专利名称：一种黄芩可溶性粉的制备及质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种黄芩可溶性粉，尤其是从中药黄芩中分离制备黄芩可溶性粉的制备及其质量检测方法。
背景技术：
鸡慢性呼吸道病的危害鸡慢性呼吸道病(CRD)是由鸡毒支原体(Mycoplasma gallis印ticum，MG)感染引起，以呼吸罗音、咳嗽、鼻漏为特征的一种鸡的慢性呼吸道传染病。由于MG分布于世界各国，可通过水平和垂直方式传播，因此，它在鸡群中可长期存在和蔓延。，该病给养鸡业造成了巨大的经济损失，并间接地影响着人类的健康。鸡慢性呼吸道病防治现状与存在问题预防用疫苗预防本病是较理想手段。因此，人们在疫苗研制方面做了大量工作， 现用的疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗两种。由于支原体培养条件苛刻，所以制造灭活疫苗和弱毒疫苗的成本较高。有时由于培养条件不良还可使鸡毒支原体某些免疫保护性抗原不能充分表达，造成灭活疫苗免疫不确实。近年来研究发现，鸡MG感染的免疫机制以细胞免疫为主，而灭活疫苗诱导的免疫以体液免疫为主。因此灭活苗有一定的局限性。弱毒苗虽然既可诱导体液免疫也可诱导细胞免疫，但现行的弱毒疫苗如F株、TS211株的毒力不够稳定，有时不能产生良好的免疫，有时有严重反应等缺点。此外，弱毒疫苗和灭活疫苗的一个共同弱点是虽然可产生一定的免疫保护，但不够坚强，也不能阻止感染，免疫鸡群在饲养管理不良的情况下仍可大批发病，免疫失败时有发生。抗菌药物治疗由于MG对部分抗生素敏感，同时由于本病常并发其他细菌的感染，因此对本病治疗常使用抗菌药物，如链霉素、土霉素、金霉素、红霉素、螺旋霉素、林肯霉素、泰乐霉素、壮观霉素、甲磺酸培氟沙星、恩诺沙星等。但由于病原体对抗菌素类药物极易产生耐药性，因此在临床中治疗本病时，疗效常常不尽人意。而在人们越来越关注食品安全的今天，抗生素的残留是亟待解决的问题，给即将上市的肉鸡及产蛋鸡使用大量抗生素显然不利于人类的健康。中药治疗近几年来，用中药防治鸡慢性呼吸道病的研究取得了可喜的进展，杨斌等用柴胡、黄芩、鱼腥草、穿心莲、大青叶、葛根、野菊花、麻黄、杏仁、甘草等中药制成的病毒 I号(水剂)，用于自然感染MG 土杂鸡的治疗，结果病毒I号达到与酒石酸泰乐菌素相同的治疗效果。郭小清等用板蓝根、大青叶、甘草、蟾酥、菌陈、连翘、鱼腥草、射干、蒲公英、木香、 白头翁、冰片等制成颗粒剂，治疗人工感染的雏鸡慢性呼吸道病，效果与临床上常用的甲磺酸达氟沙星相当(P > 0. 05)，比罗红霉素、酒石酸泰乐菌素要好(ρ < 0. 05)，且不影响鸡只的正常增重。李中武等以石决明、黄药子、黄芩、白药子、陈皮、苍术、桔梗、桅子、郁金、胆草、三仙、鱼腥草、苏叶、紫菀、大黄、苦参、甘草组方，研末，结合硫酸卡那霉素治疗产蛋鸡慢性呼吸道病，结果用药后3-5天临床症状基本消失，采食量有所增加，8-10天后产蛋开始回升，治愈率达98%以上。
所有中药防治鸡慢性呼吸道病的研究结果都证明，中药完全可以防治该病，治疗效果可达到或超过常用抗菌药的水平，且不产生抗药性，加上中药的低毒性，因此用中药防治鸡慢性呼吸道病具有显见的优越性。但是，目前使用的一些成方制剂也存在着不足，如有的使用传统的中药制作工艺制成散剂，使得一些有效成分不能很好地被利用，生物利用度低。为了达到有效的剂量，必需使配方中药物的用量增加，这样就造成了中药资源的浪费。另外，由于大多数散剂是中草药经粉碎混合而成，其中的纤维素的含量很高，根据鸡消化道的生理特点，纤维素的增加会影响鸡正常的消化功能。有的制剂处方庞大，为了发挥单味药的作用效果就必须增加总的用药量，同样带来上述弊端。有的处方未经现代药理学研究，其作用机理不明了，也无法判定其是否具有潜在的不良反应。猪气喘病的危害猪气喘病(MycoplasmaPneumonia of Swine,MPS)亦称地方性流行性肺炎(Swine enzootic pneumonia)、猪霄形体月市炎(Mycoplasmalpneumonia ofswine)、猪支原体月市炎， 是猪的一种症状以咳嗽、气喘、病变以融合性支气管肺炎为特征的慢性呼吸道传染病。本病广泛存在于世界各地，发病率一般在50% -80%。长期以来，该病被认为是常发、经济意义重大的猪病之一。猪气喘病防治现状与存在问题预防，目前，商业化菌苗接种已成为猪场防制气喘病非常重要的手段。猪气喘病疫苗有多种，包括兔化弱毒苗、无细胞弱毒冻干菌和灭活菌。据报道，它们的效果都比较理想。 