叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途的制作方法

专利名称：叶酸受体1抗体与免疫缀合物以及其用途的制作方法
技术领域：
本发明的领域是广泛地相关于结合至人类叶酸受体I的抗体与免疫缀合物，以及相关于使用所述抗体与免疫缀合物的方法，该方法是用以治疗例如癌症的疾病。
背景技术：
癌症是已开发国家主要死亡原因的，每年仅在美国就有超过一百万人诊断为癌症以及500，000人死亡。整体来说，据估计三个人中超过一人在他们的一生中将发展出某种形式的癌症。有超过200种不同的癌症，其中四种-乳癌、肺癌、直肠癌以及摄护腺癌_占了新病例的超过半数。(Jemal et al. , 2003, Cancer J. Clin. 53:5-26)。叶酸受体I (F0LR1)，还称为叶酸受体-α或叶酸结合蛋白，为在细胞质膜上表现的N端糖化蛋白质。FOLRl具有对叶酸以及数种还原型叶酸衍生物的高度亲合力。FOLRl媒介生理叶酸5-甲基四氢叶酸的运输至细胞内部。FOLRl在大多数的卵巢癌中以及在许多的子宫癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肾脏癌、肺癌以及乳癌中过量表现，然而FOLRl在正常组织的表现被限制在肾脏近端小管的上皮细胞的顶膜、肺脏的泡状肺泡壁细胞、膀胱、睪丸、脉络丛以及甲状腺(Weitman SD, etal. , Cancer Res 52:3396-3401 (1992) ；Antony AC, Annu Rev Nutr 16:501-521 (1996)；Kalli KR, et al. Gynecol Oncol 108:619-626(2008))。F0LR1 的表现型态使其成为针对F0LR1的癌症疗法的适合标的。因为卵巢癌直到晚期前典型地为无症状的，其经常在晚期被确诊，并且当以目前可用的程序，典型地为在手术减积(surgical de-bulking)后以化疗药物治疗时具有不良的预后(von Gruenigen V et al. , Cancer 112:2221-2227 (2008) ；Ayhan A et al. , AmJ Obstet Gynecol 196:81 e81~86 (2007) ；Harry VN et al. , Obstet Gynecol Surv64:548-560(2009))。因此对于卵巢癌更有效的治疗法具有明确的未满足的医疗需求。三种抗F0LR1抗体已被检验为潜在的抗癌药物。鼠类单株抗体Movl8以及Movl9于 1980 年代晚期被分离出(Miotti S et al. , Int J Cancer 39:297-303 (1987))，经确认以 F0LR1 为标的(Coney LR et al. , Cancer Res 51:6125-6132 (1991))，并且于临床前研究中作为伴随细胞毒性核糖体失活蛋白质的缀合物，以测试它们消灭表现抗原的癌症细胞的能力(Conde FP et al. , Eur J Biochem 178:795-802(1989))。将Movl9以对细胞毒性T细胞以及自然杀手细胞为目标的双特异性抗体而测试(Mezzanzanica D et al. , Int J Cancer 41:609-615 (1988) ；Ferrini S etal.,Int JCancer Suppl 4:53-55(1989) ；Ferrini S et al. , Int J Cancer 48:227-233(1991))，以及以Movl9的单链Fv(scFv)与介白素2的融合蛋白在体内测试(Melani C et al. , CancerRes 58:4146-4154(1998))。嵌合的(鼠类变异区/人类恒定区)抗FOLRl抗体Movl8以及Μον19已对它们在体外媒介细胞毒性免疫细胞依赖杀伤表现FOLRl的肿瘤细胞的能力作临床前检验(Coney LR et al. , Cancer Res 54:2448-2455 (1994))，并且在 IgE 依赖免疫疗法临床前模式中测试嵌合的Movl8-1gE (Karagiannis SN et al. , JImmunol179:2832-2843(2007);Gould HJ et al. , Eur J Immunol29:3527-3537(1999))。Mov 18于临床前研究，接着在1990年代早期的临床试验中，以伴随许多放射性核素的缀合物的形式被研究(Zacchetti A et al.，，Nucl Med Biol 36:759-770 (2009))，其以没有任何用于临床的药物被核准作结。鼠类单株抗FOLRl抗体LK26的人源化形式M0RAb003以未经修饰的抗体(Ebel Wet al. , Cancer Tmmun 7:6 (2007))以及以放射性核素 IllIn 的缀合物(Smith-Jones PM etal. ,Nucl Med Biol 35:343-351 (2008))于临床前评估，并且目前正以未经修饰的抗体进行临床试验(D. K. Armstrong et al. J. Clin. Oncol. 