专利名称：降解稳定的生物相容性胶原基质的制作方法
技术领域：
本发明涉及降解稳定的生物相容性胶原基质、这种胶原基质的制备方法、以及根据本发明的胶原基质的用途，所述生物相容性胶原基质特别地特征在于其除了不溶性胶原纤维之外还包含可溶性胶原组分以及肽组分的事实，所述制备方法特别地包括应用环氧官能交联剂化学交联，所述用途是作为美容试剂或药物试剂，特别是用于局部应用，以及也作为人或动物中的伤ロ治疗剂、植入物或止血剤，以及作为生物技术、基础研究以及组织工程领域中细胞群的支架。
背景技术：
在胶原材料领域中，机械稳定的、柔性的且显示出抗生物降解的足够稳定性的材 料和支架的提供起重要作用。尤其是在伤ロ治疗、生物植入物领域以及在组织工程和细胞群支架领域，以及也在伤ロ愈合和止血领域中的高吸附性材料领域中，这种产品需求变得越来越重要。在美容领域中，特别地另外需要具有舒适的感觉和外观而同时被皮肤良好耐受的材料。而且，在美容和药物应用以及在组织工程中，活性成分经由另外具有高机械稳定性的这种降解稳定的载体或基质材料的提供是重要的方面。例如组织工程支架与活性成分的组合是反映在大量出版物中的ー种策略。通过吸附或共价键合到支架或从贮库连续释放而经延长时期发挥其生物活性的活性成分属于现有技木。特别地，在具有短生物半衰期的活性成分的情形下，从相应活性成分贮库的连续释放开启伤ロ愈合中的靶向干预。例如，许多重要现象，例如细胞分化、细胞増殖和聚集经由基因表达受到信号蛋白的影响。个别细胞的可用性和分化、再生或替代、细胞分裂和调节是研究的主要目标(Rui Miguel Paz,Dissertation RffTH Aachen 2004)。为了改善其功能性而为生物材料装配生物活性物质说明了从完全被动植入物材料到參与与周围组织或组织液的有目的相互作用的主动植入物的发展。生物活性物质与生物材料的组合在医学中普遍存在，且起越来越多的作用，例如在预防植入物相关的感染中。例如，在伤ロ敷料领域中，越来越多更重要的作用是通过改善的伤ロ环境、減少感染和刺激细胞生长来产生的，其通过加入活性成分，也通过以可控方式调节材料的物理特性、例如尤其是基质材料的硬度而有目的地影响细胞分化和细胞表达方式而进行。近年来，所谓的伤ロ渗出物管理，其特别在慢性伤ロ的情形下特别涉及在滲出即湿润的伤口中，在经由纯吸附功能控制伤ロ渗出物等的物理水平和处于释放活性成分的药理水平的影响和相互作用也已变得更加重要。胶原基质负载蛋白活性成分比如生长因子是长期已知的，并且描述在例如WO85/04413 或 US 5219576 (EP 0428541B1)中。然而，还为了能够实现载体材料的高机械稳定性的产品需求，以及也实现降低例如在伤ロ或身体植入物中不期望的非常快的生物降解，已知且普遍采用交联的方法，特别是用化学交联剂进行交联。特别地，用环氧官能交联剂进行胶原的化学交联也是已知的。在这方面，其中用环氧交联剂交联的主要已知方法是在固体、干燥的、通常是冷冻干燥的胶原材料上进行的。例如，DE 69533285描述了可以化学交联或部分交联的生物聚合物纤维的半月板假体，所述交联是对已经冷冻干燥的胶原纤维进行的。WO 2003/053490A1 (EP 1455855A1)也提供了可以化学交联的冷冻干燥的胶原材料。其中也描述了冷冻干燥的胶原-弾性蛋白材料的化学交联，戊ニ醛用作化学交联剂，且仅仅一般性地提及环氧化物作为交联剂。