风湿定滴丸提取物和风湿定滴丸及其生产方法

专利名称：风湿定滴丸提取物和风湿定滴丸及其生产方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是一种风湿定滴丸提取物和风湿定滴丸及其生产方法。
背景技术：
风湿病是一种严重危害人类健康的常见病、多发病，被列为临床疑难杂症，该病被称为“活着的癌症”。其特征是慢性的炎性关节病变，并伴有全身多个系统受累。未经系统治疗的风湿病可反复迁延多年，最终导致关节畸形、功能丧失，给患者造成很大痛苦。数据显示，全球风湿病患者约4亿，是医学领域中最为庞大的一类疾患。据我国调查，我国各类风湿发病率达到沈.7%，国内市场药品需求每年超过300亿。目前临床上治疗风湿、类风湿性关节炎的药物主要包括留体(如地塞米松、氢化可的松等)和非留体(如双氯芬酸、塞来昔布等)两类抗炎药，以及改善症状的药物。虽然可供使用的抗炎药物很多，但均存在着较严重的副作用。留体类抗炎药有产生激素依赖性、免疫抑制及影响全身代谢的副作用。非甾体类抗炎药由于可阻断花生四烯酸形成前列腺素，故对肾及胃肠粘膜有损伤作用。特异的C0X-2抑制剂曾一度被认为克服了上述缺点，但后续研究发现C0X-2诱导表达具有胃粘膜保护作用，C0X-2抑制剂会加重已有的胃肠粘膜损伤。更为严重的是，美国Merck公司在临床观察中发现了 C0X-2抑制剂罗非昔布(万络)在心血管方面的安全性问题，并已召回该药物。因此，在治疗风湿、类风湿性关节炎的临床治疗方面，开发疗效好、毒性低、避免上述副作用的新型复方抗炎、镇痛药物势在必行。风湿定滴丸处方来自卫生部药品标准中药成方制剂第十二册“风湿定片”(标准编号WS3-B-2^7-97)，由八角枫、白芷、徐长卿和甘草四味中药组成，临床用于活血通络，除痹止痛，用于风湿性关节炎，类风湿关节炎，颈肋神经痛，坐骨神经痛等，临床疗效确切。但是，原制剂存在很多缺点①其生产工艺欠合理。白芷及部分徐长卿以粉末入药，有效成分难以溶出，生物利用度低；其余二味药也只是简单加水合提，造成有效成分提取不充分和有效成分大量流失。②制剂稳定性差。原制剂把徐长卿的挥发油丹皮酚只是简单地喷洒在颗粒上，随着放置时间的延长，丹皮酚挥发较为严重，造成制剂中丹皮酚的含量差异很大。③ 日服用量较大。原制剂一次口服4片，患者的顺应性差。④处方中含八角枫毒性药材，作为治疗风湿性疾病的中药复方，长期用药存在临床安全隐患。⑤质量标准落后。原剂型质量标准只收载了薄层的定性鉴别，缺乏有效的定量控制方法，难以对生产、贮藏过程中产品的质量状况进行有效监控。致使风湿定片未被广大患者所接受。在制剂方面，由于制备技术等原因，大多数药物的口服制剂，服用后均存在着溶散时限长、溶出度低、吸收较差、肝肠首过效应和生物利用度较低等问题，从而影响药效的发挥，也直接影响着治疗效果。另外，常规的口服剂型，如片剂、胶囊等，在制备过程中由于有制粒的工艺，因此会产生较大的粉尘污染，一定程度上会对工作人员的身体造成危害，同时也会给环境造成一定污染。再者，常规口服制剂的生产工艺复杂，生产成本较高，从而使患者的用药成本也随之提高，不利于提高广大患者的就医能力，也不利于提高社会的总体健康水平。本发明遵循原方功能主治，采用现代中药研究的技术手段，对原方进行系统深入的研究，研制出现代中药风湿定滴丸。它的优势在于明确了有效成分，提高了有效成分的纯度和利用度，增强了疗效，减少了服用剂量；去掉了毒性成分，降低了毒副作用；建立了多个成分的高效液相测定方法，增强了质量控制手段；采用了包合技术，增强挥发成分的稳定性，便于放置和储存；利用固体分散技术，建立了滴丸新剂型，缩短起效时间，提高了生物利用度。综上所述，使本发明所涉及的风湿定滴丸具有三效(速效、高效、长效)、三小(服用剂量小、毒性小、副作用小)、五方便(生产方便、贮存方便、运输方便、携带方便、使用方便)的优点，符合现代中药理论的基本要求。

发明内容
本发明的目的是克服了上述现有技术之不足，给人们提供一种风湿定滴丸提取物和风湿定滴丸及其生产方法。所得风湿定提取物含有水杨苷、丹皮酚、欧前胡素、甘草苷纯度和含量都较高，该提取物的生产方法易操作。所得风湿定滴丸具有活血通络，祛风除湿， 清肿止痛之功效，用于治疗关节肿胀、屈伸不利、麻木僵硬、肌肉酸痛及风湿性与类风湿性关节炎，效果显著，该风湿定滴丸的生产方法易操作。本发明特征在于本发明的风湿定滴丸提取物，由以下原料制成，其原料重量百分比为八角枫80% 至90%，徐长卿7%至11%，白芷1%至6%，甘草0.5%至3%。风湿定滴丸提取物按下述步骤得到 (1)取所需量的八角枫，粉碎，过筛，放入提取罐中，加15至40倍量的水或30%至 50%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至每Iml浓缩液含0. 8至1. 2g八角枫药材；取4BV至8BV上述浓缩液，过AB_8、DlOl、HPD100, HPD400、 HPD600、HPD^6中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 6至1 12，吸附速度为1至4BV/h，吸附时间为4至8小时后，以1至4BV/h流速进行洗脱，先用2至5BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用3至6BV 30%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角枫提取物；(2)取所需量的徐长卿，粉碎，过孔径0. 300至0. 600mm筛后，放入挥发油提取罐中，加20至40倍量的水，每kg药材加50至80g的NaCL，浸润1至2小时后，水蒸气蒸馏提取1至3小时，收集馏出物，于4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，在过滤的滤液中再加入 0. lg/ml氯化钠重蒸馏，重蒸收集馏液直至澄清为止，4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，合并两次结晶物，在35至40°C干燥即得每千克药材提取质量为10至15g丹皮酚结晶；称取1 份量丹皮酚结晶，用8至12份量的乙醇溶解后，加入25至45°C 6至10份量β -环糊精的饱和溶液中，超声0. 