化疗药剂和TGF-β系统抑制剂的组合的制作方法

专利名称：化疗药剂和TGF-β系统抑制剂的组合的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含化疗药剂和反义寡核苷酸，优选TGF- ^反义寡核苷酸，或TGF- ^系统的任何抑制剂的药物组合物，其中该反义寡核苷酸或该抑制剂降低化疗药剂细胞毒性的IC5tl,因而增大化疗药剂的效能。本发明进一步涉及该药物组合物用于制备治疗肿瘤疾病的药物的用途，该肿瘤疾病为，例如癌症，优选胰腺癌、膀胱癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、肾癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌、胃癌、子宫内膜癌、和骨肉瘤，本发明还涉及制造此种药物组合物的方法。
背景技术：
除手术之外，使用化疗药剂制备药物或者使用辐射是治疗肿瘤疾病的最常见手段。此种化疗药剂为，例如烷化剂、抗代谢药或源自植物的生物碱。这些化疗药剂和辐射的作用分别是非特异性地抑制细胞增殖和非特异性地诱导细胞死亡，因此产生许多严重的副 作用。化疗药剂或辐射抑制，例如，除了肿瘤细胞以外的迅速生长细胞的增殖，如毛囊、结肠黏膜细胞或免疫细胞，例如T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞、粒细胞、巨噬细胞、小胶质细胞以及骨髓的各种前体细胞。在许多情况下，使用化疗药剂制备用于治疗癌症的药物和/或使用辐射不能在延长患者生存期，特别是中位生存期方面获得理想的结果，化疗药剂和/或辐射的严重副作用有时会加剧这种情况发生。Muramaki等人,2008描述了通过给予丛生蛋白(clusterin)反义寡核苷酸提高吉西他宾耐药性人膀胱癌细胞对化疗药物的敏感性的方法。已知给予吉西他宾以时间依赖方式上调丛生蛋白表达，S卩，sCLU-2表达水平，这导致该细胞对吉西他宾产生耐药性。sCLU-2反义寡核苷酸降低增大的sCLU-2表达水平，提高该耐药细胞对吉西他宾的敏感性，使得降低50%效应的吉西他宾浓度(IC5tl)从IOOnM降低到10nM。Alberts等人,2004进一步描述了化疗药剂和反义寡核苷酸的组合。Alberts等人探究了吉西他宾和ISIS-2503，H-ras硫代磷酸酯反义寡核苷酸对患有局部晚期或转移性胰腺癌的患者的作用，其中H-ras是已知致癌基因。WO 2005/059133A2提到包含抗肿瘤化疗药剂和免疫系统刺激剂的药物组合物，该药物组合物与单独的免疫系统刺激剂相比，增大淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)对胶质瘤细胞的细胞毒性。Paz-Ares等人，2006公开了吉西他宾、顺钼和蛋白激酶C-a反义寡核苷酸的组合在制备用于治疗非小细胞肺癌的药物中的应用。然而，使用这些化疗药剂与反义寡核苷酸的组合未能延长存活期或未能表现出其它对罹患非小细胞肺癌的患者的积极作用。Bellone等人，2006描述了用于治疗胰腺癌的吉西他宾与5-氟脲嘧啶的替换组合，这种组合同样表现欠佳。WO 02/17852A2描述了特定给予剂量的bcl-2反义寡核苷酸与化疗药剂的组合，其中在短时间，即14天内向患者给予高剂量的bcl-2反义寡核苷酸。Bcl-2是细胞凋亡的抑制剂，因为所描述的化疗药剂是细胞凋亡的诱导剂。肿瘤细胞通过上调bcl-2而对该化疗药剂表现出耐药性。因此，本发明的目标问题是分别提高化疗药剂和包含此种化疗药剂的药物组合物在治疗肿瘤疾病，特别是非耐药细胞中的效能。

发明内容
本发明在一个实施方式中涉及包含化疗药剂和TGF-P系统抑制剂，优选反义寡核苷酸，例如抗肿瘤反义寡核苷酸的药物组合物，其中对于化疗药剂细胞毒性，该反义寡核苷酸令人惊讶地以剂量依赖方式降低化疗药剂细胞毒性的IC5(I。优选的反义寡核苷酸是TGF- ^反义寡核苷酸，如TGF- ^ UTGF- P 2，或TGF- ^ 3反义寡核苷酸，或其组合，其与编码TGF- P I、TGF- P 2，和/或TGF- ^ 3的信使RNA (m-RNA)和/或DNA的区域杂交，或与编码TGF- 3 I、TGF- 3 2，和 / 或 TGF- 3 3 受体的 m-RNA 和 / 或 DNA 杂交。此外，TGF-^系统抑制剂例如选自由以下构成的组不为抗体的TGF-@结合蛋 白、TGF-P结合受体、TGF-P结合受体部分、TGF-P特异性肽和与TGF-P结合的低分子物质，或者抑制TGF-P功能的它们的蛋白质、受体、受体蛋白部分或低分子物质中的任一种。TGF-^系统抑制剂，例如，反义寡核苷酸降低化疗药剂对耐药或非耐药细胞，即对该化疗药剂有耐药性或无耐药性的细胞的细胞毒性的IC5(I。本发明药物组合物特别用于治疗肿瘤疾病如癌症和用于治疗自身免疫性疾病。优选地，该药物组合物用于制备治疗肿瘤疾病，优选癌症的药物。该药物组合物和/或其化合物(compounds)制备成任何剂型,并以本领域中已知的任何给予途径给予。该药物组合物适合作为肿瘤疾病如癌症的一线治疗，或作为治疗性处理如辐射之前、之后或与其组合的二线、三线等治疗。该药物组合物中的化疗药剂和TGF-P系统抑制剂，优选反义寡核苷酸分开给予或合并成一个制剂给予。如果给予多于一种的化疗药剂和/或多于一种的TGF-P系统抑制剂，例如反义寡核苷酸，则将该化疗药剂和/或TGF- ^系统抑制剂如反义寡核苷酸分开或合并成一个制剂给予。在优选实施方式中，TGF- ^系统抑制剂如反义寡核苷酸在给予化疗药剂之后或之前给予，或者TGF-P系统抑制剂与化疗剂同时给予。由于化疗药剂细胞毒性的IC5tl降低，所以该化疗药剂的效能(effectivity)增大，而且在优选实施方式中，该化疗药剂的量和剂量都分别降低，从而有利地使该化疗药剂的严重不利副作用减小。在进一步优选的实施方式中，本发明药物组合物中的化疗药剂和TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸的组合，分别基于该化合物的超加性和协同的抗肿瘤作用而有利地延长了患者寿命。优选地，该化疗药剂不会不利地影响TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸与其靶的相互作用。本发明进一步涉及用于生产该药物组合物的方法。


图I表示数据归一化(data normalization)之后，TGF-^ 2反义寡核苷酸,例如SEQ ID No. 30对有关吉西他宾细胞毒性的IC5tl的剂量依赖性降低作用。将5iiM、2iiM、800nM、320nM、128nM、51. 2nM、20. 5nM、8. 2nM，或 3. 3nM 浓度的吉西他宾，与 0 y M (_)、5yMCA),或10 ii M ( ▽)浓度的TGF- ^ 2反义寡核苷酸组合加入到胰腺癌细胞系Hup-T3细胞中。与Oii M TGF-P 2反义寡核苷酸相比，IOii M TGF-P 2反义寡核苷酸使吉西他宾的IC5q降低约4 5X。图2示出数据归一化之后，吉西他宾分别对Hup-T3细胞增殖和活力以及TGF-3 2分泌的影响。5 u M、500nM、50nM、5nM、0. 5nM,或0. 05nM的吉西他宾对TGF-P 2分泌没有特别的影响，尤其是没有特别的抑制和/或刺激作用。TGF-P 2分泌(■)的减少分别与该细胞的增殖和活力(viability)相关，该细胞的增殖和活力在吉西他宾浓度较高(A)时因吉西他宾的细胞毒作用而降低。图3表示TGF- ^ 2反义寡核苷酸对TGF- ^ 2分泌的剂量依赖性抑制作用。将0 ii M(对照)、111] 、2.511]\1、511]\1、1011]\1、2011]\1、4011]\1、6011]\1，或8011]\1浓度的 TGF- ^ 2 反义寡核苷酸，例如SEQ ID No. 30给予Hup-T3细胞。未在该细胞中加入吉西他宾。
图4表明吉西他宾不影响TGF-P 2反义寡核苷酸与它的靶的相互作用，因而不影响该反义寡核苷酸对它的靶的抑制作用。在吉西他宾(2iiM、800nM、320nM、128nM、51. 2nM、20. 5nM、8. 2nM)的存在下，该反义寡核苷酸以剂量依赖方式(0 y M (_)、5yM (A)，或IOyM( )TGF- P 2反义寡核苷酸)抑制TGF- ^ 2分泌。在较高的吉西他宾浓度下Hup_T3细胞的增殖和活力分别降低，吉西他宾分别借助于该细胞增殖和活力的降低而间接地影响TGF-3 2分泌，该细胞的增殖和活力在吉西他宾浓度较高时因吉西他宾的细胞毒作用而降低。图5示出数据归一化之后，TGF-￠2反义寡核苷酸，例如SEQ ID No. 30对有关替莫唑胺(temozolomide)细胞毒性的IC5tl的剂量依赖性降低作用。将200 y M、100 y M、50 y M、2511] 、12.511]\1、6.2511]\1、3.12511]\1，或011]\1浓度的替莫唑胺，与011]\1 (_)、5iiM (▲)，或10uM(V )浓度的TGF-P 2反义寡核苷酸组合加入到黑素瘤细胞系MEL-Jus0细胞中。与OuM TGF-P 2反义寡核苷酸相比，IOuM TGF-^ 2反义寡核苷酸使替莫唑胺的IC5tl降低约1\。图6示出TGF-P 2反义寡核苷酸对替莫唑胺细胞毒性的影响。分别将200 y M和800 u M浓度的替莫唑胺单独，或与10 ii M TGF- ^ 2反义寡核苷酸，例如SEQ ID No. 30组合给予胶质瘤细胞系A-172细胞。与单独的替莫唑胺相比，替莫唑胺与TGF-P 2反义寡核苷酸的组合显著增大替莫唑胺的细胞毒性，增大约疒3X。
具体实施例方式在本发明中，TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸，特别是TGF-P I反义寡核苷酸、TGF-^ 2反义寡核苷酸，和/或TGF-P 3反义寡核苷酸增大化疗药剂在受验者细胞、组织和/或器官中的效能。在优选实施方式中，此种反义寡核苷酸与化疗药剂一起是药物组合物的一部分，其中该化疗剂是，例如吉西他宾、5 -氟脲嘧啶、替莫唑胺、达卡巴嗪(dacarbacine)、多西他赛(多烯紫杉醇)、顺钼、奥沙利钼、他莫昔芬，或伊立替康。本发明药物组合物适用于治疗任何哺乳动物的肿瘤疾病。哺乳动物的实例包括实验动物,包括啮齿类动物如小鼠、大鼠和豚鼠,农场动物如牛、羊、猪和山羊(oats)，宠物如狗和猫，和灵长类动物如猴、猿和人。该药物组合物最优选应用于人临床情况，特别用于治疗肿瘤疾病。在本发明一个实施方式中，一种或多种化疗药剂以及一种或多种反义寡核苷酸和/或一种或多种抑制细胞增殖的TGF-P系统抑制剂形成包含这些组分中的至少两种的混合物，其中该组分要么是纯形式，要么与药学上可接受载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂和/或佐剂合并在一起。在本发明另一个实施方式中，该一种或多种化疗药剂和该一种或多种抑制剂如反义寡核苷酸在一种药物组合物中是分开的。该药物组合物包含这些组分中的每种组分，每种组分是纯的或与药学可接受载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂和/或佐剂合并在一起，其中该药学可接受载体、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂和/或佐剂。该反义寡核苷酸优选为任何这样的TGF-P反义寡核苷酸其降低化疗药剂细胞毒性的IC5tl，因而在体外、离体(ex vivo)或体内(in vivo)增大该细胞、组织和/或器官对该化疗药剂的敏感性。此种反义寡核苷酸是，例如针对前列腺素(prostaglandine)E2(PGE， 例如 SEQ ID NO. 79-89)、VEGF (例如，SEQ ID NO. 90-126)，或 IL-10 (例如，127-146)的反义寡核苷酸，优选针对 TGF-3 I (例如，SEQ ID NO. 1-21),TGF-^ 2 (例如，SEQ ID NO. 22-48)、TGF-^ 3 (例如，SEQ ID NO. 49-78)的反义寡核苷酸。该抗肿瘤反义寡核苷酸是影响肿瘤的寡核苷酸，其中该抗肿瘤反义寡核苷酸直接或间接影响肿瘤。在直接方式下，该反义寡核苷酸阻断蛋白质或肽，如肿瘤中的生物因子的转录和表达，例如TGF- ^，特别是TGF- ^ 2的产生。在间接方式下，该反义寡核苷酸影响蛋白质或肽，如诱导免疫细胞功能和/或免疫系统的因子的转录和/或表达，因此降低或抑制肿瘤细胞生长和/或诱导癌细胞的细胞死亡。在替换实施方式中，TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸，特别是抗肿瘤反义寡核苷酸影响信号转导，即，使与肿瘤形成和/或持久性如肿瘤中毛细管形成有关的因子的信号转导增大或减小。免疫细胞为例如淋巴样细胞，如T细胞、B细胞、NK细胞(自然杀伤细胞)、NK T细胞(自然杀伤T细胞)、粒细胞，如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞(eosinophils)、嗜碱细胞(嗜碱性粒细胞，basophils)和单核细胞(mononuclear cells)如单核白血球(monocyte)、巨卩遼细胞、树突状细胞和肥大细胞。在本发明上下文中，TGF-P抑制剂是抑制TGF-P功能，即抑制TGF-0诱导的任何作用的任何物质，例如蛋白质、肽、小分子。在优选实施方式中，TGF-P抑制剂是抑制TGF-P产生的物质、与TGF-0结合的物质和/或抑制位于其激活级联下游的TGF-P功能的物质。TGF-P拮抗剂的更多细节也可以参见 Wo jtowicz-Praga (2003)。特别地，TGF- ^系统抑制剂是能够抑制TGF- ^，特别是TGF- ^ I、TGF- P 2和/或TGF- ^ 3的表达或功能的任何物质。该抑制剂例如选自以下构成的组不为抗体的TGF- ^结合蛋白、TGF-P抗体、TGF-P结合受体、TGF-P结合受体部分、TGF-0特异性肽和与TGF-^结合的低分子物质，或抑制TGF-@表达和/或功能的它们的蛋白质、受体、受体蛋白部分或低分子物质中的任一种。优选地，TGF-P系统抑制剂具有分子量小于约IOkDa但大于约IDa的抑制TGF-P系统的有机或无机物来源。在又一个实施方式中，抑制TGF-P产生的物质是肽、小于IOOkDa的肽、为TGF-3的一部分的肽、蛋白质、不为抗体的蛋白质，和/或小分子，如肉桂氨茴酸(tranilast)(N-[3，4-二甲氧基肉桂酰基]-氨基苯甲酸)(ffilkenson, K. A. 2000)。在一个实施方式中，为TGF-@的一部分的肽是实施例9中给出的那些的序列。实施例9示出TGF-@ UTGF-^ 2和TGF-P 3的氨基酸序列，这些序列也公开在Mittl (1996)中。在一个优选实施方式中，肽包含从如实施例9中描述的TGF-P I、TGF-P2或TGF-^ 3肽的末端开始计数的112个氨基酸。这些肽在RXXR基序之后开始，以TGF-3 I、TGF- ^ 2和TGF- ^ 3肽末端之前的113个氨基酸结尾，其中R是氨基酸精氨酸，XX表示任何氨基酸或甚至不是氨基酸。在一个实施方式中，为TGF-P的一部分的肽是实施例9中给出的序列的一部分，包含这个肽的一个至所有氨基酸，在其它实施方式中，优选的肽包含这些肽中的约1-100个氨基酸、约2-50个氨基酸、约3-30个氨基酸或约5-20个氨基酸。在又一些其它实施方式中，优选的氨基酸是实施例7中针对TGF-@ I、TGF-^ 2和TGF-P 3给出的相应标号为f 78的那些。进一步优选的实施方式是上面描述的包含约1-50个氨基酸、约1-40、约2-30、约3-25、约4-18、约5-15或约6_12个氨基酸或者由它们组成的氨基酸部分。在上述肽的又一些其它实施方式中，选自由组氨酸(H)、赖氨酸(K)和/或精氨酸(R)构成的组中的至少一种碱性氨基酸被选自这个组中的另一种碱性氨基酸替代，但没有失去其TGF-0拮抗作用。在上述肽的又一些其它实施方式中，选自由谷氨酸(E)和/或天门冬氨酸(D)构成的组中的至少一种酸性氨基酸被选自这个组中的对应氨基酸替代，但没有失去其TGF- ^拮抗作用。作为TGF-P的一部分的肽，其中一些氨基酸相比实施例9中给出的它们的序列被保守性替代，也称为TGF- ^ I、TGF- P 2和/或TGF- ^ 3的类似物。