专利名称：茅莓总皂苷的制备方法
技术领域：
本发明属于中药提取技术，涉及一种中药提取物的制备方法。
背景技术：
中药茅莓为民间常用中草药，来源于蔷薇科悬钩子属植物茅莓Rubus parvifolius L.的干燥全草。其性凉味苦，根、茎、叶均可入药，具有清热解毒、凉血止血、祛风除湿、杀虫疗疮等功效，主治感冒发热、咳嗽咯血、痢疾、跌打损伤、产后腹痛、崩漏、外伤出血、疥疮等多种疾病。CN200310111034. X公开了茅莓总皂苷对脑缺血、脑血栓、脑梗塞等脑血管系统疾病有很好的治疗作用，同时公开了茅莓总皂苷的制备方法将茅莓用水或浓度为60-80%的乙醇进行提取，提取物浓缩至l_3g/ml，上大孔树脂，用10-50%的乙醇洗脱，洗脱物减压或常压浓缩、干燥，所得物即茅莓总皂苷，纯度大于50%。都述虎等(中成药，2003，25(3): 185-188)对DlOl型大孔吸附树脂富集、纯化茅莓总皂苷的工艺条件及参数进行了研究，结果发现，茅莓提取液上大孔吸附树脂柱，用水、50%乙醇依次洗脱，茅莓总皂苷富集于50%乙醇洗脱液部分，洗脱率在79. 2%以上，总固物中茅莓总皂苷含量可达55. 3% ；其中茅莓提取液的制备方法为将茅莓用70%乙醇回流提取得浸膏，水浴蒸发至无醇味，加水适量，冰箱放置M小时后抽滤，即得茅莓总皂苷提取液。此外，文献(任凌燕等.茅莓总皂苷的含量测定.重庆医科大学学报，2005，30(6): 854-856)还报道了采用不同溶剂(甲醇、70%乙醇)及不同提取方法(回流提取、索氏提取、超声提取)制得的茅莓提取液中总皂苷的含量， 结果发现，以70%乙醇回流提取所得的总皂苷含量最高。在上述方法基础上，发明人对茅莓总皂苷的提取工艺和大孔吸附树脂纯化工艺均进行了优化，结果发现，制得的茅莓总皂苷中总皂苷含量最高只能达到67. 4%，含杂质较多，颜色较深，不利于制剂成型并影响制剂的外观。因此，研究一种产品纯度更高的茅莓总皂苷制备方法具有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种产品纯度更高的茅莓总皂苷制备方法。为达到上述目的，本发明提供如下技术方案 茅莓总皂苷的制备方法，包括如下步骤
a.取茅莓药材，加碱水I提取2 3次，再加水提取广2次，合并提取液，浓缩，加乙醇沉淀，过滤，滤液浓缩，调节PH至5飞，5 15°C放置12 48小时，过滤，收集沉淀；所述碱水I为质量百分浓度为0. 03、. 15%的碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液；
b.将步骤a所得沉淀用碱水II溶解，溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂，依次用碱水III、水冲洗，弃去冲洗液，再用体积百分浓度为60、0%的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩， 5 15°C放置12 48小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷；所述碱水II为质量百分浓度为0. 5^2%的碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液；所述碱水III为质量百分浓度为广3%的氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液；所述大孔型碱性阴离子交换柱为大孔型弱碱性阴离子交换树脂D382、D380、D371、D392或大孔型强碱性阴离子交换树脂D201。优选的，所述步骤a是取茅莓药材，加碱水I提取2 3次，再加水提取广2次，合并提取液，浓缩至药材量的2倍体积，加乙醇至含醇量为65、5%，静置M 48小时，过滤，滤液浓缩至含醇量为15 25%，调节pH至5飞，5 15°C放置12 48小时，过滤，收集沉淀。优选的，所述步骤b是将步骤a所得沉淀用碱水II溶解，溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂，先用广3倍树脂床体积的碱水III冲洗，再用3飞倍树脂床体积的水冲洗， 弃去冲洗液，再用7 10倍树脂床体积的体积百分浓度为65、5%的乙醇洗脱，收集洗脱液， 浓缩至含醇量为15 25%，5 15°C放置12 48小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷。更优选的，所述制备方法包括如下步骤