26:2008, May 20 suppl;摘要 5500)。发明概述本发明提供结合至人类叶酸受体I的新颖抗体、包含这些抗体的免疫缀合物以及它们的使用方法。本发明进一步提供新颖的多肽，例如结合人类叶酸受体I的抗体、此类抗体的片段以及其它与此类抗体相关的多肽。还提供包含编码多肽的核酸序列的多核苷酸，因为是含有多核苷酸的载体。进一步提供包含本发明的多肽和/或多核苷酸的细胞。还提供包含新颖的叶酸受体I抗体或免疫缀合物的组合物(例如，药物组合物)。此外，还提供制造以及使用新颖的叶酸受体I抗体或免疫缀合物的方法，例如使用新颖的叶酸受体I抗体或免疫缀合物以抑制肿瘤生长和/或治疗癌症的方法。因此，在一方面，本发明提供特异性地结合人类叶酸受体I的人源化抗体或其抗原结合片段，其中抗体包含(a)包含GYFMN (SEQ ID NO:1)的重链⑶Rl ;包含RIHPYD⑶TFYNQXaa1FXaa2Xaa3 (SEQ ID NO: 56)的重链 CDR2 ;以及包含 YDGSRAMDY (SEQ IDN0:3)的重链 CDR3 ;以及(b)包含 KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID N0:7)的轻链 CDRl ;包含RASNLEA (SEQ ID N0:8)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQSREYPYT (SEQ IDN0:9)的轻链 CDR3 ;其中Xaa1选自K、Q、H以及R ;父&&2选自Q、H、N以及R ;并且Xaa3选自G、E、T、S、A以及V。在某个具体实施例中，结合人类叶酸受体I的人源化抗体或其抗原结合片段具有与抗体嵌合的Movl9实质上相同的亲和力。在某个具体实施例中，人源化抗体或其抗原结合片段包含重链 CDR2 序列 RIHPYD⑶TFYNQKFQG (SEQ ID NO:2)。在某个具体实施例中，通过流式细胞仪、Biacore或放射免疫分析测量结合亲和力。在另一具体实施例中，本发明提供特异性地结合人类叶酸受体I的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含(a)包含GYFMN(SEQ IDN0:1)的重链⑶Rl或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；包含RIHPYD⑶TFYNQKFQG(SEQ ID NO: 2)的重链CDR2或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；以及包含YDGSRAMDY (SEQ IDNO:3)的重链⑶R3或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；以和/或(b)包含KASQSVSFAGTSLMH(SEQ ID NO: 7)的轻链⑶Rl或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；包含RASNLEA(SEQ IDN0:8)的轻链⑶R2或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；以及包含QQSREYPYT (SEQ ID N0:9)的轻链CDR3或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体。在某个具体实施例中，本发明提供的特异性地结合人类叶酸受体I的人源化抗体或其抗原结合片段，包含SEQ ID N0:6的重链。在另一具体实施例中，人源化抗体或其抗原结合片段通过在2010年4月7日保藏于ATCC并具有ATCC保藏编号PTA-10772以及PTA-10773或10774的质粒DNA编码。在某个具体实施例中，本发明提供与抗体竞争结合至FOLRl的人源化抗体或其抗原结合片段，其包含(a)包含GYFMN (SEQ ID NO:1)的重链⑶Rl ；包含RIHPYD⑶TFYNQXaa1FXaa2Xaa3 (SEQ ID NO: 56)的重链 CDR2 ;以及包含 YDGSRAMDY (SEQ IDN0:3)的重链 CDR3 ;以及(b)包含 KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID N0:7)的轻链 CDRl ;包含RASNLEA (SEQ ID NO:8)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQSREYPYT (SEQ ID NO:9)的轻链 CDR3 ;其中Xaa1选自K、Q、H以及R ；Xaa2选自Q、H、N以及R ;并且Xaa3选自G、Ε、Τ、S、A以及V。在某个具体实施例中，人源化抗体包含重链CDR2序列RIHPYD⑶TFYNQKFQG(SEQ ID NO: 2)。在某个具体实施例中，本发明提供多肽、人源化抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQ ID N0:4至少约90%相同的重链变异区域，以及与SEQ IDN0:10或SEQ ID NO: 11至少约90%相同的轻链变异区域。