用于治疗感染的组合物和方法

专利名称：用于治疗感染的组合物和方法
技术领域：
本发明涉及可用于预防和/或治疗病毒性感染、尤其是丙型肝炎和HIV的组合物和方法。
背景技术：
丙型肝炎(HCV)，先前称作血源性非甲非乙型肝炎病毒(NANBV)，是一种不同于其 它形式的与病毒相关的肝疾病传染性疾病，其包括那些由甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病 毒(HBV)以及δ肝炎病毒(HDV)引起的疾病。丙型肝炎首次发现在接收输血的个体中。丙 型肝炎病毒的慢性感染是一种隐袭的和缓慢发展的疾病，其对生命质量具有显著的影响。 它可以最终导致肝硬化、失代偿性肝疾病和/或肝细胞癌。α干扰素单药治疗法通常用来治疗慢性丙型肝炎的感染。然而，这种治疗并不总 是有效并且有时导致不可容忍的副作用，其与治疗的剂量和持续时间有关。已提出一般的抗病毒治疗的利巴韦林作为慢性丙型肝炎感染的单药治疗。然而， 已发现这种单药治疗是相对低效的，并且在被给予它的受治疗者中出现它本身的所不希望 的副作用。还提出了一种联合α干扰素和利巴韦林的替代治疗方法。初步结果表明，这样的 联合治疗可以比α干扰素或利巴韦林单药治疗更有效。然而，α干扰素和利巴韦林的联 合使用不会长期有效地根除HCV-RNA。因此需要提供可有效治疗慢性丙型肝炎感染的疗法。更理想地，这样的治疗性组 合物或治疗方案将长期有效地根除HCV-RNA。此外，除对感染有HCV的受治疗者进行治疗以外，还迫切需要提供对HCV污染的血 液或血液制品进行处理的方法。大约10%的输血患者会发生输血后肝炎(ΡΤΗ)，而在这些 病例中，HCV高达90 %，。在25 %至55 %的病例中，该疾病经常发展成慢性肝损伤。获得性免疫功能丧失综合症(AIDS)是一种特征为免疫系统失效的疾病。它归因 于一种称为人体免疫缺损病毒(HIV)的病毒，该病毒是脂包膜病毒的逆转录酶病毒家族的 一个成员。HIV感染并接管了免疫系统的某些细胞，利用这些细胞进行复制。这使得受感 染的细胞功能失当并过早死亡，因而削弱免疫系统。HIV感染导致整个免疫防御机制紊乱。 具体而言，T4或者协助细胞在发挥其调节免疫应答的作用方面受到阻挠。这种HIV诱导的 T4减少导致了经常产生并最终致命的、由致病生物例如病毒、细菌、原生动物或者真菌引起 的机会性感染。抑制病毒复制的抗病毒剂自从二十世纪八十年代中期就为人们所知。抗HIV疗法 的总体目标是减缓或阻止复制过程，并进而减缓或阻止HIV疾病的进程和对免疫系统的毁 坏。目前已有多种药物可用于抑制HIV病毒的复制。然而，它们的副作用经常非常严重以致 必须中断治疗，导致HIV抗性菌株快速产生。目前的抗HIV疗法可按照它们是针对病毒生 命周期中的哪一阶段或如何发挥作用而分类。抗HIV疗法的例子包括核苷类似物逆转录酶 抑制剂、非核苷类似物逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。前两组是通过模拟DNA结构单元中的一种而起作用，借此干扰HIV复制的一种重要过程_逆转录。第三组，蛋白酶抑制剂，则在病毒成功感染细胞并试图复制之后，在病毒生命周期的一个靠后的阶段起作用。这些 药物最终减缓了病毒DNA的复制。然而，它们并不清除病毒体。近年来，感染了 HIV病毒的病人数量已经大大增加。因此需要开发一种更有效和 低毒性的治疗HIV的疗法。许多目前可用的抗病毒疗法是利用靶向病毒成分，因而倾向于代偿性病毒逃避机 制。旨在通过增强抗病毒应答或通过抑制在宿主细胞内的前病毒活性而干扰或预防病毒复 制的治疗具有更大的控制病毒的潜力，而没有对病毒本身以代偿性方式进行突变产生耐抗 性病毒菌株的选择压力，因而是理想的。罗汉果(也称作Luo Han Kuo)是 Siraitia grosvenori Swingle (以前为 Momoridca grosvenori Swingle)(属于葫芦科)的果子。这些果子被栽培在中国部分地 区，并且罗汉果植物的提取物目前作为天然低热量甜味剂被生产和出售，例如PUREL0 。美 国专利第5，411，755号描述了一种用于从罗汉果果子中制备甜汁的方法。来自罗汉果的 提取物的甜味是由于存在高度稳定的三萜糖苷，称作罗汉果甙，其比蔗糖大约甜250至300 倍。这些化合物具有三萜骨架，其连接有2至6个葡萄糖单元。纯化自罗汉果属(Siraitia grosvenori)的葫芦烷(cucurbitane)糖苷的实例包括20-羟基-11-氧代罗汉果甙IA1, 11-氧代罗汉果甙IIEUl-氧代罗汉果甙IA1、罗汉果甙IIE、罗汉果甙III、罗汉果甙IV、罗 汉果甙V、赛门甙I以及新甙(Neogroside)。研究表明，罗汉果甙在治疗糖尿病、癌症以及 炎症方面具有有益效果。他汀类是已知对人血液中的LDL-胆固醇水平具有降低作用的化合物。他汀类抑 制羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶，在胆固醇生物合成中决定速度的酶步骤。目前可 获得的他汀类药物包括洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀(LESC0L 、CANEF )、西 立伐汀以及阿托伐他汀。氟伐他汀(披露在美国专利第4，739，073号中)是作为一种钠盐 给予，并且是完全合成的化合物，该化合物在部分结构上不同于此类的真菌衍生物，其包含 六氢化萘环。本发明人现已惊人地确定，三萜糖苷，如那些来自罗汉果植物的三萜糖苷，呈现有 效的抗病毒效力。具体而言，在深入的实验之后，本发明人已确定，罗汉果甙IV对带有丙型 肝炎病毒的受治疗者的感染具有直接的抗病毒效应，并且罗汉果甙V对个体的HIV感染具 有抗病毒效果。因而本发明提供了组合物，这些组合物包含用于预防和/或治疗诸如丙型 肝炎和HIV的病毒性疾病的三萜糖苷。本发明的组合物和方法可进一步用于预防受治疗者 的感染或与丙型肝炎病毒性感染有关的其它病症的发作和发展，如肝硬化、失代偿性肝疾 病和/或肝细胞癌。此外，本发明人进一步确定，通过给予三萜糖苷，连同降低胆固醇水平的化合物， 例如他汀类化合物(如氟伐他汀)，可以以协同方式增强三萜糖苷的效力。本发明人已认识 到包含三萜糖苷和他汀化合物的联合药剂作为用于治疗病毒感染的药剂的实效。

发明内容
根据本发明的第一方面，提供一种组合物在制备用于治疗和/或预防病毒感染的 药物的中的应用，其中该组合物含有至少一种三萜糖苷、或者其类似物、代谢物、前体、衍生物、药学活性盐或者前药。根据本发明的第二方面，提供一种药物组合物，其包含至少一种三萜糖苷、或者其 类似物、代谢物、前体、衍生物、药学活性盐或者前药，以及至少一种药用稀释剂、载体或赋 形剂。根据本发明的第三方面，提供一种组合物，其包含至少一种三萜糖苷、或者其类似 物、 代谢物、前体、衍生物、药学活性盐或者前药。根据本发明的第四方面，提供一种用作药剂的组合物，其包含至少一种三萜糖苷、 或者其类似物、代谢物、前体、衍生物、药学活性盐或者前药。根据本发明的第五方面，提供一种用于治疗和/或预防病毒感染的组合物，其包 含至少一种三萜糖苷、或者其类似物、代谢物、前体、衍生物、药学活性盐或者前药。根据本发明的第六方面，提供一种用于治疗和/或预防受治疗者病毒感染的方 法，该方法包括以下步骤_提供有效治疗量的包含至少一种三萜糖苷或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药 物活性盐或其前药的组合物；以及-将所述组合物给予受治疗者。在某些实施方式中，上述至少一种三萜糖苷得自葫芦科植物，尤其是得自葫芦科 植物的果子。在某些实施方式中，上述植物是各种罗汉果属，并且通常上述果子是罗汉果的 果子。在某些实施方式中，上述果子是罗汉果。