专利名称：三乙酰基-3-羟基苯基腺苷及其调血脂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及三乙酰基-3-羟基苯基腺苷化合物、其制备方法，含有其的药物组合 物，以及制备高血脂症药物的用途，属于医药技术领域。
背景技术：
大量的基础研究资料和临床实践证明，高脂血症，包括高胆固醇血症、高甘油三酯 血症及复合性高脂血症是脑卒中、冠心病、心肌梗死、心脏猝死的重要危险因素。此外，高脂 血症也是促进高血压、糖耐量异常、糖尿病的一个重要危险因素。高脂血症还可导致脂肪 肝、肝硬化、胰腺炎、眼底出血、失明、周围血管病变、高尿酸血症。目前临床上应用的调血脂药物包括以他汀类为代表的胆固醇生物合成酶抑制剂， 这类药物通过抑制HMG-CoA还原酶，使体内内源性胆固醇的合成减少，减少低密度脂蛋白 胆固醇(LDL-C)的来源。同时，该类药物增加或激活肝细胞表面的LDL受体表达的水平而 减少血液中LDL的含量。另一类是以激活过氧化物酶增生因子活化受体(PPARs)转录因子 从而降低甘油三酯水平的贝特类药物，上述两类药物是当今调血脂药物的主流，其临床药 效确切，服用剂量小，生物利用度较好，但二者产生的肝损伤和横纹肌溶解症等严重不良反 应均已成为当今他汀类和贝特类药物最为令人担优和关注的安全性问题。与西方制药企业开发新药的模式相比，从我国疗效确切的传统中草药中寻找新型 调血脂先导化合物则不失为一条符合我国国情的新药研究模式。许多中草药成分具有良好 的调血脂作用且不良反应较少，应用前景广阔。例如，山楂含有的三萜类成分抑制体内胆固 醇的合成和加快胆固醇清除的作用；大黄、决明子及何首乌含有的蒽醌类活性成分能促进 肠蠕动，增加胆固醇的排泄泽泻的降脂作用与其含有的三萜化合物干扰内源性胆固醇的 代谢有关；丹参的丹参甲素体外模型表明有抑制胆固醇合成的作用；赤芍可增加胆汁酸的 排出；绞股蓝的绞股蓝总甙可以使血液中LDL-C、总胆固醇以及甘油三脂的水平降低，升高 HDL-C的水平。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一个新的2’，3’，5’-三-0-乙酰基-N6-(3-羟基 苯基)腺苷化合物。本发明要解决的另一个技术问题是提供一种制备2，，3，，5，-三-0-乙酰 基-#-(3-羟基苯基)腺苷的方法。本发明要解决的又一个技术问题是提供一种含有2’，3’，5’ -三-0-乙酰 基-#-(3-羟基苯基)腺苷的药物组合物。本发明要解决的再一个技术问题是提供2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯 基)腺苷在制备预防和/或治疗高血脂症的药物中的应用。为解决本发明的技术问题，本发明采用如下技术方案本发明的2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷，如式(I)所示
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本发明另一方面涉及2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷的方法， 包括如下步骤第一步次黄嘌呤核苷在有机溶剂中滴加醋酐进行反应得三-0-乙酰基次黄嘌呤 核苷第二步三-0-乙酰基次黄嘌呤核苷和SOCl2反应制备三-0-乙酰基-6-氯腺苷，第三步原料三-0-乙酰基-6-氯腺苷和3-氨基苯酚在有机溶剂中进行反应，再 经纯化制备2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6- (3-羟基苯基)腺苷； 其中，R为3-羟基苯胺基。第一步反应中所述的有机溶剂选自吡啶；滴加醋酐的温度是_5至5°C，滴加醋酐 完成后温度上升至20至30°C。第二步反应在三乙胺存在的条件下进行。第三步纯化是柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯石油醚=2 1。本发明再一方面还公开了含有治疗有效量的2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6-(3-羟 基苯基)腺苷化合物，以及药学上可接受的载体。该药物组合物可根据本领域公知的方法 制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂 结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为 0. 1-95 重量 ％。本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道 或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、 阴道、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包
括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括0/V型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、
粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、 颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软 膏剂、凝胶剂、糊剂等。本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种
