专利名称：复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型流感病毒中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种南板蓝根浸膏的应用，具体涉及复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型流感病毒中的应用。
背景技术：
甲型流感病毒根据H和N抗原不同，又分为许多亚型，H可分为15个亚型(Hl H15)，N有9个亚型(附 N9)。其中仅H1N1、H2N2、H3N2主要感染人类，其它许多亚型的自然宿主是多种禽类和动物。目前对于亚洲人群影响较为广泛的是甲型Hmi病毒，以甲型 HlNl流感病毒为病原体的甲型Hmi流感在人群中传播，早期被称为猪流感，与以往或目前的季节性流感病毒不同，该病毒毒株包含有猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片段。人群对甲型Hmi流感病毒普遍易感，并可以人传染人，人感染甲流后的早期症状与普通流感相似，包括发热、咳嗽、喉痛、身体疼痛、头痛、发冷和疲劳等，有些还会出现腹泻或呕吐、肌肉痛或疲倦、眼睛发红等。最明显症状是，体温突然超过39度，肌肉酸痛感明显增强，伴随有眩晕、头疼、腹泻、呕吐等症状或其中部分症状。如果个体身体素质不是很好，加上自身免疫力低的情况，甲型Hmi流感病毒正好是一个重量级的导火线，患者一旦感染， 会直接引发很多并发症，甚至于危及生命。2009年开始，甲型Hmi流感在全球范围内大规模流行。虽然在2010年8月，世卫组织宣布甲型Hmi流感大流行期已经结束。但是对于怎样预防和和抵抗这一病毒的研究仍在继续，而且到目前为止，对于甲型流感的治疗，均是采用奥司他韦(oseltamivir)，即达菲；研究表明达菲是一种神经氨酸酶抑制剂，对A(HlNl) 病毒可能有抑制作用，剂量75mg/d，疗程5天，儿童慎用。由于禽流感在世界范围的扩散， 全球掀起一股抢购达菲的风潮，罗氏也因为不肯开放奥司他韦的专利权、限制达菲销售，使得奥司他韦的价格居高不下，另外奥司他韦存在诸多的不良反应如消化道的不适，包括恶心、呕吐、腹泻、腹痛等，其次是呼吸系统的不良反应，包括支气管炎、咳嗽等，此外还有中枢神经系统的不良反应，如眩晕、头痛、失眠、疲劳等。因此对于抗甲型Hmi流感病毒的研究具有非常重要的意义。板蓝根分为北板蓝根和南板蓝根，北板蓝根来源为十字花科植物菘蓝(Isatis tinctoria L.)和草大青(I. indigotica Fort.)的根；南板蓝根为爵床科植物马蓝 (Baphicacanthus cusia (Nees) Brem.)的根茎及根。板蓝根具有清热解毒、凉血消肿、利咽之功效，已经被广泛的制作成冲剂等中成药，在民间用于治疗感冒，病毒性感染以及传染病流行期间的预防，是一种常用而廉价的非处方药，已有充分的证据表明南板蓝根及其复方药物可以预防和治疗由病毒引起的呼吸道感染。而南板蓝根是否具有抗甲型流感病毒的作用，至今还没有相关的研究报道。
发明内容
本发明的目的在于涉及复方南板蓝根颗粒浸膏的新作用，主要是复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型流感病毒中的应用。—种复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型流感病毒中的应用。本发明复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型流感病毒中的应用，包括南板蓝根浸膏在甲3型(H3N2)流感病毒感染MDCK (狗肾传代细胞)模型中的抗病毒实验。所述抗病毒实验中采用磷酸奥司他韦为阳性对照。所述的MDCK细胞，从中国医学科学院基础医学研究所细胞中心购入。本发明所述的复方南板蓝根颗粒浸膏及磷酸奥司他韦由广东奇星药业有限公司提供。其中本复方南板蓝根颗粒浸膏由南板蓝根、紫花地丁、蒲公英三味草药组成，三味药各300克，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至200ml 稠膏状物，得到复方南板蓝根颗粒浸膏；如再在浓缩液中加入适量蔗糖、糊精辅料，即可制成1000板南根颗粒。本发明复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型流感病毒中的应用，还包括复方南板蓝根颗粒浸膏在甲型流感病毒鼠肺适应株FMl (H1N1的鼠肺适应株)感染小鼠模型中的病毒干预试验。