在某些实施方式中，上述至少一种三萜糖苷是罗汉果甙或类罗汉果甙化合物或其 类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或其前药。在某些实施方式中，上述至少一种三萜糖苷是化学合成的。在某些实施方式中，上述至少一种三萜糖苷选自但不限于由20-羟基-11-氧代 (OXO)罗汉果甙IAp 11-氧代罗汉果甙IIEUl-氧代罗汉果甙IA1、罗汉果甙IIE、罗汉果甙 III、罗汉果甙IV、罗汉果甙V、三萜皂苷V、赛门甙I、新甙、山奈酚7-α - τ -鼠李糖甙、山奈 酚7- α - τ - 二鼠李糖甙、11-氧代罗汉果甙III、11_脱羟基罗汉果甙ΙΙΙ、11_氧代罗汉果 甙IV、罗汉果甙II、罗汉果甙VIUl-氧代-罗汉果甙和赛门甙I (Siamcroside-I)所构成 的组。在某些实施方式中，组合物包含罗汉果甙IV或其类似物、代谢物、前体、衍生物、 药物活性盐或前药。在某些实施方式中，该组合物包含罗汉果甙V或其类似物、代谢物、前体、衍生物、 药物活性盐或前药。不希望受理论限制，本发明人预计，当共同给予卤盐或卤化盐时，可增强中性粒细 胞和/或单核细胞的产生和/或活性。可替换地，卤化三萜糖苷可以提供为增强三萜糖苷 (如罗汉果甙IV或罗汉果甙V)的特异性抗病毒活性所需要的卤素。因此，在某些实施方式中，对上述至少一种三萜糖苷或其类似物、代谢物、前体、衍 生物、药物活性盐或前药进行卤化。在某些实施方式中，该组合物包括卤盐。在某些实施方式中，该卤盐连同包含至少 一种三萜糖苷或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或前药的组合物一起给予。然 而，在另外的实施方式中，可以在给予该组合物之前或之后给予该卤盐。
在某些实施方式中，病毒性感染来自黄病毒属对受治疗者的感染。在某些实施方式中，黄病毒属是丙型肝炎病毒。在某些实施方式中，该病毒感染源于受治疗者的逆转录酶病毒例如HIV感染。在某些实施方式中，病毒性感染可以选自但不限于由流感病毒、甲型肝炎、乙型肝 炎、丁型肝炎、庚型肝炎、辛型肝炎、自体免疫性肝炎以及呼吸道合胞病毒(RSV)所构成的 组。流感病毒可以是A型流感病毒或B型流感病毒。本发明人已确定，包含降低胆固醇水平的化合物(例如他汀化合物)以及至少一 种三萜糖苷或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或前药的联合药剂可显著有效 地用于治疗受治疗者的病毒感染。该联合药剂的成分以协同方式起作用，以提供另外的此 前未预见到的优点为获得治疗/预防效果，可以给予受治疗者更低剂量的每种治疗性化 合物。因此，在某些实施方式中，本发明的组合物或药物组合物包含降低胆固醇水平的 化合物，例如他汀类或其类似物、代谢物、衍生物、药物活性盐、前体或前药。在本发明的某些实施方式中，本发明的方法进一步包括以下步骤_给予有效治疗量的包含降低胆固醇水平的化合物(例如他汀类)或其类似物、代 谢物、衍生物、药物活性盐、前体或前药的组合物。在某些实施方式中，该降低胆固醇水平的化合物减少了胆固醇的合成。在某些实施方式中，该他汀类选自由美伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他 汀、西立(西、色)伐他汀(cerivastatin)、氟露因多他汀(f luindostatin)、菲尔泊他 汀(velbstatin)、氟伐他汀、达伐他汀、二氢美伐他汀(二氢康白丁)、康白丁、阿伐他汀 (atorvastatin)、柏伐他汀以及NK-104、ZD-4522构成的组。在某些实施方式中，该他汀是氟伐他汀。在某些实施方式中，该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)可以和三萜糖苷组 合物同时给予受治疗者。在某些实施方式中，该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)可 以和三萜糖苷组合物按顺序地给予受治疗者。在顺序地给予这些化合物的情况下，在某些 实施方式中，在给予三萜糖苷组合物之前给予该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)。在 某些另外的实施方式中，在给予该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)之前给予三萜糖 苷组合物。在某些实施方式中，分开提供该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)和三萜糖 苷组合物。在某些实施方式中，共同给予该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)和三萜糖 苷组合物。共同给予该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)和三萜糖苷组合物是指，这 些成分可以以一种组合物、或作为同一个单位药剂的部分一起给予。如在本文中所使用的， 术语“共同给予”还可以指，分开给予包含该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)的组合 物和三萜糖苷组合物，但要作为同一个治疗方案或治疗程序的一部分。在某些实施方式中， 在相同时间将组合物给予受治疗者。然而，也可以作为分开的剂量或剂型分开给予这些组 合物。在分开给予组合物的情况下，组合物的“共同给予”并不限制时间、频率、剂量或何时 可以给予化合物的次序。在某些实施方式中，通过不同的给予途径，顺序地、同时或分开地提供包含该降低胆固醇水平的化合物(如他汀类)的组合物和三萜糖苷组合物。另外，所述三萜糖苷和他 汀组合物可以具有相同或不同的形式，例如固体和液体。在某些实施方式中，以联合药剂提供包含该降低胆固醇水平的化合物(如他汀 类)的组合物和三萜糖苷组合物，例如作为单个组合物。在某些实施方式中，该他汀组合物包括作为钠盐的他汀。
本发明人还确定，当与其它抗病毒化合物一起给予受治疗者时，本发明的包括至 少一种三萜糖苷或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或前药的治疗性组合物是 有效的。这样的组合物将提供联合治疗，其对于具有特别高的致病性的病毒性感染是有效 的，并且可因此证明有效降低病毒抗药性的发展。因此，在某些实施方式中，本发明的组合物或者药物组合物包含第二抗病毒化合 物。在某些实施方式中，本发明的方法进一步包括以下步骤-给予有效治疗量的第二抗病毒化合物。在某些实施方式中，所述第二抗病毒化合物可以与所述组合物同时给予受治疗
者ο在某些实施方式中，所述第二抗病毒化合物可以与所述组合物分开给予。在某些实施方式中，所述第二抗病毒化合物可以与所述组合物按次序给予受治疗 者。在按次序给予的情况下，在一些实施方式中，是在所述组合物之前给予该第二抗病毒化 合物。在另一些实施方式中，是在所述第二抗病毒化合物之前给予所述组合物。在某些实施方式中，该第二抗病毒化合物与所述组合物是共同给予的。在某些实施方式中，该第二抗病毒化合物和该组合物是以不同的给予途径提供。 此外，该第二抗病毒化合物与该组合物可以以相同或不同的形态(例如，固态和液态)给 予。在某些实施方式中，该第二抗病毒化合物和该组合物是以一种复合药剂(例如作 为一种单一组合物)提供。


