专利名称：：用于肝损伤治疗的组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种可用于肝损伤、特别是适用于防治急慢性肝炎的治疗，具有保肝降酶作用的药用组合物。
背景技术：
：包括乙肝病毒携带、慢性肝炎等在内的肝病，是我国目前最为突出的公共卫生问题之一。黄芩素胶囊、五酯胶囊、五仁醇胶囊等保肝降酶类药物，是目前可用于治疗肝病的一类重要药物。黄吝素(Baicalei)溶于乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、醋酸乙酯和热冰醋酸，微溶于氯仿和硝基苯，几乎不溶于水。亮黄色针状结晶，熔点为268272t:(甲醇)。黄芩素具有抗炎抗变态反应、抗菌、利胆、利尿、降胆固醇等主要药理作用。黄芩素胶囊已用于治疗急性传染性肝炎，黄芩素针剂肌注用于治疗急性无黄疸型肝炎。五味子包括有北五味子和南五味子。习称的北五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinesis(Turcz.)Baill的干燥成熟果实；南五味子为木兰科植物华中五味子SchisandrasphenantheraRehd.etWils.的干燥成熟果实。二者均收载于现行版《中国药典》，具有相同的功能与主治，收敛固涩，益气生津，补肾宁心，可用于久咳虚喘、自汗、盗汗、遗精、滑精、久泻不止、津伤口渴、消渴、心悸、失眠、多梦等。目前研究表明，两种五味子含有相同或相似的化学成分，如木脂素、挥发油、有机酸等，能利胆，降低血清转氨酶，对肝细胞有保护作用，能增加细胞免疫功能，使脑、肝、脾脏SOD活性明显增强，故具有提高免疫，抗氧化、抗衰老作用。因此，在本发明中一般不再区分而统称为五味子。五味子及其种仁乙醇提取物对四氯化碳所致兔、大鼠和小鼠肝损害引起谷丙转氨酶升高有明显的降低作用。有报道从五味子中得到的木脂素及其衍生物22种，发现几乎所有木脂素对CC14及半乳糖胺肝损害均有抑制作用，从中分离得到的(五味子)酯甲、酯乙、酯丙和酯丁都有降酶作用。五味子制剂和五味子乙素、华中五味子酯甲等还能减轻或抑制CC14或硫代乙胺所致肝损害。目前以五仁醇浸膏(五味子仁醇提取物，本品含五仁醇按五味子乙素计算，不得低于9.0%)制成的药品为五仁醇胶囊，功能主治为滋补肝肾，用于急慢性、迁延性肝炎(GPT偏高)而具肝肾阴虚之症者；以南五味子醇浸膏制成的药品为五酯胶囊，能降低血清谷丙转氨酶，可用于慢性、迁延性肝炎谷丙转氨酶升高者。
发明内容针对上述情况，本发明将提供一种经试验证实在用于急慢性肝炎的治疗，以及在保肝降酶作用方面具有积极和更好效果的组合物。本发明治疗肝损伤的药物组合物，是以黄芩素和五味子木脂素为有效药用成分，与药物中可以接受的辅助添加成分共同组成。其中，所说有效药用成分中的黄芩素和以生药原料五味子量计的五味子木脂素的重量份比例为1/41/100，更好的比例是1/101/40，优选的比例为1/20。黄芩素是中药黄芩有效成分黄芩苷元中的最主要药用成分，并且是现在已有广泛使用的一种有效药物成分。目前其来源和获得方式，可以由来自药用原料黄芩提取物的黄芩苷以常规方法水解或酶解后得到，也可以通过全化学合成方式得到，或是由其它相关化合物经化学改造和/或修饰后得到。其中，最简单的常用方式，是由天然药用原料——可包括一般通常直接采用的药用原料黄芩，或是以同样也含有黄芩苷成分的其它天然药用原料，如并头草的叶和根、紫葳科植物木蝴蝶的种子和茎皮、车前科植物大车前的叶等多种天然药用原料，经提取和分离得到黄芩苷提取物后再进行水解而得到黄芩素。在采用由天然药用原料提取物方式得到的黄芩素成分时，除可经进一步分离纯化后得到单一纯净形式的黄芩素外，可以允许使用同时还含有主要存在于提取物中的如汉黄芩素、千层纸素八、可加黄芩素、7_甲氧基黄芩素等其它的黄酮苷元化合物成分，以及不会对黄芩素的作用产生不利影响和难以避免的其它杂质成分形式的混合物，但一般不应含有黄芩苷等苷类成分。所说的黄芩黄酮总苷元提取物，一般可以由黄芩生药材经自身酶解后、醇提、回收乙醇析出沉淀得到的黄芩黄酮总苷元。试验结果显示，在本发明的上述药物组合物中，采用以含有所说量黄芩素的黄芩黄酮总苷元提取物进行替换，一般不会对其保肝降酶作用有明显的影响或改变。