专利名称：一种丹皮中各活性成分的制备方法
技术领域：
本发明涉及天然药物领域，特别涉及一种丹皮中各活性成分的制备方法。
背景技术：
中药丹皮是毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮，其性微寒，味辛，苦，凉，入心、肝、肾经，具有清热，凉血，和血，消淤的功效。丹皮酚(又称牡丹酚)、 丹皮多糖和丹皮总苷(主要包括芍药苷、苯甲酰芍药苷、丹皮苷、丹皮原苷、丹皮新苷等) 是丹皮中的有效活性成分，丹皮酚具有活血化瘀、清热凉血、消炎收敛、镇痛解痉等多方面的药理作用，在医药、日化、香料领域有着广泛的用途，例如做成霜剂外涂，对急性湿疹、脂溢性皮炎、接触性皮炎有明显疗效，添加入牙膏中能起到消炎杀菌、抗牙龈过敏的作用，还能消除面部粉刺，对蚊虫叮咬、夏季皮炎、痱子、头皮瘙痒，具有杀菌、祛痱、止痒的作用，此外，其对心血管系统和中枢神经系统等具有多方面的药理作用，可用于开发抗心血管系统疾病的药物；丹皮多糖具有较高的降血糖活性，可用于开发治疗糖尿病药物，具有重要的临床实践价值，还具有增强机体免疫功能及抗炎作用等，有效安全，无药理毒性；丹皮总苷具有较好的清除氧自由基和肝保护作用，可用于治疗肝炎，其免疫调节和抗炎作用，为其开发成为治疗类风湿性关节炎的新药提供可能。目前，对于丹皮的开发应用绝大部分局限于其中的某一种活性成分，所使用的技术手段较为陈旧繁琐，生产效率较低，能源消耗大，也浪费了原料丹皮，限制了在工业生产上的应用，且从丹皮中同时综合提取丹皮酚、丹皮多糖和丹皮总苷三种活性物质的专利、文献报道不多，为了提高得率，往往采用较为繁琐的方法，需要一定规模的仪器设备，限制了在工业生产中的应用。因此，建立一种简洁方便、成本较低、能够同时提取丹皮中三种活性物质、经济高效、节能环保的方法对实现中药现代化具有现实意义。
发明内容
本发明目的在于提供一种低成本、高效率、节能环保地从丹皮中同时获得丹皮酚、 丹皮多糖和丹皮总苷各活性成分的制备方法。本发明是通过以下技术方案实现的包括渗漉、分离以及液相和固相的处理，所述的渗漉是将丹皮生药粉碎后，用25 45°C水渗漉4-6倍体积，然后分离得到固相药渣和液相水提取液；所述的液相处理是用凝胶过滤层析对提取液进行分离，根据出峰时间不同得到高分子量组分和低分子量组分，向高分子量组分中加入至少两倍体积浓度50 90wt% 乙醇，搅拌均勻后静置、沉淀，收集沉淀，冻干得到丹皮多糖；低分子量组分减压浓缩，浓缩液用大孔树脂吸附分离，先水洗脱4 10柱体积(BV)，后用浓度20 50wt%的乙醇洗脱 3 10BV，收集乙醇洗脱液，真空脱溶、干燥后得到丹皮总苷；所述的固相处理是药渣加水室温浸泡至少3小时，药渣与水的重量比不小于1 5，然后用2.0 2. ^g/cm3压力的蒸气进行水蒸气蒸馏，控制釜温110 120°C，收集蒸馏液并冷却，分离，收集沉淀得到丹皮酚。所述的大孔树脂选自D201或宝恩3号或ASD-8或AB-8或HP16型大孔树脂，优选型号为D201型大孔树脂。得到的各活性成分可通过重结晶等公知的方法进一步纯化。比如丹皮酚可用70% 乙醇溶液重结晶，即85°C水浴加热溶解，冷冻结晶至少一次。本发明的有益效果在于根据丹皮多糖与丹皮总苷分子量大小的差异(丹皮多糖分子量在IOkDa以上，丹皮总苷分子量小于IOOODa)，使用凝胶过滤层析从中药丹皮中获得丹皮多糖和丹皮总苷，实现了对药材的最大程度的利用，并且成本较低，适合工业化应用； 丹皮总苷纯化过程中使用D201型大孔树脂，成本较低、效果可靠；本发明改善了从中药丹皮中综合提取丹皮酚、丹皮多糖和丹皮总苷的方法，设计合理，成本低、易操作、得率高，适合工业化生产，应用前景广阔。