DE 102006006461A1 和 DE 102004039537A1 提供了填充(populated)以皮肤细胞的胶原基质(全皮肤模型)，其中填充的胶原材料采用戊ニ醛进行化学交联。仅仅一般性列出了大量其它化学交联剂。其中也仅仅描述了已经冷冻干燥的材料的交联。在这些方法中的化学交联是通过将特别是片材或层形式的固体胶原材料浸入包含交联剂的溶液中常规进行的。所述片材样固体胶原材料(层)通常是如下方式获得的首先，通过常规方法干燥(例如冷冻干燥)胶原材料，并且在浸入包含交联剂的溶液中之后，进行进一歩的干燥步骤(例如进ー步冷冻干燥)。在另外的步骤中，在进行交联反应之后，通常通过彻底冲洗来从材料洗除还没有偶联的过量交联剂，鉴于交联材料的生物相容性或由交联剂残余物引起的其毒性降低，这是必需的。 一种相应的方法特别地描述在“Cross-linking of Collagen-basedmaterials” (论文，R. Zeeman, 1998)和 Zeeman 等人在 J Biomed Mater Res,46,424-433,1999,在 J Biomed Mater Res,47，270-277，1999 中，在 Biomaterials,20，921-931，1999 中和在J Biomed Mater Res，51，541-548，2000中。在此方法中，例如将通过冷冻干燥获得的层状皮肤绵羊胶原(DSC层)在pH酸性或碱性下浸入环氧官能交联剂溶液中，所述环氧官能交联剂比如1，4_ 丁ニ醇ニ缩水甘油醚(BDDGE)，并在室温下(20-30°C )交联几天时期。然后，冲洗完全交联的胶原层且再次冷冻干燥，以便获得环氧交联胶原材料。在那些出版物中，描述了用于交联的PH值对于交联材料的挠性和弾性具有显著的影响，与在碱性pH值下交联的材料相比，在酸性PH值< 6 (pH 4-6)交联的材料具有较高的挠性和弾性。EP 0898973B1还描述了一种用于化学交联胶原的方法。这里一般说来也将胶原悬浮液作为化学交联的可能原料提出。然而，所描述的交联方法基本上由至少两个交联步骤组成，通常在PH值4-9下进行。其中用环氧化物交联剂比如BDDGE进行交联的唯一具体实施的实施例涉及片材形式的如上所述皮肤绵羊胶原(DSC)，将其浸入包含BDDGE的溶液中，且在反应时间7天之后冲洗且之后再次冷冻干燥。其中通过浸入固体、干燥的(冷冻干燥的)胶原材料，之后再进行干燥而进行交联的该方法的缺点是一方面必须进行几次干燥步骤，出于エ艺经济性的原因这点特别不利，另ー方面，就相关的时间、特别是与持续几天的交联时间相关的时间而言，费用高。还发现，再次冷冻干燥交联的、已经冷冻干燥的材料时，可以观察到所述材料不期望的变化，特别是对于层压材料以收缩的形式的变化。由于另外的第二次干燥过程不可避免引起的胶原材料的热应カ升高，另外预期到对于胶原材料结构的不利影响，例如胶原肽结构的变性或其它结构变化増加，特别是在其中胶原以天然、生物结构蛋白存在的胶原材料中。相反，例如，由EP 0793511A1已知用于制备特别地还包含胶原和弹性蛋白的聚合物混合物的复合生物聚合物泡沫的方法，其中将交联剂加入到聚合物悬浮液中，之后只进行简单的干燥步骤，特别是冷冻干燥。然而，没有公开用环氧官能交联剂交联这种聚合物混合物。