专利名称：达木林a及达木林b含量增加的新绞股蓝提取物制备方法及利用该提取物制备的代谢疾病 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有新组成的绞股蓝提取物的制备方法，其是以高温高压方式处理绞股蓝提取物，提高了蛋白激酶(AMPK)活化有效成分达木林A(Damulin-A)及达木林 B(Damulin-B)的含量。本发明还涉及将达木林A及达木林B含量得到提高的具有新组成的新绞股蓝提取物作为有效治疗及改善代谢疾病的用途使用的方法。所述代谢疾病包括肥胖、糖尿病、高血脂症等。
背景技术：
AMPK (蛋白激酶，AMP-activated protein kinase))是由 α、β、γ 亚单位 (Subunit)构成的异三聚体(Heterotrimer)蛋白，肌管细胞中存在较多，还存在于大脑、心脏、脂肪组织及肝，是一种酶。AMPK是感知细胞内能量水平的重要传感器，此外通过上述结果，其对食欲调节、体重调节、血糖调节及血脂代谢调节等起核心作用。在高强度运动或长时间处于饥饿状态时，由于三磷酸腺苷(ATP)的大量消耗、腺苷酸(AMP)浓度上升，因此AMP与AMPK的、亚单位结合，从而引发AMPK的活化。实质性的活化由称做LKBl或CaMKK的上位磷酸化酶，通过对AMPK α亚单位苏氨酸(Threonine) (Thr)-172残基的磷酸化来表现。磷酸化形态的AMPK抑制消耗ATP的生化反应-脂肪酸和胆固醇的合成，与此相反其使得生成ATP的脂肪酸β氧化(β-oxidation)过程和糖酵解作用(glycolysis) 得到活化。不仅如此，还增加作为细胞膜葡萄糖吸收通路的葡萄糖转运蛋白4(gluC0Se transporter^ GLUT4)的量。另外，AMPK的活化与胰岛素作用下的PII信号传达机制无关，使细胞内的葡萄糖吸收通路GLUT4的细胞膜移动增加。此外，AMH(在磷酸化作用下被活化时，作为另一下位蛋白的胰岛素合成核心酶HMG-CoA还原酶(羟甲基戊二酸-辅酶A还原酶，hyd roxymethylglutaryl-CoA reductase)发生磷酸化。结果 HMG-CoA 还原酶失活 (inactivation)，胆固醇的合成降低，从而使得血液中的胆固醇减少。通过磷酸化成为活化形态的AMH(酶使得作为其下位蛋白脂肪酸合成核心酶 ACC (乙酰辅酶A羧化酶，acetyl-CoA carboxylase)的丝氨酸(ser)-79残基发生磷酸化， 抑制该ACC酶的活性。其结果，AMPK的活化使脂肪酸合成反应中的核心代谢产物-丙二酰基-C0A(Mal0nyI-C0A)的生成降低，抑制脂肪酸的合成。AMI3K活化引起丙二酰基-CoA减少时，向线粒体(mitochondria)内部流入脂肪酸-长链酰基-CoA(Long chain acyl-CoA)，促进β氧化。在高浓度丙二酰-CoA存在条件下，将长链酰基-CoA传送到线粒体的CPTl (肉毒碱棕榈酰基-辅酶A转移酶，carnitine palmitoyl-CoA transferase)受到抑制，由于 AMPK的活化使丙二酰-CoA的浓度降低，随着这一阻碍作用的消除，使长链酰基-CoA形态的脂肪酸大量流入线粒体内部，增加β氧化，因此体脂肪及血液中性脂质降低。AMPK的活化弓I发对PGC-I α (过氧化物酶体增殖子-活化受体Y共激活剂_1 α，Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coa ctivator-1 α )白勺iiH^U， 此外还活化组蛋白脱乙酰酶(Histone deacet ylase)的一种-SIRTl (沉默信息调控Tl， Silent Information Regul atory Tl)。其结果，在 AMPK和 SIRTl 作用下发生的 PGC-1 α 的磷酸化及去乙酰化，使线粒体代谢活跃，可获得糖尿病及肥胖改善效果(Canto和Auwerx， 月旨血症新见期刊 20，98-105，2009 (Canto and Au werx, Curr. Opin. Lipidol. 20,98-105, 2009) ；Canto 等，自然(Natur e) 458，1056-1060，2009)。因此，AMPK 的活化可以抑制体内脂肪酸及胆固醇的合成，并促进体脂肪的β氧化及促进血液葡萄糖的细胞吸收等作用。因此，活化AMPK的物质可以有效地用于改善或治疗肥胖、糖尿病及高血脂症。绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)是属于葫声科(Cucurbitac eae)的多年生藤本植物。在山地或野外的树丛中自生，根茎向旁伸展，节上长有白毛，互相绞缠生长，，也可以靠卷须攀援生长。干燥绞股蓝叶制备的茶主要也称作绞股蓝茶，可消除圆形脱毛症，恢复各个脏器的功能，维持健康的皮肤。具有调节压力的功效，对迟缓性便秘及痉挛性便秘有抑制效果，有止泻效果，对支气管哮喘，老年性慢性支气管炎有效。另外，具有镇咳、祛痰作用，对应激性溃疡有效，还可预防肝炎、动脉硬化，并具有镇痛等作用。如韩国公开专利2008-0003931中指出，绞股蓝提取物可增加蛋白激酶 (AMP-activated protein kinase) (AMPK)的活性，可改善胰岛素抵抗性、改善包括肥胖以及高血脂症等的代谢疾病。对此，本发明通过分析绞股蓝提取物的成分，发现称做达木林A 和达木林B的物质对AMPK的活性产生影响。另外可确认，利用本发明的技术制备的达木林 A及达木林B含量增加的具有新组成的新绞股蓝提取物，与现有绞股蓝提取物相比，其AMPK 的磷酸化能力及酶活化能力得到增强。