5至2小时至包合物形成，冷藏M小时析晶，抽滤得包合物，用少量蒸馏水洗涤，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即为徐长卿提取物；(3)取所需量的白芷和甘草，粉碎，过筛，混勻，放入提取罐中，加10至20倍量的 60%至90%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至每 Iml浓缩液含0. 7至1. Og白芷和甘草混合药材；取3BV至7BV上述浓缩液，过D101、AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为 1 7至1 12，吸附速度为1至4BV/h，吸附时间为6至10小时后，以1至4BV/h流速进行洗脱，先用3至6BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用2至5BV 30%乙醇、3至6BV 50%乙醇分别洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物；(4)将上述八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有 1. 536% 至 5. 132% 水杨苷、10. 372% M 16. 665% 丹皮酚、0. 044% 至 0. 159% 欧前胡素和 0. 101%至0. 910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。风湿定滴丸提取物的生产方法，其特征在于按下述步骤进行(1)取所需量的八角枫，粉碎，过筛，放入提取罐中，加15至40倍量的水或30%至 50%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至每Iml浓缩液含0. 8至1. 2g八角枫药材；取4BV至8BV上述浓缩液，过AB_8、DlOl、HPD100, HPD400、 HPD600、HPD^6中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 6至1 12，吸附速度为1至4BV/h，吸附时间为4至8小时后，以1至4BV/h流速进行洗脱，先用2至5BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用3至6BV 30%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角枫提取物；(2)取所需量的徐长卿，粉碎，过孔径0. 300至0. 600mm筛后，放入挥发油提取罐中，加20至40倍量的水，每kg药材加50至80g的NaCL，浸润1至2小时后，水蒸气蒸馏提取1至3小时，收集馏出物，于4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，在过滤的滤液中再加入
0.lg/ml氯化钠重蒸馏，重蒸收集馏液直至澄清为止，4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，合并两次结晶物，在35至40°C干燥即得每千克药材提取质量为10至15g丹皮酚结晶；称取1 份量丹皮酚结晶，用8至12份量的乙醇溶解后，加入25至45°C 6至10份量β -环糊精的饱和溶液中，超声0. 5至2小时至包合物形成，冷藏M小时析晶，抽滤得包合物，用少量蒸馏水洗涤，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即为徐长卿提取物；(3)取所需量的白芷和甘草，粉碎，过筛，混勻，放入提取罐中，加10至20倍量的 60%至90%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至每 Iml浓缩液含0. 7至1. Og白芷和甘草混合药材；取3BV至7BV上述浓缩液，过D101、AB-8、 HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为 1 7至1 12，吸附速度为1至4BV/h，吸附时间为6至10小时后，以1至4BV/h流速进行洗脱，先用3至6BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用2至5BV 30%乙醇、3至6BV 50%乙醇分别洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物；(4)将上述八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有
1.536% 至 5. 132% 水杨苷、10. 372% M 16. 665% 丹皮酚、0. 044% 至 0. 159% 欧前胡素和 0. 101%至0. 910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。本发明的风湿定滴丸，其特征在于按原料重量比组成，风湿定滴丸提取物与药用基质聚乙二醇的重量比为1 1.5至1 4.5。风湿定滴丸的生产方法，其特征在于按下述步骤得到按上述重量比称取药用基质聚乙二醇，将其放于75°C至100°C水预锅上完全熔融后，加入风湿定滴丸提取物，搅拌混勻后，倒入滴丸机料槽中，搅拌，使药液温度达65至 90°C，保温25至35分钟后，在8至12厘米的滴距下，以35滴/分钟至55滴/分钟的速度滴入冷却液中，待滴丸完全冷凝收缩成型后，取出，用甩油机去除滴丸表面冷却液，即得。所述冷却液为二甲基硅油或液体石蜡或甲基硅油或植物油。本发明的效果本发明遵循原方功能主治，采用现代中药研究的技术手段，对原方进行系统深入的研究，研制出现代中药风湿定滴丸。由于它具有较高纯度和含量的水杨苷、丹皮酚、欧前胡素、甘草苷，因此它的优势在于明确了有效成分，提高了有效成分的纯度和利用度，增强了疗效，减少了服用剂量；去掉了毒性成分，降低了毒副作用；建立了多个成分的高效液相测定方法，增强了质量控制手段；采用了包合技术，增强挥发成分的稳定性，便于放置和储存；利用固体分散技术，建立了滴丸新剂型，缩短起效时间，提高了生物利用度；综上所述，使本发明所涉及的风湿定滴丸具有三效(速效、高效、长效)、三小(服用剂量小、毒性小、副作用小)、五方便(生产方便、贮存方便、运输方便、携带方便、使用方便)的优点，符合现代中药理论的基本要求。本发明具有活血通络，祛风除湿，清肿止痛作用，适用于治疗关节肿胀、屈伸不利、麻木僵硬、肌肉酸痛及风湿性与类风湿性关节炎。