EP 0680990A1还描述了将交联剂加入到聚合物悬浮液中，使胶原和合成亲水性聚合物的聚合物混合物进行交联反应，所述合成亲水性聚合物比如特别是官能活化的合成亲水性聚合物，例如ニ醇，优选双官能活化的聚こニ醇(PEG)。作为交联剂的环氧化物仅仅ー般性作为许多可能的交联剂之一列出。US 4，883，864描述了化学改性的(交联的)胶原组合物，其中利用胃蛋白酶溶解所述胶原，然后通过加入交联剂进行交联。同样，在该出版物中环氧化物仅仅是一般性作为可能的交联剂提及。实施例18提到了根据该发明的胶原材料可以冷冻干燥，且用作外科海绵材料。该发明也没有公开特别地与冷冻干燥步骤相关的不溶性天然胶原的用途或环氧化物的具体用途。化学交联胶原材料，特别是酸不溶性天然胶原，是从本申请人的早期专利申请DE10350654A1中已知的。在那篇申请中，优选地使用具有pH值2_4的含水胶原悬浮液。另外，提到了将交联剂加入到这种含水胶原悬浮液中，接着冷冻干燥的可能性。其还进ー步提到，特别地当使用在酸性介质中反应的交联剂时，交联处理可以在冷冻干燥之前进行。罗列出了多组多官能性交联剂作为可能的交联剂，该一般性罗列也包括双环氧化物，比如1，4_ 丁ニ醇ニ缩水甘油醚(BDDGE)。然而，优选地进行脱氢热交联。对于利用EDC(1-こ基-3-(3-ニ甲基氨基丙基)-碳ニ亚胺)交联的材料，还提及令人惊奇地改善了胶原材料的血管生成性 质。在其中作为优选识别的脱氢热交联方面，提及冷冻干燥温度为至少50至180°C，对于脱氢热交联，高于80°C的较高温度识别为优选的。特别地与考虑的具体过程，例如具体pH值<4和选择的冷冻干燥温度范围组合的作为交联剂的环氧化物的具体选择在其中不是显而易见的。而且，该文件描述了纤维状、天然不溶性胶原的胶原悬浮液的操作(working-up)和制备。然而，没有提到可释放酸溶性胶原和肽组分的保存，所述胶原和肽组分可能是在胶原材料中在该操作情况中形成的。特别地在仅仅一般性提及的化学交联方面，既没有提到保存这种可溶组分的必要性，也没有提到因而其可能性。相反，该文件明确地涉及酸不溶性胶原材料的期望用途，且酸溶性胶原明确地被认为是不利的。在该文中，引入例如蛋白源(proteinogenic)活性成分(生长因子等)是通过包封和掺入微球实现的。天然酸不溶性胶原常规指如下胶原悬浮液的级分其在酸溶液中不溶、可离心沉淀、且包含光学显微镜检查可见的纤維；在本发明的范围内，天然酸不溶性胶原特别地包括纯胶原悬浮液的级分，其在pH < 4的酸溶液中不溶，可以通过16，OOOg的离心沉淀，且包含在光学显微镜下可见的纤维(纤维厚度0.2 μ m及以上)。在另一方面，天然可溶性或酸溶性胶原指在pH < 4的酸溶液中形成澄清溶液，且不包含在光学显微镜下可见的任何纤维结构的胶原级分。可以利用分级分离，例如利用已知的SEC(尺寸排阻色谱)方法将天然可溶性或酸溶性胶原分成具有分子量> 250kDa的高分子量、天然、完整胶原分子和具有分子量