在一些实施方式中，在TGF-@ UTGF-^ 2和TGF-P 3类似物中，该氨基酸的约1°/T约30%、约2% 约20%、约3% 约15%、4% 约12%,或约5% 约10%被保守性替代。氨基酸被保守性替代，也称为本发明上下文中的肽的保守性类似物或活性衍生物，意味着替代了肽或蛋白质的至少一种氨基酸。优选至少一种酸性氨基酸(谷氨酸(E)、天门冬氨酸(D))被各种其它酸性氨基酸替代，相应地至少一种碱性氨基酸被另一种碱性氨基酸替代，至少一种带有极性基团(_0H、_SH、-CONH2)的氨基酸被另一种带有极性基团的氨基酸替代和/或带有纯碳侧链的氨基酸被另一种带有纯碳侧链的氨基酸替代。被氨基酸保守性替代的肽和/或蛋白质仍在本发明的范围内。在另一个实施方式中，上述肽是单独的，没有与化疗药剂组合。在又一个实施方式中，这些肽用于与药学可接受载体一起制备药物组合物。在又一个实施方式中，这些肽包括在用于治疗肿瘤疾病的药物组合物中，而且在又一个实施方式中，这些肽用于 治疗肿瘤疾病的方法中或用于制备治疗根据本发明的肿瘤疾病的药物中。该肿瘤疾病特别是癌症或肿瘤如胰腺癌、膀胱癌、脑瘤、黑色素瘤、肾癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌(colorectal cancer)、胃癌、子宫内膜癌、骨肉瘤、肌肉瘤、血源性肿瘤(blood born tumors)、白血病、肿瘤转移、血管瘤、听神经瘤(acoustic neuromas)、神经纤维瘤、沙眼(trachomas)、生脓性(pyogenic)肉芽瘤、银屑病、星形细胞瘤(astracytoma)、听神经瘤、母细胞瘤(胚性细胞瘤，blastoma)、尤文氏瘤(Ewing，s tumor)、颉咽管瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、成血管细胞瘤(hemangloblastoma)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkins-lymphoma)、髓母细胞瘤、白血病、间皮瘤(mesothelioma)、神经母细胞瘤、神经纤维瘤、非霍奇金淋巴瘤、松果体瘤(pinealoma)、视网膜母细胞瘤、肉瘤、精原细胞瘤、沙目艮、肾母细胞瘤(Wilm’ s tumor)、胆管癌、膀胱癌、脑瘤、乳腺癌、支气管癌、肾脏癌、宫颈癌、绒膜癌、囊腺癌(cystadenocarcinome)、胚胎癌、上皮癌、食道癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胆囊癌、胃癌、头癌(head cancer)、肝癌、肺癌、髓样癌、颈癌、非小细胞支气管/肺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、前列腺癌(prostata cancer)、小肠癌、前列腺癌症(prostate carcinoma)、直肠癌、肾细胞癌、皮肤癌、小细胞支气管/肺癌、鳞状细胞癌、皮脂腺癌、睾丸癌和子宫癌。该脑瘤特别是少突胶质细胞瘤、间变性少突星形细胞瘤(anaplastic oligoastrozytoma)、胶质母细胞瘤、脑转移瘤、骨髓瘤、衆细胞瘤、神经胶质瘤，或星形细胞瘤。在又一个实施方式中，TGF-P抑制剂是受体和/或其部分，或与TGF-P结合的 抗体和/或其部分，或与TGF-P结合并用此种方式抑制TGF-P的功能的蛋白质和/或肽。该抗体,例如可以商购,参见例如R&D Systems, Inc0这些抗体的生产在本领域中是众所周知的。用纯化的人TGF- ^免疫动物如鸡、小鼠、家兔、山羊，该动物将产生对抗TGF- ^的抗体。利用例如，如Cooper，H.M. (1995)描述的亲和色谱纯化该抗体(例如，IgY)，可选地对它进行进一步修饰，例如，生物素化。在更优选的实施方式中，该TGF-P抗体是如Carrington (1998)描述的人化(humanized)抗体。该肽的优选实施方式是，例如，抑制TGF-^ (TGF-^ UTGF-^ 2和TGF-P 3)的一种或多种或所有三种同种型的潜在相关肽(隐性相关月太，Latency-associated peptide)。在另一个实施方式中，该TGF-P抑制剂是抑制TGF-P受体的功能，在细胞外或在细胞内起作用的蛋白质、肽或小分子。肽和蛋白质例如根据肽和蛋白质合成的经典方法如Merrifield合成法或Fmoc合成法而产生。在替换实施方式中，反义寡核苷酸，优选抗肿瘤反义寡核苷酸与其靶信使RNA(mRNA)和/或DNA杂交。该靶mRNA和/或DNA是任何直接或间接参与肿瘤疾病如癌症的形成的mRNA和/或DNA。在优选实施方式中，该反义寡核苷酸是TGF-P反义寡核苷酸，例如，TGF- ^ I、TGF- 3 2和/或TGF- ^ 3或其衍生物，其与TGF- ^的mRNA和/或编码TGF- ^的DNA的区域杂交，从而抑制TGF- ^的产生。术语“核酸”和“寡核苷酸”是指连接到磷酸酯基团(phosphate group)和连接到可变有机碱基上的多个核苷酸(即，包含糖如核糖或脱氧核糖的分子)，该可变有机碱基要么是取代的嘧啶，例如胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)，要么是替换的嘌呤，例如腺嘌呤(A)或鸟嘌呤(G)或其修饰形式。如本文使用的，该术语是指寡核糖核苷酸和寡脱氧核糖核苷酸。该术语也包括寡核苷(即，不具有磷酸酯的寡核苷酸)和任何其它含有有机碱基的聚合物。该核酸是双链或单链的。双链分子在体内更稳定，而单链分子具有增大的活性。在一个实施方式中，该核苷酸的长度在约6个和约100个核苷酸之间,在又一个实施方式中，该核苷酸长度分别为约8个 约40个核苷酸，约12 约32个核苷酸。如本文使用的关于核酸连接单元的“连接的”或“连键(连接、连接键，linkage)”是指通过任何物理化学方式结合到彼此的两个实体(部分，entities)。包括本领域技术人员已知的任何连键，共价或非共价连键。最常见的是那些通常存在于自然界，连接各个核酸单元的天然连键。然而，核酸的各个单元通过合成或修饰连键连接。在一个实施方式中，这种线性聚合结构的各个末端进一步接合从而形成环状结构。然而，开放的线性结构一般是优选的。在寡核苷酸结构内，磷酸酯基团通常是指形成该寡核苷酸的核苷间骨架。RNA和DNA的正常连键或骨架是3’到5’的磷酸二酯连键。反义寡核苷酸或抗肿瘤反义寡核苷酸包括具有非天然存在的部分、带有相似功能的寡核苷酸。此种修饰或取代的寡核苷酸通常优于天然形式，因为它们具有期望的性能如，细胞摄取增强、对核酸靶(例如蛋白质)的亲和力增强、胞内定位发生改变和在核酸酶存在下的稳定性增大。如本文使用的寡核苷酸修饰包含糖、碱基部分和/或核苷间连键的任何化学修饰。 在一个实施方式中，带有共价修饰碱基和/或糖的寡核苷酸或抗肿瘤反义寡核苷酸，包括例如带有这样的骨架糖的寡核苷酸，该骨架糖在3’位置和/或2’位置共价连接到不同于羟基的低分子量有机基团上，并在5’位置共价连接到不同于磷酸酯基团的低分子量有机基团上。因而，修饰的寡核苷酸包括，例如2’-0-烷基化核糖基。在又一个实施方式中，修饰的寡核苷酸包括糖如阿拉伯糖，而不是核糖。因而，该反义寡核苷酸，特别是抗肿瘤反义寡核苷酸在包括或含有连接在一起的任何可能的聚合物单元组合如肽-核酸(其具有带有核酸碱基的氨基酸骨架)的骨架组合物中是非均质的。在一些实施方式中，该寡核苷酸在该骨架组合物中是均质的。寡核苷酸的替换嘌呤和嘧啶包括标准的嘌呤和嘧啶如胞嘧啶以及碱基类似物如取代的碱基(Wagner等人，1996)。嘌呤和嘧啶包括，但不限于腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、次黄嘌呤，以及其它天然和非天然存在的核酸碱基、取代和未取代的芳香族部分。每个寡核苷酸或多核苷酸聚合物中的单个核苷酸均包含相同的修饰，包含这些修饰的组合，或将这些修饰与磷酸二酯连键组合。使寡核苷酸或多核苷酸聚合物耐核酸酶的方法包括，但不局限于，共价修饰该嘌呤或嘧啶碱基。例如，使碱基甲基化、羟甲基化或以其它方式取代(例如，糖基化)以便在很大程度上使该寡核苷酸或多核苷酸耐酸和核酸酶。在优选实施方式中，寡核苷酸上的至少一个封端(基团)是生物素、生物素类似物、亲和素(抗生物素蛋白，avidin)，或亲和素类似物。这些分子具有阻断被保护寡核苷酸或多核苷酸降解的能力，并提供了使修饰寡核苷酸以高亲和力结合到固体载体上的方式。例如用于制备本发明试剂的亲和素和生物素衍生物包括，链霉亲和素、琥珀酰化亲和素、单体亲和素、生物胞素(生物素-e-N-赖氨酸)、生物胞素酰肼、2-亚氨基生物素和生物素基-e -氨基己酸酰肼的胺或巯基衍生物。另外的生物素衍生物如生物素-N-羟基琥珀酰亚胺酯、生物素基-e -氨基己酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯、6_(生物素酰胺基)己酸磺基琥珀酰亚胺酯、N-羟基琥珀酰亚胺亚氨基生物素、生物素溴乙酰基酰肼、P-重氮基苯甲酰基生物胞素和3-(N-马来酰亚胺基丙酰基)生物胞素也可以用作本发明多核苷酸上的封端基团。在另一个实施方式中，修饰寡核苷酸中核苷酸的核糖基环结构在该环结构中具有被N-H、N-R (其中R为烷基或芳基取代基)、S和/亚甲基取代的氧。
在又一个实施方式中，该碱基单元保留以与合适的核酸靶化合物杂交。显示出具有优异杂交性能的一种此类低聚化合物，寡核苷酸模拟物是，例如，肽核酸(PM)。在PNA化合物中，寡核苷酸的糖骨架被含酰胺骨架，特别是氨乙基甘氨酸骨架所取代。该核酸碱基直接或间接结合到该骨架酰胺部分的氮杂氮原子上。教导PNA化合物制备的代表性美国专利包括，但不局限于美国专利No :5，539，082,5, 714，331和5，719，262。PNA化合物的进一步教导可以在Nielsen等人(1991)中找到。进一步修饰的寡核苷酸骨架包括，例如，硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨烷基磷酸三酯、甲基和其它烷基膦酸酯，包括3’ -亚烷基膦酸酯和手性膦酸酯、亚膦酸酯、氨基磷酸酯，包括3’ -氨基氨基磷酸酯和氨烷基氨基磷酸酯、硫羰基氨基磷酸酯(thionophosphoramidate)、硫羰基烧基膦酸酯、硫羰基烧基磷酸三酯,和具有正常(norm) 3’-5’连键的硼烷磷酸酯，以及这些的2’-5’连接类似物，和具有反极性的那些，其中相邻的核苷单元配对为3’ -5’到5’ -3’或2’ -5’到5’ -2，连接。也包括各种盐、混合盐和游离酸形式。在进一步实施方式中，寡核苷酸的至少一个核苷酸按照上面修饰中的一种中描述 的进行修饰。该修饰连续或不规则地涵盖寡核苷酸。在又一个实施方式中，如上描述的至少两种修饰组合在一种寡核苷酸中。在另一个实施方式中，I 约12个或f约8个或f约4个或f约2个寡核苷酸和/或核苷酸连键在该寡核苷酸的3’和/或5’端如上所述的被修饰。在一个实施方式中，本发明反义寡核苷酸与靶，例如TGF-P或其亚型TGF-3 1、TGF- ^ 2、TGF- P 3，或 VEGF、IL-10，或 PGE 杂交。序列表的反义寡核苷酸包含结合到3’和/或5’端中的至少一个上，在一个优选实施方式中结合到2’和/或5’端中的至少一个上的另外的核苷酸，例如约f约1000个核苷酸、约广约500个、约f约100个、约f约50个、约f约20个、约f约10个、约f约5个，或约f约2个核苷酸，它们仍然在本发明的范围内。该反义寡核苷酸利用形成“合成的反义寡核苷酸”的本领域众所周知的许多程序中的任一种从头合成。此种程序为，例如b-氰乙基亚磷酰胺方法(Beaucage等人，1981),或核苷 H-膦酸酯方法(Garegg 等人，1986, Froehler 等人，1986, Garegg 等人，1986, Gaffney等人，1988)。这些反义寡核苷酸通过多种可在市场上购得的自动化寡核苷酸合成器执行。替换地，反义寡核苷酸以质粒形式大规模生产(参见，例如Sambrook等人，1989)，并分成较小的片或作为整体给予。反义寡核苷酸由现有核酸序列(例如，基因组或cDNA)利用已知技术，如采用限制酶、核酸外切酶或核酸内切酶的那些技术制备。以这种方式制备的反义寡核苷酸称为分离核酸。反义寡核苷酸和抗肿瘤反义寡核苷酸分别包括合成和分离的反义寡核苷酸。具有修饰骨架，例如硫代磷酸酯键的反义寡核苷酸利用自动化技术采用例如氨基磷酸酯或H-膦酸酯化学物合成。芳基膦酸酯和烷基膦酸酯按照，如美国专利No. 4，469，863中描述的方法制备。其中带电荷氧部分按美国专利No. 5，023，243和欧洲专利No. 092，574中描述的进行烷基化的烷基磷酸三酯，利用可商购的试剂根据自动化固相合成法制备。制取反义寡核苷酸的进一步骨架修饰和取代的方法已被描述(Uhlmann等人，1990 ；Goodchild 1990)。
替换地，硫代磷酸酯利用自动化技术采用氨基磷酸酯或H-膦酸酯化学物合成。芳基膦酸酯和烷基膦酸酯按照，如美国专利No. 4，469，863中描述的方法制备；烷基磷酸三酯(其中带电荷氧部分按美国专利No. 5，023，243和欧洲专利No. 092，574中描述的烷基化)，利用可商购的试剂根据自动化固相合成法制备。制取其它DNA骨架修饰和取代的方法已被描述(Uhlmann, E.等人，1990 ；Goodchild, J. 1990)。根据本发明的术语“肿瘤疾病”是指由细胞增殖引起或以细胞增殖为特征的增殖性障碍，该细胞失去对正常生长控制的易感性。根据本发明的术语“癌症”包括，良性和恶性肿瘤以及任何其它增殖性障碍，例如转移形成。相同组织类型的癌症一般起源于相同组织，并且可以，例如根据它们的生物学特性分成不同的亚型。四大类癌症为，癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤。已知超过200种不同类型的癌症，可以影响身体的每个器官或组织。不限制癌症定义的具体癌症实例包括，实体瘤、血源性肿瘤如白血病、急性或慢性骨髓性或淋巴母细胞性白血病；瘤转移；良性肿瘤，如血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙眼和化脓性肉芽瘤；恶化前肿瘤(pre-malignant tumors);星形细胞瘤，包含毛细胞性(pilocyt)星形细胞瘤WHO I、星形细胞瘤WHO II、星形细胞瘤WHO III、母细胞瘤、乳腺 癌、脊索瘤、颅咽管瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、尤文氏瘤、胃癌、胚组织瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、血管母细胞瘤、血管外皮细胞瘤(hemangioperycatioma)、霍奇金淋巴瘤、髓母细胞瘤、白血病、间皮瘤、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、松果体瘤、视网膜母细胞瘤、肉瘤(包括血管肉瘤、软骨肉瘤、内皮肉瘤、纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管内皮肉瘤(lymphangioandothel iosarcoma)、淋巴管肉瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、肌肉瘤、神经鞘瘤、少突胶质细胞瘤、成骨肉瘤、骨肉瘤)、精原细胞瘤、亚室管膜瘤、肾母细胞瘤，或者选自以下的组中胆管癌、膀胱癌、脑瘤、乳腺癌、支气管癌、肾脏癌、宫颈癌、绒膜癌、囊腺癌、胚胎癌、上皮癌、食道癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胆囊癌、胃癌、头颈部癌、肝癌、肺癌、髓样癌、非小细胞支气管/肺癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、前列腺癌、小肠癌、直肠癌、肾细胞癌、皮肤癌、小细胞支气管/肺癌、鳞状细胞癌、皮脂腺癌、睾丸癌、骨肉瘤、卵巢癌，或子宫癌。在优选实施方式中，转移形成是指肝、肺、脑、淋巴结和/或内脏转移的形成。这些转移中的每种均可利用本发明药物组合物治疗。根据本发明的化疗药剂是抑制细胞增殖和/或诱导细胞死亡的物质，并在优选实施方式中进一步抑制转移的形成。术语化疗药剂包含，但不局限于，化疗药剂、化疗药剂辅助增效剂(chemotherapeutic agent supplementary potentiating agents)和放身寸性药齐[J。