图1为水杨苷对照品测定的色谱图。图2为水杨苷样品测定的色谱图。图3为丹皮酚对照品测定的色谱图。图4为丹皮酚样品测定的色谱图。图5为波长为300nm处欧前胡素和甘草苷混合对照品测定的色谱图。图6为波长为276nm处欧前胡素和甘草苷混合对照品测定的色谱图。图7为波长为300nm处欧前胡素和甘草苷混合样品测定的色谱图。图8为波长为276nm处欧前胡素和甘草苷混合样品测定的色谱图。
具体实施例方式实施例1 该风湿定滴丸提取物其组分按原料重量百分比组成为八角枫80%，徐长卿 11%,白芷6%，甘草3%。实施例2 该风湿定滴丸提取物其组分按原料重量百分比组成为八角枫85%，徐长卿9%， 白芷4%，甘草2%。实施例3 该风湿定滴丸提取物其组分按原料重量百分比组成为八角枫90%，徐长卿7%， 白芷2.5%，甘草0.5%。实施例4:该风湿定滴丸提取物其组分按原料重量百分比组成为八角枫90%，徐长卿8%， 白芷1%，甘草1%。
上述实施例1至4可通过以下生产方法得到实施例5 取所需量的八角枫，粉碎，过筛，放入提取罐中，加20倍量的水回流提取3次，每次 1小时，合并提取液，过滤、减压浓缩至每Iml浓缩液含0. Sg八角枫药材。取5BV上述浓缩液,过48-8、0101、朋0100、朋0400、朋0600、朋0拟6中的一种或一种以上的大孔吸附树脂， 树脂径高比为1 8，吸附速度为!3BV/h，吸附时间为5小时后，以2BV/h流速进行洗脱，先用 3BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用4BV 30%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至20°C 相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角枫提取物。取所需量的徐长卿，粉碎，过孔径0. 300mm筛后，放入挥发油提取罐中，加25倍量的水，每kg药材加65g的NaCL， 浸润1小时后，水蒸气蒸馏提取2小时，收集馏出物，于4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物， 在滤液中再加入0. lg/ml氯化钠重蒸馏，重蒸收集馏液直至澄清为止，4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，合并两次结晶物，在35至40°C干燥得每千克药材提取质量为10至15g丹皮酚结晶；称取1份量丹皮酚结晶，用10份量的乙醇溶解后，加入30°C 8份量β-环糊精的饱和溶液中，超声1小时至包合物形成，冷藏M小时析晶，抽滤得包合物，用少量蒸馏水洗涤，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即为徐长卿提取物。取所需量的白芷和甘草， 粉碎，过筛，混勻，放入提取罐中，加14倍量的75%的乙醇回流提取2次，每次1. 5小时，合并提取液，过滤、减压浓缩至每Iml浓缩液含1. Og混合药材。取4BV上述浓缩液，过D101、 AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 10，吸附速度为2BV/h，吸附时间为6小时后，以2BV/h流速进行洗脱，先用4BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用3BV 30%乙醇、5BV 50%乙醇分别洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物。将上述八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1. 536%至5. 132% 水杨苷、10. 372%至16. 665%丹皮酚、0. 044%至0. 159%欧前胡素和0. 101%至0. 910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。将该风湿定滴丸提取物用甲醇适量稀释后测定，其中水杨苷、丹皮酚、欧前胡素和甘草苷的转移率分别为78^^87^^80%和65%。实施例6 取所需量的八角枫，粉碎，过筛，放入提取罐中，加30倍量的30%的乙醇回流提取 2次，每次2小时，合并提取液，过滤、减压浓缩至每Iml浓缩液含Ig八角枫药材。取6BV上述浓缩液，过AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD600、HPD^6中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 6，吸附速度为lBV/h，吸附时间为6小时后，以lBV/h流速进行洗脱，先用4BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用5BV 30%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角枫提取物。取所需量的徐长卿，粉碎，过孔径0. 