专利名称：不含防腐剂疫苗的制作工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种不含防腐剂疫苗的制作工艺。
背景技术：
疫苗的接种多为群体性排队轮流进行，时常有一拨人群接种完毕，等待下一拨人群接种的空档间隙，当较大规格分装的疫苗从开封到接种完毕，会有一段接触空气的停留时间，以及疫苗产品在生产后的储存运输过程容易接触到细菌污染，因此，便存在对疫苗的防腐要求，很多疫苗产品在成品制备过程中加入防腐剂硫柳汞以抑制细菌生长，但是使用硫柳汞会对人体造成安全隐患，人体接种后会产生强烈的局部疼痛感，有文献指出高含量的汞在关键的发育期是一种神经毒剂，并且研究表明含有硫柳汞的疫苗会使新生儿体内的汞含量增高(参见《生物制品快讯》，2000年第3期，摘自Vaccine Weekly, 2000, May 24， PlO);还有文献指出大剂量硫柳汞可引起神经和肾脏毒性，EPA (美国环境保护管理局)和 WHO (世界卫生组织)分别作出关于汞的安全水平规定为0. 7 μ g/ kg体重/周和3. 3 μ g/kg 体重/周，据统计，在美国，婴儿出生14周接种3剂百日破疫苗(相当于含75 μ g 二乙汞)、 乙肝疫苗(相当于含37. 5 μ g 二乙汞)、Hib (B型嗜血杆菌)疫苗(相当于含75 μ g 二乙汞)， 二乙汞总含量高达187. 5yg，超过了各机构界定的高限(参见《国外医学，预防、诊断、治疗用生物制品分册》，2000，23 (3)，ppl05-107，译自 Wkly Epidem Rec 2000 ；75 (2):12-16), 1999年国际疫苗顾问委员会组织的有关硫柳汞的会议认为婴儿缺乏去除汞的能力，2002 年第 3 期第 U8-130 页，译自 Wkly Epidem Rec 2002 ；77 (47) :389_394)。目前，常用的疫苗大多含有防腐剂，对人体伤害较大，在制备过程中容易造成细菌污染，疫苗成品在其有效期内储运和保存过程不能确保无菌，疫苗安全性较低，采用多人次用剂量规格分装，存储和使用过程不方便，接种过程安全隐患较多，容易引起交叉感染等不良症状。
发明内容
本发明的目的即在于克服现有技术的不足，提供一种采用严格无菌技术，使疫苗成品能在其有效期内保持无菌状态，确保疫苗安全，解决了传统疫苗制品含防腐剂的问题， 适用于多种细菌类毒素，适用范围较广，确保每一人次使用一剂疫苗，确保使用过程安全、 卫生的不含防腐剂疫苗的制作工艺。本发明的目的是通过以下技术方案来实现不含防腐剂疫苗的制作工艺，它包括以下步骤
(1)精制采用板框式压滤法去除菌体，收集滤液，将收集到的滤液用分子量为观 32KD的超滤系统进行浓缩，浓缩完成后加入硫酸铵进行盐析，盐析后离心收集沉淀，待沉淀溶解后进行超滤脱盐，得到精制类毒素；
(2)脱毒按精制类毒素溶液的0.1 0. 3%加入甲醛溶液，在36 40°C下脱毒30 50天；(3)脱毒检查脱毒完成后，对每瓶精制类毒素进行取样，选取体重为300 400g的豚鼠至少2只，每只皮下注射400 600 Lf，将每瓶精制类毒素脱毒样品用0. 8 1. 0%无菌氯化钠溶液稀释至90 IlOLf/ml，每只皮下注射4 6ml，于注射后第5 9天、第12 16天、第19 23天进行观察，动物无不良症状，体重较注射前无减轻，且健存动物所用的类毒素即为合格，体重减轻者应予增加注射量进行复试判断，将发生不良症状动物所用的类毒素继续脱毒；
(4)除菌过滤将脱毒检查合格的原液进行除菌过滤，制得不含防腐剂疫苗原液；
(5)配制按以下组分及重量进行配制不含防腐剂疫苗原液7 9Lf/L，吸附剂 1. 0 3· Og/L, Na2HPO4O. 05 0. 07g/L, KH2PO4O. 005 0. 015g/L, NaCl 7 9g/L，配制完成后制得不含防腐剂疫苗半成品；
