专利名称：3,3`-二吲哚甲烷在炎症性肠病治疗中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及3，二吲哚甲烷在治疗炎症性肠病中的应用。
背景技术：
炎症性肠病是常见的消化道疾病，是以主要累及直肠、结肠的慢性非特异系炎症， 其症状主要包括腹痛、腹泻、血便，而且病程迁延不愈，甚至有癌变可能。针对炎症性肠病治疗过去主要集中在水杨酸制剂、糖皮质类固醇、免疫抑制剂等。但是传统的治疗存在靶点尚不明确，副作用较大。停药后易复发等缺点。虽然炎症性肠病的发病机制尚不清楚，但是近年来的研究表明自由基在肠炎的发生过程中起着重要的作用。自由基主要包括超氧阴离子自由基(02‘_)、羟自由基(0H‘_)、过氧化氢(H2O2)等。在炎症性肠病发生过程中，炎症部位的自由基含量大幅上调，其危害一方面可以破坏细胞结构，引发细胞膜脂质过氧化，产生分解产物丙二醛(MDA)，导致蛋白质变性和交联，直接造成肠道功能失调和组织损伤。另外一方面，自由基还可以通过激活转录因子NF-κ β，诱导炎症相关基因表达，使得炎症因子水平升高，细胞间黏附分子表达上升，导致活化淋巴细胞和单核细胞由血管向炎症部位迁移，进一步加重炎症性肠病患者的肠道炎症反应。为此以自由基为靶点进行治疗肠炎可以有效减轻炎症发作程度。3，3’-二吲哚甲烷 (DIM)及其母体化合物吲哚-3-甲醇(I3C)最早被报道具有抗癌作用。吲哚-3-甲醇(I3C) 在体内胃酸环境中很不稳定，可发生缩合反应形成低聚物3，3’ - 二吲哚甲烷。3，3’ - 二吲哚甲烷虽有文献报道其可以保护机体免受自由基损伤，但尚未有其用于治疗炎症性肠病的相关研究结果报道。
发明内容
本发明需要解决的问题就是公开了一类可以有效保护机体免受自由基损伤，从而阻断炎症性肠病发作的小分子药物，具体涉及到3，3’ - 二吲哚甲烷(DIM)及其水溶液注射制剂以及母体化合物吲哚-3-甲醇(I3C)在炎症性肠病中的治疗。本发明所涉及的3，3’-二吲哚甲烷以及母体化合物吲哚-3-甲醇为商业购买所得 (南京锐马精细化工有限公司)。本发明所涉及的3，3’ - 二吲哚甲烷水溶液注射制剂是利用环糊精水溶液配制所得，具体方法参见发明专利“二吲哚甲烷及其衍生物在类风湿关节炎治疗中的应用”张峻峰，董磊，夏苏华，陈江宁，申请号200810243556. 8。本发明所述的3，3’-二吲哚甲烷以及母体化合物吲哚-3-甲醇在炎症性肠病治疗中的应用
1.使用三硝基苯磺酸(TNBS)的50%乙醇溶液于BALB/C小鼠灌肠，建立TNBS型炎症性肠病模型；
2.将3，3’- 二吲哚甲烷以及吲哚-3-甲醇溶解到玉米油中，在建立TNBS型炎症性肠病模型同时进行灌胃，对炎症性肠病进行治疗；
3.治疗后每天测定小鼠体重，并于治疗3天后处死小鼠，取病变结肠拍照，分别做组织学损伤评分和MPO值测定。本发明所述的3，3’ - 二吲哚甲烷的水溶液注射制剂在炎症性肠病治疗中的应用
1.使用三硝基苯磺酸(TNBS)的50%乙醇溶液于BALB/C小鼠灌肠，建立TNBS型炎症性肠病模型；
2.将配制好的3，3’-二吲哚甲烷的水溶液注射制剂在建立TNBS型炎症性肠病模型同时进行腹腔注射，对炎症性肠病进行治疗；
3.治疗后每天测定小鼠体重，并于治疗3天后处死小鼠，取病变结肠拍照，分别做组织学损伤评分和MPO值测定。本发明的有益效果是提供一种新的治疗炎症性肠病的方法，通过给予3，3’ - 二吲哚甲烷和吲哚-3-甲醇保护机体免受自由基损伤，从而阻断和抑制肠炎的发作。同时，本发明所使用的小分子药物易于获取，价格低廉，性质稳定，便于保存和运输。
图1不同剂量的I3C 口服治疗TNBS肠炎模型三天的组织学评分。图2 口服I3C治疗TNBS肠炎模型三天的结肠MPO值测定结果。图3不同剂量的DIM 口服治疗TNBS肠炎模型三天的组织学评分。图4 口服DIM治疗TNBS肠炎模型三天的结肠MPO值测定结果。图5 DIM水溶液注射制剂治疗TNBS肠炎模型三天的组织学评分。图6腹腔注射DIM治疗TNBS肠炎模型三天的结肠MPO值测定结果。
具体实施例方式1. 口服I3C对TNBS导致的小鼠肠炎模型的治疗
将I3C用玉米油溶解，配成2. Omg/ml储液备用。按照文献报道方法建立小鼠TNBS肠炎模型，即取雌性BALB/C小鼠30只，体重16-1 ，将TNBS溶液(溶于50%乙醇)0. Iml灌肠，并于建模当日，将小鼠随机分成三组即I3C治疗低剂量组、I3C治疗高剂量组和阴性对照组，分别给予处理。I3C治疗低剂量组按％ig/kg灌胃给I3C，I3C治疗高剂量组按20mg/ kg灌胃给I3C，对照组给相应量的玉米油，每天给药一次。每天称量老鼠体重。模型建立3 天后处死，取病变结肠组织，做组织学损伤评分和MPO值测定。(1)组织学损伤评分
取部分结肠组织固定，进行HE染色，做病理切片，显微镜下观察，进行组织学损伤评分，评分标准如下
表一结肠炎组织学损伤标准
权利要求
1. 3，二吲哚甲烷及吲哚-3-甲醇在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。
全文摘要
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及二吲哚甲烷和吲哚-3-甲醇在治疗炎症性肠病中的应用。所述二吲哚甲烷和吲哚-3-甲醇可以有效保护机体免受自由基损伤，阻止自由基导致的黏附分子的表达增加,从而有效减轻炎症性肠病的症状。所述吲哚-3-甲醇和二吲哚甲烷在验证性肠病的动物模型中取得很好的疗效，具有广阔的应用前景。
文档编号A61K31/404GK102526030SQ201010576940
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月7日 优先权日2010年12月7日
发明者张峻峰, 董磊, 黄振 申请人:南京大学