种防治畜禽温热病药物组合物制备方法是①水提取连翘350450g，板兰根150250g，金银花150250g，黄芩150250g，黄连150250g，鸭趾草150250g，甘草75125g入罐，第一次加药物10倍量的蒸馏水浸泡稍片刻，加热至沸腾，保持沸腾1.5小时；过滤取滤液；滤渣再加入8倍水量，加热至沸腾提取1小时，过滤收集滤液；合并两次滤液，加热浓縮至5000ml;②醇沉将①得到浓縮滤液冷却至40°C以下，加入95%乙醇，使药液的乙醇浓度含量为75%，静止1248小时，抽滤，滤液回收乙醇至无醇味；再加入95%乙醇，使溶液中的含醇量为80%，静止1248小时，抽滤，滤液回收乙醇并浓縮，得浓稠液；加入注射用水至1300ml，加入1%的活性炭，加热沸腾30分钟，过滤得溶液；③药液配制在②得到溶液中加入0.1%的苯甲醇，定容至1500ml，用3号垂熔玻璃漏斗过滤至澄明，灌封，IO(TC灭菌30分钟即得产物。全文摘要本发明公开一种防治畜禽温热病药物组合物及其制备方法。以1500ml药液计算，药物含各味中药以生药材计算的量以及敷料量的配比为连翘350～450g，板兰根150～250g，金银花150～250g，黄芩150～250g，黄连150～250g，鸭趾草150～250g，甘草75～125g，苯甲醇2-3g，其余为蒸馏水。药物组合物制备方法是采用水提、醇沉、药液配制三步骤制成注射剂。本发明通过大量的临床使用，证明该药物具有抗病毒、抗菌、消炎、清热解毒、增强免疫力功能，对以发热为主要特征的温病具有十分良好的治疗效果，其应用对于推动我国畜禽业的发展将产生积极作用。文档编号A61P31/04GK101700290SQ20091011762公开日2010年5月5日申请日期2009年11月24日优先权日2009年11月24日发明者周绪正,张继瑜,李冰,李剑勇,李新圃,杨亚军,牛建荣,陈佳娟,魏小娟申请人:中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所