专利名称：抗鸡法氏囊炎特异性转移因子及其制备方法
技术领域：
本发明涉及抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子(STF)及其制备方法，属生物医药技术领域。
背景技术：
鸡传染性法氏囊炎是由法氏囊病毒(双RNA病毒)引起的一种急性、高度接触性传染病，发病率高、病程短、死亡率高，对养殖业的危害非常严重。目前，兽医工作者还没有研发出治疗鸡传染性法氏囊炎的特效药物。近来，研究人员对转移因子(Transfer Factor, TF)这一细胞活性因子治疗鸡传染性法氏囊炎进行了很好的尝试，并已有相关专利文献报道。转移因子为分子量介于3000 6000道尔顿的小分子核苷酸-多肽类物质，它作为一种特定的细胞因子参与机体的免疫反应，能够特异性或非特异性地提高机体细胞免疫功能， 抵抗真菌、病毒等非细菌性感染。特异性转移因子(STF)是指采用某种特定病原感染或免疫机体后所制备的能够专一抑制或杀灭该病原的转移因子，针对性强，治疗效果突出。2008 年，田杏芳和王连民申请了 4项中国发明专利一种抗鸡传染性法氏囊病毒转移因子的制备方法(申请号200810053543. 4)、抗鸡法氏囊病毒特异性转移因子与抗菌肽的制备方法 (申请号200810151760. 7)、抗禽流感病毒、新城疫病毒、鸡法氏囊病毒特异性转移因子与抗菌肽的制备方法(申请号200810151758. X)及一种体外制备抗鸡传染性法氏囊病毒特异性转移因子的制备方法。上述专利公开了针对法氏囊炎具有特效治疗功效的特异性转移因子(STF)的制备方法采用法氏囊病毒抗原免疫健康猪而后由猪脾脏或其血液中制备特异性转移因子(STF)，或用鸡脾脏或其外周血为材料在体外制备特异性转移因子(STF)。用猪作载体无形之中增加了制造成本且猪、鸡之间种属差异较大，而用鸡脾脏或其外周血在体外制备特异性转移因子(STF)，一是技术不易掌控，操作过程容易污染，最终影响产品质量， 二是制备的产量、规模明显具有局限性。现有文献报道了转移因子通常来源于脾脏和淋巴细胞(任丽君等，转移因子研究及其临床应用，生物学杂志，1997年第14卷第15期)。近几年，山东省肉食鸡饲养业发展迅速，宰杀能力也得到很好发展，成为山东省经济构成中的一大亮点。如山东省莘县817小肉食鸡的年出栏量达到5 6亿只，为国内第一大肉食鸡生产县；每只鸡可产生0. 03公斤左右的脾脏等下脚料，因而脾脏资源相当丰富，是国内乃至于国际上难得一见的资源优势； 而这里人们不喜欢食用脾脏，因而脾脏往往被弃去。而由资源丰富的鸡脾脏中直接提取抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子(STF)不仅能达到废物利用、降低成本的目的，而且有利于规模化开发。经检索，未见现有技术中有关鸡脾脏直接制备抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子(STF)相关的文献报道。
发明内容
根据现有技术状况，本发明目的在于提供一种无毒副作用、治疗与预防鸡法氏囊炎效果好的抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子(STF)；另一目的在于提供一种原料易得、成本低廉、适用于工业化生产的抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子(STF)制备方法。为实现本发明目的，技术实施方案如下1、鸡只免疫用鸡传染性法氏囊炎疫苗免疫健康鸡群，皮下多点注射上述疫苗，每鸡1 5ml ；在首次免疫后的第7 20天进行强化免疫，肌肉注射每鸡1. 5 3ml ；在强化免疫后的第7 20天进行再强化免疫，肌肉注射每鸡1. 5 :3ml。2、特异性转移因子(STF)的制备将上述经免疫的鸡养成(约7-10天)后送屠宰场宰杀，收集健康的脾脏，用无菌水反复清洗，将脾脏表面的油脂、血管、筋膜等处理干净；将脾脏切块或段放入高速组织捣碎机中捣碎，分盘后入冷库(_25°C -30°C )速冻，冻融3 5次，加3 5倍无菌水，混勻，然后置于胶体磨中均质，离心分离固体物与提取物，每分钟3000 16000转；滤液进行超滤，截留分子量小于10000道尔顿得到的超滤产物即为特异性转移因子(STF)。