<250kDa的低分子量胶原肽。因而，所述低分子量胶原肽不能指为完整胶原分子。原则上，如下述实施例描述的，可以利用已知方法，例如SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析可溶性组分来定性地检测可溶性完整胶原分子以及低分子量肽组分的存在。所述酸溶性胶原组分和胶原肽具有多种有利的特征。例如，它们具有成膜性能，以及当局部应用或从载体材料释放到皮肤上时，它们经由该薄膜形成可以提高皮肤的保水能力，因此，減少了经表皮的水分流失。此外，可溶性胶原片段是在伤ロ治疗和细胞群/细胞反应的可控制性方面产生积极性质的重要信号信使和基质组分，其特别在组织工程领域，在所谓细胞群的表达谱方面是有利的和期望的。因此，本发明的ー个重要方面是将这种酸溶性胶原组分和肽以及其它低分子量肽组分保存在冷冻干燥的、降解稳定的(化学交联的)胶原基质中，以便当使用时，其从基质中释放出，且能够在应用部位获得其有利的作用。现有技术已知的化学交联的和由此得到的降解稳定的胶原材料不再包含酸溶性胶原级分、片段及其它肽组分，这是因为例如在分离皮肤(split-skin)胶原或上述皮肤绵羊胶原(DSC)层的情形下所述材料的基本性质，或者因为进行的环氧化物交联过程和其中应用的交联条件。现有技术中描述的环氧交联过程是使用明显过量的交联剂在大量溶剂中进行至少72小时的长时间。可能存在于原料中的可溶级分由此被大量溶剂释放，稀释，因此被冲洗棹。由于高稀释效应的结果，可溶性肽和胶原级分以仅仅少量仍然存在于所述材料中。由于高交联剂浓度和长的交联时间，仍然少量存在的可溶性肽和胶原组分与所述胶原链交联，因此不可分地结合到交联的材料中。因为所述方法还包括作为必需步骤的从交 联的材料中冲洗交联剂，在最后的该洗涤步骤中，从交联的材料中冲洗掉任何未结合的可溶性胶原级分或可溶性胶原片段或低分子量可溶性肽组分。因此，现有技术没有提供下述化学交联的胶原材料由于化学交联，其具有高降解稳定性和机械强度，同时具有可以从交联材料中释放出的高生物相容性(低毒性)和酸溶性胶原级分、片段和/或其它肽组分。
发明内容
因此，本发明的目的是提供冷冻干燥的胶原基质，其同时具有适于美容应用和医学应用的高生物降解稳定性(水解稳定性)和机械性撕裂強度(tearstrength)，特别地在水合状态(湿撕裂强度)下。此外，所述胶原基质应当具有高生物相容性，特征为低毒性，并且允许从使用的交联基质中释放可溶性胶原和肽组分。此外，所述交联胶原基质应当具有高液体吸收能力和水合率，所述胶原基质应当具有高挠性和弾性，以及是触觉舒适的且具有有吸引力的光学性质(例如高光密度)，以便特别地适合作为美容试剂或药物试剂，特别地用作美容敷料或面膜和作为伤ロ治疗剂、植入物或止血剂以及也作为组织工程中细胞群/细胞培养的支架。在ー个进一歩的方面，提供胶原基质，在生物工程学、基出研究和组织工程领域中，由于受控制的硬度适合性，其允许有目的地影响细胞分化和细胞的表达模式。稳定且在影响细胞的表达模式方面最佳的支架和胶原材料的高生物相容性是有助的新细胞的掺入及其性能所需要的，例如当将其用作植入物和用作组织工程的细胞支架吋。最后但相当重要的，从经济学观点而言，所述方法优于现有技术。
图I :BCA方法根据制备实施例2的含有另外的可溶性基质蛋白(弹性蛋白水解产物)的环氧交联胶原基质中可溶性蛋白组分[% ]的測定，与含有弾性蛋白水解产物的仅仅脱氢热交联胶原基质(“未交联的”)进行比较。图2a :胶原酶消化试验根据本发明的制备实施例Ia和2a的环氧交联胶原基质与含有弾性蛋白水解产物的仅仅脱氢热交联的胶原基质(“未交联的”)比较在6小时时期之内的降解率[%]的測定。
