一种复方苦参注射液的检测方法

专利名称：一种复方苦参注射液的检测方法
专利说明一种复方苦参注射液的检测方法 发明领域 本发明涉及一种复方苦参注射液的检测方法，特别涉及一种复方苦参注射液的指纹图谱的检测方法。

背景技术：
复方苦参注射液是记载于中药部颁标准第14册中的经典处方，标准编号为WS3-B-2752-97。复方苦参注射液由苦参和白土苓组成，具有清热利湿，凉血解毒，散结止痛的功效，应用于抗肿瘤、治疗癌肿性疼痛、止血、提高肿瘤患者免疫与改善生活质量等显著作用。由于临床疗效显著，近年销售不断提高。
在部颁标准及其他现有技术中，关于复方苦参注射液的检测方法公开了苦参碱和白土苓的鉴别方法，以及苦参碱的含量测定方法，但这些方法对于检测复方苦参注射液的质量专属性不够强，尤其是一种注射液，应该有更严格的检测方法控制产品质量，故亟待完善药品的质量标准，提高质量可控性，确保用药安全。
中药指纹图谱可以较全面地反映中药所含化学成分的种类与数量，进而反映中药的质量和中医用药所体现的整体疗效，有效的表征中药质量；尤其在现阶段中药的有效成分大多尚未明确，中药指纹图谱的整体性和模糊性正好符合中药质控的要求，较之单一成分或指标成分的质控方法，更具有科学性和全面性，更加客观地从整体上评价中药的内在质量。


发明内容
本发明目的在于公开一种复方苦参注射液的指纹图谱的检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的 复方苦参注射液的指纹图谱为(如图1) 供试品指纹图谱与质量标准所附的对照指纹图谱的相似度应不低于0.9；剔除溶剂峰并用氧化苦参碱及谱图中标示的色谱峰校正后，相似度应不低于0.90；指纹图谱应有8个特征峰，以3号峰为参照峰， 相对保留时间 1号峰0.216±0.02；2号峰0.514±0.02；3号峰，即S峰1.000；4号峰1.093±0.02；5号峰1.375±0.03；6号峰1.837±0.08；7号峰1.950±0.09；8号峰2.326±0.10； 特征指纹峰积分相对比值 1号峰0.130±30％；3号峰，即S峰1.000；4号峰0.399±25％；6号峰0.187±25％；7号峰0.122±25％。
本发明复方苦参注射液的指纹图谱检测方法包括如下步骤 照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI D)，结合指纹图谱要求测定 色谱条件与系统适应性试验用硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，0min→A∶B＝100∶0；60min→A∶B＝60∶40，流动相A为0.005～0.015mol/L的醋酸铵水溶液，用浓氨水调pH值为7.0～9.0；流动相B为乙腈-0.05～0.15mol/L的醋酸铵水溶液＝7～11∶1；检测波长为225nm；柱温为室温；流速为0.6～1.0ml/min； 参照物溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.05～0.15mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备精密量取复方苦参注射液0.2～0.6ml，置于25ml量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录60分钟色谱图即得。
本发明复方苦参注射液的指纹图谱检测方法优选包括如下步骤 照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI D)，结合指纹图谱要求测定 色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，0min→A∶B＝100∶0；60min→A∶B＝60∶40，流动相A为0.01mol/L的醋酸铵水溶液，用浓氨水调pH值为8.0；流动相B为乙腈-0.1mol/L的醋酸铵水溶液＝9∶1；检测波长为225nm；柱温为室温；流速为0.8ml/min； 参照物溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备精密量取复方苦参注射液0.4ml，置于25ml量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录60分钟色谱图即得。
本发明所述的复方苦参注射液的原料药组成为 苦参1000～1500重量份白土苓400～800重量份。
本发明所述的复方苦参注射液的原料药优选组成为 苦参1400重量份白土苓600重量份。
本发明所述的复方苦参注射液的制备方法包括如下步骤 将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量3～8倍的0.5～3％醋酸浸渍30～50小时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75℃以下浓缩至适量，另器存放，药渣加3～8倍量注射用水，煎煮二次，每次0.5～2小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清液与酸浓缩液合并，调整至800～1200体积份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达50～70％，静置过夜，离心，上清液减压回收乙醇，浓缩至300～600体积份，再加乙醇使醇含量达80～95％，同上处理，加注射用活性炭适量，加热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至6～8，放置过液，滤过，再调PH至9～11，同法处理，以醋酸调PH至4～6，同法处理，再以氢氧化钠调PH至7～9，加注射用水调至1000体积份，微孔薄膜抽滤，灌封，灭菌，即得。