其为分子量小于10000道尔顿的多肽-核苷酸的混合物。STF主要成分为多肽、核糖、寡核苷酸等。特异性转移因子(STF)的含量特异性转移因子(STF)的定量采用《中国生物制品规程》中规定的转移因子定量方法i^olin-酚试剂法来进行，蛋白质标准液为Sigma公司产品。结果表明，本发明制备的特异性转移因子(STF)含量为1.7mg/ml。应用时，可以将本发明特异性转移因子(STF)制成如下制剂1)水针剂取特异性转移因子(STF) IOOmg加注射用水制成水溶液，用微孔滤膜 (Φ 0. 20 μ m)滤过除菌，无菌分装，每瓶IOml或IOOml。2)冻干粉针剂取特异性转移因子(STF)冻干粉lOOmg，无菌分装，2ml或IOml西林瓶装。3) 口服液取特异性转移因子(STF) IOOmg加注射用水制成水溶液，用微孔滤膜 (Φ0. 20 μ m)滤过除菌，加入0.5%氯仿或Ippm柳硫汞作防腐剂，每瓶100ml。4)颗粒剂、片剂等固体制剂取特异性转移因子(STF)冻干粉0. 1kg，药用淀粉 0. 5kg,湿法制粒、整粒，成颗粒剂或压片制成片剂。将采用本发明制得的特异性转移因子(STF)进行临床试验，方法及结果如下将已被确诊患法氏囊炎的817肉食鸡，以死亡、体重减轻、检出病毒或检出抗体为判定标准，将其分为治愈、有效、无效三个等级进行统计，用制备的抗法氏囊炎的特异性转移因子(STF)的水针剂进行紧急预防与治疗实验，预防用量为每鸡肌注0.5ml，治疗用量为每鸡肌注lml。结果如表1。表1紧急预防与治疗效果
权利要求
1.抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子的制备方法，其特征在于直接以健康鸡脾脏通过如下步骤制得(1)首先对鸡进行免疫用鸡传染性法氏囊炎疫苗免疫健康鸡群，皮下多点注射上述疫苗，每鸡1 5ml ；在首次免疫后的第7 20天进行强化免疫，肌肉注射每鸡1. 5 3ml ；在强化免疫后的第7 20天进行再强化免疫，肌肉注射每鸡1. 5 :3ml ； (2) 制备抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子将上述经免疫的鸡养7-10天后送屠宰场宰杀， 收集健康的脾脏，用无菌水反复清洗，将脾脏表面的油脂、血管、筋膜处理干净；将脾脏切块或段放入高速组织捣碎机中捣碎，分盘后入冷库，_25°C -30°C速冻，冻融3 5次，加3 5倍无菌水，混勻，然后置于胶体磨中均质，离心分离固体物与提取物，每分钟3000 16000 转；滤液进行超滤，截留分子量小于10000道尔顿得到的超滤产物。
2.抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子，其特征在于，采用权利要求1所述的方法制备而得。
3.如权利要求2所述的抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子，其特征在于，其为分子量小于10000道尔顿的多肽-核苷酸的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子(STF)及其制备方法，属生物医药技术领域。该方法直接用鸡传染性法氏囊炎疫苗免疫健康鸡群，收集其健康的脾脏，经过反复冻融后，置于胶体磨中均质，离心分离固体物与提取物；滤液进行超滤，截留分子量小于10000道尔顿的超滤产物即为抗传染性鸡法氏囊炎特异性转移因子(STF)。该特异性转移因子(STF)疗效显著，作用迅速，无毒副作用，容易保存，便于运输，保质期长；其生产工艺简单，使废物资源得到循环利用，并且适合于工业化生产。
文档编号A61K38/19GK102453088SQ201010515048
公开日2012年5月16日 申请日期2010年10月22日 优先权日2010年10月22日
发明者曹吉祥 申请人:曹吉祥