根据不同制剂的要求和允许范围，并非必需要求使用单一纯净形式的化合物而允许这些杂质成分以适当的形式和/或比例同时存在，可有利于大大简化本发明药物的生产工艺过程，降低药物的成本。同样，有效药用成分中的五味子木脂素，也允许替换为含有所说量五味子木脂素的五味子提取物。所说的五味子提取物，可以为目前已有报道和使用的乙醇提取物，如南五味子醇浸膏、五味子仁醇提取物等。目前研究已表明，北五味子和南五味子含有基本相同的化学成分和相同的功能与主治，因此在本发明中所说的五味子提取物，可以来源于北五味子和/或南五味子而无需区分，至少在能实现本发明目的的药物组合物中无需特别的区分。相关的药效学试验结果显示，上述药物组合物中，所说有效药物成分黄芩素替换为含有所说量黄芩素的黄芩黄酮总苷元提取物(不含黄芩苷等苷类成分)，和/或所说有效药物成分五味子木脂素替换为含有所说量五味子木脂素的五味子提取物，不会对所说药物组合物的功效和作用产生不利影响。上述两有效药用成分或所说的其相应提取物，具体均可以按目前已有文献报道的方法制备。例如，五味子提取物可按《中药成方制剂》第ll册中的方式，取生药五味子加水煎煮1小时，滤过，弃去滤液，药渣烘干，粉碎，用70%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓縮至稠膏，即得五味子提取物；或将其乙醇提取液浓縮至稀浸膏(无醇味)，水沉，分取下层含有木脂素成分的油状沉淀即为五味子提取物。或按照《中药成方制剂》第19册中的方式，取干燥、粉碎后的五味子，用75%乙醇回流提取三次，第一次加4倍量75%乙醇，回流3小时，第二次加3倍量75%乙醇，回流2小时，第三次加3倍量75%乙醇，回流1小时，合并提取液，静置48小时，吸取上清液，减压回收乙醇，再加90%乙醇回流2小时，滤过，收集滤液，减压回收乙醇，即得。黄吝黄酮总苷元提取物可以参照本中国专利2007100483153中的方式，取黄吝药材，粉碎，加水加热保温，进行酶解反应，过滤，弃去滤液，将药渣用乙醇回流提取，提取液回收乙醇，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，即得黄芩黄酮总苷元提取物。还可以进一步用乙醇纯4化得到黄芩黄酮总苷元提取物。本发明人的深入研究发现，上述形式组合物中的两有效药用成分，在用于急慢性肝炎的治疗，以及保肝降酶作用等方面，能产生显著的协同增效作用。根据实际使用需要，本发明上述的组合物可以按目前的常规方式，由所说的药效药用成分与药物中可以接受的相应辅助添加成分，如崩解齐U、赋形齐U、润滑齐U、粘合齐IJ、填充剂等，共同制备成可供使用的包括片剂、滴丸、胶囊剂、微丸等常用剂型在内的口服型药物制剂。以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。具体实施方式实施例1取南五味子(或北五味子)15kg，加水煎煮1小时，滤过，弃去滤液，药渣烘干，粉碎，用70%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇至无醇味，加水适量，充分搅拌，静置过夜，倾出上清液，下层油状沉淀经硅胶柱层析分离，先用石油醚_乙酸乙酯(io:i)洗脱除杂，再用石油醚-乙酸乙酯(io:4)洗脱，薄层层析检查，合并含木脂素部分，除去溶媒，得五味子木脂素，其中总木脂素含量>95.0%。取黄芩素纯品(0.lkg，重量含量^98.0%)和上述五味子木脂素(相当于lkg五味子)，加入溶融的聚乙二醇中，搅匀，制成滴丸，即得相应的滴丸口服药物。实施例2取南五味子(或北五味子)10kg，加水煎煮1小时，滤过，弃去滤液，药渣烘干，粉碎，用70%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，加水适量，搅拌，静置沉淀，倾出上清液，下层油状沉淀即为五味子提取物。取黄芩素纯品(0.2kg，重量含量^98.0%)和上述五味子木脂素提取物(相当于0.8kg五味子)，加入溶融的聚乙二醇中，搅匀，制成滴丸，即得滴丸口服药物制剂。