在另一具体实施例中，人源化抗体或抗原结合片段包含与SEQID N0:4至少约95%相同的重链变异区域，以及与SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11至少约95%相同的轻链变异区域。在进一步的具体实施例中，人源化抗体包含与SEQ ID N0:4至少约99%相同的重链变异区域，以及与SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11至少约99%相同的轻链变异区域。在某个具体实施例中，人源化抗体包含SEQ ID N0:4的重链变异区域，以及SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的轻链变异区域。在某些具体实施例中，本发明提供与SEQID N0:88-119至少约90%相同的多肽、抗体或抗原结合片段。在某些具体实施例中，本发明提供与SEQ ID N0:88-119至少约95%相同的多肽、抗体或抗原结合片段。在某些具体实施例中，本发明提供与SE Q ID N0:88-119至少约99%相同的多肽、抗体或抗原结合片段。在某个具体实施例中，本发明提供在真核细胞中较chMovl9表现高至少10倍的人源化抗体或其抗原结合片段。在某个具体实施例中，真核细胞为HEK-293T细胞。在某些具体实施例中，本发明提供的特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中抗体包含(a)包含 SSYGMS (SEQ ID N0:30)的重链 CDRl ;包含 TISSGGSYTY (SEQ ID N0:31)的重链CDR2 ;和/或包含DGEGGLYAMDY (SEQ IDNO: 32 )的重链CDR3 ;和/或(b)包含KASDHINNWLA (SEQ ID NO:27)的轻链 CDRl ;包含 GATSLET (SEQ ID NO:28)的轻链 CDR2 ;和/或包含QQYWSTPFT(SEQ ID N0:29)的轻链⑶R3。在另一具体实施例中，本发明提供特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中抗体包含(a)包含TNYWMQ(SEQ IDN0:60)的重链 CDRl ;包含 AIYPGNGDSR(SEQ ID N0:61)的重链 CDR2 ;和 / 或包含 RDGNYAAY(SEQID N0:62)的重链 CDR3 ;和 / 或(b)包含 RASENIYSNLA (SEQ ID NO:57)的轻链 CDRl ；包含 AATNLAD (SEQ ID N0:58)的轻链 CDR2 ;和 / 或包含 QHFWASPYT (SEQ ID NO: 59)的轻链CDR3。在另一具体实施例中，本发明提供特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中抗体包含(a)包含TNYWMY (SEQ ID NO:66)的重链CDRl ;包含AIYPGNSDTT(SEQ ID N0:67)的重链 CDR2 ;和 / 或包含 RHDYGAMDY (SEQ ID N0:68)的重链 CDR3 ;和 / 或(b)包含 RASENIYTNLA (SEQ IDNO:63)的轻链 CDRl ;包含 TASNLAD (SEQ ID N0:64)的轻链CDR2 ;和/或包含QHFWVSPYT(SEQ ID NO: 65)的轻链CDR3。在另一具体实施例中，本发明提供特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中抗体包含(a)包含SSFGMH(SEQ ID N0:72)的重链 CDRl ;包含 HSSGSSTIS (SEQ ID NO:73)的重链 CDR2 ;和 / 或包含EAYGSSMEY (SEQID NO:74)的重链 CDR3 ;和 / 或(b)包含 RASQNINNNLH (SEQ ID N0:69)的轻链 CDRl ;包含 YVSQSVS (SEQ ID NO:70)的轻链 CDR2 ;和 / 或包含 QQSNSWPHYT (SEQ IDNO:71)的轻链CDR3。在另一具体实施例中，本发明提供特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中抗体包含(a)包含TSYTMH (SEQ ID NO:78)的重链⑶Rl ;包含YINPISGYTN (SEQ ID NO:79)的重链 CDR2 ;和 / 或包含 GGAYGRKPMDY (SEQ ID N0:80)的重链 CDR3 ;和/或(b)包含 KASQNVGPNVA (SEQID NO: 75)的轻链 CDRl ;包含 SASYRYS (SEQID NO:76)的轻链 CDR2 ;和 / 或包含 QQYNSYPYT (SEQ ID NO:77)的轻链 CDR3。在某些具体实施例中，本发明中的多肽是全长抗体或抗原结合片段。