这个组的实例在本文中给出。在一个实施方式中、化疗药剂选自吉西他宾、替莫唑胺、亚硝基脲、长春花生物碱、嘌呤和喃唳碱基拮抗剂、细胞抑制抗生素(cytostatic antibiotics)、喜树碱(camphotecine)衍生物、抗雌激素药、抗雄激素药和促性腺激素释放激素类似物的组。在优选实施方式中，亚硝基脲的组包含ACNU、BCNU, CCNU和/或HCNU。在另一个实施方式中，该抗肿瘤化疗药剂选自以下的组亚硝基脲，例如，ACNU、BCNU, HCNU和/或CCNU，细胞毒活性抗生素，例如，多柔比星、聚乙二醇脂质体多柔比星(C’aclyxi)、5-氟脱氧尿苷、5-氟尿喃唳、5-氟尿苷、吉西他宾、丙卡巴肼(procarbazine)、紫杉酹(泰素，taxol)、泰索帝(taxotere)、替莫唑胺、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)。ACNU的同义词是3-[ (-4-氨基-2-甲基-5-嘧啶基)甲基]- I- (2-氯乙基)- I-亚硝基脲盐酸盐、CS-439HC1、盐酸宁得朗(Nidran hydrochloride)、盐酸尼莫司汀(NimustineHydrochloride)、NSC-245382。BCNU是双氯乙基亚硝基脲，化学名称为N，N’-双(2-氯乙基)-N-亚硝基脲，其它名称为BiCNU、卡莫司汀(carmustin)。CCNU是1-(2-氯乙基)-3-环己基-I-亚硝基脲。同义词为N-(2-氯乙基)-N’_环己基-N-亚硝基脲、洛莫司汀(Belustine)、Cee NU (罗氮芥)、氯乙基环己基亚硝基脲、ICIG 1109、洛莫司汀(Lomustine), NSC 79037。替莫唑胺的一个化学名称为3，4- 二氢-3-甲基-4-氧代咪唑并->5，Id’ 1，2，3，4-四嗪-8-羧酰亚胺。替莫唑胺的其它名称为替莫待尔(Temodal)、Temodar、methazolastone、CCRG81045、SCH52365、NSC362856、M&B39836。替尼泊苷(teniposide)的同义词为4’-去甲基表鬼臼毒素、9_(4，6-0_2_噻吩亚甲基-b-D-吡喃葡萄糖苷)、表鬼臼毒素、EPT、替尼泊苷VM-26、VM 26,5, 8，8a, 9-四氢-5- (4-羟基-3，5- 二甲氧基苯基)-9- {[4，6-0- (2-噻吩亚甲基)-b-D-吡喃葡萄糖基]氧}呋喃并[3’，4’ 6，7]萘并[2，3-d]-1，3-二氧杂环戊烯-6 (5aH)_酮。 在一个实施方式中，长春花(Vinca)生物碱包含长春新碱、长春碱、长春地辛(vindesine)及其活性衍生物。在一个实施方式中，嘌呤和嘧啶碱基拮抗剂选自5-氟尿嘧啶、5-氟脱氧尿苷、阿糖胞苷和吉西他宾的组。在其它实施方式中，化疗药剂选自多柔比星和脂质体聚乙二醇多柔比星的组，喜树碱(camphthotecine)衍生物选自依立替康(irinotecane)和托泊替康(topotecane)的组，抗雌激素药选自他莫昔芬、依西美坦、阿那曲唑和氟维司群的组，抗雄激素药选自氟他胺和比卡鲁胺的组，抗孕酮选自米非司酮(mifepriston)的组，促性腺激素释放激素的类似物选自亮丙立德(Ieuprolide)和戈舍瑞林(gosereline)的组。在其它实施方式中，该至少一种反义寡核苷酸，优选选自由TGF-3 I、TGF-^ 2,和TGF-3 3，和/或抑制剂(如果是TGF_@抑制剂)构成的组的反义寡核苷酸，与选自以下组的至少一种化疗剂组合阿西维辛(Acivicin)、阿克拉霉素(Aclarubicin)、盐酸阿考达唑(Acodazole Hydrochloride)、阿克罗宁(Acronine)、阿多来新(Adozelesin)、阿霉素(Adriamycin)、阿地白介素(Aldesleukin)、六甲蜜胺(Altretamine)、安波毒素(Ambomycin)、醋酸双氢胺蒽醌(Ametantrone Acetate)、氨鲁米特(Aminoglutethimide)> 安口丫卩定(Amsacrine)、阿那曲唑(Anastrozole)、氨茴霉素(Anthramycin)、天门冬酰胺酶(Asparaginase)、曲林菌素(Asperlin)、阿瓦斯汀(Avastin)、阿扎胞苷(Azacitidine)、氮替派(Azetepa)、阿佐霉素(Azotomycin)、巴马司他(Batimastat)、苯佐替派(Benzodepa)、比卡鲁胺(Bicalutamide)、盐酸比生群(Bisantrene Hydrochloride)、二甲横酸双奈法德(Bisnafide Dimesylate)、比折来新(Bizelesin)、硫酸博来霉素(Bleomycin Sulfate)、布喹那钠(BrequinarSodium)、溴匹利明(Bropirimine)、白消安(Busulfan)、放线菌素 C (Cactinomycin)、卡普辜丽(Calusterone )、卡拉酸胺(Caracemide)、卡贝替姆(Carbetimer)、卡钼(Carboplatin)、卡氮芥(Carmustine)、盐酸卡柔比星(Carubicin Hydrochloride)、卡折来新(Carzelesin)、西地芬戈(Cedefingol)、西妥昔单抗(Cetuximab)、苯丁酸氮芥(ChlorambuciI)、西罗里霉素(Cirolemycin)、顺钼、克拉屈宾(Cladribine)、甲磺酸克雷斯托(Crisnatol Mesylate)、环憐酉先胺(Cyclophosphamide)、阿糖胞苷(Cytarabine)、达卡巴嗪(Dacarbazine)、DACA (N_[2_( 二甲基_氨基)乙基]吖啶_4_甲酰胺)、更生霉素(Dactinomycin)、盐酸柔红霉素(Daunorubicin Hydrochloride)、道诺霉素(Daunomycin)、丁西他宾(Decitabine)、右奥马钼(Dexormaplatin)、地扎狐宁(Dezaguanine)^甲磺酸地扎狐宁、地卩丫醌(Diaziquone)、多西他赛(Docetaxel)、多柔比星(Doxorubicin)、盐酸多柔比星、屈洛昔芬(Droloxifene )、梓檬酸屈洛昔芬、丙酸屈他雄酮(Dromostanolone Propionate)、偶氮霉素(Duazomycin)、依达曲沙(Edatrexate)、盐酸依洛尼塞(Eflornithine Hydrochloride)、依沙芦星(Elsamitrucin)、恩络钼(Enloplatin)、恩普氨酯(Enpromate)、依匹哌卩定(Epipropidine)、盐酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride)、厄布洛唑(Erbulozole)、厄洛替尼(Erlotinib)^ 盐酸依索比星(Esorubicin Hydrochloride)、雌莫司汀(Estramustine)、憐酸雌莫司汀钠、依他硝唑(Etanidazole)、乙碘油I 131、依托泊苷(Etoposide)、磷酸依托泊苷、氯苯乙啼胺(Etoprine)、盐酸法曲唑(Fadrozole Hydrochloride)、法扎拉宾(Fazarabine)、维甲酉先酌 胺(Fenret ini de)、氟尿苷(Floxuri dine)、憐酸氟达拉宾(Fludarabine Phosphate)、5-氟尿啼卩定、5-FdUMP、氟环胞苷(Flurocitabine)、磷喹酮(Fosquidone)、福司曲 星钠(Fostriecin Sodium)、吉非替尼(Gef itinib)、吉西他宾、盐酸吉西他宾、金Au 198、轻基脲、盐酸伊达比星(Idarubicin Hydrochloride)、异环磷酰胺、依莫佛新(Ilmofosine)、甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate)、干扰素a-2a、干扰素a-2b、干扰素a-nl、干扰素a-n3、干扰素P-la、干扰素Y-lb、异丙钼(Iproplatin)、易瑞沙(Iressa)、盐酸依立替康(Irinotecan Hydrochloride)、醋酸兰瑞妝(Lanreotide Acetate)、来曲唑(Letrozole)、醋酸亮丙立德(Leuprolide Acetate)、盐酸利阿唑(LiarozoleHydrochloride)、洛美曲索钠(Lometrexol Sodium)、罗氮芥(Lomustine)、盐酸洛索蒽醌(Losoxantrone Hydrochloride)、马丙考(Masoprocol )、美登素(Maytansine)、盐酸氮芥(Mechlorethamine Hydrochloride)、醋酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)、醋酸美仑孕酮(Melengestrol Acetate)、美法仑(Melphalan)、美洛格瑞(Menogaril)、巯口票呤(Mercaptopurine)、甲氨噪呤(Methotrexate)、甲氨噪呤钠、氯苯氨卩定(Metoprine)、美妥替哌(Meturedepa)、米汀多酰胺(Mitindomide)、米托卡星(mitocarcin)、丝裂红素(Mitocromin)^丝林霉素(Mitogillin)、丝裂马菌素(Mitomalcin)、丝裂霉素(Mitomycin)、丝裂帕菌素(Mitosper)、米托坦(Mitotane)、盐酸米托蒽醌(MitoxantroneHydrochloride)、麦考酪酸(Mycophenolic Acid)、洛可达唑(Nocodazole)、诺加拉霉素(Nogalamycin)、奥马钼(Ormaplatin)、奥沙利钼(Oxaliplatin)、亚磺酰P比P定(Oxisuran)、紫杉醇(Paclitaxel )、天门冬酰胺酶(Pegaspargase)、佩利霉素(Peliomycin)、戊氮芥(Pentamustine)、硫酸培来霉素(Peplomycin Sulfate)、过憐酰胺(Perfosfamide)、哌泊溴焼(Pipobroman)、哌泊舒凡(Piposulfan)、盐酸必散特隆(Piroxantrone Hydrochloride)、普卡霉素(Plicamycin)^ 普洛美坦(Plomestane)、口卜吩姆钠(Porfimer Sodium)、泊非霉素(Porf iromycin)、松龙苯芥(Prednimustine)、盐酸甲基节餅(Procarbazine Hydrochloride)、卩票呤霉素(Puromycin)^盐酸票呤霉素、卩比唑呋喃菌素(Pyrazofurin)、利波腺苷(Riboprine)、利妥昔(Rituximab)、洛太米特(Rogletimide)、沙芬戈(Safinol)、盐酸沙芬戈、甲环亚硝脲(Semustine)、双曲秦(Simtrazene)、磷乙酰天冬氨酸钠(Sparfosate Sodium)、稀疏霉素(Sparsomycin)、盐酸螺旋锗(Spirogermanium Hydrochloride)、螺旋氮芥(Spiromustine)、顺螺钼(Spiroplatin)、链黑霉素(Streptonigrin)、链脲霉素(Streptozocin)、氯化银 Sr 89、磺氯苯脲(Sulofenur)、他利霉索(Talisomycin)、他莫昔芬(Tamoxifen)、紫杉焼(Taxane)、紫杉化合物(Taxoid)、替可加兰钠(Tecogalan Sodium)、喃氟唳(Tegafur)、盐酸替洛蒽醌(Teloxantrone Hydrochloride)、替莫泊芬(Temoporf in)、替尼泊苷(Teniposide)、替罗昔隆(Teroxirone)、睾内酯(Testolactone)、硫咪 _ 呤(Thiamiprine)、硫鸟票呤(Thioguanine)^ 噻替派(Thiotepa)、诺拉曲特(Thymitaq)、噻唑呋林(Tiazofurin)、替拉扎明(Tirapazamine)、拓优得(Tomudex)、T0P-53、盐酸拓扑替康(TopotecanHydrochloride)、梓樣酸托瑞米芬(Toremifene Citrate)、曲妥单抗(Trastuzumab)、醋酸曲托龙(Trestolone Acetate)、憐酸曲西立宾(Triciribine Phosphate)、曲美沙特(Trimetrexate)、葡糖醒酸曲美沙特、曲普瑞林(Triptorelin)、盐酸妥布氯唑(Tubulozole Hydrochloride)、尿啼卩定氮芥(Uracil Mustard)、尿焼亚胺(Uredepa)、伐普肽(Vapreotide)、维替泊芬(Verteporf in)、长春碱、硫酸长春碱、长春新碱、硫酸长春新碱、长春地辛(Vindesine)、硫酸长春地辛、硫酸长春皮定(Vinepidine Sulfate)、硫酸长春甘酯(Vinglycinate Sulfate)、硫酸长春罗辛(Vinleurosine Sulfate)、酒石酸长春瑞宾(Vinorelbine Tartrate)、硫酸异长春碱(Vinrosidine Sulfate)、硫酸长春利定(Vinzolidine Sulfate)、伏氯唑(Vorozole)、折尼拉汀(Zeniplatin)、净司他丁(Zinostatin)、盐酸佐柔比星(Zorubicin Hydrochloride)、2-氯脱氧腺苷、2’ -脱氧柯福霉素(Deoxformycin)、9-氨基喜树碱、雷替曲塞(raltitrexed)、N-炔丙基_5，8_ 二去氮杂叶酸(dideazafolic acid)、2_氣_2’ -阿拉伯糖_氣-2’ -脱氧腺音、2_氣_2’ -脱氧腺苷、茴香霉素(anisomycin)、曲古柳菌素(trichostatin) A、hPRL_G129R、CEP-751、利诺胺(Iinomide)0其它化疗药剂包括20_表-1，25羟基维生素D3、5-乙炔基尿嘧啶、阿比特龙(abiraterone)、阿克拉霉素(aclarubicin)、酰基富烯(acylfulvene)、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素(aldesleukin)、ALL-TK 拮抗剂、六甲蜜胺(altretamine)、氨莫司汀(ambamustine)、2，4_ 二氯苯氧乙酸(amidox)、阿米斯丁(amifostine)、氨基乙酰丙酸、氨柔比星(amrubicin)、安卩丫卩定、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、穿心莲内酯(andrographolide)、血管生成抑制剂、拮抗剂D、拮抗剂G、安雷利克斯(antarelix)、抗背部化形态发生蛋白-I、抗雄激素药，前列腺癌、抗雌激素药、抗瘤酮(antineoplaston)、反义寡核苷酸、甘氨酸艾菲地可宁(aphidicolinglycinate)、凋亡基因调节剂、凋亡调节剂、脱嘌呤核酸、ara-⑶P-DL-PTBA、精氨酸脱氨基酶、asulacrine、阿他美坦(atamestane)、阿曲氮芥(atrimustine)、海洋环肽(axinastatin)l、海洋环肽2、海洋环肽3、阿扎司琼(azasetron)、阿扎毒素(azatoxin)、重氮酪氨酸、衆果赤霉素III衍生物、balanol、巴马司他(batimastat)、BCR/ABL拮抗剂、苯并二氢卩卜酷(benzochlorins)、苯甲酰星形孢菌素、^ -内酰胺衍生物、^ -alethine、-克拉霉素B、桦木酸、bFGF抑制剂、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、双氮杂环丙烯基精素(bisaziridinylspermin)、双奈法德(bisnafide)、bistratene A、比折来 新(bizelesin)、breflate、溴匹利明(bropirimine)、布朵替坦(budotitane)、丁硫氨酸亚讽亚胺(buthionine sulfoximine)、|丐泊三醇(calcipotriol)、卡弗他丁 C (calphostinC)、喜树碱衍生物(例如，10-轻基-喜树碱)、金丝雀痘(canarypox) IL_2、卡培他宾(capecitabine)、甲酰胺-氨基-三唑、羧基酰胺基三唑、CaRest M3、CARN 700、软骨源抑制齐U、卡折来新(carzelesin)、酪蛋白激酶抑制剂(IC0S)、澳粟精胺(castanospermine)、天蚕抗菌肽(cecropin) B、西曲瑞利克斯(cetrorelix)、二氢P卜吩(chlorin)、氯喹喔啉磺酰胺、西卡前列素(cicaprost)、顺P卜啉(cis-porphyrin)、克拉屈宾、氯米芬类似物、克霉唑(clotrimazole)、collismycinA、collismycin B、考布他汀 A4、考布他汀类似物、conagenin、crambescidin 816、克雷斯托(crisnatol)、念珠藻环妝(cryptophycin)8、念珠藻环肽A衍生物、curacinA、环戊焼蒽醌、cycloplatam、cypemycin、阿糖胞苷十八焼基磷酸盐(cytarabine ocfosfate)、溶细胞因子、磷酸己焼雌酷(cytostatin)、达昔单抗(dacliximab)、丁西他宾(decitabine)、脱氢代代宁(dehydrodidemnin) B、地洛瑞林(deslorelin)、右异环磷酰胺、右丙亚胺、右维拉帕米(dexverapamil)、地R 丫醌(diaziquone)、代代宁B、3，4 一二轻基苯并氧B亏酸(didox)、二乙基降精胺(diethy Inorspermine )、二氢-5-氮杂胞苷、二氢紫杉酷，9_、dioxamycin、二苯基螺旋氮芥、discodermol ide、二十二焼醇、多拉司琼、脱氧氟尿苷、屈洛昔芬、屈大麻酷(dronabinol)、 倍癌霉素(duocarmycin) SA、依布砸啉(ebselen)、依考莫司汀(ecomustine)、依地福§f(edelfosine)^ 依决可单抗(edrecolomab)、艾佛鸟氨酸(eflornithine)、榄香烯(elemene)、乙啼替氟(emitefur)、表柔比星(epirubicin)、包括脱氧埃坡霉素在内的埃坡霉素(epothilone) (A，R. dbd. H;B，R. dbd. Me)、epithilones、依立雄胺(epristeride)、雌莫司汀(estramustine)类似物、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、依他硝唑(etanidazole)、依托泊苷、4’ -磷酸依托泊苷(etoposide 4’ -phosphate) (etopofos)、依西美坦(exemestane)、法曲唑、法扎拉宾、维甲酰酷胺、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺、夫拉平度(flavopiridol)、氟卓斯汀(flezelastine)、fIuasterone、氟达拉宾(fludarabine)、fluorodaunorunicin hydrochloride、伏芬尼美司(forfenimex)、福美司坦(formestane)、佛司曲辛(fostriecin)、福替目丁(fotemustine)、gadolinium texaphyrin、硝酸嫁、加洛他宾(galocitabine)、加尼瑞克(ganirelix)、明胶酶抑制剂、吉西他宾、谷胱甘肽抑制剂、hepsulfam、heregulin、六甲撑二乙酰胺、金丝桃素(hypericin)、伊班膦酸(ibandronicacid)、伊达比星(idarubicin)、艾多昔芬(idoxifene)、伊决孟酮(idramantone)、依莫佛新(ilmofosine)、伊洛马司他(ilomastat)、咪唑卩丫卩定酮(imidazoacridones)、咪喹莫特(imiquimod)、免疫促进肽、胰岛素样生长因子受体-I抑制剂、干扰素激动剂、干扰素、白细胞介素、碘节胍(碘节胍)、碘阿霉素(iododoxorubicin)、4-甘薯苦醇(ipomeanol)、伊立替康(irinotecan)、伊罗普拉(iroplact)、伊索格拉定(irsogladine)、isobengazole、isohomohelicondrin B、伊他司琼、jasplakinolide、kahalalideF、片螺素(lamellarin)N-三乙酸盐、兰瑞肽(Lanreotide)、雷拉霉素(Ieinamycin)、来格司亭(Ienograstim)、硫酸蘑燕多糖(lentinan sulfate)、leptolstatin、来曲唑(letrozole)、白血病抑制因子、白细胞a干扰素、亮丙立德(leuprolide) +雌激素+黄体酮、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑(levamisole)、利阿唑(liarozole)、线性多胺类似物、亲脂二糖肽、亲脂钼化合物、格力本脲(Iissoclinamide) 7、洛钼(lobaplatin)、虫丘虫引磷脂(lombricine)、洛美曲索(lometrexol)、氯尼达明(lonidamine)、洛索蒽醌(losoxantrone)、洛伐他汀(lovastatin)、罗唑利宾(loxoribine )、勒托替康(lurtotecan)、得克萨菲啉镨(Iutetiumtexaphyrin)、lysoylline、裂角军月太(lytic peptides)、美登素(maitansine)、mannostatinA、马马司他(marimastat)、马丙考(masoprocol)、脉丝平(maspin)、基质溶解因子抑制齐U、基质金属蛋白酶抑制剂、美洛格瑞(menogaril)、麦尔巴隆(merbarone)、美替瑞林(meterelin)、甲硫氨酸酶(methioninase)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、MIF 抑制剂、米非司酮(mifepristone)、米替福新(miItefosine)、米立司亭(mirimostim)、错配双链RNA、光辉霉素(mithracin)、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、丝裂霉素类似物、米托萘胺(mitonafide)、剌尾鱼毒素(mitotoxin)成纤维细胞生长因子-阜草素(saporin)、米托蒽醌、莫法罗汀(mofarotene)、莫拉司亭(molgramostim)、单克隆抗体、人域毛膜促性腺激素、单磷酰脂质A+分枝杆菌(myobacterium)细胞壁sk、单哌潘生丁(mopidamol)、多重耐药性基因抑制剂、基于多瘤抑制剂-I的疗法、芥末抗癌剂、印度洋海綿B (mycaperoxide B)、分枝杆菌细胞壁提取物、myriaporone、N-乙酰地那林、N-取代苯酰胺类、那法瑞林(nafarelin)、那瑞替喷(nagrestip)、纳洛酮(naloxone) +喷他佐辛(pentazocine)、napavin、蔡胳二酉享(naphterpin)、那托司亭(nartograstim)、奈达销(nedaplatin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、奈立膦酸(neridronic acid)、中性肽链内切 酶、尼鲁米特(niIutamide)、尼沙霉素(nisamycin)、氧化氮调节剂、氮氧化物抗氧化剂、nitrullyn. 06-苯甲基鸟嘌吟、奥曲肽、4，6，9-三羟基-8-甲基_3，4-二氢蒽-I (2H)-酮(okicenone)、寡核苷酸、奥那司酮(onapristone)、昂丹司琼(ondansetron)、昂丹司琼、oracin、口腔细胞因子诱导物、奥马钼、奥沙特隆、奥沙利钼、奥沙霉素(oxaunomycin)、紫杉醇类似物、紫杉醇衍生物、palauamine、棕榈酰根霉素、帕米膦酸、人参炔三醇、帕洛米芬(panomifene)、副球菌素(parabactin)、泊泽尼普定(pazelliptine)、天门冬酰胺酶、培得星(peldesine)、戌聚糖聚硫酸钠(pentosan polysulfate sodium)、喷司他丁(pentostatin)、戊四氮(pentrozole)、潘氟隆(perflubron)、过磷酰胺、紫苏子醇、苯连氮霉素(phenazinomycin)、乙酸苯酯、磷酸酶抑制剂、溶血链球菌Su (picibanil)、盐酸匹罗卡品(pilocarpine hydrochloride)、卩比喃阿霉素(pirarubicin)、卩比曲克辛(piritrexim)、placetin A、placetin B、纤溶酶原激活物抑制剂、钼复合物、钼化合物、钼-三胺复合物、鬼臼毒素、卩卜吩姆钠、泊非霉素(porfiromycin)、丙基双口丫卩定酮、前列腺素J2、蛋白酶体抑制剂、基于蛋白A的免疫调节剂、蛋白激酶C抑制剂、蛋白激酶C抑制剂、微藻(microalgal)、蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂、票呤核苷磷酸化酶抑制剂、红紫素(purpurins)、吡唑啉吖啶、吡醇羟乙酯化的血红蛋白聚氧乙烯缀合物、raf-拮抗剂、雷替曲塞(raltitrexed)、雷莫司琼(ramosetron)、ras_法呢基蛋白转移酶抑制齐[Kras-抑制剂、ras-GAP抑制剂、去甲基瑞替普汀、铼Re 186依替膦酸盐、根霉素、核酶、RII维胺酯(代七；[仙1111(16)、洛太米特(1'0816七；[1111(16)、罗希吐碱(1'011；^111^116)、胞壁酖基二妝(romurtide)、罗喹美克(roquinimex)、rubiginone BI、ruboxyl、沙芬戈、五轻基萘 _5，12- 二酮(saintopin)、SarCNU、sarcophytolA、沙格司亭(sargramostim)、Sdi I 模拟物、司莫司汀(semustine)、衰老衍生抑制剂I、有义寡核苷酸、信号转导抑制剂、信号转导调节剂、单链抗原结合蛋白、西索菲兰(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、硼卡钠(sodiumborocaptate)、苯乙酸钠、solverol、生长调节素结合蛋白、索纳明(sonermin)、膦门冬酸、穗霉素 D (spicamycin D)、螺旋氮芥、斯耐潘定(splenopentin)、海绵素(spongistatinI)、角S胺、干细胞抑制剂、干细胞分裂抑制剂、stipiamide、基质溶素抑制剂、sulfmosine、强效血管活性肠肽拮抗剂、suradista、苏拉明(suramin)、苦马豆碱(swainsonine)、合成糖胺多糖、他莫司汀(tallimustine)、甲碘化他莫昔芬(tamoxifen methiodide)、塔罗氮芥(tauromustine)、他佐罗汀(tazarotene)、替可加兰钠(tecogalan sodium)、喃氟P定(tegafur)、卩比喃硫(tellurapyrylium)、端粒酶抑制剂、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺、替尼泊苷(teniposide)、四氯癸氧化物(tetrachlorodecaoxide)、四唑胺(tetrazomine)、沙利布拉司汀(thaliblastine)、萨立多胺(thalidomide)、噻可拉林(thiocoraline)、促血小板生成素、血小板生成素模拟物、胸腺法新(thymalfasin)、促胸腺生成素受体激动剂、胸腺曲南(thymotrinan)、促甲状腺激素、锡乙基初紫红素(tinethyl etiopurpurin)、替拉扎明、二氯环戊二烯钛、托泊替康(titanocene)、托普散亭(topsentin)、托瑞米芬(toremifene)、全能干细胞因子、翻译抑制剂、维甲酸、三乙酰基尿苷、曲西立宾(triciribine)、曲美沙特(trimetrexate)、曲普瑞林(triptorelin)、托焼司琼(tropisetron)、妥罗雄脲(turosteride)、酪氨酸激醃抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostins)、UBC抑制剂、乌苯美司(ubenimex)、泌尿生殖窦源的生长抑制因子、尿激 酶受体拮抗剂、伐普肽(vapreotide)、variolin B、载体系统，红细胞基因治疗、维拉雷琐(velaresol)、藜芦明(veramine)、维汀司(verdins)、维替泊芬(verteporfin)、长春瑞宾、温沙阿亭(vinxaltine)、维塔辛(vitaxin)、伏罗唑(vorozole)、扎诺特隆(zanoterone)、折尼拉汀(zeniplatin)、亚节维 C (zilascorb)、净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)。化疗药剂辅助增效药剂为，例如三环抗抑郁药(例如丙咪嗪(imipramine )、地昔帕明(desipramine)、阿米替林(amitryptyline)、氯米帕明(clomipramine)、三甲丙咪嗪(trimipramine)、多虑平(doxepin)、去甲替林(nortriptyline)、普罗替林(protriptyline)、阿莫沙平(amoxapine)和马普替标(maprotiline))、非三环抗抑郁药(例如舍曲林(sertraline)、曲拉唑酮(trazodone)和西酞普兰(citalopram))、Ca. sup. ++拮抗剂(例如维拉帕米(verapamil)、硝苯地平(nifedipine)、尼群地平(nitrendipine)和卡罗维林(caroverine))、|丐调节蛋白抑制剂(例如普尼拉明(prenyIamine)、三氟拉嗪(trifluoroperazine)和氣米巾白明(clomipramine))、两性霉素(Amphotericin) B、三苯乙醇(Triparanol)类似物(例如他莫昔芬)、抗心律失常药(例如奎尼丁(quinidine))、降压药(例如利血平(reserpine))、降硫醇药(Thiol depleter)(例如丁硫氨酸和亚砜亚胺(sulfoximine))以及多重耐药性减小剂如Cremaphor EL0本发明化合物也可以与细胞因子如粒细胞集落剌激因子一起给予。抗增殖药剂为，例如羟乙基磺酸吡曲克辛(PiritreximIsethionate)。放射性药剂的实例为纤维蛋白原I 125、氟脱氧葡萄糖F 18、氟多巴(Fluorodopa)F 18、胰岛素I 125、胰岛素I 131、碘苄胍I 123、胆影钠I 131、碘安替比林I 131、碘胆固醇I 131、碘马尿酸钠I 123、碘马尿酸钠I 125、碘马尿酸钠I 131、碘吡啦口舍(Iodopyracet) I 125、碘卩比啦嗜 1131、盐酸碘非他胺(Iofetamine Hydrochloride) I123、碘双胺喹(Iomethin) I 125、碘双胺喹I 131、碘酞钠I 125、碘酞钠I 131、碘酪氨酸I 131、碘塞罗宁(Liothyronine) I 125、碘塞罗宁I 131、轻萊异丙醇醋酸酯(MerisoprolAcetate) Hg 197、羟汞异丙醇醋酸酯Hg 203、羟汞异丙醇Hg 197、砸代蛋氨酸Se 75、锝Tc99m胶体三硫化锑、锝Tc 99m比西酯、锝Tc 99m地索苯宁、锝Tc 99m依替膦酸盐、锝Tc 99m依沙美厢、锝Tc 99m呋膦(Furifosmin)、葡庚糖酸锝Tc 99m、锝Tc 99m 二甲苯双酸盐、锝Tc 99m甲溴苯宁、锝Tc 99m亚甲基二磷酸盐、锝Tc 99m亚甲基二磷酸二钠、锝Tc 99m巯替肽、锝Tc 99m轻亚甲基二膦酸盐(Oxidronate)、锝Tc 99m喷替酸盐(Pentetate)、锝Tc99m喷替酸钙三钠、司他比锝Tc 99m、西硼肟锝Tc 99m、锝Tc 99m 二巯丁二酸、锝Tc 99m胶体硫、替月亏锝Tc 99m、锝Tc 99m替曲膦(Tetrofosmin)、锝Tc 99m Tiatide、甲状腺素I 125、甲状腺素 I 131、托泊酮(Tolpovidone) I 131、三油精(Triolein) I 125、三油精 I131。该化疗药剂以及药物前体的活性衍生物也是本发明的一部分。因为化疗药剂的常见但可耐受的副作用是恶心和呕吐，所以对于本领域技术人员显而易见的，通过将抗呕吐药物与引起恶心和/或呕吐的化疗药剂联合给予可以缓解这些副作用。例如，可以在给予引起恶心/呕吐的抗肿瘤药剂之前大约30分钟给予昂丹司琼(Ondansetron),约8mg剂量，p. o.。当然需要时也可以使用其它抗呕吐药物如Hasaldol、 苯那君(Benadryl)和阿提凡(Ativan)。因此，在替换实施方式中，本发明药物组合物进一步包含用于降低化疗药剂或TGF-P系统抑制剂的副作用的化合物。施加的辐射剂量为约lGy 约lOOGy，更优选约2(T约80Gy，最优选，约4(T约60Gy，例如用于治疗星形细胞瘤、胶质母细胞瘤和神经胶质瘤。该剂量在优选实施方式中是分开的，即，在一个时间段(session)内施加约0. I"*约IOGy或约lGy 约5Gy或约lGy 约2Gy，该时间段在约约20周、约2 约10周或约8周内重复数次。该化疗药剂和/或TGF-P系统抑制剂，例如反义寡核苷酸的给予在辐射施加之前、之后或与辐射施加一起执行。一个辐射治疗循环以及数个辐射循环都是可能的，取决于肿瘤尺寸的减小程度。辐射通常利用6tlCo执行。利用中子，质子，负介子或中子俘获的辐射也是适用的。对于本领域技术人员明显的，该剂量进一步取决于肿瘤尺寸、患者体格(build)和所施加的辐射的类型。在具体实施方式