本发明所述的复方苦参注射液的制备方法优选包括如下步骤 将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量5倍的1％醋酸浸渍48小时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75℃以下浓缩至适量，另器存放，药渣加5倍量注射用水，煎煮二次，每次1小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清液与酸浓缩液合并，调整至1000体积份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达65％，静置过夜，离心，上清液减压回收乙醇，浓缩至500体积份，再加乙醇使醇含量达90％，同上处理，加注射用活性炭适量，加热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至7，放置过液，滤过，再调PH至11，同法处理，以醋酸调PH至5，同法处理，再以氢氧化钠调PH至8，加注射用水调至1000体积份，微孔薄膜抽滤，灌封，灭菌，即得。
本发明所述的重量份与体积份的比例为克/毫升。



图1复方苦参注射液的对照指纹图谱； 图2不同流动相下复方苦参注射液的色谱图； S1流动相2，S2流动相1，S3流动相3，S4流动相4，S5流动相5 图3不同检测波长下复方苦参注射液的色谱图； S1210nm，S2220nm，S3225nm，S4230nm 图4不同色谱柱下复方苦参注射液的色谱图 S1Kromasil C18，S2Alltima C18，S3Luna C18 图5复方苦参注射液2h图谱 图6不同批号复方苦参注射液色谱图 S120031004，S220040401，S320040402；S420040403，S520040404， S620040405，S720040406，S820040407，S920040408，S1020040409， S1120040410，S1220040411，S1320040412，S1420040413 图7常温放置下六个月内复方苦参注射液色谱图 S10月，S21月，S32月，S43月，S56月 图8仪器适用性考察 S1Waters，S2日本岛津(Shimadzu) 本发明采用高效液相色谱方法建立复方苦参注射液的指纹图谱，应用于复方苦参注射液生产质量检测；采用药典会发布的相似度软件，将复方苦参注射液指纹图谱相似度阈值定为不得低于0.90。经实验证明该方法准确，可靠，可以最大限度的体现各主要成分的特征峰。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
下述实验均使用下述仪器及试药 仪器及试药Agilent1100型高效液相色谱仪(四元泵，二级管阵列检测器)及3D色谱工作站。KQ-250B型超声波清洗器(超声功率250W，工作频率40KHZ)。
氧化苦参碱对照品购于中国药品生物制品检定所(批号0780-200004) 甲醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。
复方苦参注射剂样品由山西振东制药股份有限公司提供，指纹图谱研究14批注射剂批号分别为20031004、20040401、20040402、20040403、20040404、20040405、20040406、20040407、20040408、20040409、20040410、20040411、20040412、20040413。
其他样品批号为20061120、20061213、20061219、20061220、20061221、20061223、20061224、20061226、20070101、20070102、20070103、20070104、20070105、20070106、20070107、20070108、20070109、20070110、20070111、20070112、20070113、20070114、20070115、20070116、20070117、20070118、20070119、20070120、20070121、20070122、20070123、20070124、20070125、20070201、20070202、20070203、20070204、20070205、20070206、20070207、20070211、20070212、20070213、20070214、20070215、20070216、20070217、20070218、20070302、20070302、20070303、20070501、20070502、20070506、20070511、20070514、20070604、20070605、20070606、20070704、20070708、20070714、20070812、20070814、20070818、20070821、20071202。