在某些具体实施例中，抗体或抗原结合片段是Fab、Fab’、F(ab' )2、Fd、单链Fv或scFv、连结二硫化物的Fv、VNAR区域、IgNar、内抗体、IgG_CH2、微抗体(minibody)、F (ab' )3、四链抗体(tetrabody)、三链抗体(triabody)、双链抗体(diabody)、单域抗体、DVD-1g、Fcab> mAb2、(scFv) 2 或 scFv-Fc。·在某些具体实施例中，本发明中的结合至人类叶酸受体I的抗体或多肽具有约1. O至约IOnM的KcL在一具体实施例中，结合至人类叶酸受体I的抗体或多肽具有约1. OnM或更佳的Kd。在某个具体实施例中，通过流式细胞仪、Biacore或放射免疫分析测量结合亲和力。本发明还提供制作本发明中的抗体的方法，包含(a)培养表现所述抗体的细胞；以及(b)自所述培养的细胞分离抗体。在某个具体实施例中，细胞是真核细胞。本发明还提供具有化学式(A)-(L)-(C)的免疫缀合物，其中㈧是本发明中的抗体或抗原结合片段或多肽；(L)是连接元以及(C)是细胞毒性剂，其中所述连接元(L)连结
(A)至(C)。在一具体实施例中，连接元选自可裂解连接元、不可裂解连接元、亲水性连接元以及二羧酸为基底的连接元的群组。在进一步的具体实施例中，连接元选自由N_琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)戊酸酯(SPP)或N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)-2-磺酸基戊酸酯(磺酸基-SPP);N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)丁酸酯(SPDB)或N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)-2-磺酸基丁酸酯(磺酸基-SH)B);N-琥珀酰亚胺4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸酯(SMCC)5N-磺基琥珀酰亚胺4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸酯(sulfoSMCC);N-琥珀酰亚胺-4-(碘乙酰基)-胺基苯甲酸酯(SIAB);以及N-琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)_四甘醇]酯(NHS-PEG4-马来酰亚胺)组成的群组。在某个具体实施例中，连接元是N-琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)-四甘醇]酯(NHS-PEG4-马来酰亚胺)。在一具体实施例中，免疫缀合物包含选自美登素衍生物、美登素衍生物类似物、苯二氮平、类紫杉醇、CC-1065、CC-1065类似物、倍癌霉素、倍癌霉素类似物、加利车霉素、多拉司他汀、多拉司他汀类似物、奥利斯汀、托美霉素衍生物以及细霉素衍生物或该剂的前药所组成的群组的细胞毒性剂。在进一步的具体实施例中，细胞毒性剂是美登素衍生物。在另一具体实施例中，细胞毒性剂是N (2’)-去乙酰-N (2’) - (3-巯基-1-氧代丙基)-美登素或N (2’)-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素。在一具体实施例中，本发明提供免疫缀合物，其包含㈧包含SEQID NO:4的重链变异区域，以及SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的轻链变异区域的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)_四甘醇]酯(NHS-PEG4-马来酰亚胺)；以及(C)N(2’)_去乙酰-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素；其中(L)将㈧连接至(C)。在一具体实施例中，本发明提供免疫缀合物，其包含(A)包含SEQ IDNO: 4的重链变异区域，以及SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的轻链变异区域的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫基)丁酸酯(SPDB);以及(C)N(2’)_去乙酰-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)_美登素；其中(L)将㈧连接至(C)。在一具体实施例中，本发明提供免疫缀合物，其包含(A)包含SEQ IDNO: 4的重链变异区域，以及SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的轻链变异区域的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫基)2-磺基丁酸酯(磺基-STOB);以及(C) N (2’)-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)_美登素；其中(L)将㈧连接至(C)。