微粒给药系统。为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀 释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳 糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙 醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶 浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡 波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维 素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙 烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂 酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双 层片和多层片。为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混 合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合 剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀 释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物 作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、PH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶 剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；PH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、 氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干 粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加 剂。发明的药物组合物还含有其他调血脂的药物。本发明的再一方面还公开了 2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷在 制备预防和\或治疗高血脂症的药物中的应用。其调血脂活性明显、毒副作用小、体内代谢 减慢。为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给 药方法给药。本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程 度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化 合物的每天的合适剂量范围为0. 001-150mg/Kg体重，优选为0. l-100mg/Kg体重，更优选为 l-60mg/Kg体重，最优选为2-30mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单 位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。 当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
具体实施例方式下面的实施例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。1H-NMR在所有情况下与给出结构一致。特征性化学位移(δ )用低于四甲基甲硅烷 磁场的百万份表示，其中使用常缩写来命名主要的峰例如，s，单峰；d，双重峰；t，三重峰； q,四重峰；m，多重峰；br，宽峰；dd，双二重峰。质谱(m/z)用电喷雾离子化方式记录。对于 常用溶剂使用下列缩写DMS0，氘代二甲亚砜。实施例1 2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷(WS070117)的合成第一步5. 36g次黄嘌呤核苷悬浮于吡啶25mL中，冰浴至0°C，滴加醋酐16mL，滴 加完毕，室温搅拌6h，TLC检测反应结束。减压蒸去绝大部分吡啶，冷却，加水，抽率，水洗， 得白色固体(tri-Ο-乙酰基次黄嘌呤核苷)7. 55g。第二步取上述产物5. 5g，加入二氯甲烷50mL和ImL DMF，升温至40°C，滴加3. 3g SOCl2的CH2Cl2液，回流，6h后TLC检测反应结束1将反应液用二氯甲烷稀释，饱和碳酸氢钠 溶液洗两次，饱和氯化钠洗两次，无水硫酸钠干燥。减压蒸尽溶剂，得三-0-乙酰基-6-氯 腺苷5. 4g。第三步原料三-0-乙酰基-6-氯腺苷5. 4g、3_氨基苯酚4. 28g中加入无水乙醇 30mL、三乙胺3.96g，60°C反应8h。蒸尽溶剂，柱层析，乙酸乙酯石油醚=2 1洗脱，得 类白色固体1.51g。1H-NMR(400MHz, DMS0) δ 9. 83 (s, 1H) ；9. 32 (s, 1H) ；8. 52 (s, 1H) ；8. 41 (s, 1H)； 7. 48(t，lH) ；7. 30(d，lH) ；7. 08(t，lH) ；6. 45(dd，lH) ；6. 26(d，lH) ；6. 05(t，lH) ；5.64 (t， 1H) ；4. 42(q，lH) ；4. 37(q，lH) ；4. 25(q，lH) ；2. ll(s，3H) ；2. 04(s，lH) ；2. 00(s，3H)。ESI :m/z [ΜΗ+] 486. 3753药理实验实施例2 :WS070117治疗给药对高血脂症模型大鼠血脂水平的影响方法2. 1模型建立及分组动物适应性饲养1周后分别造模，大鼠除正常对照组外喂 以高脂饲料，连续4周后随机分成6组；连续4周。4周后尾尖采血，检测血清胆固醇(TC)和 甘油三酯(TG)含量。兼顾TC、TG水平，按体重随机分成6组，分别为模型对照组，阳性对照 药辛伐他汀组(2mg/kg)和非诺贝特组(50mg/kg)，WS070117高剂量组(12mg/kg)，WS070117 高剂量组(6mg/kg)，WS070117低剂量组(3mg/kg)，每组20只。2. 2给药各给药组大鼠于造模后4周，每天灌胃给药1次，正常对照组及模型组 给予同体积蒸馏水(10ml/kg)。2. 3各项指标检测大鼠给药4周后禁食12h，动物以45mg/kg戊巴比妥钠腹腔注 射麻醉，再按100U/kg体重尾静脉注射肝素。15min内，腹主动脉取血，分离血清，以试剂盒 检测血清TC、TG、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷丙转氨酶 (ALT)、游离脂肪酸(FFA)含量，取肝脏及腹后壁脂肪称重，计算肝指数及脂肪指数；取部分 肝脏作组织勻浆，以试剂盒检测勻浆液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。剩余 动物停止给药，继续给予高脂饲料，2周后眼眶静脉采血，测血清TC、TG含量。