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。实施例一取丹皮生药100g，洗净烘干粉碎，装入渗漉柱中，柱体积90ml，用360mL 35°C温水，流速200ml/h，渗漉，分离得到药渣和提取液；提取液使用Superdex G50凝胶过滤层析分离，得到含丹皮多糖的大分子组分和含丹皮总苷的小分子组分；大分子组分使用3倍体积70%乙醇沉淀12小时，收集沉淀冷冻干燥，得丹皮多糖部分，小分子组分减压浓缩，馏出液保留，浓缩液上大孔树脂柱D201 (3. 5g芍药苷/kg湿树脂)，先用水冲洗6BV除杂，再用 30%乙醇洗脱4BV，收集洗脱液并减压蒸馏至无醇味，冷冻干燥，即得丹皮总苷部分；药渣加入9. 5倍水室温浸泡5小时后，于蒸馏罐内用2. 3kg/cm3压力的蒸气进行水蒸气蒸馏，控制釜温115°C (并入上一步浓缩透过液时的馏出液)，间歇加热，循环加水，至罐内排出的原药液体澄清并伴有少量珠点油花止，收集蒸馏液，冷却后沉淀得丹皮酚粗品；粗品使用3倍体积70%乙醇于85°C水浴中溶解，完全溶解后移至冷柜中结晶，第一次结晶时间较短，至刚有晶体析出，再重复以上操作3次至彻底结晶，得丹皮酚纯品；经液相色谱测定，丹皮多糖的得率为5.0%，纯度为83% ；丹皮总苷的得率为6.3%，纯度为(以芍药苷计)85. 3% ； 丹皮酚的提取率为4. 47 %，纯度为99 %。实施例二取丹皮生药500g，洗净烘干粉碎，装入渗漉柱中，柱体积450ml，用2700mL35°C温水，流速200ml/h，渗漉，分离得到药渣和提取液；提取液使用SuperdeX650凝胶过滤层析分离，得到含丹皮多糖的大分子组分和含丹皮总苷的小分子组分；大分子组分使用3倍体积 80%乙醇沉淀12小时，收集沉淀冷冻干燥，得丹皮多糖部分，小分子组分减压浓缩后上大孔树脂柱AB-8 (3. 5mg芍药苷/g湿树脂)，先用水冲洗6BV除杂，再用50 %乙醇洗脱!3BV， 收集洗脱液并减压蒸馏至无醇味，冷冻干燥，即得丹皮总苷部分；药渣加入9. 5倍水浸泡5 小时后，于蒸馏罐内用2. 4kg/cm3压力的蒸气进行水蒸气蒸馏，控制釜温115°C (并入上一步浓缩透过液时的馏出液)，至罐内排出的原药液体澄清并伴有少量珠点油花止，收集蒸馏液，冷却后沉淀得丹皮酚粗品；粗品使用3倍体积70%乙醇于85°C水浴中溶解，完全溶解后移至冷柜中结晶，得丹皮酚纯品；经液相色谱测定，丹皮多糖的得率为5. 3%，纯度为86% ； 丹皮总苷的得率为6. 6%，纯度(以芍药苷计)为80. 8%，其中芍药苷含量为41. 7% ；丹皮酚的提取率为4. 16%，纯度为97%。
实施例三取丹皮生药500g，洗净烘干粉碎，装入渗漉柱中，柱体积450ml，用2300mL35°C温水，流速200ml/h，渗漉，滤得到药渣和提取液；提取液使用Superdex G50凝胶过滤层析分离，得到含丹皮多糖的大分子组分和含丹皮总苷的小分子组分；大分子组分使用3倍体积 90%乙醇沉淀12小时，收集沉淀冷冻干燥，得丹皮多糖部分，小分子组分减压浓缩后上大孔树脂柱D201 (3. 5mg芍药苷/g湿树脂)，先用水冲洗6BV除杂，再用50 %乙醇洗脱!3BV， 收集洗脱液并减压蒸馏至无醇味，冷冻干燥，即得丹皮总苷部分；药渣加入9. 5倍水浸泡5 小时后，于蒸馏罐内用2.3kg/cm3压力的蒸气进行水蒸气蒸馏，控制釜温115°C (并入上一步浓缩透过液时的馏出液)，至罐内排出的原药液体澄清并伴有少量珠点油花止，收集蒸馏液，冷却后沉淀得丹皮酚粗品。粗品使用3倍体积70%乙醇于85°C水浴中溶解，完全溶解后移至冷柜中结晶，得丹皮酚纯品。经液相色谱测定，丹皮多糖的得率为5. 0%，纯度为89% ； 丹皮总苷的得率为6. 2%，纯度(以芍药苷计)为85. 8%，其中芍药苷含量为43. 5% ；丹皮酚的提取率为4. 09 %，纯度为95 %。