现将参照以下实施例(其用于说明目的而不是限制本发明)以及如以下简述的附 图来描述本发明。图1示出罗汉果甙V对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的抗病毒活性；以及图2示出当和氟伐他汀联用时罗汉果甙V对BVDV的抗病毒活性。图3示出赛门甙I (样品1)对BVDV的抗病毒活性和细胞毒性。图4示出一种未确定的称为罗汉果甙X的罗汉果甙类似物(样品2)对BVDV的抗 病毒活性和细胞毒性。图5示出11-氧代-罗汉果甙IV (样品3)对BVDV的抗病毒活性和细胞毒性。图6示出罗汉果甙IV (样品4)对BVDV的抗病毒活性和细胞毒性。图7示出罗汉果甙VI (样品5)对BVDV的抗病毒活性和细胞毒性。图8示出重组干扰素α -2b (rIFN α 2b)对BVDV的抗病毒活性和细胞毒性。图9示出rIFN α 2b对BVDV的抗病毒活性和细胞毒性。
图10示出罗汉果甙V对HIV的抗病毒效果。
具体实施例方式本发明涉及本发明人的料想不到的发现当给予受治疗者时，包含至少一种罗汉 果甙的组合物可有效地预防和/或治疗诸如丙型肝炎和HIV的病毒病。不受理论的限制， 可以假设包含至少一种罗汉果甙、或类罗汉果甙化合物或其类似物、代谢物、前体、衍生 物、药物活性盐或前药的组合物，通过干扰病毒性感染或宿主细胞的复制功能或其它基本 功能，可阻止或抑制病毒性感染的复制。具体地说，罗汉果甙或类罗汉果甙化合物被假设与 细胞的细胞质环境相互作用，而不直接与病毒性感染相互作用。这是有利的，因为提供了一 种有效的抗病毒疗法，其具有最小的赋予药物抗性的危险。
此外，本发明涉及一种联合药剂，该联合药剂包含降低胆固醇水平的化合物(例 如他汀)以及至少一种三萜糖苷或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或前药。具 体地说，诸如氟伐他汀的他汀类化合物可以用来扩展罗汉果甙V的有效性的下限。在某些实施方式中，该组合物包含例如罗汉果甙或类罗汉果甙化合物的三萜糖苷 的混合物。通常，罗汉果甙IV和/或罗汉果甙V是该混合物的主要成分。本发明的一些化合物/药剂可以以立体异构体和/或几何异构体的形式存在，例 如，它们可以具有一个或多个不对称和/或几何中心，所以可以以两种或两种以上的立体 异构体形式和/或几何形式存在。本发明涉及那些化合物的所有单独立体异构体和几何异 构体以及其混合物的用途。在权利要求中使用的术语包括这些形式，只要所述形式保留适 当的功能活性(虽然不一定达到相同程度)。本发明还包括本发明的化合物/药剂的溶剂化物形式的用途。在权利要求中使用 的术语包括这些形式。本发明还包括本发明化合物/药剂的前药形式的用途。在权利要求中使用的术语 包括这些形式。前药的实例包括这样的实体，其具有某些保护基团，并且其本身可以不具有 药理活性，但在一定条件下可以被给予(如口服或肠道外给予)并在其后在体内被代谢以 形成本发明的具有药理活性的化合物。如在本文中所定义的，术语“代谢物”是指如下的任何物质，其来自或产生自受治 疗者对给予受治疗者的化合物的代谢或消化。在药物术语中，该术语是指在发生消化或代 谢(尤其是通过肝)以后保留的产物。在本发明的某些实施方式中，三萜糖苷如罗汉果甙，和/或他汀，可以是模拟物。 如在本文中所使用的术语“模拟物”是指如下的任何化合物，这些化合物包括但不限于肽、 多肽、抗体或其它有机化合物，其具有和本发明的三萜糖苷或他汀化合物相同的定性活性 或效应。在权利要求中使用的术语涵盖这些形式，只要这些形式保持适当的功能活性(但 不必要在同一程度)。在本发明的某些实施方式中，三萜糖苷化合物和/或他汀可以是衍生物。本文中 所使用的术语“衍生物”包括三萜糖苷化合物和/或他汀的化学修饰产物，所述衍生物保留 前述化合物的所希望的化学活性。在本发明的某些实施方式中，可以对三萜糖苷化合物进行化学修饰，例如通过卤 化。化合物或药剂的化学修饰可以增强或降低药剂和靶之间的氢键相互作用、电荷相互作用、疏水相互作用、范德华力相互作用或偶极相互作用。如在本文中所定义的，措词“药用盐”延伸到药用酸加成盐和药用阳离子盐。“药 用阳离子盐”包括但不限于如碱金属(例如钠或钾)盐的阳离子盐，以及碱土金属盐，例如 镁盐、铵盐等。“药用酸加成盐”包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、 磷酸氢盐、磷酸二氢盐、乙酸盐、丁二酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐以及对甲苯磺酸盐(甲苯磺 酸盐)。对于本领域技术人员来说，药用盐是众所周知的，例如包括Berge等在J. Pharm. Sci. 66,1 -19 (1977)中所提及的那些盐。适宜的酸加成盐形成自可形成无毒盐的酸，并且 包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、三 氟乙酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、抗坏血酸盐、丁二酸盐、马来 酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸以及对甲苯磺酸
Τττ . ο本文中使用的术语“类似物”是指具有结构相似性以及相同功能活性的化合物，虽 然对于所讨论的化合物，相似性程度不必要相同。可以通过化学合成技术来制备本发明的化合物和/或药剂。对于本领域技术人员 来说，显而易见的是，在合成本发明的化合物和/或药剂的过程中，可能需要对敏感官能团 进行保护和去保护。这可以通过常规技术来实现，例如，如τ W Greene和P G M Wuts和 John Wiley and Sons Inc 在"Protective Groups in Organic Synthesis，，(1991)中，·、 \)JsR P. J. Kocienski ^"Protecting Groups，，[Georg Thieme Verlag(1994)]巾Μ δ 白勺。可能在某些反应过程中，有些存在的立体中心，在某些条件下，被差向异构化，例 如，在和具有旋光中心(包含碱敏感基团)的物质的反应中使用了碱。通过选择反应顺序、 条件、试剂、保护/去保护方案等(这些在本技术领域是熟知的)，应当可以防止潜在问题 (如上述问题)的发生。当在本文中提及“三萜糖苷”如罗汉果甙时，此术语包括游离碱形式的三萜糖苷或 该三萜糖苷的药用盐。此外，所述三萜糖苷可以扩展到所述三萜糖苷化合物的对映异构体 或非对映异构体，其中在该形式中保持三萜糖苷化合物的所希望的功能活性。如果需要，供本发明之用的三萜糖苷化合物或其相关盐可以通过常规方法加以分 离和纯化。术语“化合物”包括化合物的异构体形式(如立体异构体和/或几何异构体和/或 旋光异构体以及其混合物)、化学衍生物、模拟物、溶剂化物以及盐。在某些实施方式中，在他汀组合物中提供的他汀是至少一种他汀化合物或他汀样 化合物。术语“他汀化合物”和“他汀样化合物”包括他汀或他汀样化合物的类似物、代谢 物、衍生物、药物活性盐如含氧酸盐、前体、前药、对映体、以及立体异构体。在某些实施方式中，他汀盐是含氧酸盐。在某些实施方式中，所述含氧酸盐是被给 予需要治疗的受治疗者并由所述受治疗者代谢的他汀前药的代谢物。在某些实施方式中，他汀代谢物来自给予受治疗者后化合物的代谢。在某些实施方式中，他汀前药是这样一种组合物，在给予受治疗者以后，该组合物 被代谢成一种分子或结构形式，就提供他汀化合物所希望的效果而论，所述分子或结构形 式具有活性。