中，该剂量比上述剂量高或低约疒约100倍，还取决于该剂量是分成几次给予的。在另一个实施方式中，包含至少一种化疗药剂和至少一种TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸的药物组合物与用于治疗该疾病的其它程序组合使用。例如，可以按常规用手术和/或辐射对肿瘤进行处理，随后向该患者给予包含化疗药剂和至少一种反义寡核苷酸和/或至少一种TGF-P系统抑制剂的根据本发明的组合物，从而延长微小转移(micrometastases)的休眠期(dormancy)并从而分别稳定和减轻任何残留的肿瘤疾病，即，肿瘤。在优选实施方式中，向可能存在转移病灶(该转移病灶在当时是可临床识别或不可临床识别的)的部位给予包含至少一种化疗药剂和至少一种TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸的药物组合物。特异性植入在转移病灶可能位于的部位(或组织)处的缓释制剂适合于后面的情况。包含至少一种化疗药剂和至少一种TGF-0系统抑制剂如反义寡核苷酸，例如TGF-￠2反义寡核苷酸如SEQ ID No. 30的药物组合物的实施方式是以有效量给予的。一般而言，关于药物组合物、化疗药剂，和TGF-P系统抑制剂的术语“有效量”分别是指，实现期望生物效应所需的或足以实现期望生物效应的量。这尤其取决于递送模式(例如，局部或全身)、给药周期、接受该药物组合物的受验者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食情况等。具体地，该有效量是降低肿瘤疾病的速率或完全抑制肿瘤疾病形成的量。例如，当该受验者荷瘤时，有效量是减轻或消除该肿瘤疾病的量。另外，有效量可以是阻止新肿瘤疾病加重或使新肿瘤疾病减轻的量。该有效量的变化取决于该组合物是以单剂量还是多剂量使用。在本文中给出的剂量是关于成人的剂量。对于本领域技术人员很明显的，如果是儿童、遭受此外的疾病或其它环境的人，则需要调整这些剂量。在一个实施方式中，本文描述的化合物题述剂量典型地在每次给予约0. I ii g 约IOmg的范围内，该剂量取决于该应用，可以每小时、每天、每周或每月和期间的任何其它时间量给予。在又一个实施方式中，该剂量在每次给予约IOyg 约5mg的范围内，或约IOOii g 约Img的范围内，其中1-10次给予间隔数小时、数天或数周。然而在一些实施方式中，可以在甚至比上述典型剂量高或低2 100倍的范围内使用剂量。这些剂量主要适用于成人治疗；在儿童治疗的情况下，必须降低该剂量，如技术人员所知的。化合物作用由例如其IC5tl,半数最大抑制浓度表示，IC50表示50%抑制它的靶所需的抑制剂浓度，即，它测量了抑制一些生物学过程50%需要多少特定物质/分子。根据本发明，该化疗药剂的IC5tl描述了产生50%细胞毒性的化疗药剂浓度。IC5tl描述化合物的效 能，化合物的IC5tl越低，该化合物越有效。在优选实施方式中，该反义寡核苷酸，特别是抗肿瘤反义寡核苷酸如TGF-P I、TGF-P 2或TGF-P 3导致化疗药剂，优选吉西他宾的IC5tl呈
I.5x、2x、2. 5x、5x、5. 5x、6x、6. 5x、7x、7. 5x、8x、8. 5x、9x、9. 5x、10x、15x、20x、25x、30x、35x、40x、45x、50x、55x、60x、65x、70x、75x、80x、85x、90x、95x，或 99x 降低。优选地，与在不存在反义寡核苷酸，特别是TGF-P I、TGF-^ 2和/或TGF-0 3反义寡核苷酸情况下的吉西他宾相比，化疗药剂如吉西他宾或替莫唑胺的IC5tl被反义寡核苷酸如TGF-P I、TGF-^ 2和/或TGF- P 3反义寡核苷酸，和/或TGF- ^系统抑制剂降低1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 99%。化疗药剂的IC5tl降低使得以较低浓度的化疗药剂获得相同的细胞毒性效应，或以相同浓度的化疗药剂获得增大的细胞毒性效应成为可能。在优选实施方式中，TGF-P系统抑制剂以剂量依赖方式降低化疗药剂的IC5tl。令人惊讶地，该化疗药剂既不影响导致该化疗药剂的IC5tl降低的TGF- P系统抑制剂如反义寡核苷酸的靶的表达或活性，也不影响TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸与靶的相互作用。该化疗药剂甚至支持和增大TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸与靶的相互作用。优选的反义寡核苷酸靶是TGF- P I、TGF- P 2和/或TGF- ^ 3。在本发明的一个实施方式中，该至少一种TGF-P系统抑制剂，特别是TGF-3 I、TGF- P 2或TGF- P 3反义寡核苷酸在约I U g/kg/天 约100mg/kg/天或约10 U g/kg/天 约10mg/kg/day或约100 u g/kg/天 约lmg/kg/天的剂量范围内给予。在进一步优选的实施方式中，该药物组合物利用导管直接给予到肿瘤中。该反义寡核苷酸在无菌水溶液中的浓度为约0. I u M/L 约1M/L，更优选约I y M/L 约500 u M/L，甚至更优选约1(T约200 u M/L或约50 u M/L 约150 u M/L。在又一个优选实施方式中，这种溶液利用约 0. I u L/min^ 约 50 u L/min 或约 2 u L/min^ 约 12 u L/min 或约 3 u L/min^ 约10 V- L/min的流量(flow,流速)给予到肿瘤中。在又一个实施方式中，该至少一种化疗药剂选自亚硝基脲的组，更优选BCNU、CCNU和/或ACNU，与至少一种TGF- P系统抑制剂，如反义寡核苷酸，例如TGF- ^ I、TGF- ^ 2或TGF-P3反义寡核苷酸组合。该化疗药剂如吉西他宾或替莫唑胺，例如在约lmg/nT约1000mg/m2剂量范围内，更优选以约50mg/m2 约500mg/m2的剂量，最优选以约150mg/nT200mg/m2的单剂量每6周静脉给予。它可以作为单剂量给予或分成连续两天的日注射液如约 75mg/m2 约 100mg/m2。在又一个治疗肿瘤疾病的实施方式中，该化疗药剂是吉西他宾，它以约lOmg/nT约10g/m2,更优选约IOOmg""约5g/m2,最优选约500mg/m2 约2000mg/m2的剂量与至少一种TGF-^系统抑制剂如反义寡核苷酸，和/或辐射一起给予。吉西他宾优选在反义寡核苷酸给予前或给予后约IOmirT约120min内，更优选约15min 约60min内，最优选约20min 约40min内给予。在最优选实施方式中，吉西他宾与一种或多种反义寡核苷酸同时共给予，其中吉西他宾和该反义寡核苷酸如SEQ ID No. 30分开或组合给予。在优选实施方式中，在约约10天，约5 约8天，最优选在约7天内重复 给予单剂量化疗药剂如吉西他宾。在约约10天内，在约5 约8天内，最优选在约7天内给予约f约8个，更优选约2 约6个，最优选约3 约4个单剂量。在这之后是约2 约60天，更优选约5 约30天，最优选约1(T约20天的无治疗间隔期。可以重复这些循环数次，例如，I 10、2 10、3 10、4 10、5 10、6 10、7 10、8 10，或9或10次。在又一个实施方式中，该至少一种化疗药剂是替莫唑胺，它以约50(T约1200mg/m2的总剂量，在连续约r约28天的时间内，更优选在连续约r约7天的时间内，最优选在连续约5天的时间内给予。因而，如果该总剂量是在约5天的时间内给予的约1000mg/m2,则这段时间的每日剂量为约200mg/m2/天。替莫唑胺每天给予至少一次。优选的给药方案是每天两次、每天三次或每天四次。在约28 约42天，或约28 约35天，或更优选28天之后，从给予替莫唑胺的第一天起，可以开始另一个给予循环。在又一个实施方式中，替莫唑胺可以减少的剂量持续更长的时间给予。例如，替莫唑胺每日给予多于一次，持续多达6周，每日剂量为约50mg/m2/天 约150mg/m2,约50mg/m2/天 约75mg/m2/天,最优选约75mg/m2/天。更优选的,将这些每日剂量大致均勻地分成用于每日两次或多次给予的两个或多个剂量。在又一个实施方式中，长春碱以约0. lmg/m2 约50mg/m2的剂量，更优选以约Img/m2 约10mg/m2的剂量,甚至更优选以约4mg/m2 约8mg/m2的剂量给予。在进一步实施方式中，长春新碱以约0. lmg/m2"10mg/m2的剂量，更优选以约0. 5mg/m2 约5mg/m2的剂量,更优选以约0. 8mg/m2 约2mg/m2的剂量给予，大约每周一次，而神经毒性是剂量限制因素。最常用的，约0. lmg/mL 约lOmg/mL的硫酸长春新碱溶液，以约0. lmg/m2 约50mg/m2的单剂量,更优选以约0. 5mg/m2 约10mg/m2的剂量,甚至更优选以约lmg/m2 约5. Omg/m2的剂量给予。在一个实施方式中，用于治疗胰腺癌、神经母细胞瘤和/或间变性星形细胞瘤的药物组合物包含至少一种反义寡核苷酸，例如TGF-^ I、TGF-P 2和/或TGF-^ 3反义寡核苷酸，优选SEQ ID NO. f 78所示的TGF-P反义寡核苷酸，和化疗药剂的组合，该化疗药剂优先选自由以下药剂构成的组替莫唑胺、ACNU、BCNU、CCNU、长春碱、长春新碱、长春地辛及其活性衍生物、5-氟尿嘧啶、5-氟脱氧尿苷、阿糖胞苷、吉西他宾、脂质体聚乙二醇多柔比星、丙卡巴肼和长春新碱。
在另一个实施方式中，化疗药剂丙卡巴肼、CCNU和长春新碱与在SEQ ID NO. 1-127下的序列表，甚至更优选SEQ ID NO. 22-48下的序列表中识别的反义寡核苷酸，和/或TGF-^系统抑制剂一起给予。这个实施方式中的剂量为，丙卡巴肼约40mg/m2 约80mg/m2p.o.(从开始给予起的约第8至约21天)、CCNU约8(T约120mg/m2p. o.(约在给予的第I天)，长春新碱约I. 2mg/m2 约I. 8mg/m2p. o.(给予的第I天),最大约2mg/m2i. v在约第8天和约第29天(从开始给予起)给予。该反义寡核苷酸和/或TGF-P系统抑制剂在给予化疗药剂之前，或与化疗药剂一起或在化疗药剂之后给予，即，一般而言，本发明药物组合物的化合物的给予时间相同、重叠，或不同。在另一个实施方式中，这个循环在约6 约8周之后重复一次或多次。在进一步优选的实施方式中，该至少一种反义寡核苷酸，甚至更优选TGF-3 I、TGF-￠2或TGF-￠3反义寡核苷酸，最优选在SEQ ID NO. 1_127下的序列表，甚至更优选SEQID NO. 22-48的序列中识别的反义寡核苷酸，和替莫唑胺是该药物组合物的一部分。在这种情况下，用于治疗肿瘤疾病，更优选癌症如胰腺癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤和/或间变性星形细胞瘤的替莫唑胺剂量，在循环的第I、天为约12(T约180mg/m2, p. o.。在更优选的实施方式中，该反义寡核苷酸按约I U g/kg/天 约50mg/kg/天给予。约3、周后重复该循环。在进一步优选的治疗神经胶质瘤的实施方式中，根据上述标准方案进一步施加辐射。在一个实施方式中，该辐射的施加与上述组合的给予一起执行。在其它实施方式中，该辐射在根据本发明的药物组合物给予之前或之后施加。在一个治疗肿瘤疾病，更优选胰腺肿瘤的药物组合物的实施方式中，抑制细胞增殖和/或诱导细胞死亡的至少一种化疗药剂选自下列药剂的组顺钼、卡钼、环磷酰胺、多西他赛、PEG-脂质体多柔比星、依托泊苷(etoposid)、叶酸(folinicc acid)、5_氟尿卩密唳、米托蒽醌、紫杉醇、托泊替康和/或曲奥舒凡(treosulfan)。在更优选的治疗肿瘤疾病的实施方式中，化疗药剂紫杉醇或卡钼是根据本发明的药物组合物的至少一部分。在循环的第I天静脉给予约100mg/m2 约200mg/m2,更优选约175mg/m2的紫杉醇,或卡钼。约20 30天之后重复这个循环(周期，cycle)。在又一个治疗肿瘤疾病如胰腺癌的实施方式中，根据本发明的药物组合物的至少一种化疗药剂是吉西他宾。吉西他宾以约800mg/m2 约1200mg/m2,更优选约1000mg/m2的剂量，在约IOmin"约60min内，更优选在约12min"约20min内静脉给予。这种应用重复约5 约10天。在又一些其它实施方式中，紫杉醇加卡钼、多西他赛加卡钼、卡钼加环磷酰胺、顺钼加曲奥舒凡、依托泊苷、米托蒽醌加叶酸和5-氟尿喃唳、topotect或PEG-脂质体多柔比星是用于治疗胰腺癌的根据本发明的药物组合物中的至少一种化疗药剂。在上述治疗胰腺癌的实施方式的更优选实施方式中，该反义寡核苷酸是在SEQ IDNO. 1-127下的序列表，甚至更优选SEQ ID NO. 22-48的序列中识别的寡核苷酸。在进一步优选的实施方式中，该反义寡核苷酸以1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95，或 IOOnM 剂量给予。在另一个实施方式中，进一步为了给予这些药物组合物，根据上述标准方案运用 放疗。
替换地，对于本发明药物组合物的局部给予，该组合物在优选实施方式中是全身给予的。本发明药物组合物优选包含至少一种化疗药剂如吉西他宾或替莫唑胺，和至少一种TGF- ^系统抑制剂如TGF- ^ 2反义寡核苷酸，例如SEQ IDNo. 30,它们构成该药物组合物的组分。这些组分要么是混合在一起的纯形式，要么与混合在一起的药学可接受载体、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂和/或佐剂合并在一起。在替换实施方式中，该药物组合物的组分是分开的，要么是纯形式，要么与药学可接受载体、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂和/或佐剂合并在一起。在优选实施方式中，该组分的药学可接受载体、润滑剂、稀释剂、赋形齐U、崩解剂和/或佐剂是相同或不同的。本发明药物组合物的“给予”可以通过本领域技术人员已知的任何方式完成。给予途径包括但不局限于，口服、鼻腔内、气管内、眼、肺、阴道、直肠、肠胃外(如肌内、皮内、静脉内、瘤内或皮下或直接注射)、!&库(depo)注射、植入、限时释放模式(time-release mode)、颅内、腹膜内、膀胱内、结膜下、外用(局部用)、透皮，或舌下给予。
在一个治疗形成肿瘤的肿瘤疾病如癌症的药物组合物的实施方式中，至少一种化疗药剂和至少一种TGF-P系统抑制剂如反义寡核苷酸的组合优选通过生物可降解的聚合物植入物或植入式导管递送。术语“药物组合物”是指包含固体和/或液体形式的组分的组合物，其中该组分是纯形式的，和/或与药学可接受载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂和/或佐剂合并