但需根据猪场类型、生产方式和猪场中的感染类型采用不同的接种方案，且控制该病时还应当将免疫接种与管理因素结合起来进行，一旦某些环节有偏差，就会导致免疫失败，所以猪气喘病仍然是当前危害养猪业的重要因素。抗生素治疗脉冲性使用抗生素可减缓疾病的临床症状和避免继发感染的发生。 常用的抗生素有四环素、泰乐菌素、林肯霉素、泰妙灵、螺旋霉素、奎诺酮类。但总的来说，使用抗生素不会阻止感染发生，且一旦停止用药，疾病很快就会复发。在生产实践中常预防性使用抗生素，这易导致病原体产生耐药性，再想彻底杀灭病原体，将十分困难。同样，由于持续使用抗生素引起药物残留，从而降低肉质，而且费用也随之提高。中药治疗用中药防治猪气喘病已逐渐被人们所接受，郭小清等用蟾蜍、合成牛黄、黄连、香附、雄黄、皂角、桔梗、山豆根、甘草、明矾、干姜等组成“镇喘散”，用于治疗猪气喘病，效果与磷酸泰乐菌素相当，且简单地证明了“镇喘散”对猪只无毒副作用。孔祥臣等用麻黄、淡竹叶、甘草、桔梗、远志、枇杷叶、瓜娄等组成方剂，水煎或粉碎后拌入饲料中喂发病猪，取得了满意的治疗效果。还有一些用中西兽医结合的方法治疗猪气喘病，也有不错的疗效。但是，目前使用的一些成方制剂也同样存在着不足，如汤剂已无法在现代化养猪场中推广使用。使用传统的制作工艺制成散剂，使得一些有效成分不能很好地被利用，生物利用度低，造成中药资源的浪费。有的制剂处方庞大，为了发挥单味药的作用效果就必须增加总的用药量，同样带来上述弊端。有的处方同样未经现代药理学研究，其作用机理不明了，也无法判定其是否具有潜在的不良反应。鉴于上述鸡慢性呼吸道病和猪气喘病的危害及防治现状，如何选择高效、使用方便、作用机理明确、毒副作用小、不影响人类健康的药物来防治这两种动物疾病，成为动物疫病防治者急需攻克的重要课题。为此，我们根据中兽医学辨证施治理论以及现代药理学研究成果，结合大量临床实践，选定中兽药黄芩，并应用科学的提取方法将其制成可溶性粉，用于两病的防治，同时经大量试验独创了该可溶性粉的质量检测方法，以保证其质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种黄芩可溶性粉的制备及质量检测方法；目的之一，提供一种黄芩可溶性粉的制备方法，包括如下步骤称取黄芩；加水煎煮2-3次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为 1. 20-1. 30 ；用盐酸调节pH值至1. 0-2. 5，80°C保温，静置，滤过；沉淀物加适量水搅勻，用 35-40%氢氧化钠调节pH值至6. 5-7. 0 ；加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH 值至1. 0-2. 5，60-70°C保温，静置，滤过；沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至pH值至 6. 5-7. 0 ；挥尽乙醇，减压干燥，即得。临床试验的结果表明，黄芩可溶性粉对鸡慢性呼吸道病和猪气喘病两病的治疗效果能达到甚至超过常用抗生素的水平，确定了黄芩可溶性粉良好的有效性。从剂型上说，可溶性粉中有效成分的含量相对稳定，且可以监控，这将保证临床用药时有效成分的剂量稳定，从而确保疗效的稳定。黄芩为传统中药，临床中至今未发现其有严重的毒副作用，已有的药理学研究以及本课题的研究结果均证实了黄芩的低毒性。所以，应用单味黄芩，可确保人畜安全。黄芩可溶性粉按照科学的工艺制备，在保留了原药材有效成分的前提下，去除了粗纤维等无效成分，减少了用药体积，避免了粗纤维等对动物消化功能的不良影响。由于经过提取，黄芩苷等有效成分可在动物的消化道内直接被吸收，大大提高了药物的生物利用度，既节约了中药资源，又可适当提高药效。黄芩可溶性粉在使用时既可拌料也能混饮，使用方便的特性有利于该药的推广应用。总之黄芩可溶性粉具备了优良兽药的特性，作为鸡慢性呼吸道病和猪气喘病防治用药切实可行。目的之二，提供一种对黄芩可溶性粉进行质量检测的方法，包括如下步骤1、鉴别，取本品定量，加甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各定量，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。2、检查，包括水分，照水分测定法测定，不得过5. 0%。