400mm筛后，放入挥发油提取罐中，加20倍量的水，每kg药材加55g 的NaCL，浸润2小时后，水蒸气蒸馏提取3小时，收集馏出物，于4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，在滤液中再加入0. lg/ml氯化钠重蒸馏，重蒸收集馏液直至澄清为止，4°C冷藏M 小时，过滤，得结晶物，合并两次结晶物，在35至40°C干燥即得每千克药材提取质量为10至 15g丹皮酚结晶；称取1份量丹皮酚结晶，用11份量的乙醇溶解后，加入35°C 9份量β-环糊精的饱和溶液中，超声1. 5小时至包合物形成，冷藏M小时析晶，抽滤得包合物，用少量蒸馏水洗涤，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即为徐长卿提取物。取所需量的白芷和甘草，粉碎，过筛，混勻，放入提取罐中，加16倍量的80%的乙醇回流提取3次，每次1 小时，合并提取液，过滤、减压浓缩至每Iml浓缩液含0. Sg混合药材。取5BV上述浓缩液， 过D101、AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 8，吸附速度为lBV/h，吸附时间为7小时后，以3BV/h流速进行洗脱，先用 5BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用5BV 30%乙醇、4BV 50%乙醇分别洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物。将上述八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1.536% 至5. 132%水杨苷、10. 372%至16. 665%丹皮酚、0. 044%至0. 159%欧前胡素和0. 101%至 0. 910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。将该风湿定滴丸提取物用甲醇适量稀释后测定，其中水杨苷、丹皮酚、欧前胡素和甘草苷的转移率分别为74^^89^^77%和69%。实施例7 取所需量的八角枫，粉碎，过筛，放入提取罐中，加40倍量的50%的乙醇回流提取 3次，每次3小时，合并提取液，过滤、减压浓缩至每Iml浓缩液含1. 2g八角枫药材。取8BV 上述浓缩液，过AB-8、DlOl、HPD100, HPD400、HPD600、HPD826中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 11，吸附速度为4BV/h，吸附时间为8小时后，以4BV/h流速进行洗脱，先用5BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用6BV 30%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角枫提取物。取所需量的徐长卿，粉碎，过孔径0. 500mm筛后，放入挥发油提取罐中，加25倍量的水，每kg药材加80g的NaCL，浸润2小时后，水蒸气蒸馏提取3小时，收集馏出物，于4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，在滤液中再加入0. lg/ml氯化钠重蒸馏，重蒸收集馏液直至澄清为止，4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，合并两次结晶物，在35至40°C干燥即得每千克药材提取质量为 10至15g丹皮酚结晶；称取1份量丹皮酚结晶，用12份量的乙醇溶解后，加入40°C 10份量 β -环糊精的饱和溶液中，超声0. 5小时至包合物形成，冷藏M小时析晶，抽滤得包合物，用少量蒸馏水洗涤，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即为徐长卿提取物。取所需量的白芷和甘草，粉碎，过筛，混勻，放入提取罐中，加15倍量的85%的乙醇回流提取3次，每次2. 5小时，合并提取液，过滤、减压浓缩至每Iml浓缩液含0. 7g混合药材。取7BV上述浓缩液,过D101、AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 12，吸附速度为4BV/h，吸附时间为10小时后，以2BV/h流速进行洗脱，先用3BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用2BV 30%乙醇、3BV 50%乙醇分别洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1.05至1.20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物。将将上述八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1. 536%至5. 132%水杨苷、10. 372%至16. 665%丹皮酚、0. 044%至0. 159%欧前胡素和 0. 101%至0.910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。将该风湿定滴丸提取物用甲醇适量稀释后测定，其中水杨苷、丹皮酚、欧前胡素和甘草苷的转移率分别为80^^85^^75%和75%。实施例8 取所需量的八角枫，粉碎，过筛，放入提取罐中，加15倍量的水回流提取3次，每次 1小时，合并提取液，过滤、减压浓缩至每Iml浓缩液含0. 9g八角枫药材。取6. 5BV上述浓缩液,过AB-8、DlOl、HPD100, HPD400、HPD600、HPD826中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 8，吸附速度为lBV/h，吸附时间为6小时后，以lBV/h流速进行洗脱，先用3BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用5BV 30%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至 20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角枫提取物。