(6)分装将不含防腐剂疫苗半成品按每一次人用剂量规格分装，于2 8°C遮光保存。所述的不含防腐剂疫苗包括细菌性类毒素疫苗；所述的细菌性类毒素疫苗至少包括破伤风疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗；所述的吸附剂为Al (OH) 3。本发明的有益效果是本发明提供一种不含防腐剂疫苗的制作工艺，采用独特的无菌生产设备及工艺和制剂配方，具有解决了传统疫苗制品含防腐剂的问题，在疫苗制备全过程无菌，疫苗成品在其有效期内储运和保存过程无菌，提高疫苗安全性，采用每一次人用剂量规格进行分装，存储和使用方便，确保每一人次使用一剂，避免了多人次使用同一剂时等待过程中的污染，确保使用过程卫生、安全，适用于多种细菌类毒素，适用范围较广等优点。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的描述，但本发明的保护范围不局限于以下所述。实施例1
不含防腐剂疫苗的制作工艺，它包括以下步骤
(1)精制采用板框式压滤法去除菌体，收集滤液，将收集到的滤液用分子量为^KD的超滤系统进行浓缩，浓缩完成后加入硫酸铵进行盐析，盐析后离心收集沉淀，待沉淀溶解后进行超滤脱盐，得到精制类毒素；
(2)脱毒按精制类毒素溶液的0.1%加入甲醛溶液，在36°C下脱毒30天；
(3)脱毒检查脱毒完成后，对每瓶精制类毒素进行取样，选取体重为400g的豚鼠至少2只，每只皮下注射600Lf，将每瓶精制类毒素脱毒样品用1. 0%无菌氯化钠溶液稀释至 90Lf/ml，每只皮下注射6. 67ml，于注射后第9天、第16天、第23天进行观察，动物无不良症状，体重较注射前无减轻，且健存动物所用的类毒素即为合格，体重减轻者应予增加注射量进行复试判断，将发生不良症状动物所用的类毒素继续脱毒；
(4)除菌过滤将脱毒检查合格的原液进行除菌过滤，制得不含防腐剂疫苗原液；
(5)配制按以下组分及重量进行配制不含防腐剂疫苗原液7Lf/ml，Al(OH)3 1. Og/L, Na2HPO4O. 07g/L, KH2PO4O. 005g/L, NaCl 9g/L，配制完成后制得不含防腐剂疫苗半成品；
(6)分装将不含防腐剂疫苗半成品按每一次人用剂量规格分装，于8°C遮光保存。所述的不含防腐剂疫苗包括细菌性类毒素疫苗；所述的细菌性类毒素疫苗至少包括破伤风疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗。实施例2:
不含防腐剂疫苗的制作工艺，它包括以下步骤
(1)精制采用板框式压滤法去除菌体，收集滤液，将收集到的滤液用分子量为32KD的超滤系统进行浓缩，浓缩完成后加入硫酸铵进行盐析，盐析后离心收集沉淀，待沉淀溶解后进行超滤脱盐，得到精制类毒素；
(2)脱毒按精制类毒素溶液的0.3%加入甲醛溶液，在40°C下脱毒50天；
(3)脱毒检查脱毒完成后，对每瓶精制类毒素进行取样，选取体重为300g的豚鼠至少2只，每只皮下注射400Lf，将每瓶精制类毒素脱毒样品用0. 8%无菌氯化钠溶液稀释至 110Lf/ml，每只皮下注射3. 6細1，于注射后第5天、第12天、第19天进行观察，动物无不良症状，体重较注射前无减轻，且健存动物所用的类毒素即为合格，体重减轻者应予增加注射量进行复试判断，将发生不良症状动物所用的类毒素继续脱毒；
(4)除菌过滤将脱毒检查合格的原液进行除菌过滤，制得不含防腐剂疫苗原液；
(5)配制按以下组分及重量进行配制不含防腐剂疫苗原液9Lf/ml，Al(OH)3 3. Og/L, Na2HPO4O. 05g/L, KH2PO4 0. 015g/L, NaCl 7g/L，配制完成后制得不含防腐剂疫苗半成品；
(6)分装将不含防腐剂疫苗半成品按每一次人用剂量规格分装，于2°C遮光保存。所述的不含防腐剂疫苗包括细菌性类毒素疫苗；所述的细菌性类毒素疫苗至少包括破伤风疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗。实施例3:
不含防腐剂疫苗的制作工艺，它包括以下步骤
(1)精制采用板框式压滤法去除菌体，收集滤液，将收集到的滤液用分子量为30KD的超滤系统进行浓缩，浓缩完成后加入硫酸铵进行盐析，盐析后离心收集沉淀，待沉淀溶解后进行超滤脱盐，得到精制类毒素；