3、含量测定，照高效液相色谱法测定，⑴色谱条件与系统适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液07 5 为流动相；检测波长为 280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1000 ； (2)对照品溶液的制备，取黄芩苷对照品定量，精密称定，置容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，精密量取定量，置容量瓶中， 加水稀释至刻度，摇勻，即得(每Iml含黄芩苷50 μ g)。( 供试品溶液的制备，取本品定量，精密称定，置于量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，精密量取定量，置于量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。(4)测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各定量，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于85. 0%。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明作进一步阐述基于本方法制备黄芩可溶性粉的实施例实施例1取黄芩200g，加水煎煮两次，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1. 20 ；用盐酸调节PH值至1.0，80°C保温，静置，滤过；沉淀物加适量水搅勻，用35%氢氧化钠调节 pH值至6.8 ；加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.0，60°C保温，静置， 滤过；沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH值至6. 5 ；挥尽乙醇，减压干燥，得黄芩提取物20. 2g ；实施例2取黄芩500g，加水煎煮三次，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1. 22 ；用盐酸调节PH值至2. 0，80°C保温，静置，滤过；沉淀物加适量水搅勻，用40%氢氧化钠调节 PH值至7.0 ；加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至2.0，65°C保温，静置， 滤过；沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH值至6. 8 ；挥尽乙醇，减压干燥，得黄芩提取物39. 9g。实施例3黄芩可溶性粉的质量检测方法的实施例1、鉴别，取本品10mg，加甲醇IOm使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各 2μ1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。2、检查，水分照水分测定法测定，不得过5. 0%。3、含量测定，照高效液相色谱法测定。(1)色谱条件与系统适应性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液07 5 为流动相；检测波长为 280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1000 ； (2)对照品溶液的制备，取黄芩苷对照品 IOmg,精密称定，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，精密量取5ml，置IOml量瓶中，加水稀释至刻度，摇勻，即得(每Iml含黄芩苷50 μ g) ； (3)供试品溶液的制备，取本品10mg，精密称定，置于IOOml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，精密量取5ml，置 IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。(4)测定法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各IOy 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计，含黄芩苷(C21H18O11)不得少于85. 0%。实施例4 (关于黄芩可溶性粉的相关研究和实验)黄芩可溶性粉的稳定性研究报告黄芩可溶性粉为黄芩经提取精制而成淡黄色粉末。具有清热解毒，燥湿化痰，止咳平喘，促孕安胎等功能。临床上主要用于肺炎、支气管肺炎、胸膜肺炎等多种细菌、支原体或病毒引起的动物呼吸系统和消化系统感染的治疗。