a.取茅莓药材，加入6 10倍药材量的碱水I提取2次，再加入6、倍药材量的水提取 1次，合并提取液，浓缩至药材量的2倍体积，加乙醇至含醇量为65 75%，静置M小时，过滤，滤液浓缩至含醇量为15 20%，调节pH至5飞，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀；所述碱水I为质量百分浓度为0. 03、. 15%的碳酸氢钠或碳酸钠溶液；
b.将步骤a所得沉淀用碱水II溶解，溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂，先用1.5^2 倍树脂床体积的碱水III冲洗，再用4倍树脂床体积的水冲洗，弃去冲洗液，再用8、倍树脂床体积的体积百分浓度为65、0%的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至含醇量为15 20%， 5 10°C放置M小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷；所述碱水II为质量百分浓度为0. 5^2%的碳酸氢钠或碳酸钠溶液；所述碱水III为质量百分浓度为H 5%的氢氧化钠溶液。按照文献(任凌燕等.茅莓总皂苷的含量测定.重庆医科大学学报，2005， 30(6) 854-856)方法测定本发明方法制得的茅莓总皂苷中的总皂苷含量，结果显示，按照本发明方法制得的茅莓总皂苷中总皂苷含量达到95%以上，杂质少，色泽佳。所制得的茅莓总皂苷可以按照药物制剂学的常规方法制成适合于临床治疗需要的各种制剂，包括但不限于注射剂、片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂以及缓释、控释制剂等，优选剂型为咀嚼片、 胶囊剂和注射用无菌粉末。本发明的有益效果在于本发明公开了一种茅莓总皂苷的制备方法，与现有技术相比，该方法能够显著提高茅莓总皂苷中的总皂苷含量，所得产品杂质少、色泽佳，利于制剂成型和改善制剂外观，此外，该方法操作简单，重复性好，产品质量稳定，适用于工业化大规模生产。
具体实施例方式为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例1、茅莓总皂苷的制备
a.取茅莓药材，粉碎成粗粉，超声提取3次，第一次加入10倍药材量的质量百分浓度为0. 08%的碳酸氢钠溶液，第二次加入8倍药材量的质量百分浓度为0. 05%的碳酸氢钠溶液，第三次加入8倍药材量的水提取1次，每次1小时，合并三次提取液，浓缩至药材量的2 倍体积，加乙醇至含醇量为75%，静置M小时，过滤，滤液减压回收乙醇至含醇量为20%，用盐酸调节PH至6，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀；
b.将步骤a所得沉淀用质量百分浓度为1. 5%的碳酸氢钠溶液溶解，溶解液上大孔型强碱性阴离子交换树脂D201，先用1. 5倍树脂床体积的质量百分浓度为2. 5%的氢氧化钠溶液冲洗，再用4倍树脂床体积的水冲洗，弃去冲洗液，再用8倍树脂床体积的体积百分浓度为80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至含醇量为15%，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷，经测定总皂苷含量为98. 3%。实施例2、茅莓总皂苷的制备
a.取茅莓药材，粉碎成粗粉，煎煮提取3次，第一次加入10倍药材量的质量百分浓度为0. 07%的碳酸氢钠溶液，第二次加入8倍药材量的质量百分浓度为0. 03%的碳酸氢钠溶液，第三次加入8倍药材量的水提取1次，每次1小时，合并三次提取液，浓缩至药材量的2 倍体积，加乙醇至含醇量为70%，静置M小时，过滤，滤液减压回收乙醇至含醇量为15%，用盐酸调节PH至5，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀；