取所需量的徐长卿，粉碎，过孔径0. 600mm筛后，放入挥发油提取罐中，加35倍量的水，每kg药材加75g的 NaCL,浸润2小时后，水蒸气蒸馏提取2小时，收集馏出物，于4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，在滤液中再加入0. lg/ml氯化钠重蒸馏，重蒸收集馏液直至澄清为止，4°C冷藏M小时， 过滤，得结晶物，合并两次结晶物，在35至40°C干燥即得每千克药材提取质量为10至15g 丹皮酚结晶；称取1份量丹皮酚结晶，用8份量的乙醇溶解后，加入25°C 6份量β-环糊精的饱和溶液中，超声2小时至包合物形成，冷藏M小时析晶，抽滤得包合物，用少量蒸馏水洗涤，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即为徐长卿提取物。取所需量的白芷和甘草，粉碎，过筛，混勻，放入提取罐中，加20倍量的60%的乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤、减压浓缩至每Iml浓缩液含0. 9g混合药材。取3BV上述浓缩液，过D101、 AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1 7，吸附速度为4BV/h，吸附时间为7小时后，以2BV/h流速进行洗脱，先用5BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用4BV 30%乙醇、4BV 50%乙醇分别洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物。将上述八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1. 536%至5. 132% 水杨苷、10. 372%至16. 665%丹皮酚、0. 044%至0. 159%欧前胡素和0. 101%至0. 910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。将该风湿定滴丸提取物用甲醇适量稀释后测定，其中水杨苷、丹皮酚、欧前胡素和甘草苷的转移率分别为85^^80^^82%和80%。对上述所得风湿定滴丸提取物中水杨苷、丹皮酚、欧前胡素和甘草苷的检测分析方法如下。实验药物水杨苷对照品(购置美国sigma公司)，丹皮酚、欧前胡素和甘草苷对照品(均购于中国药品生物制品检定所)I.水杨苷的测定色谱条件与系统适应性试验采用Shim-pack vp-ODS C18 (150_Χ 4. 6謹，5 μ m)， 柱温为25°C;以乙腈-水(7 93)为流动相，流速为l.OmL/min;检测波长为沈9nm。理论塔板数以水杨苷计算不低于4000。对照品溶液精密称取水杨苷对照品适量，加甲醇溶解并定容，制成ImL含75 μ g 的溶液，即得。供试品溶液精密称取风湿定滴丸提取物0. 2g，置IOmL量瓶中，甲醇稀释至刻度， 摇勻，溶解，过0. 45 μ m滤膜，即得。样品含量测定分别精密吸取对照品与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。II.丹皮酚的测定色谱条件与系统适应性试验采用Shim-pack vp-ODS C18(150mmX4. 6mm, 5 μ m), 柱温为25°C ；以甲醇-水G5 55)为流动相，流速为1. OmL/min ；检测波长为274nm。理论塔板数以水杨苷计算不低于3000。对照品溶液精密称取丹皮酚对照品适量，加无水乙醇溶解并定容，制成ImL含 25 μ g的溶液，即得。
供试品溶液精密称取风湿定滴丸提取物0. 2g，置25mL量瓶中，用无水乙醇稀释 至刻度，摇勻，超声 20min (250ff,50kHz,45°C )后冷藏 12h，离心(12000r/min、3min)，精密吸
取上清液，即得。样品含量測定分別精密吸取对照品与供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测 定，即得。III.欧前胡素和甘草苷的同时测定色谱条件与系统适应性试验采用Shim-pack vp-ODS C18 (250mmX4. 6mm, 4. 6 u m)，柱温35°C，检测波长为双波长276nm(检测甘草苷)、300nm(检测欧前胡素)，流 速0. 6ml/min，梯度洗脱，程序如下梯度洗脱3min 甲醇水=45 556min 甲醇水=55 458min 甲醇水=65 35理论塔板数以欧前胡素和甘草苷分别计算不低于2500、3000。对照品溶液精密称取欧前胡素和甘草苷对照品适量，加甲醇溶解并定容，制成 ImL含200ii g、180ii g的溶液，即得。供试品溶液精密称取风湿定滴丸提取物0. 2g，置IOmL量瓶中，甲醇稀释至刻度， 摇勻，溶解，过0. 45 y m滤膜，即得。样品含量測定分別精密吸取对照品与供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测 定，即得。結果，风湿定滴丸提取物中水杨苷占总浸膏量的1.536% 5. 132%、丹皮酚浸 膏量的10. 372% 16. 665%、欧前胡素浸膏量的0. 044% 0. 159%、甘草苷浸膏量的 0. 101% 0. 910%。实施例9 该风湿定滴丸及其生产方法如下风湿定滴丸提取物IOg药用基质PEG4000，40g化料温度70°C油浴温度上限90°C下限85°C底盘温度上限90°C下限85°C 制冷温度上限15°C下限10°C冷却剂ニ甲基硅油滴距8cm ；滴速35士3滴/min具体生产方法称取要用基质PEG4000量为40g，于70°C水浴锅上完全熔融后，カロ 入风湿定滴丸提取物10g，搅拌混勻后，倒入滴丸机装料槽中，搅拌、保温25分钟后，在8cm 的滴距下，以35滴/min的速度滴入ニ甲基硅油冷却液中，待滴丸完全收缩冷凝成型后，取 出，用甩油机除去滴丸表面冷却液，即得。