在某些实施方式中，该组合物是一种联合药剂，该联合药剂包含至少一种他汀化合物、其前药或代谢物以及三萜糖苷或其衍生物、类似物或代谢物。在某些另外的实施方式中，他汀化合物或他汀样化合物可以是任何以上所列的他 汀化合物的旋光或几何异构体、无毒的药用酸加成盐、N-氧化物、酯、季铵盐、或前药。在某些实施方式中，可以将他汀的无定形形式给予受治疗者。在某些实施方式中，可以基于所获得的药物组合物的预期的给予途径来选择药用 稀释剂、赋形剂或载体。在某些实施方式中，该组合物是配制在羟基环糊精中。在某些 实施方式中，药用载体选自由环糊精、α-环糊精、β-环糊精、(β-羟基丙基环糊精)Y-环 糊精以及维生素E油组成的组。在某些实施方式中，将组合物配制在由聚合物制成的肠溶衣中。通常，肠溶衣包含 聚合物或共聚物，该聚合物或共聚物选自由聚乳酸-聚羟乙酸聚酯、醋酸邻苯二甲酸纤维 素、羟丙基甲基纤维素聚甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸-2-二甲基氨基乙基酯以及甲基丙 烯酸甲酯组成的组。在某些实施方式中，罗汉果甙或其类似物、前体、衍生物、药物活性盐或前药来自 罗汉果(也称作Luo Han Kuo)，其是罗汉果植物(Siraitia grosvenori Swingle，以前为 Momoridca grosvenori Swingle)(属于葫芦科)的果子。在某些实施方式中，该组合物包 括分离形式的罗汉果甙或其类似物、前体、衍生物、药物活性盐或前药，其中罗汉果甙已分 离和纯化自罗汉果。在某些实施方式中，该组合物包括来自罗汉果的粗提取物形式的罗汉 果甙或其类似物、前体、衍生物、药物活性盐或前药。在某些实施方式中，该罗汉果甙或其类 似物、前体、衍生物、药物活性盐或前药是以果汁的天然甜味剂的形式提供。在某些实施方 式中，该罗汉果甙或其类似物、前体、衍生物、药物活性盐或前药包括细菌转化的罗汉果甙。在某些实施方式中，该组合物包含合成形式的罗汉果甙或其类似物、前体、衍生 物、药物活性盐或前药。这些化合物的合成是本领域技术人员所已知的。在某些实施方式中，所述病毒感染是由黄病毒科家族，例如瘟病毒属、黄病毒属或 者丙型肝炎病毒属引起的。在某些实施方式中，病毒感染由黄病毒属引起。在某些实施方式中，该黄病毒是丙 型肝炎病毒。本发明的组合物和方法还可用于预防或者抑制与丙型肝炎有关的感染或者其 他症状(例如肝硬化、失代偿性肝病、慢性肝损伤和/或肝细胞癌)的发作和发展。本发 明的组合物和方法还可用于处理受肝炎污染的血液产品，特别是受丙型肝炎污染的血液产
品ο在某些实施方式中，该病毒感染由逆转录酶病毒引起。在某些实施方式中，该逆转 录酶病毒是HIV，例如HIVl或HIV2。在某些实施方式中，该逆转录酶病毒是HIVl。在某些实施方式中，罗汉果甙或类罗汉果甙化合物选自具有以下化学式1所示的 化学式的化合物组化学式1 在某些实施方式中，该至少一种三萜糖苷是化学式1所示的化合物之一的类似 物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或前药。如在本文中所使用的，术语“联合制剂，，或“联合药剂，，或“联合组合物，，是指“多 个部分的试剂盒”，其意思是联合伙伴，即(a)他汀组合物，以及(b)三萜糖苷组合物(如上 文所定义的)可以独立地按剂量给予或通过利用具有不同量的联合伙伴(a)和(b)的不同 的固定组合，即，同时或在不同的时间点。于是多个部分的试剂盒的不同部分可以同时或按 顺序或分开给予，例如在不同时点按时间顺序交错开，并且对于多个部分的试剂盒的任何 部分采用相同或不同的时间间隔。通常，如此选择给予剂型的时间间隔，以致由多个部分的联合使用而产生的治疗 疾病的效果大于仅使用联合伙伴(a)和(b)任何一种所获得的效果。在联合制剂中给予的联合伙伴(a)与联合伙伴(b)的总量的比率可以变化，例如， 以适应待治疗受治疗者的需要。通常，选择他汀组合物和三萜糖苷组合物的量，以便从组合物的给予获得协同效 应，协同效应是这样一种效应，其大于来自他汀组合物和三萜糖苷组合物结合的相加效应。 另外的优点可以是降低副作用或降低一种或两种组合物的有效剂量。在不同的其它方面，本发明扩展到药物小盒，其包括一个或多个室，其中至少一个 室包含一种或多种如本文所定义的化合物、或如本文所定义的组合物或联合药剂或如本文 所定义的药剂。氟伐他汀的IUPAC化学名称是7-[3-(4_氟苯基)-1-(1_甲基乙基)_1Η_吲哚-2-基]-3，5- 二羟基-庚-6-烯酸。在一种实施方式中，氟伐他汀由以下化学式所限定化学式2 在某些实施方式中，病毒感染选自一种或多种黄病毒或、囊膜病毒感染，其包括但 不限于加利福尼亚脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、西文马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、科罗 拉多蜱热病毒、拉克罗斯脑炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、墨累 山谷热病病毒、蜱传脑炎病毒、GB病毒A、GB病毒B、GB病毒C、I型登革热病毒、II型登革 热病毒、III型登革热病毒、IV型登革热病毒、塞姆利基森林病毒以及辛德毕斯病毒。在某些其它实施方式中，病毒感染可以来源于风疹病毒，如人风疹病毒，瘟病毒， 如粘膜病病毒，例如，牛病毒性腹泻病毒，猪霍乱病毒和羊边境病病毒，逆转录病毒，如人免 疫缺陷病毒，例如HIVl或HIV2，猿猴免疫缺陷病毒，重组人猿猴免疫缺陷病毒，猫免疫缺陷 病毒，猫或鼠白血病病毒，猫或鼠肉瘤病毒，儿童中的Rote病毒感染以及马尔堡病毒。在某些实施方式中，病毒感染是肝炎病毒感染，其选自由甲型肝炎、乙型肝炎、丙 型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、己型肝炎、庚型肝炎、辛型肝炎和自体免疫性肝炎病毒感染构 成的组。在某些实施方式中，该病毒是引起肝炎的病毒。在某些实施方式中，该病毒感染选 自由(但不限于)Epstein-Barr病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、黄热病、牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)、猪瘟病毒和绵羊边境病毒(she印border disease virus)感染构成的组。在某些实施方式中，病毒感染导致AIDS综合征。在某些实施方式中，病毒复制受到阻止或抑制。在某些实施方式中，病毒感染是逆转录病毒感染，并且本发明的方法包括治疗和/ 或预防逆转录病毒感染的并发症或后遗症。在某些实施方式中，病毒感染是由脂质包膜病毒引起。在某些实施方式中，与丙型肝炎有关的病症(如肝硬化、失代偿性肝疾病和/或肝 细胞癌)的发作和/或发展可得到预防或抑制。如在本文中所使用的，术语“受治疗者”是指动物，优选哺乳动物并且尤其是人。如 在本文中所使用的，术语“受治疗者”与术语“患者”是可互换的。在本发明的范围内“受治疗者”包括哺乳动物如人类，灵长类和家畜(例如，羊、 猪、牛、马、驴)；实验室试验动物如小鼠，兔，大鼠和豚鼠；以及宠物如狗和猫。对于本发明 而言，哺乳动物优选为人。在某些实施方式中，受治疗者可以是免疫受到抑制的动物或人。在某些实施方 式中，受治疗者是免疫减弱的AIDS患者或感染有逆转录病毒，如显示出AIDS相关综合征 (ARC)的HIV病毒。