b.将步骤a所得沉淀用质量百分浓度为1的碳酸钠溶液溶解，溶解液上大孔型弱碱性阴离子交换树脂D382，先用2倍树脂床体积的质量百分浓度为洲的氢氧化钠溶液冲洗， 再用4倍树脂床体积的水冲洗，弃去冲洗液，再用9倍树脂床体积的体积百分浓度为70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至含醇量为20%，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀， 干燥，即得茅莓总皂苷，经测定总皂苷含量为96. 9%。实施例3、茅莓总皂苷的制备
a.取茅莓药材，粉碎成粗粉，煎煮提取3次，第一次加入8倍药材量的质量百分浓度为 0. 09%的碳酸氢钠溶液，第二次加入6倍药材量的质量百分浓度为0. 05%的碳酸氢钠溶液， 第三次加入6倍药材量的水提取1次，每次1小时，合并三次提取液，浓缩至药材量的2倍体积，加乙醇至含醇量为70%，静置M小时，过滤，滤液减压回收乙醇至含醇量为18%，用盐酸调节pH至6，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀；
b.将步骤a所得沉淀用质量百分浓度为0.5%的碳酸氢钠溶液溶解，溶解液上大孔型弱碱性阴离子交换树脂D392，先用2倍树脂床体积的质量百分浓度为m的氢氧化钠溶液冲洗，再用4倍树脂床体积的水冲洗，弃去冲洗液，再用9倍树脂床体积的体积百分浓度为 70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至含醇量为19%，5°C放置M小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷，经测定总皂苷含量为95. 3%。实施例4、茅莓总皂苷的制备
a.取茅莓药材，粉碎成粗粉，煎煮提取3次，第一次加入8倍药材量的质量百分浓度为 0. 15%的碳酸钠溶液，第二次加入6倍药材量的质量百分浓度为0. 08%的碳酸钠溶液，第三次加入6倍药材量的水提取1次，每次1小时，合并三次提取液，浓缩至药材量的2倍体积， 加乙醇至含醇量为65%，静置24小时，过滤，滤液减压回收乙醇至含醇量为20%，用盐酸调节 pH至5，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀；
b.将步骤a所得沉淀用质量百分浓度为0.5%的碳酸氢钠溶液溶解，溶解液上大孔型弱碱性阴离子交换树脂D380，先用1. 5倍树脂床体积的质量百分浓度为2. 5%的氢氧化钠溶液冲洗，再用4倍树脂床体积的水冲洗，弃去冲洗液，再用9倍树脂床体积的体积百分浓度为65%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至含醇量为15%，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷，经测定总皂苷含量为97. 4%。
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实施例5、茅莓总皂苷注射用无菌粉末的制备
分别取实施例广4制得的茅莓总皂苷，加入适量无菌注射用水，调节pH至6. 5^7. 0，搅拌加热使溶解，再加入适量注射用甘露醇，混勻，用无菌抽滤漏斗滤过，再用灭菌的(^6垂熔玻璃漏斗精滤，滤液分装于2ml安瓿中，冷冻干燥，无菌熔封，即得茅莓总皂苷注射用无菌粉末。实施例6、茅莓总皂苷胶囊剂的制备
分别取实施例广4制得的茅莓总皂苷，以淀粉和糊精为填充剂，以质量百分浓度为3% 的淀粉浆为粘合剂制软材，2号筛制粒，60°C干燥，2号筛整粒，加入适量硬脂酸镁混勻，分装于空胶囊中，即得茅莓总皂苷胶囊剂。实施例7、茅莓总皂苷咀嚼片的制备
分别取实施例广4制得的茅莓总皂苷，加入适量淀粉、蔗糖、糊精、甘露醇和薄荷香精混勻，湿法制粒，60°C干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁混勻，压片，即得茅莓总皂苷咀嚼片。最后说明的是，以上实施例仅用于说明本发明的技术方案，并不构成对本发明内容的限制。尽管通过上述实施例已经对本发明做了较为详细的例举，但本领域技术人员仍然可以根据发明内容部分和实施例部分所描述的技术内容，在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
权利要求