实施例3取黄芩10kg，粉碎，加水4-10倍，于40-7(TC保温3_10小时，进行酶解反应，过滤，将药渣用浓度为5095%的乙醇回流提取，提取液回收乙醇，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，即得黄芩黄酮总苷元提取物，黄芩素重量含量^40%。取北五味子(或南五味子)10kg，加水煎煮1小时，滤过，弃去滤液，药渣烘干，粉碎，用70%乙醇回流提取2次，每次1-2小时，滤过，合并滤液，浓縮，即得五味子提取物。取上述相当于O.lkg黄芩素的黄芩黄酮总苷元提取物和相当于2kg五味子的五味子提取物，加入淀粉适量，混合均匀，制粒，装入胶囊，制成iooo粒，即得所述的胶囊剂口服药物。实施例4取黄芩5kg，粉碎，加水3-6倍，于30-6(TC保温3_8小时，进行酶解反应，过滤，将药渣用浓度为6095%的乙醇回流提取，提取液回收乙醇，析出沉淀，将沉淀过滤、干燥，即得黄芩黄酮总苷元提取物，黄芩素重量含量^40%。取南五味子(或北五味子)5kg，加水煎煮1次，滤过，弃去滤液，药渣烘干，粉碎，用60-90%乙醇回流提取2次，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，加水适量，搅拌，静置沉淀，倾出上清液，下层油状沉淀即为五味子提取物。取上述相当于O.lkg黄芩素的黄芩黄酮总苷元提取物和相当于2kg五味子的五味子木脂素提取物，加入淀粉和糖粉适量，混合均匀，制粒，压片，制成2000片，即得所述的片剂口服药物。实施例5取黄芩素纯品(0.lkg，重量含量^98.0%)和按上述实施例3方式制备得到的五味子提取物(相当于4kg五味子)，加辅料适量，混合均匀，挤压制丸，即得所述的丸剂口服药物。实施例6取黄芩10kg，粉碎，加水4-10倍，于40-7(TC保温3_10小时，进行酶解反应，过滤，将药渣用浓度为5095%的乙醇回流提取，提取液回收乙醇，析出沉淀，过滤，再用乙醇重结晶纯化，即得黄芩黄酮总苷元提取物，黄芩素重量含量^60%。取上述相当于O.lkg黄芩素的黄芩黄酮总苷元提取物和实施例1方式制备得到的相当于10kg五味子的五味子木脂素，混合，加入淀粉和糖粉适量，混合均匀，制粒，压片，制成5000片，即得所述的片剂口服药物。以黄芩素和五味子木脂素为有效药用成分的不同比例组成形式的药物组合物作为试验药物进行下述试验研究。1材料1.1实验药物黄吝素重量含量^98.0%，本试验剂量以其重量(g)计算。黄芩黄酮总苷元提取物本试验剂量以其含有黄芩素的重量(g)计算。五味子木脂素(以下简称五味子)本试验剂量以其提取用原料生药五味子重量(g)计算。五味子提取物本试验剂量均以其提取用原料生药五味子重量(g)计算。ConA:Sigma产品，临用前用灭菌生理盐水配成所需浓度的溶液备用。对乙酰氨基酚化学纯，由国药集团化学试剂有限公司出品，批号为F20041216，临用前用温热的蒸馏水配成所需浓度的溶液备用。CC14:临用前用橄榄油配成所需浓度的溶液备用。硫代乙酰胺分析纯(AR)，25g/瓶，天津大茂化学试剂厂出品，批号为2004，1，11，临用前用灭菌生理盐水配成所需浓度的溶液备用。谷丙转氨酶测定试剂盒(ALT)，谷草转氨酶测定试剂盒(AST)，甘油三酯(TG)测定试剂盒，总胆固醇(TC)测定试剂盒(COD-CE-PAP法)批号为0805031，均购自四川省迈克科技有限责任公司。1.2实验动物小鼠ICR小鼠，雄性，一级动物，中国医学科学院简阳分院实验动物中心提供，昆明种一级小鼠，雄性，由四川省中医药科学院实验动物中心提供。2方法与结果2.1对ConA致小鼠肝损伤模型的影响取体重为22_24g的雄性ICR小鼠，随机分为10组，分别灌胃黄芩素0.lg/kg、黄吝素0.5g/kg、五味子0.4g/kg、五味子2.0g/kg、黄吝素0.lg/kg+五味子0.4g/kg、黄吝素0.lg/kg+五味子2.Og/kg、黄吝素0.5g/kg+五味子0.4g/kg和黄吝素0.5g/kg+五味子2.Og/kg及等量0.5%CMC，每天一次，连续5次，末次给药后40min除对照组外，其余各组动物均静脉注射ConA25mg/kg，对照组则给以等体积的生理盐水，然后动物禁食不禁水16h，取血测定其血清AST和ALT活性。