在一具体实施例中，本发明提供免疫缀合物，其包含㈧包含SEQ IDN0:4的重链变异区域，以及SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的轻链变异区域的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫基)-2-磺基戊酸酯(磺基-SPP );以及(C) N (2’)-去乙酸-N(2’)-(3-疏基-1-氧代丙基)-美登素；其中(L)将(A)连接至(C) ο在一具体实施例中，本发明提供免疫缀合物，其包含㈧包含SEQ IDNO: 4的重链变异区域，以及SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的轻链变异区域的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫基)戊酸酯(SPP);以及(C) N (2’)-去乙酰-N (2’) - (3-巯基-1-氧代丙基)_美登素；其中(L)将㈧连接至(C)。本发明还提供包含本发明中的抗体、抗原结合片段、多肽或免疫缀合物的药物组合物以及药学上可接受的载体。在某个具体实施例中，药物组合物进一步包含第二抗癌剂。本发明还提供包含被标记的本发明中的抗体、抗原结合片段、多肽或免疫缀合物的诊断剂。在一具体实施例中，标记选自放射性标记、荧光团、发色团、显影剂以及金属离子的群组。 本发明还提供包含本发明中的抗体、抗原结合片段、多肽或免疫缀合物的试剂盒。本发明还提供抑制患者肿瘤生长的方法，其包含将治疗有效量的本发明中的抗体、抗原结合片段、多肽、免疫缀合物或药物组合物施用患者。在某个具体实施例中，本发明提供抑制患者肿瘤生长的方法，其包含将治疗有效量的具有化学式(A)-(L)-(C)的免疫缀合物施用患者，其中(A)是特异性结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段；(L)是连接元；以及(C)是选自由美登素衍生物以及美登素衍生物类似物组成的群组的细胞毒素；其中(U将(A)连接至(C)，并且其中该免疫缀合物在KB异体移植模式中减少肿瘤体积至少二倍。在某个具体实施例中，此方法包含施用抗体或其抗原结合片段，其包含(a)包含GYFMNCSEQ ID NO:1)的重链CDRl ;包含RIHPYD⑶TFYNQXaalFXaa2Xaa3(SEQ ID N0:56)的重链 CDR2 ;以及包含 YDGSRAMDY(SEQ ID NO: 3)的重链 CDR3 ;以及(b)包含 KASQSVSFAGTSLMH(SEQ ID N0:7)的轻链 CDRl ;包含 RASNLEA(SEQID NO:8)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQSREYPYT(SEQ ID N0:9)的轻链CDR3 ;其中Xaa1选自K、Q、H以及R ;Xaa2选自Q、H、N以及R ;以及Xaa3选自G、E、T、S、A以及V。在进一步的具体实施例中，抗体含有包含RIHPYD⑶TFYNQKFQG(SEQ ID NO:2)的重链 CDR2。在某个具体实施例中，本发明提供抑制肿瘤生长的方法，其包含施用抗体或其抗原结合片段，其通过在2010年4月7日保藏于ATCC并且具有ATCC保藏编号PTA-10772以及PTA-10773或10774的质粒DNA编码。在另一具体实施例中， 此方法提供施用包含含有重链变异区域SEQ IDN0:4以及轻链变异区域SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11的人源化抗体的免疫缀合物；(L)N-琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)_四甘醇]酯(NHS-PEG4-马来酰亚胺);以及(C)N(2’)_去乙酰-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)_美登素。在另一具体实施例中，此方法包含施用免疫缀合物，其包含(A)包含重链变异区域SEQ ID NO: 4以及轻链变异区域SEQ ID NO: 10或SEQ IDN0:11的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)丁酸酯(SPDB);以及(C)N(2’)_去乙酰-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)_美登素；其中(L)将㈧连接至(C)。在另一具体实施例中，此方法包含施用免疫缀合物，其包含(A)包含重链变异区域SEQ ID N0:4以及轻链变异区域SEQ ID NO: 10或SEQ IDN0:11的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)2-磺酸基丁酸酯(磺酸基-STOB);以及(C)N(2’)_去乙酰-N2-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)_美登素；其中(L)将㈧连接至(C)。