专利名称：一种中药组合物的萃取方法
技术领域：
本发明涉及中医药制药工艺领域，尤其是一种中药组合物的萃取方法。
背景技术：
紫草，中国2010版药典中收载为新疆紫草和内蒙紫草的干燥根。《本草纲目》中记 载“紫草，其功长于凉血活血，利大小肠。故痘疹欲出未出，血热毒盛，大便闭塞者用之，已 出而紫黑便闭者可用。”功能清热凉血，活血，解毒透疹。临床应用于温病血热毒盛，斑疹 紫黑，麻疹不透，疮疡，湿疹，水火烫伤。苦参为豆科植物苦参的干燥根。功效清热燥湿，杀虫，利尿。应用于阴肿阴痒、湿 疹湿疮、皮肤瘙痒、疥癣等。本品对结核杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑 制作用，对多种皮肤真菌也有抑制作用。苦参临床用于治疗神经性皮炎、湿疹、烫伤。大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根及根茎。功效泻下 攻积，清热泻火，凉血解毒，逐瘀通经。应用于积滞便秘、血热吐衄、热毒疮疡、烧烫伤、瘀血 证、湿热痢疾等。药理作用大黄有抗感染作用，对多种革兰氏阳性和阴性细菌均有抑制作 用，其中最敏感的为葡萄球菌和链球菌，其次为白喉杆菌、伤寒和副伤寒杆菌、肺炎双球菌、 痢疾杆菌等。白芷为伞形科植物白芷的干燥根。功效解表散寒，祛风止痛，通鼻窍，燥湿止带， 消肿排脓。应用风寒感冒、头痛、牙痛、鼻渊、带下证、皮肤风湿瘙痒。白芷主要含挥发油，并 含欧前胡素、白当归素等多种香豆素类化合物，另含白芷毒素、花椒毒素、留醇、硬脂酸等。 白芷对大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌有一定抑制作用；呋喃香豆素类 化合物为“光活性物质”，可用以治疗白癜风及银屑病。上述四种药材为中药制剂中的常用药物，例如用于制备治疗烧伤外伤疮疡的中 药组合物，然而现有技术中其萃取方法均采用了高温麻(猪)油炸料制备工艺(公开号 CNlOl 116688A、CN101513441A)，所述方法具有提取周期长，溶媒温度高使大多数有效物质 降解或变性，空气环境污染大等众多缺点，无法在同一工艺流程中，一次性获得四味中药的 多个挥发性物质。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种中药组合物的萃取方法，该方法具有提 取率高、操作温度低、中药有效成分不被破坏、无污染和工艺简单等优点。为解决上述技术问题，本发明的技术方案是一种中药组合物的萃取方法，包括以下步骤(1)取苦参、大黄、紫草、白芷四味药物混合，-4 0°C低温粉碎过30 100目筛；(2)将步骤(1)的药粉置于超临界CO2萃取设备中，在萃取温度30 60°C，萃取 压力20 45Mpa，CO2流量为1. 5 3. 5L/min条件下直接静态萃取0. 5 1小时，然后打 开出口阀，维持CO2流量为1. 5 3. 5L/min流速继续动态萃取1 2. 5小时；
(3)将步骤⑵得到的萃取物在操作温度50 60°C和操作压力6 IOMpa条件 下，在萃取釜中进行分离除去CO2，得到含有挥发性成分的红褐色膏状萃取物。优选的，上述中药组合物的萃取方法，所述步骤(1)中四味药物按其重量份数计 为苦参1 2份、大黄3 5份、紫草2 4份、白芷1 2份。优选的，上述中药组合物的萃取方法，所述步骤(1)中四味药物粉碎过30 80目 筛。优选的，上述中药组合物的萃取方法，所述步骤(2)中萃取温度55°C，萃取压力 20 40Mpa, CO2流量为1. 5 3L/min，动态萃取1 2小时。优选的，上述中药组合物的萃取方法，所述步骤(3)中膏状萃取物用于制备治疗 烧伤外伤疮疡的药物。本发明的有益效果是所述中药组合物的萃取方法，可以在同一工艺流程中，一次性获得四味中药的多 个挥发性物质，克服了以往治疗烧伤外伤疮疡中药所采用高温麻(猪)油炸料工艺的不足， 便于有效成分检出，提高了生产效率，减少了对环境的污染，具有提取率高、操作温度低、中 药有效成分不被破坏、无污染和工艺条件简单等优点，具有非常重要的生产实践意义，适合 规模化工业生产的需要。
图1为大黄薄层图谱；图2为对照品-大黄素HPLC图谱；图3为超临界提取对照品(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚)HPLC图谱；图4为超临界提取大黄样品HPLC图谱；图5为白芷薄层图谱；图6为对照品-欧前胡素(白芷)HPLC图谱；图7为超临界白芷样品HPLC图谱；图8为苦参薄层图谱；图9为对照品-苦参碱HPLC图谱(-C18柱分离)；图10为对照品-氧化苦参碱、苦参碱HPLC图谱(-氨基柱分离)；图11为对照品-氧化苦参碱HPLC图谱-C18柱分离；图12为超临界提取_苦参HPLC图谱-C18柱分离；图13为超临界提取_苦参HPLC图谱-氨基柱分离；图14为紫草薄层图谱；图15为对照品-阿卡宁HPLC图谱；图16为超临界提取_紫草HPLC图谱。
具体实施例方式为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图及具体实 施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。实施例1