在某些实施方式中，受治疗者是新生儿。可以在新生儿分娩之前和/或在新生儿分娩期间给药。在某些实施方式中，除给予该组合物之外，还给予第二抗病毒化合物。该第二 抗病毒化合物可以选自下述构成的组核苷类似物(AZT ;ddC ;ddl ;d4T ;3TC ;BW 1592 ； PMEA/- 二 -POM PMEA ；dOTC ；DAPD)；非核苷逆转录酶抑制剂(地拉韦啶；DMP 266 ；HBY097 ； 洛韦胺；奈韦拉平；乙米韦林；AG1549 ；PNU 142721 ；胡桐素 A(Calanolide Α) ；DPC961)； 蛋白酶抑制剂(ABT-378 ；利托那韦；奈非那韦；Bff 141 ；KNI-272 ；茚地那韦；沙奎那韦； L-756, 423 ；DMP-450 ；BMS-232630) ；ALX40-4C ；羟基脲；洛布卡韦；喷他夫西；T-1249 ； PR0-542 ；FP-21399 ；AMD 3100 ；HE-2000 ；多肽T ；阿巴卡韦；醋孟南；阿昔洛韦；阿昔洛韦 钠；阿德福韦；阿洛夫定；阿韦舒托；盐酸金刚烷胺；阿拉诺丁 ；阿立酮；阿替韦啶甲磺酸 盐；阿夫立定；西多福韦；西潘茶碱；可韦拉西(Coviracil)；盐酸阿糖胞苷；甲磺酸地拉韦 啶；地昔洛韦；去羟肌苷；二沙噁利；依度尿昔(Edoxudine)；乙米韦林；Emtricitabine ；恩 韦拉登；恩韦肟；拉米夫定；泛昔洛韦；盐酸法莫汀；非西他滨；非阿尿昔；膦利酯；膦甲酸 钠；膦乙酸钠；更昔洛韦；更昔洛韦钠；碘苷；茚地那韦；乙氧丁酮醛(kethoxal)；拉米夫 定；洛布卡韦；洛德腺苷；洛匹那韦；盐酸美莫汀；美替沙腙；奈非那韦；奈韦拉平；喷昔洛 韦；吡罗达韦；利巴韦林；盐酸金刚乙胺；甲磺酸沙奎那韦；利托那韦；盐酸索金刚胺；索立 夫定；维司托隆；司他夫定；替诺福韦；盐酸替洛隆；曲氟尿苷；盐酸伐昔洛韦；阿糖腺苷； 磷酸阿糖腺苷；磷酸阿糖腺苷钠；替拉那韦；韦罗肟；扎西他滨；齐多夫定；净韦肟；以及 α、β和γ干扰素。在所述病毒是HIV的某些实施方式中，该第二抗病毒化合物是一种常用在 HAART(高活性抗逆转录酶病毒疗法)中的药物。已经显示，HIV可以快速变异以逃避单独 一种药物的作用，因此以组合“鸡尾酒”疗法而使用有效的抗HIV药物用来对抗病毒是有利 的。可以借助于任何适宜的途径将该组合物给予受治疗者。通常，选择将增强溶解性 并提供最大生物利用度的递送系统。在某些待治疗的病毒感染是肝炎的实施方式中，可以配制和设计该组合物，以便 在给予以后它对身体的肝和肝炎感染的细胞具有最大的生物利用度。在某些实施方式中，通过将该组合物组合物结合到脂质体或碳水化合物载体中， 而将该组合物递送到病毒感染细胞。通过将针对病毒抗原的抗体放置在脂质体或载体的表 面上，则脂质体或碳水化合物载体可以被特异地靶向感染的病毒细胞。这是有利的，因为它 使脂质体或碳水化合物载体可以选择性地靶向病毒感染的细胞。在某些实施方式中，提供 这样的脂质体，其将高浓度的至少一种罗汉果甙或类罗汉果甙化合物运送到感染的细胞。在某些实施方式中，给予的途径可以包括但不限于肠道外途径(包括皮下、肌内 以及静脉内，借助于例如滴注、贴剂)，口服，直肠途径(栓剂)，鼻途径，胃途径，局部途径 (包括颊和舌下)，输注，阴道途径，皮内途径，腹膜内途径，颅内途径，鞘内途径以及硬膜外 途径。在某些实施方式中，借助于口服或鼻吸入法给予组合物。对于借助于口服或鼻吸入 途径的给予来说，通常活性组分将在适宜的药物剂型中，并且可以利用机械形式加以递送， 其中机械形式包括但不限于吸入器、雾化装置或鼻腔喷雾器。另外，在使用口服或鼻吸入途 径的情况下，可以使用SPAG(小颗粒气雾发生器)来给药。
在某些实施方式中，给药途径是口服或肠道外途径，例如，静脉内途径(即通过注射、输注或连续滴注)，肌内途径或通过栓剂的直肠途径。对于静脉注射来说，活性组分将是以肠外用水溶液的形式，其是无热原的并具有 适宜的PH、等渗性以及稳定性。本领域技术人员可以容易地制备适宜的溶液，例如，利用等 渗载体如氯化钠注射液、林格注射液、葡萄糖溶液以及乳酸盐林格注射液。也可以使用适当 的非水载体，其实例包括环糊精，优选羟丙基β环糊精，混合油(维生素E油)，聚乙二醇以 及油酸乙酯。优选的载体是水中的环糊精。当需要增强等渗性和化学稳定性时，可以包括 防腐剂、稳定剂、缓和剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。用于口服给予的药物组合物可以具有片剂、固体、胶囊剂、散剂或液体的形式。片 剂可以包括固体载体如明胶或佐剂。液体药物组合物通常包括液体载体如水、石油、动物油 或植物油、矿物油或合成油，可以包括生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖类溶液或二醇类如乙 二醇、丙二醇或聚乙二醇。用于口服给药的适宜剂型进一步包括硬的或软的明胶胶囊、糖衣 丸、丸剂、片剂(包括软包衣片剂)、药片、锭剂、熔化物、散剂、微粒化颗粒、非微粒化颗粒、 溶液、乳剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂或吸入剂以及其控释剂型。另外的口服给药形式包括将组合物加入动物饲料和/或饮用水中以给予动物，进 而治疗和/或预防动物的病毒感染。在某些实施方式中，给药是局部的。用于局部给药的适宜剂型包括乳膏剂、凝胶 齐U、胶冻剂、胶浆剂、糊剂以及软膏剂。可以对化合物进行配制，以用于透皮给药，例如以透 皮贴剂的形式，从而实现全身给药。还可以借助于置于某些组织(包括血液)中的微球体、脂质体、其它微粒递送系统 或缓释剂型来给予该组合物。在某些实施方式中，可以利用药物递送系统将该组合物植入或注射入受治疗者。在某些实施方式中，可以以输液的形式或作为鼻吸入剂或喷雾剂给予该组合物。可以局部地或全身地给予根据本发明的药物组合物。全身给予是指导致有效量的 活性罗汉果甙出现在血液中或出现在远离给药部位的部位的任何给予方式或途径。在某些实施方式中，可以间歇地给予根据本发明的药物组合物。这使受治疗者可 以暂停治疗一段时间而不用担心由于产生病毒抗药株的药物的失活。在某些实施方式中，该罗汉果甙被微粉化。术语“微粉化”是指按照任何微粉化方 法(许多微粉化方法在本技术领域是已知的)对化合物进行微粉化。微粉化颗粒优选包括 一定百分比的颗粒，其直径大约为10微米或更小，优选5微米或更小。例如，在本发明的一 个优选方面，在微粉化颗粒的剂型中至少80%的颗粒具有小于5微米的直径。一种对化合 物进行微粉化的可替换方法是溶解该化合物并将它放入适当大小的脂质体中。脂质体的制 备以及将活性组分嵌入这样的脂质体在本技术领域是熟知的。上文提及的技术和方法以及根据本发明可以使用的其它技术和方法的实例可以 参见 Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18th edition, Gennaro, A. R. , Lippincott Williams & Wilkins ;20th edition (December 15，2000)ISBN 0-912734-04-3 和 Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems；Ansel, H. C. et al. 7th Edition ISBN0-683305-72-7，其披露的全部内容以引用方式结合于本文。优选将“有效治疗量”的罗汉果甙给予受治疗者，有效治疗量是足以对受治疗者产生益处的量。尤其是，益处可以是治疗或部分治疗或改善至少一种与病毒感染有关的症状。在上下文要求的情况下，“有效治疗量”是诱导、促进、刺激或增强受治疗者产生抗病毒反应的量。实际给予的量、以及给予的速度和时间进程将取决于待治疗疾病的特性和严重 性。治疗的处方，例如，剂量的确定，最终是开业医师和其它医生的责任并由他们决定，并 且通常考虑到要治疗的病症、各个患者的状况、递送部位、给予方法以及医生已知的其它因 素。精确的剂量将取决于许多因素，包括要给予的该化合物的剂型的具体性质。优选地，给予一定的剂量，以便得到足以降低病毒载量的罗汉果甙和/或其代谢 物的循环浓度(如通过病毒滴度法或通过PCR所监测到的)。在某些实施方式中，该组合物是以包含5_500mg的罗汉果甙或其类似物、前体、衍 生物、药物活性盐或前药的单位剂量的形式。在某些实施方式中，每天将组合物给予受治疗者。在某些实施方式中，以6μ g/ml的浓度给予罗汉果甙V。该浓度被证明在治疗HIV 时特别有效。在某些实施方式中，该组合物可以以体外施加的方式使用来杀灭病毒。该病毒可 以是上面列出的任何病毒。例如，该组合物可以用于对设备、墙壁和地面消毒。该组合物还 可以用于对血液产品，特别是被诸如丙型肝炎的病毒污染的血液产品消毒。