下述实验的供试品溶液均采用如下方法制备 供试品溶液的制备 精密量取复方苦参注射液0.4mL，置于25mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
下述实验的参照物溶液均采用如下方法制备 1.参照物的选择 复方苦参注射液经HPLC分析出现多个色谱峰，但以氧化苦参碱为主要成分，其积分面积在指纹图谱中所占的比例较大且相对稳定，因此选用氧化苦参碱峰作为参照物峰。
2.参照物溶液的制备 精密称取氧化苦参碱对照品适量，用甲醇溶解并稀释成0.1mg.mL-1的溶液，作为参照物溶液。
实验例1色谱条件及检测方法的确定 一、流动相的确定 试验过程中共选择了5种流动相系统 ①甲醇-乙腈-水-磷酸＝10∶30∶65∶0.05(含33mmol.L-1的SDS) ②甲醇-乙腈-水-磷酸＝10∶28.5∶61.5∶0.05(含26.4mmol.L-1的SDS) ③乙腈(A)-0.05％磷酸水溶液(B)梯度洗脱 0min→A∶B＝6∶94；42min→A∶B＝32∶68；80min→A∶B＝70∶30 ④流动相A为0.01mol.L-1的醋酸铵水溶液，用浓氨水调pH值为8.0；流动相B为甲醇-0.1mol.L-1的醋酸铵水溶液(9∶1)不同比例梯度程序洗脱 ⑤流动相A为0.01mol.L-1的醋酸铵水溶液，用浓氨水调pH值为8.0；流动相B为乙腈-0.1mol.L-1的醋酸铵水溶液(9∶1)线性梯度洗脱0min→A∶B＝100∶0；60min→A∶B＝60∶40。色谱图见附图2。
结果表明，各种流动相系统中以第五种流动相系统，即流动相A为0.01mol.L-1的醋酸铵水溶液，用浓氨水调pH值为8.0；流动相B为乙腈-0.1mol.L-1的醋酸铵水溶液(9∶1)线性梯度洗脱0min→A∶B＝100∶0；60min→A∶B＝60∶40为最佳，谱图上各个色谱峰的分离度较好，保留时间适中，因此选此流动相作为复方苦参注射液的HPLC指纹图谱检测的流动相。
二、检测波长的选择 试验过程中共选择了210、220、225、230nm四种波长，色谱图见附图3。在这四种检测波长下的HPLC图谱中均有多个色谱峰，在210nm处各个色谱峰的吸收最强，但综合考虑其末端吸收的干扰、HPLC梯度洗脱中基线的稳定性等因素，选定225nm为制作指纹图谱的测定波长。
三、色谱柱的选择 试验过程中共选择了三种不同的色谱柱Luna C18(5μm，4.6×250mm)；KromasilC18(5μm，4.6×250mm)；Alltima C18(5μm，4.6×250mm)，色谱图见附图4。
从图4可以看出，在Alltima C18色谱柱下HPLC图谱中色谱峰较少且分离效果较差，在Luna C18和Kromasil C18色谱柱下HPLC图谱中均有多个色谱峰且分离效果较好。综合考虑，选定Luna C18(5μm，4.6×250mm)色谱柱为制作指纹图谱的色谱柱。
四、色谱条件的确定 复方苦参注射液2h图谱见附图5。
通过2h图谱可看出，复方苦参注射液中所有成分的色谱峰在60min之内全部出现，故复方苦参注射液指纹图谱的检测时间确定为60min。
五、结论 通过选择，选定如下色谱条件为复方苦参注射液指纹图谱的测定色谱条件 色谱柱Luna C18(5μm，4.6×250mm)色谱分析柱； 流动相流动相A为0.01mol.L-1的乙酸铵水溶液(用浓氨水调pH值为8.0)，流动相B为乙腈-0.1mol.L-1的醋酸铵水溶液(9∶1)线性梯度洗脱0min→A∶B＝100∶0，60min→A∶B＝60∶40 检测波长225nm 柱温室温 流速0.8mL.min-1 检测方法分别精密吸取参照物溶液和供试品各20μL，注入高效色谱仪，记录60min色谱图即得。供试品色谱图中以氧化苦参碱作为参照峰，根据其保留时间和峰面积计算其它共有峰的相对保留时间和相对峰面积。
实验例2精密度试验 以新鲜配制的复方苦参注射液供试品溶液，连续进样5次，记录各共有色谱峰保留时间和积分面积。以氧化苦参碱的保留时间和积分面积为参照，换算出各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD，结果见表1和表2。
表1各共有峰的相对保留时间及RSD
表2各共有峰的相对峰面积及RSD
以上结果显示，复方苦参注射液的制备样品通过HPLC分析结果稳定，共有峰的(相对)保留时间和(相对)积分面积一致，相对标准偏差(RSD)均小于5.0％。结果表明，仪器等整个检测系统的精密度良好。
实验例3稳定性试验 以新鲜配制的复方苦参注射液供试品溶液，在1d内不同时间进样7次，记录各共有色谱峰保留时间和积分面积。以氧化苦参碱的保留时间和积分面积为参照，换算出各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD，结果见表3和表4。
表3各共有峰的相对保留时间及RSD
表4各共有峰的相对峰面积及RSD
以上结果显示，复方苦参注射液的制备样品在24h内通过HPLC分析结果稳定，共有峰的(相对)保留时间和(相对)积分面积一致，相对标准偏差(RSD)均小于4.0％。结果表明，样品溶液在24h内稳定性良好。
实验例4重现性实验 取同一批号的供试品5份，按上述方法进行制备并进行检测，考察各色谱峰相对保留时间、峰面积的一致性，结果见表5和表6。
表5各共有峰的相对保留时间及RSD
表6各共有峰的相对峰面积及RSD
以上结果显示，5份供试品中各共有色谱峰的(相对)保留时间和(相对)积分面积一致，相对标准偏差(RSD)均小于3.0％，表明其重现性良好。