表1黄芩素、五味子不同比例对ConA致小鼠肝损伤模型的影响(x士S)黄岑素(g/kg)五味子(g/kg)ConA(mg/kg)NAST(u/uALT(U/L)000879.6±12.237.1±4.100258183.6±30.6173.0±8.20.10257159.1±42.8135.9±0.45.3'0.50259140.8±30.6*107.1士37.r"00.4257153.0±48.994.8±41.2"*02.0257117.9±24.5*"45.4±12.40.10.4258134.6±36.7****86.5±13.6-0.12.0257110.2±24.5***32.9±24.7***0.50.4258116.3±24.553.6±41.2*"0.52.0258104.0±18.4"*28.8±20.6*"双环醇0.1g/kg25897.9±24.5"*32.9士16.5"'注与模型组比较*P<0.05，微P<0.001。表2对AST指标方差分析表方差来源方禾口自由度均方FP值五味子0.08688420.04344221.41<0.001黄芩素0.02049320.01024655,05<0.01交互作用3.40006940.85001725418.92<0扁误差0.123772610.00202卯49表3对ALT指标方差分析表方差来源方和自由度均方FP值五味子0.87卯7120.439925.5837O.001黄芩素0細32123720.045162,6267>0.05交互作用2.64457440.61143538.4547<0.001误差1.048759610.01719表1、表2和表3的结果均显示，黄芩素、五味子单用或合用均可显著减少ConA小鼠血清AST及ALT的活性，但合用后较单用时的作用明显增强，与模型组比较有统计学差7异。从表2可见，黄芩素和五味子在降低ConA小鼠血清AST活性上存在显著的协同作用；从表3可见，黄芩素和五味子在降低ConA小鼠血清ALT活性上存在显著的协同作用。当黄芩素与五味子的剂量均为大剂量时，其抗急性肝损伤作用与目前市场抗肝损伤西药新药双环醇的作用相当。2.2对CC14致小鼠急性肝损伤模型的影响取体重为22-24g的雄性ICR小鼠，按表6灌胃给药，每天一次，连续5次，末次给药后40min除对照组外，其余各组动物均腹腔注射CC140.13ml/kg(稀释在橄榄油中，给药体积均为10ml/kg)，对照组则给以等体积的生理盐水，然后动物禁食不禁水16h，取血测定其血清AST和ALT活性，结果见表4。表4结果显示，黄芩素、五味子单用或联合用均可显著减少CC14小鼠血清AST及ALT的活性，与模型组比较有统计学差异；联合应用时的作用显著增强，当其重量比为0.25:5时的效果最佳。2.3对CC14致小鼠急性肝损伤模型的影响取体重为22_24g的雄性ICR小鼠，随机分为8组(IVIII)，每组10只，按表5的量分别灌胃黄芩素0.lg/kg+五味子2g/kg(III)、黄芩素0.lg/kg+五味子提取物(实施例2)2g/kg(IV)、黄芩素0.lg/kg+五味子提取物(实施例3)2g/kg(V)、黄芩黄酮总苷元提取物(实施例3)0.lg/kg+五味子2g/kg(VI)、黄芩黄酮总苷元提取物0.lg/kg+五味子提取物(实施例2)2g/kg(VII)、黄芩黄酮总苷元提取物0.lg/kg+五味子提取物(实施例3)2g/kg(VI11)及等量O.5%CMC，每天一次，连续5次，表4黄芩素、五味子不同比例对CC14致小鼠肝损伤模型的影响(x士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与模型组比较:*P<0.05，微P<0.001。末次给药后40min除对照组外，其余各组动物均腹腔注射CC140.13ml/kg(稀释在橄榄油中，给药体积均为10ml/kg)，对照组则给以等体积的生理盐水，然后动物禁食不禁水16h，取血测定其血清AST和ALT活性，结果见表5。表5黄芩素或其提取物替换品与五味子或其提取物替换品对CC14致小鼠肝损伤模型的影响(x±S)组另IJAST(U/L)ALT(U/L)I对照组48.9±12.2"*28.8±4.