图2b :胶原酶消化试验根据本发明的制备实施例Ia和2a的环氧交联胶原基质与含有弾性蛋白水解产物的仅仅脱氢热交联的胶原基质(“未交联的”)比较在23小时时期之内的溶解部分的绝对量的測定(对IOmg标准化)。图3 :水解稳定性a)含有甘油三酯/中性油的脱氢热交联的胶原基质(“未交联的”)(冷冻干燥温度> 120°C ) ；b)根据本发明制备实施例3的环氧交联胶原基质(5%环氧化物/DM ;含有甘油三酷/中性油；冷冻干燥温度< 100°C ) ；c)相应于根据制备实施例3的组合物的环氧交联胶原基质(5%环氧化物/DM ;含有甘油三酷中性油；冷冻干燥温度>120 0C )。图4 :a)脱氢热交联胶原基质，与b)根据本发明的制备实施例3的胶原基质比较，在18天之后的水解度。图5 :冷冻干燥温度对湿撕裂强度的影响(内部法UV8801)。图6:冷冻干燥温度和环氧化物交联剂浓度对湿撕裂強度的影响(内部法UV8801)。图7 :在冷冻之前的静置时间和含水胶原悬浮液/混合物的静置时间期间的温度对湿撕裂強度的影响(内部法UV8801)。图8 :残余环氧化物活性和再润湿对根据本发明的制备实施例I的胶原基质的残余环氧化物活性降低的影响。图9 :用于测量硬度/弹性模量E的试验装置。
具体实施例方式本发明人发现通过在pH值<4下，将环氧官能交联剂加入到胶原的含水悬浮液中，然后在< 100°c的温度下，将该混合物冷冻和冷冻干燥，可以获得这种特定改善的胶原材料，所述胶原的水悬浮液除了包含纤维性、酸不溶性天然胶原之外，还包含如上定义的天然可溶性(酸溶性)胶原和胶原肽的级分、和/或来自基质蛋白、细胞外基质组分、蛋白源(proteinogenic)活性成分和可溶性蛋白或肽组分的结构形成剂和活性成分。特别地，已经表明，令人惊奇地是，与现有技术已知的交联剂含量相比，该新方法能够使环氧化物交联剂的含量显著降低，而在交联度方面没有损失。特别地，在冷冻干燥后残余环氧化物活性方面，和在使用时可以释放的未交联的可溶性胶原和肽组分的保存方面，以及因此在交联胶原材料的毒性和生物相容性方面，< 4的低pH值以及降低的交联剂含量是有利的。从经济学观点而言，相较于脱氢热交联中常规应用的温度，更低的冷冻干燥温度可为有利的，但已知该更低的冷冻干燥温度特别地对于温和的加工和保护温度敏感组分(例如不稳定的活性成分)是必需的。根据本发明的方法的ー个进一歩的优点是使用所谓的ー锅法将交联剂加入到胶原悬浮液中，然后在最后的冷冻干燥之前优选不超过24小时的短的胶原/交联剂混合物的静置时间(适用期(pot time))的情况下，直接进行冷冻干燥得到交联的最終产物。因此，总的来说，显著更经济的方法是可能的。因此，可以特别地通过提供包含可以在使用时释放的未交联可溶性胶原和肽组分的机械稳定的且降解稳定的、生物相容的环氧交联胶原基质的制备方法实现上述目的，所述方法包括下述步骤a)制备含水胶原悬浮液，、
b)将来自步骤a)的胶原悬浮液的pH值调节至pH < 4，c)任选地加入其它结构形成剂、活性成分和/或辅助物质，d)加入环氧官能交联剂，步骤c)和d)的顺序是可变的，e)冷冻从步骤d)可获得的胶原混合物， f)在冷冻干燥温度< 100°C下，冷冻干燥来自步骤e)的冷冻混合物，g)任选地调节如此可获得的冷冻干燥的交联胶原材料至水分含量为基于冷冻干燥的胶原材料计< 25重量％，和h)任选地将从步骤g)可获得的的材料转化成期望的形式，杀菌和/或加工。