实施例10 该风湿定滴丸及其生产方法如下风湿定滴丸提取物IOg药用基质PEG4000，30g化料温度75°C油浴温度上限85°C下限80°C底盘温度上限85°C下限80°C 制冷温度上限15°C下限10°C冷却剂液体石蜡滴距10cm ；滴速45士3滴/min具体生产方法称取要用基质PEG4000量为30g，于75°C水浴锅上完全熔融后，カロ入风湿定滴丸提取物10g，搅拌混勻后，倒入滴丸机装料槽中，搅拌、保温30分钟后，在IOcm 的滴距下，以45滴/min的速度滴入二甲基硅油冷却液中，待滴丸完全收缩冷凝成型后，取 出，用甩油机除去滴丸表面冷却液，即得。实施例11 该风湿定滴丸及其生产方法如下风湿定滴丸提取物10g药用基质PEG4000，20g化料温度80°C油浴温度上限70°C下限65°C底盘温度上限70°C下限65°C 制冷温度上限15°C下限10°C冷却剂植物油滴距12cm ；滴速55士3滴/min具体生产方法称取要用基质PEG4000量为20g，于80°C水浴锅上完全熔融后，力口 入风湿定滴丸提取物10g，搅拌混勻后，倒入滴丸机装料槽中，搅拌、保温25分钟后，在12cm 的滴距下，以55滴/min的速度滴入二甲基硅油冷却液中，待滴丸完全收缩冷凝成型后，取 出，用甩油机除去滴丸表面冷却液，即得。实施例12 该风湿定滴丸及其生产方法如下风湿定滴丸提取物10g药用基质PEG4000，25g化料温度85°C油浴温度上限75°C下限70°C底盘温度上限75°C下限70°C 制冷温度上限10°C下限5°C冷却剂甲基硅油滴距11cm;滴速50士3滴/min具体生产方法称取要用基质PEG4000量为25g，于85°C水浴锅上完全熔融后，力口 入风湿定滴丸提取物10g，搅拌混勻后，倒入滴丸机装料槽中，搅拌、保温30分钟后，在Ilcm 的滴距下，以50滴/min的速度滴入二甲基硅油冷却液中，待滴丸完全收缩冷凝成型后，取 出，用甩油机除去滴丸表面冷却液，即得。实施例13 该风湿定滴丸及其生产方法如下风湿定滴丸提取物10g药用基质PEG4000，35g化料温度90°C油浴温度上限80°C下限75°C底盘温度上限80°C下限75°C 制冷温度上限5°C下限0°C冷却剂二甲基硅油滴距9cm ；滴速55士3滴/min具体生产方法称取要用基质PEG4000量为35g，于90°C水浴锅上完全熔融后，力口 入风湿定滴丸提取物10g，搅拌混勻后，倒入滴丸机装料槽中，搅拌、保温35分钟后，在9cm 的滴距下，以55滴/min的速度滴入二甲基硅油冷却液中，待滴丸完全收缩冷凝成型后，取 出，用甩油机除去滴丸表面冷却液，即得。上述风湿定滴丸经药效学试验，其在抗炎、镇痛方面的作用结果如下(一)抗炎作用1.1对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响NIH种小鼠50只，随机分组，每组10只，正常 对照组、阿司匹林组、风湿定滴丸低剂量组、中剂量组、高剂量组，除正常对照组外，各组均 0. 2ml/10g,灌胃给药3d，正常对照组灌予等量容积蒸馏水，末次给药Ih后，将二甲苯涂于 小鼠右耳前后两面，50 u 1/只，2h后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，计算肿胀度(以两耳质量之差为肿胀度指标)，结果进行统计学处理(如表1)。实验结果表明，风湿定高剂量组和阿司匹林组动物的肿胀度与正常对照组比较，差异有统计学意义(P < 0. 05)。1. 2对大鼠棉球肉芽肿的影响取雄性大鼠60只，随机分组，每组12只，分别为正常对照组、地塞米松组、风湿定滴丸低剂量组、中剂量组、高剂量组。试验时，乌来糖深度麻醉， 无菌操作，将两个高温高压消毒的20mg脱脂棉球分别植入大鼠两侧腋窝皮下，棉球形状应和植人部位一样。术后连续给药7d,正常对照组灌予等量容积蒸馏水。第8天脱白处死大鼠，取出棉球，置60%烤箱烤至恒重，减去棉球原质量，即为肉芽肿质量，肉芽肿质量以g表示，比较各组肉芽肿质量(如表2)。实验结果表明，风湿定滴丸各剂量组和地塞米松组动物在抑制棉球肉芽肿胀与正常对照组比较，具有显著性差异(P < 0. 05)。提示，风湿定滴丸对慢性炎症有显著的抑制作用，具有明显抗炎作用。(二)镇痛作用2. 1对热刺激致痛的影响(热板法)NIH小鼠，雌性，使用智能热板仪重复测定小鼠正常痛阈值两次，选取基础痛阈在5 30s之间的小鼠，取后两次痛阈平均值作为该鼠给药前的基础痛阈值。将动物随机分为正常对照组，阿司匹林组，风湿定滴丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。每组按o.ani/iog，灌胃给药，正常对照组给蒸馏水。于药后 30、60、120min分别测小鼠痛阈值计算痛阈提高百分率，比较组间差异。如60s仍无反应，将小鼠取出，以免烫伤，其痛阈值以60s计算。结果用t检验进行统计学处理(如表3)。结果表明，与正常对照组比较，风湿定滴丸各剂量组和阿司匹林组给药后30min，痛阈提高百分率差异无统计学意义(P >0.05)；药后60min，中剂量组与阿司匹林组痛阈提高百分率具有显著性差异(P < 0. 05)；药后120min，风湿定滴丸各剂量组和阿司匹林组的痛阈提高百分率与正常对照组比较，具有显著性差异(P < 0. 05)。2.2对化学刺激致痛的影响(甲醛致痛)NIH小鼠，雌雄各半，SPF级，随机分为正常对照组，阿司匹林组，风湿定滴丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只，各组按 0. aiil/10g，连续灌胃给药3d，l次/d，正常对照组灌予等容积蒸馏水。末次给药lh，各组小鼠左后足跆皮下注射2. 5%甲醛生理盐水溶液0. 05ml/只，立即计时，分别记录给药后5min 和30min内小鼠舔左后足累积时间，比较各组差异(如表4)。结果表明，与正常对照组比较，风湿定滴丸高剂量组可明显减少给药后5min内舔足累计时间(P < 0. 05)；阿司匹林组也具有显著性差异(P < 0. 01)。各组对给药后30min内舔足累计时间均无显著性差异(P > 0. 05)。