所述甲型流感病毒鼠肺适应株FM1，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供，测定LD5tl (半数致死量)后，分装，-80°C保存。本发明所述的复方南板蓝根颗粒浸膏由广东奇星药业有限公司提供，所述的磷酸奥司他韦胶囊由瑞士巴塞尔豪夫迈 罗氏有限公司生产，批号B1162。本发明的复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型流感病毒中的作用，通过复方南板蓝根颗粒浸膏在甲3型流感病毒感染MDCK细胞模型中的抗病毒试验，结果表明复方南板蓝根颗粒浸膏对甲3型流感病毒有抑制作用，半数有效浓度(EC5tl)为3. 8mg/ml，治疗指数(TI) 为3.3。通过复方南板蓝根颗粒浸膏在甲型流感病毒鼠肺适应株FMKHmi的鼠肺适应株) 感染小鼠模型中的病毒干预试验，结果显示复方南板蓝根颗粒浸膏对甲型流感病毒感染小鼠肺指数具有降低作用(P <0.01)；同时，具有延长甲型流感小鼠的存活时间的作用。治疗方法复方南板蓝根颗粒浸膏每1毫升中添加辅剂制成5g的板蓝根颗粒成药，其中所用的辅剂为蔗糖和糊精，按每袋IOg包装，服用时按正常的剂量开水冲服，一次半袋 1袋(含蔗糖)，一日3 4次。下面结合具体实施方式
对本发明作进一步详细说明。
具体实施例方式实施例1
复方南板蓝根颗粒浸膏在甲3型流感病毒感染MDCK细胞模型中的抗病毒实验包括以下步骤
(a)选择实验材料
细胞:MDCK细胞，中国医学科学院基础医学研究所细胞中心购入，本室传代； 病毒甲3型流感病毒，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供，本室传代冻存；
4药物复方南板兰根颗粒浸膏，由广东奇星药业有限公司提供；磷酸奥司他韦，瑞士巴塞尔豪夫迈·罗氏有限公司生产，批号B1162 ；
试剂DMEM(美国GiBCO公司)细胞培养液，96孔细胞培养板(Costar)；
(b)体外实验
药物对细胞半数毒性浓度(CC5tl)测定在进行上述抗病毒实验之前，测定药物对试验用细胞的毒性浓度界限，采用Reed-Muench法，求出药样对细胞的50%细胞毒性浓度(CC5tl)， 以无毒浓度用于抗病毒试验；
药物抗甲3型流感病毒半数有效浓度(EC5tl)测定向96孔细胞板加入100 μ 1生长旺盛的MDCK细胞悬液，使每孔中含有IO4个细胞，置细胞板于37°C 5% CO2培养箱中培养， 待长成单层后，将100个TCID5tl的病毒液ΙΟΟμΙ加入除正常细胞对照外的各孔中，置试验细胞板于37°C 5% CO2培养箱中，培养2小时后，将病毒液弃去，再向细胞板各孔中加入不同稀释度的药物溶液(除正常细胞对照和病毒感染对照)，并设正常细胞对照、病毒感染细胞对照及磷酸奥司他韦阳性药对照，置细胞板于37°C 5% CO2培养箱中，培养72小时，观察细胞病变(CPE)；
(c)细胞病变(CPE)的判定
在光学显微镜下观察，无CPE，记作“_”;25%以下的细胞出现CPE，记作“ + ”;25% 50%的细胞出现CPE,记作“++” ;50% 75%的细胞出现CPE,记作“+++” ;75% 100%的细胞出现CPE，记作“++++”；
(d)结果计算
根据下述公式进行结果计算
Reed-Muench法计算CC5tl的公式
权利要求
1. 一种复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型Hmi流感病毒中的应用。
全文摘要
本发明具体涉及复方南板蓝根颗粒浸膏在抗甲型流感病毒中的作用。本发明复方南板蓝根颗粒浸膏作用于甲3型流感病毒感染MDCK细胞模型以及甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠模型，复方南板蓝根颗粒浸膏在甲3型流感病毒感染MDCK细胞模型中的病毒干预试验结果表明复方南板蓝根颗粒浸膏对甲3型流感病毒有抑制作用，半数有效浓度为3.8mg/ml，治疗指数为3.3。通过复方南板蓝根颗粒浸膏在甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠模型中的病毒干预试验结果显示复方南板蓝根颗粒浸膏对甲型流感病毒感染小鼠肺指数具有降低作用(P＜0.01)；同时，具有延长甲型流感小鼠的存活时间的作用。
文档编号A61K36/86GK102258636SQ20111015502
公开日2011年11月30日 申请日期2011年6月10日 优先权日2011年6月10日
发明者丘鸰原, 刘军, 李光亮, 胡燕, 郑朝晖 申请人:广州奇星药业有限公司