实验例5复方苦参注射液指纹图谱及技术参数的确定实验 一、指纹图谱选择及共有指纹峰的标定 参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》(暂行)，并根据14批供试品指纹图谱，生成了对照指纹图谱，见附图1。
根据14批供试品指纹图谱所给出的相关参数，复方苦参注射液所有成分的色谱峰在60min之内全部出现。氧化苦参碱为其主要成分，从指纹图谱中可以看出氧化苦参碱峰积分百分最大，因此选氧化苦参碱为参照峰，并选择指纹图谱中可以用于反映药材内在质量的峰作为共有峰。
参照物氧化苦参碱标号为3(S)，其他共有峰依次标号为1，2，4，5，6，7，8。
二、共有峰的相对保留时间及相对峰面积 将不同批号的注射剂按相同的方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下检测指纹图谱，其色谱图见附图6。以参照物氧化苦参碱峰(S)的保留时间和峰面积为1，计算其余各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，并对复方苦参注射液HPLC色谱指纹峰进行测定分析，结果见表7和表8。
表7不同批号注射剂的相对保留时间
表8不同批号注射剂相对峰面积
结果显示，14批供试品各共有峰的保留时间及相对保留时间、峰面积及相对峰面积均具有较好的重现性，所选择的共有峰可以较为全面的反映样品中化学成分的信息，符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》(暂行)。
复方苦参注射液各共有峰的相对保留时间见表9。
表9复方苦参注射液各共有峰的相对保留时间
三、不同批号注射剂指纹图谱相似度计算 以共有模式为参照，通过“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”计算，得到各批号注射剂色谱指纹图谱相似度。结果见表10。
表10复方苦参注射液相似度评价结果
结果显示不同批号复方苦参注射液在上述色谱条件下分析所获得的指纹图谱，以共有模式为参照进行相似度分析，其相似度均在0.90以上。供试品的图谱应与标准(对照)谱图一致。剔除溶剂峰并用氧化苦参碱及标准(对照)谱图中标示的色谱峰校正后，相似度应不低于0.90。
四、制剂指纹图谱稳定性考察 取批号为20041002-1的注射剂，常温下放置6个月，分别在0月，1月，2月，3月和6月取样进行指纹图谱分析，考察制剂指纹图谱的稳定性。
色谱图见附图8，从附图8可以看出，注射液常温下放置6个月内其色谱指纹图谱无明显变化，相似性良好。与对照指纹图谱相比较，其相似度计算结果见表11。
表11制剂指纹图谱稳定性考察结果
从上表可以看出，复方苦参注射液常温下放置6个月其指纹图谱相似度均大于0.90，表明其制剂指纹图谱在6个月内稳定性良好。
五、应用本发明指纹图谱进行样品检测 实施例2所述指纹图谱技术应用于复方苦参注射液的质量检测，2006～2007年部分批号检测数据汇总计算，结果见表12 表12复方苦参注射液指纹图谱检测相似度评价结果
在所述色谱条件下分析所获得的指纹图谱，以共有模式为参照进行相似度分析，其相似度均在0.90以上。表明本指纹图谱技术能够很好的用于复方苦参注射液的质量检测。
六、仪器适用性考察 仪器一Waters 600 HPLC泵，Waters 996 PAD检测器，Millennium32化学工作站；仪器二日本岛津(Shimadzu)LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6A检测器，Allchrom化学工作站。其色谱指纹图谱见附图9，与标准(对照)图谱的相似度计算结果见表13。
表13仪器适用性考察结果
从附图9和表13可以看出，复方苦参注射液指纹图谱具有仪器通用性。
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。

具体实施例方式 实施例1复方苦参注射液 苦参1400g白土苓600g。
将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量5倍的1％醋酸浸渍48小时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75℃以下浓缩至适量，另器存放，药渣加5倍量注射用水，煎煮二次，每次1小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清液与酸浓缩液合并，调整至1000ml，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达65％，静置过夜，离心，上清液减压回收乙醇，浓缩至500ml，再加乙醇使醇含量达90％，同上处理，加注射用活性炭适量，加热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至7，放置过液，滤过，再调PH至11，同法处理，以醋酸调PH至5，同法处理，再以氢氧化钠调PH至8，加注射用水调至1000ml，微孔薄膜抽滤，灌封，灭菌，即得。