2. 3对电刺激致痛的影响(大鼠尾电刺激法)SD大鼠，雌雄各半，随机分为正常对照组，阿司匹林组，滴丸低剂量组、中剂量组、高剂量组。除正常对照组外，各组动物按 lml/100g给药，连续灌胃给药5d，1次/d，正常对照组灌予等容积蒸馏水。末次给药Ih后， 将动物的尾巴放在电极上，使用生物机能实验系统，采用连续连续电刺激模块，程控方式， 0.05mA/s的速度增加电流。以动物的嘶叫为标准断开电流，记录当时的电流强度(mA)(如表5)。结果表明，风湿定滴丸高剂量组和阿司匹林组动物在电刺激实验中忍受的电流强度与正常对照组比较，具有显著性差异(P < 0. 05)。2. 4对机械致痛的影响(大鼠尾尖部压痛法)SD大鼠，雌雄各半，随机分为正常对照组，阿司匹林组，独一味滴丸低剂量组、中剂量组、高剂量组。除正常对照组外，各组动物按lml/100g给药，连续灌胃给药5d，l次/d，末次给药Ih后，将动物的尾尖部放在压片上， 接通电流，压片上的压块不断移动，逐渐增加压片的压强。以动物的嘶叫为标准断开电流， 记录当时的压块的移动距离(cm)(如表6)。结果表明，风湿定滴丸高剂量组和阿司匹林组在压尾致痛实验中忍受压强的程度与正常对照组比较，具有显著性差异(P < 0. 05)。药效学试验结果表明，本发明风湿定滴丸具有明显抗炎作用(二甲苯致炎法和棉球肉芽肿法)和镇痛作用(热板法、甲醛致痛、大鼠尾电刺激法和大鼠尾尖部压痛法)，并呈现量效关系方式，本试验为风湿定滴丸用于临床抗炎、镇痛提供了重要的药效学依据。上述风湿定滴丸经毒理学研究，其结果如下急性毒理学实验单次小鼠灌胃(ig)风湿定滴丸，剂量约为临床用药剂量的700 倍，连续观察15天，小鼠活动未见明显异常，也无动物死亡。长期毒性试验风湿定滴丸高中低三个剂量，约为临床剂量的20、60、180倍，连续灌胃(ig)给药小鼠12周，无明显毒性反应，也未见迟发性毒性反应。上述风湿定滴丸经临床研究，其结果如下风湿定滴丸具有活血通络，祛风除湿，清肿止痛作用，用于治疗关节肿胀、屈伸不利、麻木僵硬、肌肉酸痛及风湿性与类风湿性关节炎。经300例临床试验研究，显效率为 90. 8%,总有效率为99. 5%0本发明工艺生产的风湿定滴丸，组方科学，配伍严谨，经药效学、毒理学及临床研究，表明该药具有较高的临床疗效，未发现明显的不良反应，安全稳定，质量可控，工艺先进，检测手段科学。表1风湿定滴丸对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响G 土 s， g)
权利要求
1.一种风湿定滴丸提取物，其特征在于由以下原料制成，其原料重量百分比为八角枫 80%至90%,徐长卿7%至11%,白芷1%至6%,甘草0. 5%至3%。
2.根据权利要求1所述的风湿定滴丸提取物，其特征在于该风湿定滴丸提取物按下述步骤得到(1)取所需量的八角枫，粉碎，过筛，放入提取罐中，加15至40倍量的水或30%至50% 的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至每Iml浓缩液含0.8 至 1. 2g 八角枫药材；取 4BV 至 8BV 上述浓缩液，过 AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD600、 HPD826中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1:6至1:12，吸附速度为1至 4BV/h,吸附时间为4至8小时后，以1至4BV/h流速进行洗脱，先用2至5BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用3至6BV 30%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1.05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角枫提取物；(2)取所需量的徐长卿，粉碎，过孔径0.300至0. 600mm筛后，放入挥发油提取罐中，加 20至40倍量的水，每kg药材加50至80g的NaCL，浸润1至2小时后，水蒸气蒸馏提取1至 3小时，收集馏出物，于4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，在过滤的滤液中再加入0. lg/ml 氯化钠重蒸馏，重蒸收集馏液直至澄清为止，4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，合并两次结晶物，在35至40°C干燥即得每千克药材提取质量为10至15g丹皮酚结晶；称取1份量丹皮酚结晶，用8至12份量的乙醇溶解后，加入25至45°C 6至10份量β-环糊精的饱和溶液中，超声0. 5至2小时至包合物形成，冷藏M小时析晶，抽滤得包合物，用少量蒸馏水洗涤，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即为徐长卿提取物；(3)取所需量的白芷和甘草，粉碎，过筛，混勻，放入提取罐中，加10至20倍量的60%至 90%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至每Iml浓缩液含0.7至l.Og白芷和甘草混合药材；取3BV至7BV上述浓缩液，过D101、AB_8、HPD100A、 HPD400、HPD600、HPD750中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1:7至1:12， 吸附速度为1至4BV/h，吸附时间为6至10小时后，以1至4BV/h流速进行洗脱，先用3至 6BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用2至5BV 30%乙醇、3至6BV 50%乙醇分别洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物；(4)将上述八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有 1. 536% 至 5. 132% 水杨苷、10. 372% 至 16. 665% 丹皮酚、0. 044% 至 0. 159% 欧前胡素和 0. 101% 至0. 910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。