(2)脱毒按精制类毒素溶液的0.2%加入甲醛溶液，在38°C下脱毒40天；
(3)脱毒检查脱毒完成后，对每瓶精制类毒素进行取样，选取体重为350g的豚鼠至少2只，每只皮下注射500Lf，将每瓶精制类毒素脱毒样品用0. 9%无菌氯化钠溶液稀释至 100Lf/ml，每只皮下注射5ml，于注射后第7天、第14天、第21天进行观察，动物无不良症状，体重较注射前无减轻，且健存动物所用的类毒素即为合格，体重减轻者应予增加注射量进行复试判断，将发生不良症状动物所用的类毒素继续脱毒；
(4)除菌过滤将脱毒检查合格的原液进行除菌过滤，制得不含防腐剂疫苗原液；
(5)配制按以下组分及重量进行配制不含防腐剂疫苗原液8Lf/ml，Al(OH)3 2. Og/L, Na2HPO4 0. 06g/L, KH2PO4O. 01g/L, NaCl 8g/L，配制完成后制得不含防腐剂疫苗半成品；
(6)分装将不含防腐剂疫苗半成品按每一次人用剂量规格分装，于5°C遮光保存。所述的不含防腐剂疫苗包括细菌性类毒素疫苗；所述的细菌性类毒素疫苗至少包括破伤风疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗。
权利要求
1.不含防腐剂疫苗的制作工艺，其特征在于它包括以下步骤(1)精制采用板框式压滤法去除菌体，收集滤液，将收集到的滤液用分子量为观 32KD的超滤系统进行浓缩，浓缩完成后加入硫酸铵进行盐析，盐析后离心收集沉淀，待沉淀溶解后进行超滤脱盐，得到精制类毒素；(2)脱毒按精制类毒素溶液的0.1 0. 3%加入甲醛溶液，在36 40°C下脱毒30 50天;(3)脱毒检查脱毒完成后，对每瓶精制类毒素进行取样，选取体重为300 400g的豚鼠至少2只，每只皮下注射400 600 Lf，将每瓶精制类毒素脱毒样品用0. 8 1. 0%无菌氯化钠溶液稀释至90 IlOLf/ml，每只皮下注射4 6ml，于注射后第5 9天、第12 16天、第19 23天进行观察，动物无不良症状，体重较注射前无减轻，且健存动物所用的类毒素即为合格的原液，体重减轻者应予增加注射量进行复试判断，将发生不良症状动物所用的类毒素继续脱毒；(4)除菌过滤将脱毒检查合格的原液进行除菌过滤，制得不含防腐剂疫苗原液；(5)配制按以下组分及重量进行配制不含防腐剂疫苗原液7 9Lf/ml，吸附剂 1. 0 3· Og/L, Na2HPO4O. 05 0. 07g/L, KH2PO4O. 005 0. 015g/L, NaCl 7 9g/L，配制完成后制得不含防腐剂疫苗半成品；(6)分装将不含防腐剂疫苗半成品按每一次人用剂量规格分装，于2 8°C遮光保存。
2.根据权利要求1所述的不含防腐剂疫苗的制作工艺，其特征在于所述的不含防腐剂疫苗包括细菌性类毒素疫苗。
3.根据权利要求2所述的不含防腐剂疫苗的制作工艺，其特征在于所述的细菌性类毒素疫苗至少包括破伤风疫苗、白喉疫苗、百日咳疫苗。
4.根据权利要求1所述的不含防腐剂疫苗的制作工艺，其特征在于所述的吸附剂为 Al(OH)3O
全文摘要
本发明公开了一种不含防腐剂疫苗的制作工艺，它包括以下步骤(1)精制去除菌体，浓缩、盐析并收集沉淀，沉淀溶解后超滤脱盐；(2)脱毒加入0.1～0.3%甲醛溶液，在36～40℃下脱毒30～50天；(3)脱毒检查取样并进行脱毒检查；(4)除菌过滤除菌过滤脱毒检查合格的原液，制得不含防腐剂疫苗原液；(5)配制不含防腐剂疫苗原液7～9Lf/ml，吸附剂1.0~3.0g/L，Na2HPO40.05~0.07g/L，KH2PO40.005~0.015g/L，NaCl7~9g/L，制得半成品；(6)分装。本发明具有不含防腐剂，适用于多种疫苗，在疫苗制备、存运、使用等过程无菌等优点。
文档编号A61K39/10GK102363041SQ20111036565
公开日2012年2月29日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年11月17日
发明者关晓峰, 吴强, 张丽莺, 曾令学, 李靖, 杨襄诚, 王子龙, 罗力心, 罗芹, 魏新 申请人:成都欧林生物科技股份有限公司