在另一具体实施例中，此方法包含施用免疫缀合物，其包含(A)包含重链变异区域SEQ ID N0:4以及轻链变异区域SEQ ID NO: 10或SEQ IDN0:11的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)-2-磺酸基戊酸酯(磺酸基-SPP);以及(C)N(2’)_去乙酸-N(2’)-(3-疏基-1-氧代丙基)-美登素；其中(L)将(A)连接至(C) ο在另一具体实施例中，此方法包含施用免疫缀合物，其包含(A)包含重链变异区域SEQ ID NO: 4以及轻链变异区域SEQ ID NO: 10或SEQ IDN0:11的人源化抗体；(L)N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)戊酸酯(SPP);以及(C) N (2’)-去乙酰-N (2’) - (3-巯基-1-氧代丙基)_美登素；其中(L)将㈧连接至(C)。在另一具体实施例中，此方法包含施用免疫缀合物，其包含在2010年4月7日保藏于ATCC的抗体huFR-1-21并且具有ATCC保藏编号PTA-10775以及PTA-10776。在某个具体实施例中，此huFRl-21抗体包含(a)包含SSYGMS (SEQ ID NO: 30)的重链CDRl ;包含TISSGGSYTY (SEQID NO:31)的重链 CDR2 ;包含 DGEGGLYAMDY (SEQ ID NO:32)的重链 CDR3 ；以及(b)包含 KASDHINNWLA (SEQ ID NO: 27)的轻链 CDRl ;包含 GATSLET (SEQ ID NO: 28)的轻链CDR2 ;包含QQYWSTPFT(SEQID NO: 29)的轻链CDR3。在某些具体实施例中，此方法包含施用含有抗体为huFRl-48抗体的免疫缀合物，其包含(a)包含TNYWMQ (SEQ IDN0:60)的重链 CDRl ;包含 AIYPGNGDSR (SEQ ID NO:61)的重链 CDR2 ;包含 RDGNYAAY (SEQ ID N0:62)的重链 CDR3 ;以及(b)包含 RASENIYSNLA (SEQ ID NO: 57)的轻链 CDRl ;包含 AATNLAD (SEQIDNO:58)的轻链CDR2 ;包含QHFWASPYT (SEQ ID NO:59)的轻链CDR3。在某些具体实施例中，此方法包含施用含有抗体为huFRl-49抗体的免疫缀合物，其包含(a)包含TNYWMY(SEQID NO:66)的重链 CDRl ;包含 AIYPGNSDTT (SEQ ID NO:67)的重链 CDR2 ;包含 RHDYGAMDY(SEQID N0:68)的重链 CDR3 ;以及(b)包含 RASENIYTNLA (SEQ ID NO:63)的轻链 CDRl ;包含 TASNLAD (SEQ ID NO:64)的轻链 CDR2 ;包含 QHFWVSPYT (SEQ ID NO:65)的轻链 CDR3。在某些具体实施例中，此方法包含施用含有抗体为huFRl-57抗体的免疫缀合物，其包含(a)包含 SSFGMH (SEQ ID NO:72)的重链 CDRl ;包含 YISSGSSTIS (SEQ ID N0:73)的重链CDR2 ;包含 EAYGSSMEY (SEQ ID NO: 74)的重链 CDR3 ;以及(b)包含 RASQNINNNLH (SEQ IDN0:69)的轻链 CDRl ;包含 YVSQSVS (SEQID NO:70)的轻链 CDR2 ;包含 QQSNSWPHYT (SEQ IDNO: 71)的轻链⑶R3。在某些具体实施例中，此方法包含施用含有抗体为huFRl-65抗体的免疫缀合物，其包含(a)包含TSYTMH (SEQ ID NO:78)的重链CDRl ;包含HNPISGYTN (SEQID NO:79)的重链 CDR2 ;包含 GGAYGRKPMDY (SEQ ID N0:80)的重链 CDR3 ;以及(b)包含KASQNVGPNVA (SEQ IDNO: 75)的轻链 CDRl ;包含 SASYRYS (SEQ ID NO: 76)的轻链 CDR2 ;包含 QQYNSYPYT (SEQ ID NO:77)的轻链 CDR3。在一具体实施例中，此方法抑制卵巢肿瘤、脑肿瘤、乳腺肿瘤、子宫肿瘤、子宫内膜肿瘤、胰腺肿瘤、肾肿瘤或肺肿瘤生长。在某个具体实施例中，此方法抑制卵巢肿瘤生长。在另一具体实施例中，本发明抑制肺肿瘤生长。在某个具体实施例中，抑制肿瘤生长用以治疗癌症。在进一步的具体实施例中，此方法包含将第二抗癌剂施用受试者。在某个具体实施例中，第二抗癌剂是化疗剂。本发明还提供产生本发明中的抗体、抗原结合片段或多肽的分离细胞。本发明还提供分离的多核苷酸，其包含与选自由SEQ ID NO:5、14、15、37、38、43、44、47、48以及120-127所组成的群组的序列至少90%相同的序列。在某个具体实施例中，分离的多核苷酸与选自由SEQ ID N0:5、14、15、37、38、43、44、47、48以及120-127所组成的群组的序列至少95%相同的序列。在另一具体实施例中，分离的多核苷酸与选自由SEQIDN0:5、14、15、37、38、43、44、47、48以及120-127所组成的群组的序列至少99%相同的序列。本发明还提供包含SEQ ID N0:5、14、15、37、38、43、44、47、48以及120-127的任一多核苷酸的载体。在另一具体实施例中，本发明提供含有包含SEQ ID N0:5、14、15、37、38、43、44、47、48以及120-127的多核苷酸的载体的宿主细胞。附图