本发明进一歩提供通过所述方法可获得的机械稳定的且降解稳定的、交联的、生物相容的胶原基质，其包含使用时可释放的未交联的、可溶性胶原和肽组分。根据本发明制备交联胶原基质中使用的胶原特别地为牛、猪、马或人来源的或通过遗传工程生产的胶原。特别优选地，其为牛来源的胶原。特别优选的胶原的制备描述在本申请人的DE 4048622A1和DE 10350654A1中。其中描述用于制备胶原海绵的方法包括-使胶原原料接受碱处理，-冲洗得到的胶原材料，-使得到的胶原接受酸处理，-冲洗得到的胶原材料，和-碾磨得到的胶原材料，特别地使用胶体磨，其中每个上述步骤都可以任选地重复几次。由此获得纤维和原纤维形式的所谓天然酸不溶性胶原的含水胶原悬浮液，其还包含可測量量的酸溶性胶原和酸溶性肽组分。这种酸溶性级分的定性检测可以例如利用SDS-PAGE进行，如本文描述的。然后，可以利用根据本发明的方法加工该胶原悬浮液调节pH值至pH < 4，任选地加入进ー步的结构形成剂、美容或药物活性成分和辅助物质，接着加入环氧官能交联剂，在冷冻干燥温度< 100°C下冷冻干燥，得到根据本发明的产物。相对于在根据本发明的方法中使用的主要包含纤维和原纤维形式的酸不溶性胶原的胶原悬浮液，使用现有技术(參见例如US 4，883，864)中常规描述的只有酸溶性胶原材料是不利的，因为比较而言，为了获得合适的交联度，对于只有酸溶性胶原的情形显著较高量的交联剂是必需的。已知与由酸不溶性胶原可获得的材料相比，由纯酸溶性胶原制备的材料在湿态下本身具有不足够的机械强度(湿撕裂强度)和低降解稳定性。这基本上是由于如下事实酸溶性胶原是由个别胶原分子组成的，而酸不溶性胶原基本上是由胶原原纤维组成，该胶原原纤维是由已经自然彼此交联的横向排列胶原分子組成。这些原纤维进而通过自然交联横向结合形成更大的聚集体，胶原纤維。已经天然交联的胶原纤维和化学交联的胶原纤维的降解都由于相对表面积较小和包含于纤维复合物中的个别蛋白质链的可接近性降低而进行得显著更慢。根据本发明的胶原材料基本上是I、III和V型胶原，主要是是I型胶原。根据本发明的方法中使用的胶原悬浮液是例如由DE 3203957A1已知的方法可获得的，其包含预碾磨形式、匀浆化形式和脱纤维形式的预处理和纯化的胶原材料，并且作为代表用于制备根据本发明的交联胶原基质的原料的水分散体存在。所述分散体的干重应当为约I至4重量％，优选I. 5至2. 5重量％。所述水分散体的pH值应当为< 4，否则所述pH值必须调节至pH < 4。pH值的调节优选地采用稀盐酸进行。优选地，所述含水胶原悬浮液的pH值调节为pH 2. 5至3. 5，更优选pH2. 7至3. 3，最特别优选pH 3。由于上述制备，特别是由于碾磨步骤，如此获得的胶原悬浮液通常除了包含纤维状天然酸不溶性胶原之外，还优选地包含胶体碾磨释放出的、根据本发明所期望的酸溶性胶原和肽组分。这种酸溶性组分的含量可以通过所述エ艺控制和调节至期望的量。优选地，酸溶性胶原和肽组分在胶原悬浮液中的含量为基于胶原悬浮液的干质量计至多(up to) 7重量％，其是通过在16，OOOg离心且然后冷冻干燥之后获得的可溶性组分的重量计的量确定的。 