将苦参10g、大黄50g、紫草40g、白芷IOg混合，_4°C低温粉碎过50目筛；药粉置 于超临界CO2萃取设备中，在萃取温度55°C，萃取压力25Mpa，CO2流量为2. 5L/min条件下 直接静态萃取0. 5小时，然后打开出口阀，维持CO2流量为2. 5L/min流速继续动态萃取1. 5 小时；得到的萃取物在操作温度60°C和操作压力6Mpa条件下，在萃取釜中进行分离除去 CO2,，得到含有挥发性成分的红褐色膏状萃取物，总提收率为3. 2%，用HPLC法测定萃取物 中β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁含量1.534% (g/g)。实施例2将苦参20g、大黄30g、紫草20g、白芷20g混合，0°C低温粉碎过80目筛；药粉置于 超临界C02萃取设备中，在萃取温度60°C，萃取压力30Mpa，CO2流量为3. 5L/min条件下直 接静态萃取1小时，然后打开出口阀，维持CO2流量为3L/min流速继续动态萃取2小时；得 到的萃取物在操作温度50°C和操作压力SMpa条件下，在萃取釜中进行分离除去CO2,，得到 含有挥发性成分的红褐色膏状萃取物，总提收率为2. 73%。，用HPLC法测定萃取物中β， β-二甲基丙烯酰阿卡宁含量0.201% (g/g)。实施例3将苦参15g、大黄40g、紫草30g、白芷15g混合，_2°C低温粉碎过30目筛；药粉置 于超临界CO2萃取设备中，在萃取温度35°C，萃取压力40Mpa，CO2流量为1. 5L/min条件下直 接静态萃取0. 75小时，然后打开出口阀，维持CO2流量为3. 5L/min流速继续动态萃取2. 5 小时；得到的萃取物在操作温度55°C和操作压力IOMpa条件下，在萃取釜中进行分离除去 CO2,，得到含有挥发性成分的红褐色膏状萃取物，总提收率为2. 2%，用HPLC法测定萃取物 中β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁含量1.268% (g/g)。实施例4将苦参15g、大黄45g、紫草35g、白芷IOg混合，_3°C低温粉碎过100目筛；药粉 置于超临界CO2萃取设备中，在萃取温度45°C，萃取压力20Mpa，CO2流量为3. OL/min条件 下直接静态萃取0. 5小时，然后打开出口阀，维持CO2流量为1. 5L/min流速继续动态萃取 1小时；得到的萃取物在操作温度60°C和操作压力7Mpa条件下，在萃取釜中进行分离除去 CO2,，得到含有挥发性成分的红褐色膏状萃取物，总提收率为2. 73%，用HPLC法测定萃取物 中β，β -二甲基丙烯酰阿卡宁含量1. 174% (g/g)。实施例5将苦参20g、大黄35g、紫草25g、白芷20g混合，_1°C低温粉碎过60目筛；药粉置 于超临界CO2萃取设备中，在萃取温度30°C，萃取压力45Mpa，CO2流量为2. 5L/min条件下 直接静态萃取0. 5小时，然后打开出口阀，维持CO2流量为2. 5L/min流速继续动态萃取1. 5 小时；得到的萃取物在操作温度60°C和操作压力9Mpa条件下，在萃取釜中进行分离除去 CO2，，得到含有挥发性成分的红褐色膏状萃取物，总提收率为1. 20 %，用HPLC法测定萃取物 中β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁含量0.573% (g/g)。实施例6大黄鉴别如图1-图4所示，取实施例3所述红褐色膏状萃取物O.lg，加甲醇20ml，浸泡1 小时，滤过，取滤液5ml，蒸干，残渣加水IOml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即 冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材O.lg，同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品， 加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶 液各4μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30 60°C)_甲酸乙酯-甲酸(15 5 1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 (365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧 光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑 点变为红色。含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0. 1% 磷酸溶液(72 28)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于 3000。对照品溶液的制备精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照 品、大黄酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各 80 μ g，大黄素甲醚40 μ g的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混勻，即得(每Iml 中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16 μ g，含大黄素甲醚8 μ g)。