专利名称：月季花用于制备抗真菌产品的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是月季花用于制备抗真菌产品的用途。
背景技术：
月季花为蔷薇科蔷薇属植物月季的花，其根、叶也入药。月季花味甘、性温，入肝经，有活血调经、消肿解毒之功效。由于月季花的祛瘀、行气、止痛作用明显，故常被用于治疗月经不调、痛经等病症。未见其用于制备抗真菌产品的报道。
发明内容
本发明提供一种月季花用于制备抗真菌产品的用途。经体外细胞实验证实，其对对耐药真菌和其他真菌的生长有一定的抑制作用。因此月季花具有制备抗真菌产品的前 景，用于不同深部和浅部真菌感染的治疗。发明效果本发明为月季花开辟了新的用途，在临床治病真菌耐药性日趋普遍，耐药程度日趋严重的情况，月季花对耐药真菌的生长有一定的抑制作用，具有良好的临床应用前景。实施方式以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例I :月季花对不同临床真菌的作用材料和方法I.试药月季花的药材原料是蔷薇科植物月季的干燥花。提取过程把粉碎后的药材粉末加入IOOOml圆底烧瓶中，加入70%乙醇水浴回流2h，回流液过滤，放入已称重的烧瓶中，50°C左右减压旋蒸至粘稠浸膏状。在烧瓶中加入蒸馏水，加热使充分溶解(取出少许作为水提液，得到lg/ml的生药浓度)，再加入与蒸馏水等量的无水乙醇，加热充分混匀，合并提取液混匀，得O. 5g/ml的生药浓度，取少许到EP管中做体外实验。试药置于-20°C保存。实验前，将药物取出置于35°C温箱融化，充分混匀，分别进行药效学检验。2.菌株临床株耐药白念珠菌(100、904、953)，近平滑念珠菌(90018)，克柔念珠菌(4996)，热带念珠菌(2718)，均由上海长海医院真菌室提供，分别采自长海医院不同科室临床样本，并经形态学和生化学鉴定。所有实验用菌株均于沙堡葡萄糖琼脂培养基(SDA)划板活化，白念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌等球状菌于30°C培养2周后，分别挑取单克隆再次划板活化，取第二次所得单克隆置SDA斜面，用上述方法培养后于4°C保存备用。3.培养液
RPMI 1640液体培养液RPMI1640 (Gibco BRL) 10g，NaKO3 2. Og,吗啡啉丙磺酸(MOPS)(Sigma) 34. 5g(0. 165M)，加三蒸水 900ml 溶解，IN NaOH 调 pH 至 7. 0(25°C )，三蒸水定容至IOOOml，O. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌，分装后于4°C保存备用。沙堡葡萄糖琼脂固体培养基(SDA)蛋白胨10g，葡萄糖40g，琼脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，调整pH至7.0，以三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121°C，15min)后于4°C保存备用。
YEro 培养液酵母浸膏IOg,蛋白胨20g,葡萄糖20g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，三蒸水定容至1000ml，高压灭菌(121°C，15min)后于4°C保存备用。4.仪器设备Multiskan MK3型酶标检测仪(芬兰Labsystems产品)隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)THZ-82A台式恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)Sff-CT-IF型超净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)5.菌液制备实验前，用接种圈从4°C保存的SDA培养基上挑取白念珠菌、热带念珠菌等球状菌少量，接种至Iml YEPD培养液，于30°C，200rpm振荡培养，活化16h，使真菌处于指数生长期后期。取该菌液至ImlYEro培养液中，用上述方法再次活化，16h后，用血细胞计数板计数，以RPMI 1640培养液调整菌液浓度至I X IO3 5 X 103CFU/ml。6.药敏板制备取无菌96孔板，于每排I号孔加RPMI 1640培养液200 μ I作空白对照；96孔板每排3 12号孔各加RPMI 1640培养液100 μ I ；2号孔分别加RPMI 1640培养液180 μ I和640 μ g/ml抗真菌化合物溶液20 μ 1，充分混匀；第一排为月季花提取物；第二排为质控氟康唑；2 11号孔10级倍比稀释，得到相应浓度，各孔中DMSO含量均低于1% ;12号孔不含药物，作阳性对照；7. MIC8。值判定在30°C恒温箱中，念珠菌培养48h后，用酶标分析仪于630nm测各孔OD值。与阳性对照孔比，以OD值下降80%以上的最低浓度孔中的药物浓度为MIC8tl(真菌生长80%被抑制时的药物浓度)。当药物的MIC8tl值超过测定浓度范围时，按以下方法进行统计=MICm值高于最高浓度64 μ g/ml时,计为“> 64 μ g/ml HC8tl值为最低浓度或在最低浓度以下时，不作区别，均计为“彡O. 125 μ g/ml，，。上述实验均平行操作2到3次，当MIC8tl值能准确重复或只差一个浓度时才被接受，并以较高浓度作为MIC8tl值；当MIC8tl值相差两个浓度以上时，则需重新实验，直到符合要求为止。实验结果见表I表I月季花对不同临床真菌的MIC8tl值(μ g/ml)
权利要求
1.月季花在制备抗真菌产品中的应用。
2.根据权利要求I所述的月季花的应用，其特征在于，所述的月季花的药材原料是蔷薇科植物月季的干燥花。
3.根据权利要求I所述的月季花的应用，其特征在于，所述的月季花是月季花药材水提物或こ醇提取物的ー种。
4.根据权利要求3所述的月季花的应用，其特征在于，所述的こ醇提取是指用70%こ醇提取。
5.根据权利要求I所述的月季花的应用，其特征在于，所述的抗真菌的应用中的真菌包括I)敏感菌株敏感白色念珠菌(Y0109，SC5314)，敏感近平滑念珠菌(90018,22090)；2)耐药菌株耐药白色念珠菌(103，100，904，953，J28)，耐药热带念珠菌(2718)，天然耐药克柔念珠菌(44996，46)。
6.根据权利要求5所述的月季花的应用，其特征在于，所述的抗真菌的应用中的耐药菌株是对氟康唑耐受。
7.根据权利要求5所述的月季花的应用，其特征在于，所述的抗真菌的应用中的敏感菌株是对氟康唑敏感。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，是月季花用于制备抗真菌产品的用途。经体外实验，对耐药真菌和其他真菌的生长有一定的抑制作用。因此月季花具有制备抗真菌产品的用途。
文档编号A61P31/10GK102670777SQ20111005933
公开日2012年9月19日 申请日期2011年3月11日 优先权日2011年3月11日
发明者刘伟, 姜远英, 安毛毛, 曹永兵, 林小红, 林辉, 王耘, 顾文文 申请人:中国人民解放军第二军医大学