如在本文中所使用的，术语“治疗”是指在受治疗者中预防病毒病原体的感染、或 预防或降低由病毒病原体介导的病毒感染的进展、严重性和/或持续时间，其中所述降低 或改善来自给予本发明的组合物。因而术语“治疗”是指可以有益于受治疗者的任何方案。 治疗可以是对于已存在病症的治疗或可以是预防性治疗。治疗可以包括治愈性效果、缓解 性效果或预防性效果。本文提及的“治疗性”和“预防性”治疗应在它们的最广泛的范围内 加以理解。术语“治疗”不一定意味着对受治疗者进行治疗直到完全恢复。类似地，“预防” 不一定意味着受治疗者将最终不会得病。因此，治疗性和预防性治疗包括减轻特定病症的症状或预防或降低出现特定病症 的危险。术语“预防性”可以看作为降低特定病症的严重性或发作。“治疗性”还可以降低 已存在病症的严重性。除非另有规定，本文使用的所有技术和科学术语均具有本发明领域的技术人员所 通常理解的含意。在整个说明书中，除非上下文另有要求，术语“包含”或“包括”均包括所述整数或 整数组，但不排除任何其它整数或整数组。如在本文中所使用的，术语如“一”、“一个”、“一种”、以及“该”和“所述”均包括单 数和复数被谈到的事物，除非上下文清楚地另有要求。因此，例如，“一种罗汉果甙”包括单 一罗汉果甙以及联用的两种或两种以上的不同的罗汉果甙，而“一种载体”包括两种或两种 以上载体的混合物以及单一载体等。实施例实施例1 三萜糖苷罗汉果甙V对BVDV的抗病毒活性材料和方法测试了罗汉果甙V相对于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、菌株NADL的抗病毒活性。BVDV是和人的丙型肝炎病毒相同家族的黄病毒。丙型肝炎不能在组织培养物中生长，所以 使用BVDV作为模型病毒，这是由于在这两种病毒之间存在结构相似性。对病毒进行滴定， 并且确定储用病毒的10_4稀释达到用于抗病毒测定的合适接种物。罗汉果甙V可以储存在室温并且是水溶的。在宽的浓度范围内(6. 25-3600 μ g/ mL)独立地测试了罗汉果甙V。在两个试验中测试了罗汉果甙V，一个在100、50、25、12. 5以 及 6. 25μ g/mL 下，而另一个在 3600、1200、400、133. 3μ g/mL 以及 44. 4μ g/mL 下。Bos Taurus(BT)鼻甲细胞用作病毒的宿主细胞。在平皿接种细胞并允许生长过 夜以后，加入 药物，然后将病毒接种到培养物。用药物但没有用病毒接种物进行细胞毒性对 照。使培养物生长7天，然后进行荧光细胞增殖测定。计算来自所有重复培养物的数据的 平均值并与阴性对照(没有病毒或药物)的生长进行比较。在测试期间，在吸收过程中以 及在培养基中存在实验化合物。在没有实验化合物的测试条件下，对病毒进行滴定，以确定 用于抗病毒测定的最佳病毒接种物。使用的生长培养基是Dulbecco最低Eagle培养基以 及10%的过滤的马血清。舰阳性对照_具有病毒但没有实验化合物的培养物。阴性对照_仅有未感染细胞的培养物。细胞毒性对照_在所有使用浓度的实验化合物，但没有病毒接种物。抑制指数1减去阳性对照的平均荧光单位与感染培养物(其具有特定浓度的一种提取物) 的平均荧光单位的比率(1-(平均阳性对照+具有提取物的平均值))。0表示没有抑制； 0. 9至1表示最好的抑制。抑制指数有助于确定药物最有效的剂量。阴件对照与抑制指数的百分比在这种类型的细胞增殖测定中，结果是病毒和实验化合物之间的竞争。如果病毒 杀死细胞较慢，则实验化合物可以做更充分的工作，但如果病毒非常具有进攻性，像BVDV， 并且快速地杀死细胞，则实验化合物不能赶上。因而，对于BVDV而言，阴性对照在50%范围 内的百分比是极好的结果。阴性对照的百分比并不考虑病毒如何有进攻性。它仅将细胞的 生长尤其是培养物的生长和阳性对照的生长进行比较。另一方面，抑制指数是基于阳性对照。它是与阳性对照(感染的细胞，但没有化合 物)相比，具有化合物的细胞生长得更好程度的指数，其中数值越接近1，则作用越好。MM罗汉果甙V的剂量范围很宽，为2至3600μ g/mL。图1示出这些范围的抗病毒效 应。罗汉果甙V在整个范围内未显示出细胞毒性，并且在浓度大于100 μ g/mL时，相对于 BVDV是最有效的。在浓度小于100 μ g/mL时，它的有效性降低，并且在浓度为25 μ g/mL或 更小时它几乎没有效力。表1和2示出各种不同浓度的罗汉果甙V的阴性对照的百分比和抑制指数。表1罗汉果甙V在高浓度范围内和低浓度范围内的阴性对照的百分比和抑制指数。 表2罗汉果甙V的阴性对照的百分比和抑制指数。
如上所示，抑制指数的数值越接近1，则作用越好。高范围的罗汉果甙V具有接近 1的数值(0. 86至0. 97)。研究表明，罗汉果甙V不能完全抑制BVDV，但它具有能够部分地抑制B⑶V增殖的 有效浓度范围(40至3600 μ g/mL)。虽然在本研究的条件下它不能完全抑制BVDV，但根据 本发明人的经验，还没有任何药物在此细胞模型中完全抑制BVDV，也没有任何药物在此体 外系统中以任何方式显示出优越于罗汉果甙V的作用。BVDV是一种特别有进攻性的病毒 (可获得的用于丙型肝炎的最准确的模型)。因此，对于BVDV，在50%范围内的阴性对照的 百分比被认为是极好的结果。在浓度为100μ g/mL时获得最佳的结果，其中观测到49. 8% 的阴性对照。实施例2 当和氟伐他汀联用时三萜糖苷罗汉果甙V对BVDV的抗病毒活件材料和方法材料和方法类似于实施例1中概述的那些材料和方法。氟伐他汀必须储存在0°C 和5°C之间并且是水溶性的。联合测试了罗汉果甙V和氟伐他汀，其中罗汉果甙V有两种浓 度有效剂量(100 μ g/mL)和低于其有效范围的剂量(6 μ g/mL)，而氟伐他汀有在其有效范 围内的 5 个剂量(0. 313,0. 625、1. 25,2. 5、以及 5. 0 μ g/mL)。MM研究表明，氟伐他汀扩展了罗汉果甙V的有效性的下限。尤其是，在使用6μ g/mL 罗汉果甙V的情况下，和单独使用氟伐他汀相比，5 μ g/mL和0. 3125 μ g/mL的氟伐他汀的抑 制指数得到很大提高(图2)。表3示出各种不同浓度的罗汉果甙V和氟伐他汀的阴性对照的百分比和抑制指数。
表3罗汉果甙V和氟伐他汀结合的阴性对照的百分比和抑制指数。 具有6 μ R/mL罗汉果甙V的氟伐他汀系列在没有氟伐他汀的情况下，6 μ g/mL罗汉果甙V对于BVDV没有抗病毒活性(表2)， 但当和所使用的任何浓度的氟伐他汀结合时，要比单独使用浓度为6μ g/mL的罗汉果甙V 所产生的抗病毒活性更大(表3)。在浓度为5 μ g/mL时，单用氟伐他汀具有一定的细胞毒 性，在浓度为0. 313 μ g/mL时，单用氟伐他汀没有抗病毒活性，但当上述两种中任何一种浓 度的氟伐他汀与浓度为6 μ g/mL的罗汉果甙V结合时，抗病毒效应既大于单用的氟伐他汀 又大于单用的罗汉果甙V的效应。在浓度为5 μ g/mL的氟伐他汀和浓度为6 μ g/mL的罗汉果甙V结合使用的情况下，抑制指数是0. 84，而在浓度为0. 3125 μ g/mL的氟伐他汀和浓度为6 μ g/mL的罗汉果甙V结合使用的情况下，抑制指数是0. 78 (表3)，两者均比单独使用 氟伐他汀有很大提高(数据未示出)。在氟伐他汀取中间浓度时(其中单独使用氟伐他汀 是最有效的)，氟伐他汀单独使用比结合使用具有更大的抗病毒活性。在浓度为2. 5 μ g/mL 时，在氟伐他汀的单独使用和结合使用之间并没有很大的差异。与浓度为1.25 μ g/mL的氟 伐他汀结合使用的效应大约比单独使用氟伐他汀低10%，而在浓度为0. 625 μ g/mL时，结 合的效应比单独使用氟伐他汀的效应低20%。此外，在结合研究中，浓度为100μ g/mL的罗 汉果甙V具有0. 84的抑制指数。这也是极好的。具有100 μ g/mL罗汉果甙V的氟伐他汀系列浓度为100 μ g/mL的罗汉果甙V本身并没有显示对BVDV的良好抑制(表2)。没 有与氟伐他汀结合增加了此有效性。