供试品溶液的制备取实施例3所述红褐色膏状萃取物约0. 15g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇 补足减失的重量，摇勻，滤过。精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液 10ml，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量 三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次 10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至IOml量瓶中，加甲 醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪， 测定，即得。本品按干燥品计算，含芦荟大黄素(C15HltlO5)、大黄酸(C15H8O6)、大黄素(C15HltlO5)、 大黄酚(C15HltlO4)和大黄素甲醚(C16H12O5)的总量不得少于1. 5%。实施例7白芷鉴别如图5-图7所示，取实施例3所述红褐色膏状萃取物0. 5g，加乙醚IOml，浸泡1小 时，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。另取欧前胡 素对照品、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶 液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合 剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30 60°C)-乙醚(3 2)为展开剂，在25°C以下展开， 取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的荧光斑点。含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (55 45)为流动相；检测波长为300nm。理论板数按欧前胡素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每Iml含10 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备取实施例3所述红褐色膏状萃取物约0. 4g，精密称定，置50ml 量瓶中，加甲醇45ml，超声处理(功率300W，频率50kHz) 1小时，取出，放冷，用甲醇稀释至 刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得。本品按干燥品计算，含欧前胡素(C16H14O4)不得少于0.080%。实施例8苦参鉴别如图8-图13所示，取实施例3所述红褐色膏状萃取物0. 5g，加浓氨试液0. 3ml、 三氯甲烷25ml，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0. 5ml使溶解，作为供试品溶 液，另取苦参碱对照品、槐定碱对照品，加乙醇制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作为对照 品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4 μ 1，分别点于同一用2%氢氧化钠溶液 制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8 3 0.5)为展开剂，展开，展距8cm，取 出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2 4 2 1)10°C以下放置的上层溶液为展 开剂，展开，取出，晾干，依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色斑点。取氧化苦参碱对照品，加乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，作为对照品溶液。 照薄层色谱法试验，吸取上述鉴别项下的供试品溶液及上述对照品溶液各4μ1，分别 点于同一用2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液 (5 0.6 0.3)10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以碘化铋钾 试液和亚硝酸钠乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色斑 点ο含量测定照高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-无水乙醇