发明内容
本发明要解决的技术问题本发明的目的在于提供一种含有从绞股蓝提取物分离的新化合物-达木林A或达木林B的具有改善及治疗肥胖、糖尿病及高血脂症等代谢疾病效果的组合物。本发明的另一目的在于提供一种达木林A或达木林B含量得到提高，并具有改善及治疗肥胖、糖尿病及高血脂症等代谢疾病效果的新绞股蓝提取物及包括其的医药品、功能保健食品或功能食品。。解决技术问题的技术手段本发明利用HPLC及NMR方法，对具有蛋白激酶(AMPK)的酶活化功能的新达玛烷型皂苷物质-被命名为达木林A(damulinA)的2 α，3 β，12 β -三羟基达马脂-20⑵-Ε，24- 二烯-3-0- [ β -D-批喃葡萄糖基-(1 — ) - β -D-卩比喃葡萄糖Κ2 α， 3 β ,12 β -trihydroxydammar-20(22)-Ε,24-diene-3_0-[β -D-glucopyranosyl-(1 —)-β-D-glucopyranoside])及被命名为达木林 B (damulinA)的 2α，3β，12 β-三羟基达马脂-20，24-二烯-3-0-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1 - )-β- -吡喃葡萄糖Κ2α，3β， 12 β -trihydroxydam mara-20, 24-diene-3_0-[ β -D-glucopyranosyl- (1 —) - β -D-gluco pyranosid e])，利用高效液相色谱法(HPLC)及核磁共振法(NMR)进行分离分析，其结构如下列化学式所示。化学式权利要求
1.一种绞股蓝提取物的制备方法，其特征在于其是将绞股蓝叶乙醇提取物浓缩液在 40 125°C、1.2 1100气压的高温高压或高压反应条件下，处理0. 1 对小时，使绞股蓝叶提取物浓缩液干燥粉末的达木林A含量增加到0. 7 7% (w/w)、达木林B含量增加到 0. 5 6% (w/w)。
2.一种用于改善及治疗如肥胖、糖尿病或高血脂症代谢疾病的绞股蓝提取物，其特征在于其是将绞股蓝叶乙醇提取物浓缩液在40 125°C、1. 2 1100气压下，进行0. 1 M 小时高温高压反应制得；其含有0. 7 7% (w/w)达木林A，0. 5 6% (w/w)达木林B作为有效成分。
3.一种用于改善如肥胖、糖尿病或高脂血症代谢疾病的功能食品，其特征在于其含有权利要求2所述的绞股蓝提取物。
4.根据权利要求3所述的功能食品，其特征在于所述功能食品含有作为载体的温泉水、过滤水、蒸馏水、碳酸水、果汁、酸奶、牛奶、食用油。
5.一种用于改善及治疗如肥胖、糖尿病或高血脂症代谢疾病的药物组合物，其特征在于其含有权利要求2所述的绞股蓝提取物。
6.根据权利要求5所述的用于改善及治疗如肥胖、糖尿病或高血脂症等代谢疾病的药物组合物，其特征在于所述药物组合物提高蛋白激酶的活性。
7.一种用于改善及治疗如肥胖、糖尿病或高血脂症代谢疾病的药物组合物，其特征在于其含有下述化学结构式所示的达木林A或达木林B的化合物中的一种以上作为有效成分。[化学结构式]
8.根据权利要求7所述的用于改善及治疗如肥胖、糖尿病或高脂血症代谢疾病的药物组合物，其特征在于所述药物组合物提高蛋白激酶的活性。
全文摘要
本发明涉及作为活体内能量传感器及调节脂质代谢和糖代谢的关键酶-蛋白激酶(AMPK)的活化物质在代谢疾病的改善及治疗方面的应用。当AMPK被活化，脂肪合成及胆固醇合成会受到抑制，会促进体内脂肪减少和血糖降低，从而使得肥胖、糖尿病及高血脂症得到改善。本发明涉及作为AMPK的活化物质的新型化合物在改善和治疗包括肥胖、糖尿病及高血脂症的代谢疾病上的应用，所述新型化合物作为具有改善和治疗功效的有效成分使用。所述化合物为被命名为达木林A(DamulinA)的2α，3β，12β-三羟基达马酯-20(2)-E，24-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→)-β-D-吡喃葡萄糖]和被命名为达木林B的2α，3β，12β-三羟基达马脂-20，24-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→)-β-D-吡喃葡萄糖]。并且，本发明提供通过高温、高压处理绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)提取物，从而提高AMPK活化有效指标物质-达木林A或达木林B含量的方法；同时还提供AMPK活化能力显著增加的新绞股蓝提取物用于改善或治疗肥胖、糖尿病及高血脂症等代谢疾病的技术。
文档编号A61P3/04GK102470155SQ200980160081
公开日2012年5月23日 申请日期2009年12月22日 优先权日2009年7月17日
发明者全小荣, 吴元根, 宋喜复, 许太疄, 金知恩 申请人:Btc 株式会社, Tg Bio技术有限公司