结果1 对高血脂症大鼠血脂的影响结果表明，大鼠连续给予高脂饲料后血清TC、TG、LDL-C含量明显增高，HDL/LDL比 值明显降低，血清游离脂肪酸升高，表明高血脂症大鼠模型复制成功。给予WS070117治疗 后可使血清中升高的TC、TG、LDL-C含量明显降低，HDL/LDL比值明显增高，表明WS070117 具有明显的调血脂作用。WS070117的6mg/kg剂量下对大鼠游离脂肪酸有明显降低作用。 (结果见表1)表1. WS070117治疗给药对高血脂症大鼠血脂的影响 同正常组比较#P < 0. 05，##P < 0. 01，###P < 0. 001 ；同模型组比较 *P < 0. 05，**P < 0. 01，***P < 0. 001。结果2 对高血脂症大鼠腹后壁脂肪重量的影响结果表明，大鼠连续给予高脂饲料后腹后壁脂肪重量明显增高。给予WS070117治 疗后重量明显降低，表明WS070117对腹部脂肪蓄积有明显的降低作用。(结果见表2)表2. WS070117治疗给药对高血脂症大鼠腹后壁脂肪重量的影响 同正常组比较 flP < 0. 05, flflP < 0.01, ·Ρ < 0.001 ；
同模型组比较 *P < 0. 05，**P < 0. 01，***P < 0· 001。结果3 对高血脂症大鼠肝脏SOD、MDA的影响结果表明，大鼠造模4周后肝脏MDA含量明显增高，SOD活性明显降低，给予辛伐 他汀、非诺贝特或WS070117后大鼠肝脏SOD活性明显增高、WS070117在12mg/kg剂量下 可使肝脏MDA含量明显降低，显示其具有抗氧化作用。(结果见表3)表3. WS070117治疗给药对高血脂症大鼠肝脏SOD、MDA的影响 同正常组比较 flP < 0. 05, flflP < 0. 01, ·Ρ < 0. 001 ；同模型组比较 *Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01，***Ρ < 0· 001。结果4 对高血脂症大鼠肝重、血清ALT活性的影响结果表明，大鼠连续给予高脂饲料后血清ALT活性均有一定的增高趋势，但无统 计学意义。模型组大鼠肝指数明显增大。(结果见表4)表4. WS070117对高血脂症大鼠肝重、血清ALT活性的影响
同正常组比较flP < 0. 05, ##P < 0.01,腿P < 0.001 ；同模型组比较 *P < 0. 05，**P < 0. 01，***P < 0· 001。结果5 停药2周后大鼠血脂变化结果显示，大鼠停药2周后血清TC含量明显低于模型组大鼠、TG均明显回升，表 明WS070117调血脂作用停药后可维持2周以上。(结果见表5)表5. WS070117对停药后实验性高血脂症大鼠血清脂质的影响
同正常组比较flP < 0. 05, flflP < 0.01, ·Ρ < 0.001 ；同模型组比较 *Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01，***Ρ < 0· 001。实施例3 :WS070117治疗给药对高血脂症模型金黄地鼠血脂水平的影响方法3. 1模型建立及分组动物适应性饲养1周后分别造模，金黄地鼠除正常对照组 外喂以高脂饲料，连续4周后随机分成6组；连续4周。4周后尾尖采血，检测血清胆固醇 (TC)和甘油三酯(TG)含量。兼顾TC、TG水平，按体重随机分成6组，分别为模型对照组，阳 性对照药辛伐他汀组(2mg/kg)和非诺贝特组(50mg/kg)，WS070117高剂量组(12mg/kg)， WS070117 高剂量组(6mg/kg)，WS070117 低剂量组(3mg/kg)，每组 12 只。3. 2给药各给药组金黄地鼠于造模后4周，每天灌胃给药1次，正常对照组及模 型组给予同体积蒸馏水(10ml/kg)。2. 3各项指标检测金黄地鼠给药4周后各组随机选取10只动物，禁食12h，眼眶 静脉取血，常规制备血清，以试剂盒检测血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量；取腹后壁脂肪称重 计算脂肪指数；取部分肝脏作组织勻浆，以试剂盒检测勻浆液中S0D、MDA含量。剩余动物停 止给药，继续给予高脂饲料，2周后眼眶静脉采血，测血清TC、TG含量。结果1 对高血脂症金黄地鼠血脂的影响结果表明，金黄地鼠连续给予高脂饲料后血清TC、TG、LDL-C含量明显增高，HDL/ LDL比值明显降低，血清游离脂肪酸略有升高，表明高血脂症金黄地鼠模型复制成功。给予 WS070117治疗后可使血清中升高的TC、TG、LDL-C含量明显降低，HDL/LDL比值明显增高， 表明WS070117具有明显的调血脂作用。(结果见表6)表6. WS070117治疗给药对高血脂症金黄地鼠血脂的影响 同止常组比较sP < 0.05, flflP < 0.01, ·Ρ < 0.001 ；同模型组比较 *Ρ < 0.05, **Ρ < 0· 01，***Ρ < 0. 001。结果2 对高血脂症肌金黄地鼠腹后壁脂肪重量的影响结果表明，金黄地鼠连续给予脂肪乳或高脂饲料后腹后壁脂肪重量明显增高。给 予WS070117治疗后重量明显降低，表明WS070117对腹部脂肪蓄积有明显的降低作用。(结 果见表7)表7. WS070117治疗给药对高血脂症金黄地鼠腹后壁脂肪重量的影响 同正常组比较flP < 0. 05, flflP < 0. 01, ·Ρ < 0. 001 ；同模型组比较 *Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01，***Ρ < 0. 001。结果3 对高血脂症金黄地鼠肝脏MDA、SOD的影响结果表明，金黄地鼠造模4周后肝脏MDA含量明显增高，肝脏SOD活性明显降低， 给予辛伐他汀、非诺贝特或WS070117后金黄地鼠肝脏MDA含量明显降低，显示其具有抗氧 化作用。(结果见表8)表8. WS070117治疗给药对高血脂症金黄地鼠肝脏SOD、MDA的影响