实施例2实施例1所述复方苦参注射液的指纹图谱检测方法 照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI D)，结合指纹图谱要求测定 色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，0min→A∶B＝100∶0；60min→A∶B＝60∶40，流动相A为0.01mol/L的醋酸铵水溶液，用浓氨水调pH值为8.0；流动相B为乙腈-0.1mol/L的醋酸铵水溶液＝9∶1；检测波长为225nm；柱温为室温；流速为0.8ml/min； 参照物溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备精密量取复方苦参注射液0.4ml，置于25ml量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录60分钟色谱图即得； 指纹图谱应有8个特征峰，以3号峰为参照峰， 相对保留时间 1号峰0.216；2号峰0.514；3号峰，即S峰1.000；4号峰1.093；5号峰1.375；6号峰1.837；7号峰1.950；8号峰2.326； 特征指纹峰积分相对比值 1号峰0.130；3号峰，即S峰1.000；4号峰0.399；6号峰0.187；7号峰0.122。
供试品指纹图谱与质量标准所附的对照指纹图谱的相似度不低于0.9；剔除溶剂峰并用氧化苦参碱及谱图中标示的色谱峰校正后，相似度不低于0.90；
权利要求
1.一种复方苦参注射液的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中指纹图谱为
供试品指纹图谱与质量标准所附的对照指纹图谱的相似度应不低于0.9；剔除溶剂峰并用氧化苦参碱及谱图中标示的色谱峰校正后，相似度应不低于0.90；
指纹图谱应有8个特征峰，以3号峰为参照峰，
相对保留时间
1号峰0.216±0.02；2号峰0.514±0.02；3号峰，即S峰1.000；4号峰1.093±0.02；
5号峰1.375±0.03；6号峰1.837±0.08；7号峰1.950±0.09；8号峰2.326±0.10；
特征指纹峰积分相对比值
1号峰0.130±30％；3号峰，即S峰1.000；4号峰0.399±25％；6号峰0.187±25％；7号峰0.122±25％。
2.如权利要求1所述的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤
照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI D)，结合指纹图谱要求测定
色谱条件与系统适应性试验用硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，0min→A∶B＝100∶0；60min→A∶B＝60∶40，流动相A为0.005～0.015mol/L的醋酸铵水溶液，用浓氨水调pH值为7.0～9.0；流动相B为乙腈-0.05～0.15mol/L的醋酸铵水溶液＝7～11∶1；检测波长为225nm；柱温为室温；流速为0.6～1.0ml/min；
参照物溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.05～0.15mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备精密量取复方苦参注射液0.2～0.6ml，置于25ml量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录60分钟色谱图即得。
3.如权利要求2所述的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤
照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI D)，结合指纹图谱要求测定
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，0min→A∶B＝100∶0；60min→A∶B＝60∶40，流动相A为0.01mol/L的醋酸铵水溶液，用浓氨水调pH值为8.0；流动相B为乙腈-0.1mol/L的醋酸铵水溶液＝9∶1；检测波长为225nm；柱温为室温；流速为0.8ml/min；
参照物溶液的制备精密称取氧化苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备精密量取复方苦参注射液0.4ml，置于25ml量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；
测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录60分钟色谱图即得。
4.如权利要求1-3任一所述的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中的复方苦参注射液的原料药组成为
苦参 1000～1500重量份白土苓 400～800重量份。
5.如权利要求4所述的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中的复方苦参注射液的原料药组成为
苦参 1400重量份白土苓 600重量份。
6.如权利要求4所述的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中复方苦参注射液的制备方法包括如下步骤