简述第I图.鼠类(mu Movl9)以及人源化(huMovl9)的Movl9的表面残基。(A)鼠类以及人源化Μον19的轻链表面残基。提供鼠类以及人源化Μον19的轻链变异区骨架表面残基以及位置编号(Kabat系统)。将与原始鼠类序列相异的人类残基标示底线。*位置74不是表面位置，但为移去版本1. 00中的一致性N端连接醣化位置，将此位置改成苏氨酸(在此位置最普遍的人类残基)，造成版本1. 60。(B)鼠类和人类Μον19重链表面残基。提供鼠类以及人源化Μον19的重链变异区骨架表面残基以及位置编号(Kabat系统)。将与原始鼠类序列相异的人类残基标示底线。第2图.嵌合的Μον19与huMovl9重和轻链变异区域以及muFRl_21与huFRl-21重和轻链变异区域的排列。针对伴随它们的鼠类配对物的Movl9与Frl-21变异区域的表面重塑序列的排列。A)以及C)轻链变异区域。B)以及D)重链变异区域。破折号代表与鼠类序列相同。将⑶R (Kabat定义)标示底线。第3图.嵌合Movl9与huMovl9在HEK细胞中的表现。将嵌合和人类Movl9表现质粒暂时转染至悬浮的ΗΕΚ293-Τ细胞中，在7天后收获，并且将表现的抗体通过定量ELISA测定。将轻链和重链质粒以各自3 :1或6 :1的摩尔比转染。第4图.抗FOLRl抗体的结合特异性性，通过它们结合至FOLRl-表现300-19细胞而检测。通过流动式细胞测量huMovl9结合至300-19-F0LR1细胞。300-19亲代细胞表现F0LR-1。灰色实体阴影代表细胞自发荧光；黑色点状线条代表与FITC结合的抗人类第二抗体培养的细胞，黑色实线代表与huMov-19抗体以及与FITC结合的抗人类第二抗体培养的细胞。第5图.抗FOLRl抗体以及免疫缀合物的结合亲和力以及在体外的细胞毒活性。于SK0V3细胞测量huMovl9以及多种鼠类以及人源化FR-1抗体的结合亲和力。还分析所列抗体的PEG4-Mal-DM4缀合物在体外的细胞毒活性。第6图.免疫缀合物的抗体相关细胞毒性。对Igrovl细胞分析huMOV19、huFRl_21以及Mor003的ADCC活性。将Igrovl以15000细胞/孔培养，标的NK细胞比率1:4。第7 图.在 KB 细胞中 huFRl-21-PEG4-mal-DM4 以及 huMovl9-PEG4-mal_DM4 持续暴露的细胞毒活性。当它们在KB细胞存在下一起培养时，过量的非共轭抗体抑制免疫缀合物活性，意指细胞毒活性是抗原依赖的。第8图.在KB异体移植模式中以huMovl9为标的的缀合物在体内的功效。标的FOLRl 的可裂解缀合物huMovl9-SPDB-DM4(B)与非标的 F0LRlhuC242_SPDB_DM4 (D)的比较，以及非可裂解缀合物huMovl9-PEG4-Mal-DM4(C)与非标的huC242_PEG4Mal_DM4 (E)的比较使用已建立的KB细胞植入SCID小鼠皮下的异体移植模式。通过huMovl9标的FOLRl造成平均肿瘤体积的显著降低。第9图.在KB异体移植模式中huMovl9-PEG4-Mal-DM4相较于鼠类FR-1抗FOLRl抗体在体内的功效。将与PEG4-Mal-DM4非共轭或共轭的FR-1系列抗体，对于它们相较于huMovl9-PEG4-Mal-DM4在KB异体移植模式中降低平均肿瘤体积的能力测试。(A)FR-1-9, (B)FR-1-13, (C)FR-1-22 以及(D)FR_1_23。第10图.在KB异体移植模式中huMovl9-PEG4-Mal_DM4以及huFRl-21-PEG4-Mal-DM4在体内的功效。在接种执行后的第6天，执行huMovl9-PEG4-Mal-DM4 以及 huFRl-21-PEG4-Mal_DM4 的 IOmg / kg 单氨基注射。huMovl9-PEG4-Mal-DM4以及huFRl-21_PEG4-Mal_DM4皆显示平均肿瘤体积的显著降低。“Mean TV”意指平均肿瘤体积。第11图.在KB异体移植模式中HuMovl9-PEG4-mal_DM4显示剂量依赖活性。在整个测试剂量的范围分析免疫缀合物的剂量依赖活性。每周以剂量施用造成抗肿瘤活性的改善。高药物量仅少量地改善IOmg / kg剂量组别的活性，伴随在较低剂量组别中的活性降低。3. 7DAR意指每抗体3. 7药物分子。第12图.与DMl和DM4以各种连接元共轭的huMovl9在体内的功效。将huMovl9以每抗体3. 9药物分子共轭至SMCC-DMl ;以每抗体3. 7药物分子共轭至磺酸基-mal-DM4⑶以及以每抗体8. 