事实上，与氟伐他汀的大多数结合显示出的活性比单 独使用罗汉果甙V显示出的活性更小，除2. 5 μ g/mL氟伐他汀之外，在该浓度，与罗汉果甙 V结合的活性单独使用罗汉果甙V是相同的，抑制指数是0. 84。同样，相对于单独使用氟伐 他汀来说，结合使用的效力并没有改善，除浓度为2. 5 μ g/mL之外，在该浓度，相对于单独 使用氟伐他汀，效力大约增加10%。在氟伐他汀和罗汉果甙V各自最有效的浓度范围内，两种药物结合并没有优势。 然而，研究表明，氟伐他汀扩展了罗汉果甙V的有效性的下限。在受治疗者不能很好耐受罗 汉果甙V或罗汉果甙V太贵的情况下，这是有利的。实施例3.罗、汉果甙IV对BVDV的杭病毒活件材料和方法评价了五种试验化合物对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的抗病毒效力和细胞毒性。 BVDV是一种与人类丙型肝炎病毒同属一个家族的黄病毒。丙型肝炎病毒在组织培养物中不 能生长，因此，由于这两种病毒之间的结构相似性，BVDV被用作模型病毒。这五个试验化合 物是利用在Madin-Darby牛肾(马-达氏牛肾；MDBK)细胞中的BVDV菌株NADL，在CPE (病 毒诱导的致细胞病变效应)_抑制分析中被评价。药物制备五个试验化合物以干粉提供，并溶解在分子级质量的无菌水中，得到列在表4中 的20mg/mL储液。所有的化合物用连续稀释的六次半对数稀释液及100 μ g/mL高测试浓度 进行评价。用500IU/mL的高测试浓度的重组干扰素α作为阳性对照抗病毒化合物。表4化合物的溶解 BVDV抗病毒评价分析按照 Buckwold，V . E . ，J . Wei, M. Wenzel-Mathers 禾口 J. Russell-2003- "Synergistic in vitro interactions between alpha interferon and ribavirin against bovine viral diarrhea virus and yellow fever virus as surrogate models of hepatitis C virus replication，，，Antimicrobial Agents and Chemotherapy 47(7) :2293_2298所描述的进行BVDV的抗病毒评价分析。简言之，将 Madin-Darby牛肾(MDBK)细胞继代于T-75培养瓶中。在分析的前一天，将细胞胰蛋白酶 化、粒化、计数并在体积为每孔100 μ L的96孔平底组织培养板中以IxlO4细胞/孔再悬浮 于组织培养基中。在平板接种细胞的后一天，洗涤这些孔，用含有以分析培养基稀释的各种 浓度的试验化合物的完全培养基(2%浆液)替换该培养基，代表性的平板接种设计参见表 5。在六次半对数浓度且100 μ g/mL高测试浓度下一式三份地针对挑战病毒评价这些化合 物。表5.用于抗-BVDV化合物评价的平板排布 M=培养基；B =空白；1 =赛门甙I ;2 =罗汉果χ(未确定的类似物)；等HT = 100 μ g/ml 的高测试浓度；2nd = 31. 6 μ g/ml ； 3rd = 10 μ g/ml，4th = 3. 16 μ g/ml ； 5th = 1 μ g/ml ；6th = 0. 316 μ g/ml只含有培养基的细胞对照(CC)、含有培养基和病毒的病毒感染的细胞对照(VC)、 含有培养基和每种药物浓度的药物细胞毒性对照、只含有培养基(没有细胞)的试剂对照 和含有药物和培养基(没有细胞)的药物比色对照与测试样品同时进行。用重组干扰素 α -2b作为阳性对照化合物。
在每次实验前从冰箱中取出预先滴定等分量的BVDV菌株NADL (ATCC VR-1422)。 将病毒稀释于组织培养基中，以致加到每个孔中的病毒量在感染后的6至7天能全部杀死 细胞。通过用含有四唑的染料混合物Cell Titer 96 (Promega, Madison, WI)对细胞 染色来测试添加药物后第7天的细胞存活率。用代谢活性细胞的线粒体酶将该混合物代谢 成可溶的甲臢(formazan)产物，以实现细胞数量的快速定量分析。除去培养基并用100 μ L 的新鲜培养基和IOyL的Cell Titer96 代替。平板在37°C再孵育4小时，用Molecular Devices Vmax平板读数器在490和650nm下读取分光光度学读数。数据分析利用内置计算机程序得到IC5tl(50%病毒复制抑制)，TC5Q(50%细胞毒性)和治疗 指数(TI5Q，用公式 TI5tl = TC50/IC50 计算)。MM按照前面所描述的标准抗病毒程序进行抗BVDV活性和细胞毒性评价。图3至7 给出了用图表形式表示的每一种化合物的抗病毒和细胞毒性的原始数据。在抗BVDV分析 中将重组干扰素α (rIFNa)作为相关的阳性对照化合物进行平行评价。图8和9中示出 rIFNa的数据。研究结果列在表6中。表6.试验化合物抗BVDV的评价 N/A=未实现如表6所总结的，罗汉果甙IV在试验浓度下显示了对BVDV特异的抗病毒活性， IC50值为0. 57 μ g/mL。其他试验化合物没有表现出明显的抗BVDV活性。由于阳性对照化合物重组干扰素α表现出预期的抗病毒水平，因而总体分析结 果有效。实施例4罗汉果甙V对HIV-I的抗病毒活性
材料与方法用H9细胞作为病毒宿主测试罗汉果甙V对HIV-I菌株IIIB的效力。罗汉果甙V可以在室温下以粉末形式储存并且是水溶性的。在4°C下储存含水储液。在生长培养基中由该含水储液制备最终的试剂稀释液。使用五份罗汉果甙V的稀释液 100、36、12、6 和 2μ g/mLo用H9细胞作为病毒的宿主细胞。H9是一种人T细胞克隆，被选择用于HIV-I的高 产量生长，其克隆自Hut78(—种来源于塞扎里综合征(Sezary Syndrome)患者的外周血的 具有诱导/辅助表型的人T细胞淋巴瘤细胞系)。使用的病毒是HIV-1，菌株 IIIB，目录 No 10-124-000，批号 No. 6M0008-DP。 HIV-IIIIB感染H9但并不总是导致细胞病变效应(CPE)，因此病毒的生长通过HIV_lp24抗 原捕获ELISA进行测定。在没有试验化合物的分析条件下对病毒进行滴定，用来确定用于抗病毒分析的 病毒接种量，即感染所有阳性对照培养物的最低感染复数(MOI)。接种量大约为病毒原液 (stock virus) TCID50/mL 的 7 倍。含有病毒却不含罗汉果甙V的培养物提供阳性对照。仅有未感染细胞的培养物 (无罗汉果甙V)提供阴性对照。采用所使用的所有浓度的罗汉果甙V(不含病毒接种物)提供细胞毒性对照。从 细胞的显微镜观察判断细胞毒性。如果具有罗汉果甙V的细胞生长得比阴性对照慢、具有 变化的形态或者显示坏死，即判断罗汉果甙V具有细胞毒性。如果细胞毒性对照具有与阴 性对照相同的外观，即认为罗汉果甙V在所研究的浓度下没有毒性。分析参数用每份培养物大约2. 5x10s细胞的ImL培养物滴板。每个分析条件进行四次重复。在培养基体积减少的情况下经2小时病毒吸收到宿主细胞上。然后用磷酸缓冲盐 从细胞洗去接种物。然后向培养物补充适量的含罗汉果甙V的培养基，达到它们的最终体 积。使用的生长培养基是RPMI 1640，含10%的胎牛血清和50yg/mL庆大霉素。将罗汉果 甙V留在生长培养基中持续试验阶段。分析进行7天，并在第4天再补充具有适当化合物浓度的培养基。用HIV_lp24抗原捕获ELISA来测定病毒增殖的量。在第7天收集上清液并冷冻。 解冻上清液，必要时进行稀释，并进行HIV-lp24ELISA分析。将多余的上清液再冷冻并保存 3个月。对HIV-lp24pg/mL的复制式培养物求平均值并表示为对阳性对照的百分比。抑制指数通过比较由试验培养物(含罗汉果甙V)产生的病毒的平均量与阳性对照(病毒 但不含药物)的平均量，来计算每一浓度的罗汉果甙V的抑制作用。