此时，向根据本发明的胶原组合物中加入如下所述其它可以存在的结构形成剂或任选的美容或药物活性成分和任选的辅助物质可以通过将其加入到含水胶原悬浮液中进行。通过加入来自基质蛋白、细胞外基质组分、蛋白源活性成分和可溶性蛋白或肽组分等的其它结构形成剂或活性成分，上述可溶性胶原和肽组分在胶原悬浮液中的含量可以自然地升高，特别是由此也有可能获得>7重量％ (干质量)的显著更高含量。如果使用本身只包含少量酸溶性胶原和肽的胶原悬浮液，则此时，可以优选地以期望的量将这些组分混入所述悬浮液中。然后，进行环氧化物交联剂向所述胶原悬浮液中的加入。然而，同样可能在加入任ー种其它可以存在的结构形成剂、活性成分或辅助物质之前，混入环氧化物交联剂。因此，这些步骤在加工顺序中是可变的，且一般可互換。所述环氧官能交联剂选自环氧化物化合物(环氧化物)，其特别地包含双环氧化物，以及聚环氧化合物，比如具有聚合度为I至3的聚甘油聚缩水甘油醚、多元醇聚缩水甘油醚、こニ醇ニ缩水甘油醚、甘油ニ缩水甘油醚、甘油三缩水甘油醚、双甘油四缩水甘油醚、こニ醇缩水甘油醚、丁ニ醇ニ缩水甘油醚，比如特别是1，4_ 丁ニ醇ニ缩水甘油醚、ニ羧酸ニ缩水甘油酯等。所述环氧官能交联剂可以特别地选自根据下述通式的聚こニ醇ニ缩水甘油醚
CHj一"·CU 一 CH.r*0—iCH 画 CK.rO》 雌 CHjrCだ--CH2
OO或选自聚こニ醇、聚丙ニ醇和聚こ烯丙ニ醇的聚缩水甘油醚-官能分子，其中所述ニ缩水甘油醚衍生物由下述通式代表
CH7-CH-CH2-[OCH2CH(CH3)Ijt—[OCH 2CH2]y—[OCH ^H(CH3)J1
O
—O -CH2-CH-CH2 ヽO其中x+z = 0-70 和 y = 0-90。所述双环氧化物组特别地包括符合下述通式的那些
权利要求
1.交联胶原基质的制备方法，包括如下步骤 a)制备含水胶原悬浮液， b)将来自步骤a)的胶原悬浮液的pH值调节至pH< 4, c)任选地加入其它结构形成剂、活性成分和/或辅助物质， d)加入环氧官能交联剂，步骤c)和d)的顺序是可变的， e)冷冻从步骤d)可获得的胶原混合物， f)在冷冻干燥温度<100°C下，冷冻干燥来自步骤e)的冷冻混合物， g)任选地调节如此可获得的冷冻干燥的交联胶原材料至水分含量为基于最终产物至多25重量％，和 h)任选地将从步骤g)可获得的材料转化成期望的形式，杀菌和/或加工。
2.根据权利要求I的方法，其中来自步骤a)的胶原悬浮液包含纤维和原纤维形式的天然酸不溶性胶原。
3.根据权利要求I或2的方法，其中所述胶原悬浮液包含酸溶性胶原和肽组分，和/或其中在步骤c)中，加入来自基质蛋白、细胞外基质组分、蛋白源活性成分和可溶性蛋白或肽组分的结构形成剂或活性成分。
4.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述环氧官能交联剂选自双环氧化物，特别如1，4_ 丁ニ醇ニ缩水甘油醚(BDDGE)。
5.根据权利要求I至4中任ー项的方法，其中所述环氧官能交联剂以基于来自步骤a)的胶原悬浮液的干质量计不超过50重量％的量加入。
6.根据权利要求I至5中任ー项的方法，其中根据步骤e)的冷冻是在由步骤d)制备胶原混合物的24小时之内进行的。
7.通过根据权利要求I至6中任ー项的方法可获得的交联胶原基质。