在一起。根据本发明的药学可接受载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂和/或佐剂是任何适合给予受验者的物质，该物质为有机来源或无机来源的、天然或合成来源的，药物组合物的组分与该物质，例如组合从而使给药容易，或从而增大该组分的效能。优选地，载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂和/或佐剂使药物组合物的组分或该药物组合物能够调配成供待治疗受验者口服摄取的片剂、包衣片、泡腾片(evervescent tab let)、颗粒齐Li、含片、粉剂、丸剂、糖衣丸、(微)胶囊、液体、凝胶、糖衆、衆剂(slurry)、悬浮液、乳液等。该药物组合物还包括,涂覆在微型金颗粒(microscopic gold particle)上的颗粒剂、粉剂、片剂、包衣片、(微)胶囊、栓剂、糖浆、乳液、悬浮液、乳膏、滴剂，或延缓释放该组分的制剂，在该制剂中，如上所述通常使用赋形剂和添加剂和/或辅助物如崩解剂、粘合齐U、包衣剂、溶胀剂、润滑剂、调味剂、甜味剂或增溶剂。药物递送的当前方法的综述参见Langer (1990)。在一个实施方式中，口服使用的药物制剂利用固体赋形剂获得，可选地研磨获得混合物，需要时在加入合适的辅助物之后对颗粒混合物进行加工，从而获得片剂或糖衣丸核。合适的赋形剂为，特别是填料如糖类，包括乳糖、鹿糖、甘露醇或山梨醇，纤维素制品如，玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍树胶、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠，和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。在又一个实施方式中，加入崩解剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂，或海藻酸或其盐如海藻酸钠。可选地，也可以在使内部酸条件中和的盐水或缓冲液中调配口服制剂。在又一个实施方式中，糖衣丸核具有合适的包衣。为此，可使用浓的糖溶液，该溶液可选地包含阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇，和/或二氧化钛、漆溶液(lacquer solutions)和合适的有机溶剂或溶剂混合物。在又一个实施方式中，可将染料或色素加入到片剂或糖衣丸包衣中，以便鉴定不同的活性化合物剂量组合或赋予其特征。在另一个实施方式中，可口服使用的药物制剂“vegicap”包括明胶制成的推入配合胶囊，以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨醇制成的密封软胶囊。在一个实施方式中，推入配合胶囊包含与填料如乳糖、粘合剂如淀粉，和/或润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁，和可选的稳定剂混合的活性成分。在另一个软胶囊实施方式中，活性化合物可以溶解于或混悬于合适的液体中，如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。另夕卜，可加入稳定剂。在又一个实施方式中，使用调配用于口服给予的微球体，如本领域技术人员众所周知的。用于口服给予的制剂的剂量应适合于此种给予。在又一个用于颊部给予的实施方式中，该组合物可采用通过常规方法调配的片剂或含片的形式。在又一个通过吸入给予的实施方式中，用于本发明的化合物可以气雾剂喷雾形式方便地递送，该气雾剂喷雾是从加压包装或喷雾器，借助于合适的推进剂(propellant) 如二氟二氯甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳，或其它合适的气体呈递。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供阀门递送计量的量来确定。可以调配用于吸入器或吹入器中的如明胶的胶囊和药筒，其包含该化合物与合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。合适的药物载体为，例如，用于吸入的水溶液或盐水溶液，微胶囊化、螺旋化(encochleated)、容纳于脂质体中的雾状气雾剂。在又一个实施方式中，例如，用于口服、静脉内、颅内、腹膜内、膀胱内、外用、透皮、结膜下、舌下、肠胃外、贮库注射、限时释放模式、鞘内、心室内或瘤内给予的化合物的药学可接受载体包括无菌水溶液，该无菌水溶液也包含缓冲液、稀释剂和其它合适的添加剂如，但不局限于，渗透促进剂、载体化合物和其它药学可接受载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形齐U、崩解剂，和/或佐剂。在又一个全身递送药物组合物或其组分的实施方式中，它们，例如与用于肠胃外注射(例如，快速推注或连续输注)给予的药学载体、填料、润滑齐U、稀释齐U、赋形剂、崩解剂和/或佐剂合并在一起。注射用制剂，例如以单位剂型呈递，例如在添加有防腐剂的安瓿或多剂量容器中呈递。优选地，该药物组合物可以采用在油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液，或乳液形式，并含有调配剂(formulatory agents)如悬浮剂、稳定剂,和/或分散剂。在一个实施方式中，用于肠胃外给予的药学载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂，和/或佐剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。在又一个实施方式中，本发明药物组合物的一种或多种组分的悬浮液可以制备成适合的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒剂包括脂肪油如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射悬浮液可包含增大悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇，或葡聚糖。可选地，该悬浮液还可包含合适的稳定剂或增大该化合物的溶解度从而允许制备高浓缩溶液的试剂。在又一个实施方式中，该化疗药剂和/或TGF-P系统抑制剂，例如反义寡核苷酸是粉末形式，用于在使用前用合适的媒剂如无菌无热原水进行配制，或干结到待划入皮肤的尖物(sharp object)上。在又一个实施方式中，该化合物可以调配成，例如含有常规栓剂基质如可可油或其它甘油酯的直肠或阴道组合物，如栓剂或保留灌肠剂或片剂。在又一个实施方式中，该化合物调配成贮库(depot)制剂。在一个实施方式中，此种长效制剂用合适的聚合或疏水材料(例如作为可接受油中的乳液)或离子交换树脂调配，或调配成微溶衍生物，例如调配成微溶盐。在其它实施方式中，递送系统包括限时释放(time-release)、缓释或持续释放递送系统。此种系统可以避免该化合物的重复给予，为受验者和医生增加便利。可利用许多类型的释放递送系统，它们是本领域技术人员所知的。在替换实施方式中，该递送系统包括聚合物基质系统如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯(copolyoxalate)、聚已酸内酯、聚酰胺酯、聚原酸酯、聚轻基丁酸和聚酐。含有前述聚合物的药物的微胶囊描述在例如美国专利No. 5，075，109中。在另一个实施方式中，该递送系统包括非聚合物系统，该非聚合物系统为，例如脂质，包括固醇如胆固醇、胆固醇酯和脂肪酸或中性脂肪如甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯；水凝胶释放系统；硅橡胶(sylastic)系统；基于肽的系统；蜡涂层；使用常规粘合剂和赋形 剂的压缩片；部分融合的植入物等。具体实例包括，但不局限于，Ca)侵蚀(erosional)系统，其中本发明药剂以在基质(基体，matrix)内的形式被容纳，如美国专利No. 4，452，775、4,675, 189和5，736，152中描述的那些，和(b)扩散系统，其中活性组分以受控速率从聚合物中渗透出来，如美国专利No. 3,854, 480,5, 133，974和5，407，686中描述的。另外，优选使用基于泵的硬件递送系统，其中的一些适合于植入。在进一步的实施方式中，该化疗药剂和/或反义寡核苷酸和/或TGF-P系统抑制剂与GELFOAM ，由缓慢降解的修饰(改性，modified)胶原纤维组成的商业产品一起调配。而且，该药物组合物也包含例如合适的固体或凝胶相载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形齐IJ、崩解剂，和/或佐剂。此种载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂，和/或佐剂的实例包括，但不局限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶，和聚合物如聚乙二醇。优选该化疗药剂和/或反义寡核苷酸和/或TGF- ^系统抑制剂以纯的形式给予，或以药学可接受盐形式给予。该盐必须是药学可接受的，但非药学可接受的盐可以方便地用于制备它的药学可接受盐。此种盐包括，但不局限于，由下列酸制备的那些盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲烷磺酸、甲酸、丙二酸、丁二酸、萘-2-磺酸，和苯磺酸。而且，此种盐可以制备成碱金属或碱土金属盐，如羧酸根的钠、钾或钙盐。在一个实施方式中，合适的缓冲剂包括但不局限于，乙酸和盐(l-2%w/v)、柠檬酸和盐(l-3%w/v)、硼酸和盐(0. 5-2. 5%w/v),以及磷酸和盐(0. 8_2%w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵(0. 003-0. 03%w/v)、氯丁醇(0. 3-0. 9%w/v)>苯甲酸酯类(parabens)(0. 01-0. 25%w/v)和硫柳萊(thimerosal) (0. 004-0. 02%w/v)o在一个实施方式中，用于根据本发明的药物组合物的至少两个组分局部给予(tropical administration,外用给予)的药学可接受载体包括,透皮贴剂、软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规的药学载体、水性基质、粉末基质或油性基质、增稠剂等可能是必须的或期望的。在又一个实施方式中，涂覆的避孕套、手套等是有用的。在又一个实施方式中，该药物组合物包括渗透促进剂以便促进营养递送。渗透促进剂可以归类为属于五大类之一，即，脂肪酸、胆盐、螯合剂、表面活性剂和非表面活性剂(Lee等人，1991，Muranishi 1990)。优选地,包括来自这些大类中一个或多个大类的一种或多种渗透促进剂。用作渗透促进剂的各种脂肪酸及其衍生物包括，例如，油酸、月桂酸、癸酸、肉豆蘧酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、二癸酸盐(酯)、三癸酸盐(酯)、蓖麻醇酸酯(recinleate)、单油酸甘油酯(monoolein)(又称I-单油酰基_rac_甘油)、二月桂精、辛酸、花生四烯酸(arichidonic acid)、I-单癸酸甘油酯、1_十二烷基氮杂环庚_2_酮、酰基肉碱、酰基胆碱、甘油一酯和甘油二酯及其生理可接受盐(即，油酸盐、月桂酸盐、癸酸盐、肉豆蘧酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、亚油酸盐等)(Lee等人，1991, Muranishi 1990, El-Hariri等人，1992)。一些本发明优选的脂肪酸实例为单独使用或以0.5 5%浓度组合使用的癸酸钠和月桂酸钠。胆汁的生理作用包括使脂质和脂溶性维生素易于分散和吸收(Brunton1996)。各种天然胆盐及其合成衍生物用作渗透促进剂。因而，术语“胆盐”包括任何天然存在的胆汁组分及其任何合成衍生物。本发明优选的胆盐是鹅去氧胆酸(⑶CA) (SigmaChemical Company, St. Louis, Mo.), 一般以0. 5 2%的浓度使用。在优选实施方式中，使用 包含一种或多种渗透促进剂的复配制剂(complex formulation)。例如,将胆盐与脂肪酸组合使用从而制得复配制剂。优选的组合包括⑶CA与癸酸钠或月桂酸钠(一般为0. 5飞％)的 组合。在一个实施方式中，另外使用螯合剂，其包括但不局限于，乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、柠檬酸、水杨酸盐(酯)(例如，水杨酸钠、5-甲氧基水杨酸盐(酯)和高香兰酸盐(酯)(homovanillate))、胶原的N-酰基衍生物、月桂醇聚醚_9 (laureth-9)和P _ 二酮(烯胺)的N-氨酰基衍生物(Lee等人，1991 ；Muranishi 1990 ;Buur等人，1990)。螯合剂的额外好处是还充当DNA酶(DNase)抑制剂。在又一个实施方式中，另外使用表面活性剂。表面活性剂包括，例如，十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯-9-十二烷基醚和聚氧乙烯-20-鲸蜡醚(Lee等人，1991)，和全氟化合物的乳液如FC-43 (Takahashi等人，1988)。非表面活性剂包括，例如，不饱和环状脲、1_烷基-和I-烯基氮杂环烷酮衍生物(Lee等人，1991)，和非留体抗炎药剂如双氯芬酸钠、茚甲新(indomethacin)和苯基丁氮酮(Yamashita 等人，1987)。在一个实施方式中，本发明药物组合物另外包含通常在药物组合物中发现的，现有技术确定的使用水平的其它附加组分(ad j unct components )。因而,例如,该组合物可以包含另外的相容性药物活性材料如，止痒剂、收敛剂、局部麻醉剂或消炎药，或可以包含对物理调配本发明组合物的各种剂型有用的另外材料，如染料、调味剂、防腐剂、抗氧化剂、乳池剂(opacifiers)、增稠剂和稳定剂。然而，当添加此种材料时，它们不应不适当地干扰本发明组合物组分的生物活性。实施例本发明以下面实施例进行说明，但本发明不局限于这些实施例。实施例I降低吉西他宾的IC5tl的TGF-P 2反义寡核苷酸(图I)将4000细胞/孔的人胰腺肿瘤细胞系Hup-T3 (德国微生物和细胞培养物保藏中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH),不伦瑞克(Braunschweig)，德国)接种于96孔组织培养板中。该Hup_T3细胞系对吉西他宾没有耐药性。接种后I天，用八种不同吉西他宾浓度，即，5 ii M、2 ii M、800nM、320nM、128nM、51. 2nM、20. 5nM、8. 2nM、3. 3nM 和 OnM 的吉西他宾，分别与 0yM(_)、5y M(A)或 10 UM(V)TGF- 3 2
反义寡核苷酸，例如SEQ ID No. 30组合，共同处理该细胞5h。此后，除去包含吉西他宾和TGF-^ 2反义寡核苷酸的第一处理溶液，并用含有TGF-P 2反义寡核苷酸但不含有吉西他宾的第二处理溶液替代。3天后可选地替换该处理溶液。总共处理7天后，移出细胞上清液，分析TGF-￠2浓度(见实施例4和图4)。根据制造商说明书(Biozol Diagnostca Vertrieb GmbH),采用EZ4U方法分析Hup-T3细胞的增殖/活力，并在用EZ4U溶液温育75min后，利用板读取器(plate reader)〃Fluostar-Optima〃 (BMG LABTECH GmbH)测量 0D。结果表明，当吉西他宾与 TGF-P 2 反义寡核苷酸组合给予时，吉西他宾对细胞增殖的抑制出乎意料地增大。因而，TGF-P 2反义寡核苷酸令人惊讶地以剂量依赖方式降低吉西他宾的IC5tl (图I)。实施例2