广*II模型组226.4±30.6197.8±41.2in黄芩素o.ig/kg+五味子2g/kg141.2±36.7***95.2±37.1"*IV黄芩素O.lg/kg+五味子提取物2g/kg134.9士33.2"'***86.3±45.4V黄芩素0.1g/kg+五味子提取物2g/kg132.4±42.8****85.0±28.8VI黄苓黄酮总苷元提取物O.lg/kg+五味子2g/kg135.1±31.2"*87.1±37.广*W黄芩黄酮总苷元提取物O.lg/kg+五味子提取物2g/kg120.8±25.C81.4±16.5VI黄岑黄酮总苷元提取物O.lg^cg+五味子提取物2g/kg122.9±23.2"*79.8士20.7"'注与模型组比较:*P<0.05，***P<0.001。表5的结果显示，无论是黄芩素或是黄芩黄酮总苷元提取物与五味子木脂素或五味子提取物配伍均有相似的保肝降酶作用，与模型组比较有统计学差异，表明在本发明的药物组合物中，有效药物成分中的黄芩素替换为含有所说量黄芩黄酮总苷元提取物，和/或五味子木脂素替换为含有所说量五味子提取物，可具有基本一致的效果，不会对所说药物组合物的功效和作用产生不利影响。将本发明的药物组合物(黄芩黄酮总苷元提取物2g生药/kg+五味子提取物2g生药/kg)进一步与由黄芩提取物(黄芩苷含量^85X)2g生药/kg+五味子提取物2g生药/kg组成的药物组合物进行保肝降酶作用比较，结果见表6。表6黄芩、五味子不同比例对CC14致小鼠肝损伤模型的影响(x±S)组另uNAST(U/L)ALT(U/L)对照组10**承88.9±12.2模型组10226.4±30.6197.8±41.2黄芩黄酮总苷元提取物2g生药/kg+五味子提取物2g生药/kg10110.2±11.3"*55.2±27.广*黄芩提取物2g生药/kg+五味子提取物2g生药/kg10137.9±33.2***A89.8±25.3"'A注与模型组比较,P<0.05，***P<0.001。由表6可见相当于等生药量的黄芩黄酮总苷元提取物和主要为黄芩苷的黄芩提取物分别与五味子提取物配伍，二者均有保肝降酶作用，与模型组比较有统计学差异，但前者明显优于后者(P<0.05)。上述实验结果清楚显示，由黄芩素或黄芩总苷元提取物和五味子木脂素或其提取物为有效药用成分的本发明药物组合物，在综合的保肝、降酶作用方面可具有显著的协同增效作用，其结果明显优于其中有效药用成分黄芩素和五味子木脂素的单独作用，因而具有令人满意的开发前景和价值。权利要求用于肝损伤治疗的组合物，其特征是以黄芩素和五味子木脂素为有效药用成分，与药物中可以接受的辅助添加成分共同组成，所说有效药用成分中的黄芩素和以生药原料五味子量计的五味子木脂素的重量份比例为1/4～1/100。2.如权利要求1所述的用于肝损伤治疗的组合物，其特征是所说的黄芩素和以生药原料五味子量计的五味子木脂素的重量份比例为1/101/40。3.如权利要求1所述的用于肝损伤治疗的组合物，其特征是所说的黄芩素和以生药原料五味子量计的五味子木脂素的重量份比例为1/20。4.如权利要求1至3之一所述的用于肝损伤治疗的组合物，其特征是所说的有效药用成分黄芩素允许替换为含有所说量黄芩素的黄芩黄酮总苷元。5.如权利要求1至3之一所述的用于肝损伤治疗的组合物，其特征是所说的有效药用成分五味子木脂素允许替换为含有所说量五味子木脂素的五味子提取物。6.如权利要求1至3之一所述的用于肝损伤治疗的组合物，其特征是所说的组合物为口服型药物制剂。全文摘要用于肝损伤治疗的组合物，以黄芩素和五味子木脂素为有效药用成分，与药物中可以接受的辅助添加成分共同组成。有效药用成分中的黄芩素和以生药原料五味子量计的五味子木脂素的重量份比例为1/4～1/100。试验表明，上述两种有效药用成分的组合，在治疗急慢性肝炎、肝损伤作用方面具有显著的协同增效作用，结果明显优于其中有效药用成分的单独作用，也优于以黄芩苷与五味子木脂素组合的效果。文档编号A61P31/20GK101700278SQ20091021653公开日2010年5月5日申请日期2009年12月3日优先权日2009年12月3日发明者刘云华,刘玉红,唐大轩,易进海,谭正怀,陈燕,黄志芳申请人:四川省中医药科学院