将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量3～8倍的0.5～3％醋酸浸渍30～50小时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75℃以下浓缩至适量，另器存放，药渣加3～8倍量注射用水，煎煮二次，每次0.5～2小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清液与酸浓缩液合并，调整至800～1200体积份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达50～70％，静置过夜，离心，上清液减压回收乙醇，浓缩至300～600体积份，再加乙醇使醇含量达80～95％，同上处理，加注射用活性炭适量，加热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至6～8，放置过液，滤过，再调PH至9～11，同法处理，以醋酸调PH至4～6，同法处理，再以氢氧化钠调PH至7～9，加注射用水调至1000体积份，微孔薄膜抽滤，灌封，灭菌，即得。
7.如权利要求6所述的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中复方苦参注射液的制备方法包括如下步骤
将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量5倍的1％醋酸浸渍48小时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75℃以下浓缩至适量，另器存放，药渣加5倍量注射用水，煎煮二次，每次1小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清液与酸浓缩液合并，调整至1000体积份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达65％，静置过夜，离心，上清液减压回收乙醇，浓缩至500体积份，再加乙醇使醇含量达90％，同上处理，加注射用活性炭适量，加热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至7，放置过液，滤过，再调PH至11，同法处理，以醋酸调PH至5，同法处理，再以氢氧化钠调PH至8，加注射用水调至1000体积份，微孔薄膜抽滤，灌封，灭菌，即得。
8.如权利要求5所述的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中复方苦参注射液的制备方法包括如下步骤
将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量3～8倍的0.5～3％醋酸浸渍30～50小时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75℃以下浓缩至适量，另器存放，药渣加3～8倍量注射用水，煎煮二次，每次0.5～2小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清液与酸浓缩液合并，调整至800～1200体积份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达50～70％，静置过夜，离心，上清液减压回收乙醇，浓缩至300～600体积份，再加乙醇使醇含量达80～95％，同上处理，加注射用活性炭适量，加热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至6～8，放置过液，滤过，再调PH至9～11，同法处理，以醋酸调PH至4～6，同法处理，再以氢氧化钠调PH至7～9，加注射用水调至1000体积份，微孔薄膜抽滤，灌封，灭菌，即得。
9.如权利要求8所述的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中复方苦参注射液的制备方法包括如下步骤
将二味原料药粉碎成粗粉，混匀，置渗漉缸中，加相当于药量5倍的1％醋酸浸渍48小时，而后进行渗漉，收集漉液，减压75℃以下浓缩至适量，另器存放，药渣加5倍量注射用水，煎煮二次，每次1小时，合并滤液，浓缩至适量，放冷，离心，上清液与酸浓缩液合并，调整至1000体积份，加乙醇沉淀2次，先使溶液醇含量达65％，静置过夜，离心，上清液减压回收乙醇，浓缩至500体积份，再加乙醇使醇含量达90％，同上处理，加注射用活性炭适量，加热处理，滤过，用氢氧化钠调pH值至7，放置过液，滤过，再调PH至11，同法处理，以醋酸调PH至5，同法处理，再以氢氧化钠调PH至8，加注射用水调至1000体积份，微孔薄膜抽滤，灌封，灭菌，即得。
全文摘要
本发明公开一种复方苦参注射液的检测方法——色谱指纹图谱法，本发明采用高效液相色谱方法建立复方苦参注射液的指纹图谱，应用于复方苦参注射液中间体及成品的质量控制；采用药典会发布的《中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件》，将复方苦参注射液指纹图谱相似度阈值定为不得低于0.90。经实验证明该方法准确，可靠，可以最大限度的体现复方苦参注射液的主要成分，确保药品质量。
文档编号A61K9/08GK101744975SQ20091024432
公开日2010年6月23日 申请日期2009年12月31日 优先权日2009年12月31日
发明者王智民, 李安平, 菅晓勇, 胡红宇, 海丽娜, 李军红 申请人:北京振东光明药物研究院有限公司, 山西振东制药股份有限公司