吉西他宾对TGF-P 2分泌的影响(图2)在Hup-T3细胞上研究了吉西他宾对TGF- ^ 2表达和分泌的影响。向Hup_T3细胞给予下列浓度的吉西他宾5 ii M、0. 5 ii M、50nM、5nM、0. 5nM、0. 05nM或OnM，并根据实施例I将该细胞温育5h。3天后可选地替换该处理溶液。处理7天后，移出细胞上清液用于TGF-P 2浓度分析。根据制造商说明书，通过标准 TGF-P 2ELISA 试剂盒(R&D Systems, Minneapolis, USA)量化 TGF- ^ 2 分泌(A)。根据制造商说明书(BiozolDiagnostca Vertrieb GmbH),采用 EZ4U 方法分析Hup-T3细胞的增殖/活力(■)，并在用EZ4U溶液温育75min后，利用板读取器"Fluostar-Optima〃 (BMG LABTECH GmbH)测量 0D。TGF-^ 2分泌(A)的降低分别与该细胞的增殖和活力(■)相关，该细胞的增殖和活力在吉西他宾浓度较高时因吉西他宾的细胞毒作用而降低。这由图2中的交叠曲线示出。令人惊讶地，虽然吉西他宾具有细胞毒作用，但没有特别地影响Hup-T3细胞的TGF- ^ 2分泌(A)(见图2)。实施例3TGF- ^ 2反义寡核苷酸对TGF- ^ 2分泌的影响(图3)在进一步的实验中，分别在Hup-T3细胞上研究了 TGF-P2反义寡核苷酸对TGF-^ 2表达和分泌的影响。按照实施例I中所述的，向Hup-T3细胞给予TGF-P 2反义寡核苷酸，例如 SEQ ID No. 30(0 u MU U M,2. 5 u M,5 u MUO u M.20 u M.40 u M.60 u M, ^80 u MTGF-^ 2反义寡核苷酸)。根据实施例I温育细胞，处理7天后，取出细胞上清液，利用R&DSystems 的 TGF- ^ 2ELISA 试剂盒分析 TGF- ^ 2 浓度。如所预期的，TGF-^ 2反义寡核苷酸以剂量依赖方式分别抑制了 TGF-P 2的表达和分泌(见图3)。实施例4吉西他宾对TGF-P 2反义寡核苷酸抑制TGF-P 2分泌的影响(图4)根据实施例I用不同浓度的吉西他宾(2iiM、800nM、320nM、128nM、51. 2nM、20. 5nM、8. 2nM 和 OnM)和 TGF-3 2 反义寡核苷酸(OyM (_)、5yM (A)或 10 y M ( )TGF-￠2反义寡核苷酸)温育Hup-T3细胞，处理7天后，移出细胞上清液，利用R&D Systems的TGF- ^ 2ELISA试剂盒分析TGF- ^ 2浓度。
令人惊讶地，吉西他宾没有不利地影响TGF-P 2反义寡核苷酸与它的TGF-P 2靶的相互作用，即，吉西他宾没有损害TGF-P 2反义寡核苷酸对TGF-P 2分泌的抑制。实施例5TGF-^ 2反义寡核苷酸降低替莫唑胺的IC5tl (图5)将10000细胞/孔的人黑素瘤细胞系MEL-Juso (CLS-Cell LinesService, Eppelheim,德国)接种于48-孔组织培养板中。该MEL-Juso细胞系对替莫唑胺没有耐药性。接种后6小时，用八种不同替莫唑胺浓度，S卩，200 PM、100 PM、50 PM、25 PM、12. 5iiM、6. 25iiM、3. 125 y M，和 0 y M 的替莫唑胺分别与 0 y M(_)、5 y M(A)或 10uM( V)TGF-￠2反义寡核苷酸，例如SEQ ID No. 30组合，共同处理该细胞2天。将物质(替莫唑胺和TGF-￠2反义寡核苷酸)配制成水溶液，在4° C下储存并用于4周。此后，除去包含替莫唑胺和TGF-P 2反义寡核苷酸的第一处理溶液，并用含有上述浓度的TGF-P 2反义寡核苷酸和替莫唑胺的第二处理溶液替代，再(处理)2天。除去含有TGF-P 2反义寡核苷酸和替莫唑胺的处理溶液，将新测试溶液加入到该细胞中，再(处理)3天。 总共处理7天后，移出细胞上清液，分析TGF-P 2浓度。根据制造商说明书(Invitrogen),采用Cyquant方法分析MEL-Juso细胞的增殖/活力，并在用Cyquant溶液(检测试剂、直接核酸染色剂，和直接核酸背景抑制剂)温育60min 后，利用板读取器〃Fluostar-Optima〃 (BMG LABTECH GmbH)测量 0D。结果表明，当替莫唑胺与TGF-P 2反义寡核苷酸组合给予时，替莫唑胺对细胞增殖的抑制出乎意料地增大。因而，TGF-￠2反义寡核苷酸令人惊讶地以剂量依赖方式降低替莫唑胺的IC5tl (图5)。实施例6TGF-^ 2反义寡核苷酸增大替莫唑胺的细胞毒性(图6) 将A-172细胞(约7000细胞/孔)接种于48孔板中，接种后6h，将0 y M、200 u M，或800 ii M替莫唑胺单独(灰色条柱)，或与IOii M TGF-￠2反义寡核苷酸，例如SEQ ID No. 30组合(黑色条柱)，加入该细胞中。温育2d后，替换处理溶液，将细胞再温育3d(总处理时间5d)。此后，从该孔中移出含有来自裂解细胞的乳酸脱氢酶(LDH)的细胞上清液，和由于处理诱导的应力而漂浮在该上清液中的细胞。通过加入例如，来自CytoToxicity DetectionKit Plus (Roche Diagnostics GmbH)的裂解溶液，使该上清液的细胞裂解，并根据例如该试剂盒手册测定LDH水平。替莫唑胺与TGF- ^ 2反义寡核苷酸组合时，释放的LDH量显著增大(图6)。实施例7人转化生长因子TGF-@ U TGF-^ 2和TGF-P 3的反义m_RNA人TGF- @ I 的反义 m-RNA CTGCAGCCTTGACCTCCCAGGATCAAGTGATCCTCCCACCTTAGCCTCCAGAGTAGCTGGGACCACAGGTGTACATTTTTTAAAAGTGTTTTGTAGAGATAGGGTCTCACTATGTTACCCAGGCTGGTCTCAAATGCCTGGATTCAAGTATCCTCCCATCTCTGCCTCCCAAAAGTGCTAGGATTACAGGCGTGAGCACCCCGCCTGGCCTGAACTACTATCTTTTATTGTCTTCTTCACTATCCCCCACTAAAGCAGGTTCCTGGTGGGCAGGAACTCCTTCCCTTAACCTCTCTGGGCTTGTTTCCTCAACCTTTAAAATGGGTGTTATCAGAGTCCCTGCCATCTCAGAGTGTTGCTATGGTGACTGAATGAGTTCATTAATGTAAGGCACTTCAACAGTGCCCAAGGTGCTCAATAAATAGATCTAACTACAGTAGTGTTCCCCACTGGTCCCCTGTGCCTTGATGCCGGGC ccccc^r-cc C < ^cc < Ccc < Ccc ^cccccc < rr Crr Ccc Ce ^ Ccc ^ Crrcc Ce C C C C < < Ccccrrccrcf-cc」
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TGTAGCGCTGGGATTCTTGTCCATGTGTCTAAACAGGTTTTGCTGG人白介素10 (IL-10)的反义m-RNATCACCCTATGGAAACAGCTTAAAAACAGGTGAAAATAATAAATATTGAAAAAAATTATAATATTGGGCTTCTTTCTAAATCGTTCACAGAGAAGCTCAGTAAATAAATAGAAATGGGGGTTGAGGTATCAGAGGTAATAAATATTCTATAAGAGAGGTACAATAAGGTTTCTCAAGGGGCTGGGTCAGCTATCCCAGAGCCCCAGATCCGATTTTGGAGACCTCTAATTTATGTCCTAGAGTCTATAGAGTCGCCACCCTGATGTCTCAGTTTCGTATCTTCATTGTCATGTAGGCTTCTATGTAGTTGATGAAGATGTCAAACTCACTCATGGCTTTGTAGATGCCTTTCTCTTGGAGCTTATTAAAGGCATTCTTCACCTGCTCCACGGCCTTGCTCTTGTTTTCACAGGGAAGAAATCGATGACAGCGCCGTAGCCTCAGCCTGAGGGTCTTCAGGTTCTCCCCCAGGGAGTTCACATGCGCCTTGATGTCTGGGTCTTGGTTCTCAGCTTGGGGCATCACCTCCTTCCAGGTAAAACTGGATCATCTCAGACAAGGCTTGGCAACCCAGGTAACCCTTAAAGTCCTCCAGCAAGGACTCCTTTAACAACAAGTTGTCCAGCTGATCCTTCATTTGAAAGAAAGTCTTCACTCTGCTGAAGGCATCTCGGAGATCTCGAAGCATGTTAGGCAGGTTGCCTGGGAAGTGGGTGCAGCTGTTCTCAGACTGGGTGCCCTGGCCTGGGCTGGCCCTCACCCCAGTCAGGAGGACCAGGCAACAGAGCAGTGCTGAGCTGTGCATGCCTTCTTTTGCAAGTCTGTCTTGTGGTTTGGTTTTGCAAGAGCAACCCCCTGATGTGTAGACCTTCACCTCTCTGTCCCCCTTTTATATTGTAAGCTCAGGGAGGCCTCTTCATTCATTAAAAAGCCACAATCAAGGTTTCCCGGCACAGGATTTTTTCTGCTTAGAGCTCCTCCTTCTCTMCCTCTCTMTAMCTTAGTTTTCMTTTTTGCATCGTMGCAAAMTGATTGGTTGMCATGMCTTCTGCATTTACAGCTATTTTTTAGGATGGGCTAC
CTCTCTTAGAATAATTTTTTAGCTTCTCAATTAAAAAAAGTTGATTTCCTGGGGAGAACAGCTGTTCTGTCCGCAGAGGCCCTCAGCTGTGGGTTCTCATTCGCGTGTTCCTAGGTCACAGTGACGTGGACAAATT
GCCCATTCCAGAATACAATGGGATTGAGAAATAATTGG人前列腺素E2合成酶的反义-mRNAtttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttCCATGAGATGCCTGCCATGACAGGCGCCACAAACCTTTCCTTTATTGCAAACATGTCCCAGTCCCGGGAGGCTTGGGAAGAGTGGGAACCAGGGGAACCCAGGGATGGGATTCCACTGAAAACAAACCGTCCTGCTGTCCTGTCGAGGGCCCCCACCCACAGGATGTAGCCATGGGACAGCCACTGAGGGTCCAGGAAGAGGGGCGGCAGAGCAGGGAGGCAGGGACAGGGAGGGGTCGCCCCAGGGCAGTGGCAGGGCTGGAACTCGTCCCTAACATCCCTGAGCCCCAGCAGGTGCCCTGTGTTAGAAGCGAGAGGGCTGGTGGGGGTGCGTGGACAAGGGGCAGAATGATCCTGCCCCCAACCAGTATCGCCAGGCGCTGGCCCAGTGGCCCCAGGCCCTGGCAGCTGGCGTCTTCCGCTGCCTTCCCTCTGCTCTGCGCGGGGACATTCAGTGCGCTGGGGAGGCCTCGGTGATGGCCCTCTCCACCCGCA
GGTACCAGGGCTGGATGTGCGTGTGCTGCATCAGGTCATCGAATGCATCCAGCCCCTCCATCACACGCAGCACGCCATACACCGCCAAATCAGCGAGATTCGGCTTCTGGCCCCCCATGAAGGGCCGGTCCTTGCCCACAGCAGCCACCCACTTGTCAGCAGCCTCATAGAGGTCCTCGCGCACGTTGTCCTGGAGGCGGTGCCTGCTCTTGAGTCGCTTGCTGATGAGGTACATGGCCGCTGCACCCATGTACTTGGCCACGGCACCCTCCACGGCTCCGAACTTGCCCTCGCGGACAATGTAGTCAAAGGACGCCAGAGCCTCGGTGGGCGTGCGGTACACATTGGGGGAGATCAGGTGCACCAGCCAGTCGTCCGCCCACTGCCGCCACTTCATCTCCTCCGTCCTGGCCTCCTTCCCACCATACACTTGCTGGGCCTCCTTCTCGTTGAGCATGAGCCAGTACTTATTGCCGAACTCGGTCACCTCCTTGCCCTGCTCGTTCACAGCCTTCATGGCTGGGTAGTAGGTGATGATCTCTTCCAGGGGCTGCCCCGACACCAGGTAGGTCTTGAGGGCGCTGATGATGACAGAGGAGTCATTTAGTTGTTGCGAGCTTTCTCCTTCCTGGGCCACCAGGATGGGCACCTTTCTGTAGGAGGAGAACTTGATCTCAGCCCTGCGCACAGGGTTCACCTCCACCACCTGGTAGGGCAGGGCATGGAAGTCGAGGAAGGCTCGGACCTTGCTGCAGAAGGGACACGTCTTGTACTGGTACAGGGTCAGCTGCAGGCGGCTGGACAGGGAGAGCTGCGCGGCTGAGCGCTCTGCGTGGAGGTCCTGGGCGCGCAGGTGCCACCGCGCCGTGTGGTACAGCCCCAGGGCTCCCCCCAGGGCCAGCGCCGCAGCTCCCAGCAGCCGCGGGCTCCCCTTACGAGCTGCAGCCACGGGGCTCGGGCCGCCCGCCGCCCCCGCGAAGCCAGCCCGGCTCTGCGTGGGTAGCAGCGGCTGGGGGCGGCCTCCCAGCCTCCAGGCCAAGGCGCACCCACCAGGCCACAGCGCCCGCACCACCCGCGCAGCCGGGTCCATGTTCGCTCCGCCGGCGCCGCGGGCGGGCGCGCGAAA CGAAGACGCCGAGGCACGCGCGGCGTTTAAAGGGCCAGGACTCTGGCGCCCCGCGGGTTGGCCGGGGTGAGGGCGACGCTAAGGGAACCCTCAGCGCTCTCGGGACTGGGCGTGTGCCCGGCGCCCAAGTTCGAAACGCCCGCC人 VEGF 的反义 m-RNACAGTGTGCTGGCGGCCGCGGTGTGTCTACAGGAATCCCAGAAATAAAACTCTCTAATCTTCCGGGCTCGGTGATTTAGCAGCAAGAAAAATAAAATGGCGAATCCAATTCCAAGAGGGACCGTGCTGGGTCACCCGCCCGGGAATGCTTCCGCCGGAGTCTCGCCCTCCGGACCCAAAGTGCTCTGCGCAGAGTCTCCTCTTCCTTCATTTCAGGTTTCTGGATTAAGGACTGTTCTGTCGATGGTGATGGTGTGGTGGCGGCAGCGTGGTTTCTGTATCGATCGTTCTGTATCAGTCTTTCCTGGTGAGAGATCTGGTTCCCGAAACCCTGAGGG