3.—种风湿定滴丸提取物的生产方法，其特征在于按下述步骤进行(1)取所需量的八角枫，粉碎，过筛，放入提取罐中，加15至40倍量的水或30%至50% 的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至每Iml浓缩液含0.8 至 1. 2g 八角枫药材；取 4BV 至 8BV 上述浓缩液，过 AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD600、 HPD826中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1:6至1:12，吸附速度为1至 4BV/h,吸附时间为4至8小时后，以1至4BV/h流速进行洗脱，先用2至5BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用3至6BV 30%的乙醇洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1.05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角枫提取物；(2)取所需量的徐长卿，粉碎，过孔径0.300至0. 600mm筛后，放入挥发油提取罐中，加20至40倍量的水，每kg药材加50至80g的NaCL，浸润1至2小时后，水蒸气蒸馏提取1至 3小时，收集馏出物，于4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，在过滤的滤液中再加入0. lg/ml 氯化钠重蒸馏，重蒸收集馏液直至澄清为止，4°C冷藏M小时，过滤，得结晶物，合并两次结晶物，在35至40°C干燥即得每千克药材提取质量为10至15g丹皮酚结晶；称取1份量丹皮酚结晶，用8至12份量的乙醇溶解后，加入25至45°C 6至10份量β -环糊精的饱和溶液中，超声0. 5至2小时至包合物形成，冷藏24小时析晶，抽滤得包合物，用少量蒸馏水洗涤，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即为徐长卿提取物；(3)取所需量的白芷和甘草，粉碎，过筛，混勻，放入提取罐中，加10至20倍量的60%至 90%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小时，合并提取液，过滤，减压浓缩至每Iml浓缩液含0.7至l.Og白芷和甘草混合药材；取3BV至7BV上述浓缩液，过D101、AB_8、HPD100A、 HPD400、HPD600、HPD750中的一种或一种以上的大孔吸附树脂，树脂径高比为1:7至1:12， 吸附速度为1至4BV/h，吸附时间为6至10小时后，以1至4BV/h流速进行洗脱，先用3至 6BV的水洗柱除去水溶性杂质，再用2至5BV 30%乙醇、3至6BV 50%乙醇分别洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至20°C相对密度为1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物；(4)将上述八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有 1. 536% 至 5. 132% 水杨苷、10. 372% 至 16. 665%丹皮酚、0. 044% 至 0. 159% 欧前胡素和 0. 101% 至0. 910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。
4.一种根据权利要求1或2或3所述风湿定滴丸提取物为原料之一的风湿定滴丸，其特征在于按原料重量比组成，风湿定滴丸提取物与药用基质聚乙二醇的重量比为1:1. 5至 1:4. 5。
5.一种根据权利要求4所述风湿定滴丸的生产方法，其特征在于按下述步骤得到按上述重量比称取药用基质聚乙二醇，将其放于75°C至100°C水预锅上完全熔融后，加入风湿定滴丸提取物，搅拌混勻后，倒入滴丸机料槽中，搅拌，使药液温度达65至90°C，保温25 至35分钟后，在8至12厘米的滴距下，以35滴/分钟至55滴/分钟的速度滴入冷却液中， 待滴丸完全冷凝收缩成型后，取出，用甩油机去除滴丸表面冷却液，即得。
6.一种根据权利要求5所述风湿定滴丸的生产方法，其特征在于所述冷却液为二甲基硅油或液体石蜡或甲基硅油或植物油。
全文摘要
本发明涉及一种风湿定滴丸提取物和风湿定滴丸及其生产方法，其特征在于风湿定滴丸提取物由以下原料制成，其原料重量百分比为八角枫80%至90%，徐长卿7%至11%，白芷1%至6%，甘草0.5%至3%，由八角枫提取物、徐长卿提取物和白芷和甘草提取物混合均匀，即得含有1.536%至5.132%水杨苷、10.372%至16.665%丹皮酚、0.044%至0.159%欧前胡素和0.101%至0.910%甘草苷的风湿定滴丸提取物。按风湿定滴丸提取物与药用基质聚乙二醇的重量比为1:1.5至1:4.5生产成风湿定滴丸。经药效学试验结果表明，本发明风湿定滴丸具有活血通络，祛风除湿，清肿止痛之功效，用于治疗关节肿胀、屈伸不利、麻木僵硬、肌肉酸痛及风湿性与类风湿性关节炎，效果显著，具有速效、高效、长效，服用剂量小、毒性小、副作用小，生产方便、贮存方便、运输方便、携带方便、使用方便的优点。
文档编号A61K36/484GK102293816SQ201110250010
公开日2011年12月28日 申请日期2011年8月26日 优先权日2011年8月26日
发明者卓馨, 曹稳根, 段红, 翟科峰, 高贵珍 申请人:宿州学院