1.茅莓总皂苷的制备方法，其特征在于，包括如下步骤a.取茅莓药材，加碱水I提取2 3次，再加水提取广2次，合并提取液，浓缩，加乙醇沉淀，过滤，滤液浓缩，调节PH至5飞，5 15°C放置12 48小时，过滤，收集沉淀；所述碱水I为质量百分浓度为0. 03、. 15%的碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液；b.将步骤a所得沉淀用碱水II溶解，溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂，依次用碱水III、水冲洗，弃去冲洗液，再用体积百分浓度为60、0%的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩， 5 15°C放置12 48小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷；所述碱水II为质量百分浓度为0. 5^2%的碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液；所述碱水III为质量百分浓度为广3%的氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液；所述大孔型碱性阴离子交换柱为大孔型弱碱性阴离子交换树脂D382、D380、D371、D392或大孔型强碱性阴离子交换树脂D201。
2.根据权利要求1所述的茅莓总皂苷的制备方法，其特征在于，所述步骤a是取茅莓药材，加碱水I提取2 3次，再加水提取广2次，合并提取液，浓缩至药材量的2倍体积，加乙醇至含醇量为65、5%，静置M 48小时，过滤，滤液浓缩至含醇量为15 25%，调节pH至5 6， 5 15°C放置12 48小时，过滤，收集沉淀。
3.根据权利要求1所述的茅莓总皂苷的制备方法，其特征在于，所述步骤b是将步骤a 所得沉淀用碱水II溶解，溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂，先用广3倍树脂床体积的碱水III冲洗，再用3飞倍树脂床体积的水冲洗，弃去冲洗液，再用7 10倍树脂床体积的体积百分浓度为65、5%的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至含醇量为15 25%，5 15°C放置12、8 小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷。
4.根据权利要求1或2或3所述的茅莓总皂苷的制备方法，其特征在于，包括如下步骤a.取茅莓药材，加入6 10倍药材量的碱水I提取2次，再加入6、倍药材量的水提取 1次，合并提取液，浓缩至药材量的2倍体积，加乙醇至含醇量为65 75%，静置M小时，过滤，滤液浓缩至含醇量为15 20%，调节pH至5飞，10°C放置M小时，过滤，收集沉淀；所述碱水I为质量百分浓度为0. 03、. 15%的碳酸氢钠或碳酸钠溶液；b.将步骤a所得沉淀用碱水II溶解，溶解液上大孔型碱性阴离子交换树脂，先用1.5^2 倍树脂床体积的碱水III冲洗，再用4倍树脂床体积的水冲洗，弃去冲洗液，再用8、倍树脂床体积的体积百分浓度为65、0%的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至含醇量为15 20%， 5 10°C放置M小时，过滤，收集沉淀，干燥，即得茅莓总皂苷；所述碱水II为质量百分浓度为0. 5^2%的碳酸氢钠或碳酸钠溶液；所述碱水III为质量百分浓度为H 5%的氢氧化钠溶液。
5.采用权利要求1至4任一项所述制备方法制得的茅莓总皂苷。
6.含有权利要求5所述茅莓总皂苷的药物制剂。
全文摘要
本发明公开了一种茅莓总皂苷的制备方法，是将茅莓药材先用碱水提取，再用水提取，提取液浓缩，醇沉，再浓缩，调节pH至5~6，静置，过滤，所得沉淀用碱水溶解后上大孔型碱性阴离子交换树脂，依次用碱水、水冲洗，弃去冲洗液，再用含水乙醇洗脱，洗脱液浓缩，静置，过滤，所得沉淀即为茅莓总皂苷；与现有技术相比，本发明方法能够显著提高茅莓总皂苷中的总皂苷含量，所得产品杂质少、色泽佳，利于制剂成型和改善制剂外观，此外，该方法操作简单，重复性好，产品质量稳定，适用于工业化大规模生产。
文档编号A61K36/73GK102488764SQ201110450510
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者夏培元, 张宏伟, 王显凤, 胡小刚, 陈剑鸿, 黄明春 申请人:中国人民解放军第三军医大学第一附属医院