8.冷冻干燥的环氧交联胶原基质，其包含未交联的酸溶性胶原和/或肽组分和/或结构形成剂或活性成分，所述结构形成剂或活性成分来自基质蛋白、细胞外基质组分、蛋白源活性成分和可溶性蛋白或肽组分，其是使用时可释放的且利用BCA方法可检测的，优选地其总量为根据BCA方法测量的基于冷冻干燥的胶原基质至少O. I %。
9.根据权利要求7或权利要求8的冷冻干燥的环氧交联胶原基质或通过根据权利要求I至6中任ー项的方法可获得的胶原基质，其具有的湿撕裂强度为利用DIN EN ISO 3376测量的> 50cN/mm层厚度，或利用UV8801方法测量的> 200cN/mm层厚度。
10.根据权利要求7至9中任一项的冷冻干燥的环氧交联胶原基质或通过根据权利要求I至6中任ー项的方法可获得的胶原基质，其包含至少ー种其它结构形成剂、至少ー种美容或药物活性成分和/或至少ー种辅助物质。
11.根据权利要求7至10中任一项的冷冻干燥的环氧交联胶原基质或通过根据权利要求I至6中任ー项的方法可获得的胶原基质，其为可以任选地整体或部分提供的层状敷料、片材、垫或面膜的形式，其具有选自纤维、非织造布、网状物、膜、或箔或自粘层的其它层，该其它层以其随胶原材料在边缘终止或完全或部分地在边缘凸出胶原材料外的方式应用于所述层状胶原材料。
12.根据权利要求7至11中任一项的冷冻干燥的环氧交联胶原基质或通过根据权利要求I至6中任ー项的方法可获得的胶原基质，包含至少ー种活性成分，所述活性成分选自用于皮肤处理、治疗皮肤病、伤ロ治疗或止血的皮肤和透皮活性成分，特别是选自如下的那些活性成分包括基质蛋白、可溶性肽组分比如特别是弾性蛋白和/或生长因子、抗菌伤ロ治疗剂比如特别是含银活性成分，特别是硝酸银；和/或至少ー种辅助物质，所述辅助物质选自美容油和脂肪，比如特别是甘油三酯或中性油。
13.根据权利要求7至12中任一项的冷冻干燥的环氧交联胶原基质或通过根据权利要求I至6中任ー项的方法可获得的胶原基质，用作药物试剂，特别地用作治疗急性和/或慢性伤ロ的试剂、用作植入物、用作皮肤或透皮的皮肤治疗剂、用作止血剂和/或用于真空辅助伤ロ治疗疗法。
14.根据权利要求7至12中任一项的冷冻干燥的环氧交联胶原基质或通过根据权利要求I至6中任ー项的方法可获得的胶原基质作为美容试剂、作为美容敷料或面膜或作为用于细胞群的支架的用途。
15.组合制剂，其包含至少ー种根据权利要求7至13中任ー项的冷冻干燥的环氧交联胶原基质或通过根据权利要求I至6中任ー项的方法可获得的胶原基质，以及至少ー种包含ー种或多种活性成分和/或任选地ー种或多种辅助物质的水溶液，其以相关联的空间排列作为组件或配套组件组合。
全文摘要
本发明涉及特征特别地在于包含可溶性胶原和肽组分的事实的降解稳定的、生物可相容的胶原基质、这种胶原基质的制备方法和根据本发明的胶原基质的用途，所述制备方法特别地包括应用环氧官能交联剂的化学交联，所述用途是作为美容试剂或药物试剂，特别地用于局部应用，和在人或动物中作为伤口治疗剂、作为植入物或作为止血剂，和作为生物工程学、基础研究和组织工程领域中细胞群的支架。
文档编号A61L15/32GK102657584SQ20111046327
公开日2012年9月12日 申请日期2011年12月22日 优先权日2010年12月23日
发明者A·卡斯纳, R·马勒萨 申请人:苏维拉克皮肤及健康护理公司