权利要求
1.一种丹皮中各活性成分的制备方法，包括渗漉、分离以及液相和固相的处理，其特征在于所述的渗漉是将丹皮生药粉碎后，用25 45°C水渗漉4-6倍体积，得到固相药渣和液相水提取液；所述的液相处理是用凝胶过滤层析对提取液进行分离，根据出峰时间不同得到高分子量组分和低分子量组分，向高分子量组分中加入至少两倍体积浓度50 90wt%乙醇，搅拌均勻后静置、沉淀，收集沉淀，冻干得到丹皮多糖；低分子量组分减压浓缩，浓缩液用大孔树脂吸附分离，先水洗脱4 10BV，后用浓度20 50wt %的乙醇洗脱3 10BV，收集乙醇洗脱液，真空脱溶、干燥后得到丹皮总苷；所述的固相处理是药渣加水室温浸泡至少3小时，药渣与水的重量比不小于1 5，然后用2.0 2. ^g/cm3压力的蒸气进行水蒸气蒸馏，控制釜温110 120°C，收集蒸馏液并冷却，分离、收集沉淀得到丹皮酚。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于将丹皮生药粉碎后，用25 45°C水渗漉4-6倍体积。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于用凝胶过滤层析对提取液进行分离， 根据出峰时间不同得到高分子量组分和低分子量组分。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于向高分子量组分中加入至少两倍体积浓度50 90wt%乙醇，搅拌均勻后静置、沉淀，收集沉淀，冻干得到丹皮多糖。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的大孔树脂选自D201或宝恩3 号或ASD-8或AB-8或HP16型大孔树脂，先用水洗脱5 8BV，再用30 50Wt%乙醇洗脱 3 5BV，收集乙醇洗脱液，真空脱溶、干燥后得到丹皮总苷。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于药渣加水室温浸泡至少3小时，药渣与水的重量比不小于1 5，然后用2.0 2. 5kg/cm3压力的蒸气进行水蒸气蒸馏，控制釜温110 120°C，收集蒸馏液并冷却，分离、收集沉淀得到丹皮酚。
全文摘要
本发明公开了一种丹皮中各活性成分的制备方法，是丹皮生药用25～45℃水中渗漉4～6倍体积，得到固相药渣和液相水提取液；固相加水室温浸泡后用水蒸气蒸馏法制取丹皮酚，液相水浸提液用凝胶过滤层析对浸提液进行分离，分别得到高分子量组分和低分子量组分，高分子量组分用醇沉法制取丹皮多糖，低分子量组分用大孔树脂吸附分离制取丹皮总苷。本方法从中药丹皮中综合提取得到丹皮酚、丹皮多糖和丹皮总苷，所得到的丹皮多糖纯度高于80％，丹皮总苷纯度高于80％，丹皮酚经纯化后纯度高于95％。
文档编号A61K36/71GK102429965SQ20111039979
公开日2012年5月2日 申请日期2011年11月25日 优先权日2011年11月25日
发明者毕云英 申请人:威海天泓农业科技有限公司