本文旨在研究黄芩可溶性粉的稳定性， 为临床用药提供依据。1仪器与药品1. 1 仪器SHIMADZU LC-10AT VP高效液相色谱仪；SPD-10A VP紫外可见检测器；色谱柱 SHIMADZU ODSCw柱(150 X 4. 6mm，5 μ m)；雷磁PHS-25型数显pH计(上海精密科学仪器有限公司)。1.2 试剂黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)；磷酸二氢钾(分析纯)；磷酸(分析纯)；甲醇(色谱纯)；流动相用水为双蒸水；醋酸丁酯(分析纯)；丁酮(分析纯)；甲酸 (分析纯)；三氯化铁(分析纯)；乙醇(分析纯)；黄芩可溶性粉由北京生泰尔生物科技有限公司提供。2实验方法2. 1加速实验按药典规定的加速试验法，三批样品在40士2°C，相对湿度75士5%的条件下放置六个月，每个月定期取样一次，然后测定黄芩可溶性粉的干燥失重、黄芩苷的含量，做鉴别试验，并观察外观、色泽等性状指标，根据结果预测有效期。2. 2光照加速实验取供试样品三批，置于光厨中，在照度4500 士 500Lx的条件下放置10天，于第5、10 天定时取样，然后测定黄芩可溶性粉的干燥失重、黄芩苷的含量，做鉴别试验，并观察外观、 色泽等性状指标，根据结果预测有效期。2. 3留样观察法2. 3. 1供试品三批，按市售包装，在温度25 士 2°C，相对湿度60 士 10%的条件下放置12个月。每3个月取样一次，分别于0、3、6、9、12个月测定黄芩可溶性粉的干燥失重、黄芩苷的含量，做鉴别试验，并观察外观、色泽等性状指标，根据结果预测有效期。2. 3. 212个月以后继续观察，分别于18J4个月取样进行检测。将结果与0个月比较，确定药品的有效期。由于实测数据的分散性，按95%可信限进行统计分析，得出合理的有效期。如三批统计分析结果差别较小，则取其平均值为有效期限；若差别较大，则取其最短的为有效期。数据表明很稳定的药品，不作统计分析。3实验结果3. 1黄芩可溶性粉加速试验结果黄芩可溶性粉在40 士 2°C，相对湿度75 士 5 %的条件下放置六个月，其外观性状无变化，干燥失重变化差异不显著，黄芩可溶性粉中黄芩苷的含量变化差异不显著。依据美国食品药物管理局(FDA)的要求标准，可初步确定其稳定性为二年。结果见表1。表1不同批次黄芩可溶性粉加速试验结果
权利要求
1.一种黄芩可溶性粉的制备及质量检测方法，包括如下步骤称取黄芩；加水煎煮2-3 次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20-1.30 ；用盐酸调节pH值至1.0-2.5， 80°C保温，静置，滤过；沉淀物加适量水搅勻，用35-40%氢氧化钠调节pH值至6. 5-7. 0 ；加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节PH值至1. 0-2. 5，60-70°C保温，静置，滤过； 沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至PH值至6. 5-7.0 ；挥尽乙醇，减压干燥，即得。其特征在于在制备过程中去除粗纤维等无效成分。
2.根据权利要求1所述的一种黄芩可溶性粉的制备方法，其特征在于，成品为可溶性粉。
全文摘要
发明公开一种黄芩可溶性粉的制备及质量检测方法，包括如下步骤1、称取黄芩；2、加水煎煮2-3次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20-1.30；3、用盐酸将滤液调节pH值至1.0-2.5，80℃保温，静置，滤过；4、将沉淀物加适量水搅匀，用35-40％氢氧化钠调节pH值至6.5-7.0；5、加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.0-2.5，60-70℃保温，静置，滤过；6、沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至pH值至6.5-7.0；7、挥尽乙醇，减压干燥，即得。本发明成品为可溶性粉，具有疗效稳定、无毒副作用、用药体积小、避免了粗纤维等对动物消化功能的不良影响、生物利用度高，节约中药资源，使用方便等明显优点。
文档编号A61P31/12GK102397332SQ20101028445
公开日2012年4月4日 申请日期2010年9月17日 优先权日2010年9月17日
发明者侯晓礁, 李学良, 江厚生, 王秀敏 申请人:北京生泰尔生物科技有限公司