同正常组比较 flP < 0. 05，flflP < 0. 01，·Ρ < 0. 001 ；同模型组比较 *Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01，***Ρ < 0. 001。结果4 对高血脂症金黄地鼠肝重、血清ALT活性的影响结果表明，金黄地鼠连续给予脂肪乳或高脂饲料后血清ALT活性均有一定的增高 趋势，但无统计学意义。模型组大鼠肝指数明显增大，WS070117对金黄地鼠血清ALT活性 有一定的降低趋势。(结果见表9)表9. WS070117对高血脂症金黄地鼠肝重、血清ALT活性的影响
同正常组比较 flP < 0. 05，flflP < 0.01,腿P < 0. 001 ； 同模型组比较 *P < 0. 05，**P < 0. 01，***P < 0. 001。 结果5 停药2周后金黄地鼠血脂变化
结果显示，金黄地鼠停药2周后TC、TG仍明显低于模型对照组，表明WS070117调 血脂作用停药后可维持2周以上。(结果见表10)表10. WS070117对停药后实验性高血脂症金黄地鼠血清脂质的影响 同正常组比较sP <0.05，##P< 0.01，·Ρ< 0.001 ；同模型组比较*Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01，< 0.001ο综上所述，2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷(代号WS070117)是 一种合成的未见文献报道的新化合物，药效学实验证实WS070117具有调节大鼠、金黄地鼠 高血脂模式动物血脂水平的作用，提示2’，3’，5’ -三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷 具有治疗实验性高血脂症方面的作用。
权利要求
如式(I)所示的2’，3’，5’-三-O-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷FPA00001141214600011.tif
2.式(I)所示的2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷的制备方法， 其特征在于，包括如下步骤第一步次黄嘌呤核苷在有机溶剂中滴加醋酐进行反应得三-0-乙酰基次黄嘌呤核苷 第二步三-0-乙酰基次黄嘌呤核苷和S0C12反应制备三-0-乙酰基-6-氯腺苷， 第三步原料三-0-乙酰基-6-氯腺苷和3-氨基苯酚在有机溶剂中进行反应，再经纯 化制备2，，3，，5，-三-0-乙酰基-N6- (3-羟基苯基)腺苷； 其中，R为3-羟基苯胺基。
3.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，第一步反应中所述的有机溶剂选自吡啶。
4.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，第一步反应中滴加醋酐的温度是-5至 5°C，滴加醋酐完成后温度上升至20至30°C。
5.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，所述的第二步反应在三乙胺存在的条件 下进行。
6.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，所述的第三步纯化是柱层析，洗脱剂为乙 酸乙酯石油醚=2 1。
7.—种药物组合物，其特征在于，含有治疗有效量的式(I)所示的2’，3’，5’_三-0-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷，以及药学上可接受的载体
8.根据权利要求7的药物组合物，其特征在于，还含有其他调血脂的药物。
9.根据权利要求中任一药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型选自片剂、 胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒给药系统。
10.式(I)所示的2，，3，，5，_三-O-乙酰基-Ν6-(3-羟基苯基)腺苷在制备预防和\或 治疗高血脂症的药物中的应用
全文摘要
本发明公开了式(I)所示的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷、其制法和其药物组合物与用途。具体而言，公开了一个新的化合物2’，3’，5’-三-O-乙酰基-N6-(3-羟基苯基)腺苷，其制备方法以次黄嘌呤核苷为原料，经醋酐乙酰化、氯化亚砜氯代、3-羟基苯胺取代而得。还公开了含有三乙酰基-3-羟基苯基腺苷的药物组合物，所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒给药系统。本发明化合物制备的预防和\或治疗高血脂症的药物，具有调血脂活性明显、毒副作用小、体内代谢减慢的优点。
文档编号A61P3/06GK101874036SQ200980101131
公开日2010年10月27日 申请日期2009年3月10日 优先权日2008年10月6日
发明者吴松, 朱平, 朱海波, 李薇, 渠凯, 王星, 郝玲花 申请人:中国医学科学院药物研究所