每一罗汉果甙V浓度 的抑制指数按照1_(含罗汉果甙V的HIV-lp24平均值+阳性对照HIV-lp24平均值)来 计算。抑制指数为0表示没有效力。抑制指数离1越近，效力越大。如果含罗汉果甙V的培养物具有0. 90或更大的抑制指数，即判断罗汉果甙V对病 毒是强有效的，如果培养物抑制指数在0. 20和0. 89之间，则为有效，如果培养物抑制指数 小于0. 20，则没有效力。如果经细胞毒性对照测定罗汉果甙V对宿主细胞具有细胞毒性效应，则任何病毒生长减少都判断为细胞毒性效应而非抗病毒效应。MM阳性对照对HIV_lp24显阳性。阴性对照通过显微镜观察表现为健康 生长培养物， 并没有HIV-lp24信号。罗汉果甙V的剂量范围为2至100 μ g/mL，结果列在下面的表7中。图11给出这 些范围的抗病毒效果。显微镜观察证实，在所使用浓度的整个范围，罗汉果甙V没有显示出 细胞毒性，并且在6 μ g/mL的浓度下对HIV-I最有效。表7.罗汉果甙V的细胞毒性和抑制指数 罗汉果甙V在本研究的条件下没有显示出能完全抑制HIV-I。然而，使用的所有浓 度(100 μ g/mL的最高浓度除外)皆能显著地抑制病毒产生。在6μ g/mL下具有最大效果， 在该浓度下罗汉果甙V抑制HIV-I复制的有效性几乎为80%，高于或低于这个浓度有效性 会降低。不愿受理论的束缚，我们猜想在较高浓度时的效力下降可能是由于在溶液中的化 学作用抑制了细胞的吸收，例如由罗汉果甙V形成抑制性构建体。在本说明书中提及的所有文献以引用方式结合于本文。对本领域技术人员来说， 对所描述的本发明的实施方式的各种改进和变化将是显而易见的，而没有偏离本发明的范 围。虽然结合具体的优选实施方式对本发明进行了描述，但应当明了，被主张权利的本发明 不应过分地限制于这样的具体实施方式
。确实，本发明应该涵盖对所描述的本发明实施方 式的各种改进，这些改进对于本领域技术人员来说是显而易见的。
权利要求
一种包含罗汉果甙IV或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或前药的组合物在制备用于治疗和/或预防病毒感染的药剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述罗汉果甙IV得自葫芦科植物。
3.根据权利要求2所述的应用，其中所述植物是罗汉果属。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其中所述罗汉果甙IV得自罗汉果的果子。
5.根据权利要求1所述的应用，其中所述罗汉果甙IV是化学合成的。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的应用，其中所述罗汉果甙IV被卤化。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的应用，其中所述组合物包含卤盐。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的应用，其中所述组合物包含第二抗病毒化合物。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的应用，其中所述病毒感染由黄病毒引起。
10.根据权利要求9所述的应用，其中所述黄病毒引起丙型肝炎。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的应用，其中所述病毒感染引起选自流感、甲型 肝炎、乙型肝炎、丁型肝炎、庚型肝炎、辛型肝炎、自体免疫性肝炎、HIV以及呼吸道合胞病毒 (RSV)的组中的一种。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的应用，其中所述组合物包含他汀或者其类似 物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或者前药。
13.根据权利要求12所述的应用，其中所述他汀是氟伐他汀。
14.一种药物组合物，包含罗汉果甙IV或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐 或前药，以及至少一种稀释剂、载体或赋形剂。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述罗汉果甙IV得自罗汉果的果子。
16.根据权利要求14所述的组合物，其中所述罗汉果甙IV是化学合成的。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的组合物，其中所述罗汉果甙IV被卤化。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含卤盐。
19.根据权利要求14至18中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含第二抗病毒化 合物。
20.根据权利要求14至19中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含他汀或者其类 似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或者前药。
21.根据权利要求20所述的组合物，其中所述他汀是氟伐他汀。
22.根据权利要求14至21中任一项所述的组合物，用作药剂。
23.一种包含罗汉果甙V或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或前药的组合 物在制备用于治疗和/或预防逆转录酶病毒感染的药剂中的应用。
24.根据权利要求23所述的应用，其中所述罗汉果甙V得自葫芦科植物。
25.根据权利要求24所述的应用，其中所述植物是罗汉果属。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的应用，其中所述罗汉果甙V得自罗汉果的果子。
27.根据权利要求23所述的应用，其中所述罗汉果甙V是化学合成的。
28.根据权利要求23至27中任一项所述的应用，其中所述罗汉果甙V被卤化。
29.根据权利要求23至28中任一项所述的应用，其中所述组合物包含卤盐。
30.根据权利要求23至29中任一项所述的应用，其中所述组合物包含第二抗病毒化合物。
31.根据权利要求23至30中任一项所述的应用，其中所述逆转录酶病毒感染是由HIV 引起的。
32.根据权利要求31所述的应用，其中所述HIV为HIVl。
33.根据权利要求31所述的应用，其中所述HIV为HIV2。
34.根据权利要求23至33中任一项所述的应用，其中所述组合物包含他汀或者其类似 物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或者前药。
35.根据权利要求34所述的应用，其中所述他汀是氟伐他汀。
全文摘要
本发明提供一种包含至少一种三萜糖苷或其类似物、代谢物、前体、衍生物、药物活性盐或前药的组合物及其在制备用于治疗和/或预防病毒性感染的药剂方面的应用。还提供上述组合物与包含氟伐他汀或其类似物、代谢物、衍生物、药物活性盐、前体或前药的组合物的联合组合物在制备用于治疗和/或预防病毒性感染的药剂方面的应用。本发明的组合物和方法可进一步用于预防受治疗者的感染或与丙型肝炎病毒性感染有关的其它病症的发作和发展，如肝硬化、失代偿性肝疾病和/或肝细胞癌。
文档编号A61P31/18GK101837001SQ20091012933
公开日2010年9月22日 申请日期2009年3月20日 优先权日2009年3月20日
发明者帕特里克·T·普伦德加斯特 申请人:帕特里克·T·普伦德加斯特