磷酸溶液(80 10 10)为流动相；检测波长为220nm。理论板数按氧化苦参碱峰计算应 不低于2000。对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，分别加乙 腈_无水乙醇(80 20)溶解，制成每Iml含苦参碱0. 05mg,氧化苦参碱0. 15mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取实施例3所述红褐色膏状萃取物约0. 3g，精密称定，置具 塞锥形瓶中，加浓氨试液0. 5ml，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率 250W,频率33kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇勻，滤过。精 密量取续滤液5ml，通过中性氧化铝柱(100 200目，5g，内径Icm)，依次以三氯甲烷、三氯 甲烷-甲醇(7 3)各20ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量使溶解， 并转移至IOml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇勻，即得。测定法分别精密吸取上述对照品溶液各5μ 1与供试品溶液5 10μ 1，注入液 相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O)的总量不得少于 1. 2%。实施例9紫草含量测定如图14-图16所示，羟基萘醌总色素取取实施例3所述红褐色膏状萃取物适量， 于50°C干燥3小时，粉碎(过三号筛)精密称取约0. 5g，置IOOml量瓶中，加乙醇至刻度，4 小时内时时振摇，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇勻。照分光
光度法，在516nm波长处测定吸收度，按左旋紫草素(C16H16O5)的吸收系数丨^ )为242计
算，即得。本品含羟基萘醌总色素以左旋紫草素(C16H16O5)计，不得少于0. 80%。β，β ’ _ 二甲基丙烯酰阿卡宁照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙 腈-水-甲酸(700 700 0. 5)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按β，β，- 二 甲基丙烯酰阿卡宁峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备精密称取β，β ’ _ 二甲基丙烯酰阿卡宁对照品适量，加乙醇 制成每Iml含0. IOmg的溶液，即得。供试品溶液的制备取实施例3所述红褐色膏状萃取物约0. 5g，精密称定，置具 塞锥形瓶中，精密加入石油醚(60 90°C ) 25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率 33kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用石油醚(60 90°C )补足减失的重量，摇勻，滤过。精 密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用流动相溶解并转移至IOml量瓶中，加流动相至刻度，摇 勻，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测 定，即得。上述参照具体实施方式
对该一种中药组合物的萃取方法进行的详细描述，是说明 性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体 构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
权利要求
一种中药组合物的萃取方法，其特征在于包括以下步骤(1)取苦参、大黄、紫草、白芷四味药物混合，-4～0℃低温粉碎过30～100目筛；(2)将步骤(1)的药粉置于超临界CO2萃取设备中，在萃取温度30～60℃，萃取压力20～45Mpa，CO2流量为1.5～3.5L/mi n条件下直接静态萃取0.5～1小时，然后打开出口阀，维持CO2流量为1.5～3.5L/min流速继续动态萃取1～2.5小时；(3)将步骤(2)得到的萃取物在操作温度50～60℃和操作压力6～10Mpa条件下，在萃取釜中进行分离除去CO2，得到含有挥发性成分的红褐色膏状萃取物。
2.根据权利要求1所述的中药组合物的萃取方法，其特征在于所述步骤(1)中四味 药物按其重量份数计为苦参1 2份、大黄3 5份、紫草2 4份、白芷1 2份。
3.根据权利要求1或2所述的中药组合物的萃取方法，其特征在于所述步骤(1)中 四味药物粉碎过30 80目筛。
4.根据权利要求1所述的中药组合物的萃取方法，其特征在于所述步骤(2)中萃取 温度55°C，萃取压力20 40Mpa，CO2流量为1. 5 3L/min，动态萃取1 2小时。
5.根据权利要求1所述的中药组合物的萃取方法，其特征在于所述步骤(3)中膏状 萃取物用于制备治疗烧伤外伤疮疡的药物。
全文摘要
本发明提供了一种中药组合物的萃取方法，将苦参、大黄、紫草、白芷四味药物混合过筛后，药粉置于超临界CO2萃取设备中萃取，将萃取物在萃取釜中进行分离除去CO2即可；该方法具有提取率高、操作温度低、中药有效成分不被破坏、无污染和工艺简单等优点，可以在同一工艺流程中，一次性获得四味中药的多个挥发性物质。
文档编号A61P17/02GK101879222SQ201010235610
公开日2010年11月10日 申请日期2010年7月23日 优先权日2010年7月23日
发明者刘文伟, 刘玉璇, 国大亮, 李晓峰, 田松江, 艾庆波, 董村, 赵宇, 郝洁 申请人:天津达仁堂京万红药业有限公司