AGGCTCCTTCCTCCTGCCCGGCTCACCGCCTCGGCTTGTCACATCTGCAAGTACGTTCGTTTAACTCAAGCTGCCTCGCCTTGCAACGCGAGTCTGTGTTTTTGCAGGAACATTTACACGTCTGCGGATCTTGTACAAACAAATGCTTTCTCCGCTCTGAGCAAGGCCCACAGGGATTTTCTTGTCTTGCTCTATCTTTCTTTGGTCTGCATTCACATTTGTTGTGCTGTAGGAAGCTCATCTCTCCTATGTGCTGGCCTTGGTGAGGTTTGATCCGCATAATCTGCATGGTGATGTTGGACTCCTCAGTGGGCACACACTCCAGGCCCTCGTCATTGCAGCAGCCCCCGCATCGCATCAGGGGCACACAGGATGGCTTGAAGATGTACTCGATCTCATCAGGGTACTCCTGGAAGATGTCCACCAGGGTCTCGATTGGATGGCAGTAGCTGCGCTGATAGACATCCATGAA CTTCACCACTTCGTGATGATTCTGCCCTCCTCCTTCTGCCATGGGTGCAGCCTGGGACCACTTGGCATGGTGGAGGTAGAGCAGCAAGGCGAGGCTCCAATGCACCCAAGACAGCAGAAAGTTCATGGTTTCGGAGGCCCGACCGGGGCCGGGCCGGCTCGCGCCGGGCCGCCAGCACACTG实施例8TGF- P 抑制剂抑制TGF-P的小分子GlaxoSmithKline 的 SB-431542T ^ RI 激酶抑制剂(Callahan 等人，2002 ；Laping等人，2002 ；Inman 等人，2002)。Scios, Inc.的 NPC30345T P RI 激酶抑制剂(Dumont & Arteaga 2003)。SD-093T ^ R-I 激酶抑制剂(Subramanian, G.等人，2003)。Lilly, Inc.的 LY364947TP RI 激酶抑制剂(Sawyer 等人，2003)。核心蛋白聚糖(decorin)，与活性TGF-P的各种形式结合的小硫酸软骨素-皮肤素蛋白聚糖(Border等人，1992)。抑制TGF-P的蛋白质内皮糖蛋白(endoglin),TGF-P 结合的 95kDa 糖蛋白(Gougos 等人，1992)。与TGF-P结合的抗体Genzyme/CAT 的 CAT-192 人化 TGF-P I mAB (Benigni 等人，2003)。Genzyme/CAT 的 CAT-152 人化 TGF-0 2mAB (Siriwardena 等人，2002)。Genzyme/CAT 的 ID 11TGF-P I、TGF-P 2、TGF-P 3mAB (Ananth 等人，1999)。Genentech.的 2G7TGF- ^ 1、TGF_ P 2、TGF_ P 3 单克隆 IgG2(Arteaga 等人，1993)。R&D 的抗 TGF- ^ I、TGF- 3 2 或 TGF- ^ 3 抗体参见，例如目录614R&Dsystems, McKinley Place NE, Minneapolis, MN USA 55413家兔抗TGF-0 2LAP : (Schlotzer-Schrehardt, U.等人，2001)。可溶性受体Biogen 的 sT P RII:Fe (RII/Fc hu IgGl 融合蛋白)(Muraoka 等人，2002 ；Rowland-Goldsmith 等人，2001 )。sT^ RII:Fc (Yang, Y. A.等人，2002)。0 聚糖(重组可溶性 T 0 RIII) (Bandyopadhyay 等人，2002)。实施例9TGF- P I、TGF- P 2 和 TGF- ^ 3 的氨基酸序列RXXR :成熟(活性)部分的切割部位(XX可以是任何情况)ASPC :这个基序的C是将两个单体连接成功能二聚体的分子间胱氨酸桥的C
C C C:分子内半胱氨酸(cystein)桥(半胱氨酸结基序)TGF-^ UTGF-^ 2和TGF-P 3的成熟蛋白含有从这个列表末端起的112个氨基酸TGF- 3 IMPPSGLRLLLLLLPLLWLLVLTPGRPAAGLSTCKTIDMELVKRKRIEAIRGQILSKLRUSPPSQGEVPPGPLPEAVLALYNSTRDRVAGESAEPEPEPEADYYAKEVTRVLMVETHNEIYDKFKQSTHSIYMFFNTSELREAVPEPVLLSRAELRLLRLKLKVEQHVELYQKYSNNSWRYLSNRLLAPSDSPEWLSFDVTGVVRQWLSRGGEIEGFRLSAHCSCDSRDNTLQVDINGFTTGRRGDLATIHGMNRPFLLLMATPLERAQHLQSSRHRRALDTNYCFSSTEKNCCVRQLYIDFRKDLGWKWIHEPKGYHANFCLGPCPYIWSLDTQYSKVLALYNQHNPGASA
APCCVPQALEPLPIVYYVGRKPKVEQLSNMIVRSCKCS优选的TGF- ^ I的氨基酸序列I)ALDTNYCFSSTEKNCCVRQL2)YIDFRKDLGffKffIHEPKGYH3)ANFCLGPCPYINSLDTQYSK4)VLALYNQHNPGASAAPCCVP5)QALEPLPIVYYVGRKPKVEQ6)LSNMIVRSCKCS7)TEKNCCVRQLYIDFRKDLGff 8)KNIHEPKGYHANFCLGPCPY9)WSLDTQYSKVLALYNQHNP10)GASAAPCCVPQALEPLPIVYI Dyvgrkpkveqlsnmivrsckcs12)QYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKP13)QYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKPIQYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKP(通过AAPC基序的胞嘧啶(Cytosins)处s_s桥偶联的TGF-^ I氨基酸序列No. 12的二聚体)14)ALDTNYCFSSTEKNCCVRQLYIDFRKDLGWKWIHEPKGYHANFCLGPCPYIWSLDTQYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKPKVEQLSNMIVRSCKCS15)ALDTNYCFSSTEKNCCVRQLYIDFRKDLGW16)KffIH EPKGYHANFCLGPCPYIWSLDTQYSK17)VLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVY18)YVGRKPKVEQLSNMIVRSCKCS19)CVRQLYIDFRKDLGffKffIHEPKGYHANFCL20)GPCPYIWSLDTQYSKVLALYNQH NPGASAA21)PCCVPQALEPLPIVYYVGRKPKVEQLSNMITGF- 3 2MHYCVLSAFLILffl,VTVALSLSTCSTLDMDQFMRKRIEAIRGQILSKLKLTSPPEDYPEPEEVPPEVISIYNSTRDLLQEKASRRAMCERERSDEEYYAKEVYKIDMPPFFPSENAIPPTFYRPYFRIVRFDVSAMEKNASNL
VKAEFRVFRLQNPKARVPEQRIELYQILKSKDLTSPTQRYIDSKVVKTRAEGEWLSFDVTDAVHEWLHHKDRNLGFKISLHCPCCTFVPSNNYIIPNKSEELEARFAGIDGTSTYTSGDQKTIKSTRKKNSGKTPHLLLMLLPSYRLESQQTNRRKRALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS优选的TGF- ^ 2的氨基酸序列I)ALDAAYCFRNVQDNCCLRPL2)YIDFKRDLGNKffIHEPKGYN 3)ANFCAGACPYLffSSDTQHSR4)VLSLYNTINPEASASPCCVSS)QDLEPLTILYYIGKTPKIEQ6)LSNMIVKSCKCS7)VQDNCCLRPLYIDFKRDLGff8)KffIHEPKGYNANFCAGACPY9)LWSSDTQHSRVLSLYNTINP10)EASAS PCCVSQDLEPLTILY11)YIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS12)QHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPK13)QHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPK(通过ASPC基序的胞嘧啶处s-s桥偶联的TGF-^ 2氨基酸序列No. 12的二聚体)
14)ALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGNKWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS15)ALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGff16)KWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSR17)VLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILY18)YIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS19)CLRPLYIDFKRDLGffKffIHEPKGYNANFCA20)GACPYLNSSDTQHSRVLSLYNTINPEASAS21)PCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMITGF- & 3MKMHLQRALVVLALLNFATVSLSLSTCTTLDFGHIKKKRVEAIRGQILSKLRLTSPPEPTVMTHVPYQVLA
LYNSTRELLEEMHGEREEGCTQENTESEYYAKEIHK FDMIQGLAEHNELAVCPKGITSKVFRFNVSSVEKNRTNLFRAEFRVLRVPNPSSKRNEQRIELFQILRPDEHIAKQRYIGGKNLPTRGTAEWLSFDVTDTVRENLLRRESNLGLEISIHCPCHTFQPNGDILENIHEVMEIKFKGVDNEDDHGRGDLGRLKKQKDHHNPHLILMMIPPHRLDNPGQGGQRKKRALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCAGACPYLNSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS优选的TGF- P 3的氨基酸序列I)ALDTNYCFRNLEENCCVRPL
2)YIDFRQDLGffKffVHEPKGYY3)ANFCSGPCPYLRSADTTHST4)VLGLYNTLNPEASASPCCVP
5)QDLEPLTILYYVGRTPKVEQ6)LSNMVVKSCKCS7NLEENCCVRPLYIDFRQDLG8WKWVHEPKGYYANFCSGPCP9)YLRSADTTHSTVLGLYNTLN
10)PEASASPCCVPQDLEPLTILII)YYVGRTPKVEQLSNMVVKSCKCSI2)THSTVLGLYNTLNPEASASPCCVPQDLEPLTILYYVGRTPKI3)THSTVLGLYNTLNPEASASPCCVPQDLEPLTILYYVGRTPKITHSTVLGLYNTLN PEASASPCCVPQDLEPLTILYYVGRTPK(通过ASPC基序的胞嘧啶处s-s桥偶联的TGF-^ 3氨基酸序列No. 12的二聚体)14)ALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS15)ALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGff16)KWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSR17)VLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILY18)YIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS19)CLRPLYIDFKRDLGffKffIHEPKGYNANFCA20)GACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASAS21)PCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMI序列
权利要求
1.包含化疗剂和TGF-P反义寡核苷酸的药物组合物，其中，所述反义寡核苷酸降低所述化疗剂细胞毒性的IC5tl。
2.根据权利要求I所述的药物组合物，其中，所述TGF-P反义寡核苷酸使所述化疗剂的 IC50 降低 5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或 95%。
3.根据权利要求I或2所述的药物组合物，其中，所述化疗剂选自由吉西他宾、5-氟脲嘧啶、替莫唑胺、达卡巴嗪、多西他赛、顺钼、奥沙利钼、他莫昔芬和伊立替康构成的组。
4.根据权利要求I至3中任一项所述的药物组合物，其中，所述反义寡核苷酸是TGF-￠2反义寡核苷酸、TGF-P I反义寡核苷酸、或TGF-P 3反义寡核苷酸。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，所述TGF-P2反义寡核苷酸选自由SEQ IDNO. 22-48构成的组，所述TGF-P I反义寡核苷酸选自由SEQ ID NO. 1-21构成的组，而所述TGF-^ 3反义寡核苷酸选自由SEQ ID NO. 49-78构成的组。
6.根据权利要求I至5中任一项所述的药物组合物，进一步包含药学可接受载体、填料、润滑剂、稀释剂、赋形剂、崩解剂、和/或佐剂。
7.根据权利要求I至6中任一项所述的药物组合物，用于治疗肿瘤疾病。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中，所述肿瘤疾病选自由以下构成的组胰腺癌、黑色素瘤、脑瘤、膀胱癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠直肠癌、胃癌、子宫内膜癌、骨肉瘤、肌肉瘤、血源性肿瘤、白血病、肿瘤转移、血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙目艮、生脓性肉芽瘤、银屑病、星形细胞瘤、听神经瘤、母细胞瘤、尤文氏瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、成血管细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、髓母细胞瘤、白血病、间皮瘤、神经母细胞瘤、神经纤维瘤、非霍奇金淋巴瘤、松果体瘤、视网膜母细胞瘤、肉瘤、精原细胞瘤、沙眼、肾母细胞瘤、胆管癌、膀胱癌、脑瘤、乳腺癌、支气管癌、肾脏癌、宫颈癌、绒膜癌、囊腺癌、胚胎癌、上皮癌、食道癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、胆囊癌、胃癌、头癌、肝癌、肺癌、髓样癌、颈癌、非小细胞支气管/肺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、前列腺癌、小肠癌、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、皮肤癌、小细胞支气管/肺癌、鳞状细胞癌、皮脂腺癌、睾丸癌和子宫癌。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，所述脑瘤是神经胶质瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、间变性少突星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、脑转移瘤、骨髓瘤、或浆细胞瘤。
10.根据权利要求7、8或9中任一项所述的药物组合物，其中，所述药物组合物口服、静脉内、颅内、腹膜内、膀胱内、肠胃外、外用、透皮、结膜下、或舌下给予。
11.根据权利要求7、8、9或10中任一项所述的药物组合物，其中，所述化疗剂和所述反义寡核苷酸的给予时间相同、部分重叠、或不同。
12.用于制备根据权利要求I至7中任一项所述的药物组合物的方法。
全文摘要
包含化疗药剂和TGF-β反义寡核苷酸的药物组合物，其中该反义寡核苷酸分别降低该化疗药剂细胞毒性的敏感性和IC50。优选地，该反义寡核苷酸是TGF-β1、TGF-β2和/或TGF-β3反义寡核苷酸，该化疗药剂优选为吉西他宾、5-氟脲嘧啶、替莫唑胺、达卡巴嗪、多西他赛、顺铂、奥沙利铂、他莫昔芬、或伊立替康。
文档编号A61K31/7088GK102712924SQ201080043680
公开日2012年10月3日 申请日期2010年7月30日 优先权日2009年7月30日
发明者卡尔-赫尔曼·施林根西彭, 塔尼亚·罗特哈马尔, 安内利泽·施奈德尔, 弗兰克·亚申斯基 申请人:安提森斯制药有限公司