23药物分子共轭至磺酸基-mal_DM4 (C)并且相较于huMovl9-PEG4-mal-DM4以各种浓度分析它们降低平均肿瘤体积的能力。第13图.与DMl和DM4以各种连接元共轭的huMovl9在体内的功效。将huMovl9以每抗体4. 3药物分子共轭至SPP-DMl ；以每抗体3. 8药物分子共轭至磺酸基-STOB-DM4，以每抗体3. 8药物分子共轭至SPDB-DM4，以及以每抗体6. 8药物分子共轭至磺酸基-SH)B-DM4并且分析它们降低平均肿瘤体积的能力。以5mg / kg (A)以及2. 5mg / kg⑶的上列缀合物的一者或仅以PBS处理小鼠。第14图.在0VCAR-3异体移植肿瘤模式中huMovl9_磺基-SH)B-DM4在体内的功效。以25、50或100 μ g / kg的huMovl9-磺酸基-SPDB-DM4或仅以PBS处理小鼠。第15图.在IGR0V-1异体移植肿瘤模式中huMovl9_磺酸基-SH)B-DM4在体内的功效。以25、50或100 μ g / kg的huMovl9-磺酸基-SPDB-DM4或仅以PBS处理小鼠。第16图.在0V-90异体移植肿瘤模式中huMovl9_磺酸基-SH)B-DM4在体内的功效。以25、50或100 μ g / kg的huMovl9-磺酸基-SPDB-DM4或仅以PBS处理小鼠。第17图.在KB异体移植模式中，可裂解以及非可裂解连接子对免疫缀合物的功效的影响。第18图.在(A) KB异体移植模式(B) 0VCAR-3异体移植模式中，可裂解连接子对免疫缀合物的功效的影响。第19图.在KB以及异体移植肿瘤模式中huFRl-48、huFRl-49、huFRl-57以及huFRl-65-SMCC-DMl在体外以及在体内的功效。以200 μ g / kg单一剂量处理小鼠。发明详述本发明提供新颖的药剂，其包括但不限于多肽例如结合至人类叶酸受体I(FOLRl)的抗体以及免疫缀合物。还提供相关的多肽以及多核苷酸、包含结合FOLRl的药剂的组合物以及制作结合FOLRl的药剂的方法。进一步提供使用此新颖的结合FOLRl的药剂的方法，例如抑制肿瘤生长和/或治疗癌症的方法。定义为帮助了解本发明，将数个用语与措词定义如下。该 用语“人类叶酸受体I”或“F0LR1”，如同本文中所使用的，除非另外指明，意指任何自然人类FOLRl。该用语“F0LR1”包括“全长”、未处理的FOLRl以及起因于在细胞中处理的任何形式的FOLRl。该用语还包括天然发生的FOLRl的变体，例如，剪接变体、对偶变体以及异构物。本文中所描述的FOLRl多肽可由各种来源分离出，例如从人类组织类型或从另外的来源，或通过重组或合成方法制备。FOLRl序列的例子包括但不限于，NCBI参考编号 Ρ15328、ΝΡ_001092242· UAAX29268. UAAX37119. 1、ΝΡ_057937· I 以及 ΝΡ_057936· I。该用语“抗体表示透过免疫球蛋白分子的变异区内的至少一个抗原辨识位置辨认以及特异性性地结合至标的的免疫球蛋白分子，例如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂肪或上述的结合。如同本文中所使用的，该用语“抗体”包括完整的多株抗体、完整的单株抗体、抗体片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2以及Fv片段)、单链Fv (scFv)突变、多特异性性抗体(例如由至少两个完整抗体生成的双特异性抗体)、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、含有抗体的抗原决定部分的融合蛋白以及包含抗原辨认位置的任何其它经修饰的免疫球蛋白分子，只要抗体表现所希望的生物活性。抗体可以是免疫球蛋白的五个主要类别的任一者IgA, IgD, IgE, IgG 以及 IgM，或其子类别(亚型)(例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl以及IgA2)根据它们的重链恒定区的识别而分别称为a (alpha)、δ (delta)、ε(epsilon)、Y (gamma)以及μ (mu)。不同类别的免疫球蛋白具有不同且已熟知的次单元结构以及三度空间构形。抗体可为裸露的或共轭至其它分子例如毒素、放射性同位素等等。“阻断”抗体或“拮抗剂”抗体为抑制或降低其结合抗原的生物活性者，例如F0LR1。在某个具体实施例中，阻断抗体或拮抗剂抗体实质上或完全地抑制抗原的生物活性。希望地，降低生物活性 10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95% 或甚至 100%。该用语“抗FOLRl抗体”或“结合至FOLRl的抗体”意指能够以足够的亲和力结合FOLRl的抗体，使得抗体在标的FOLRl以作为诊断和/或治疗剂是有效用的。抗FOLRl抗体结合至非相关的、非-FOLRl蛋白质的程度比抗体结合至FOLRl所测到的程度少约10%，例如，通过放射免疫测定法(RIA)。在某些具体实施例中，结合至FOLRl的抗体具有解离常数(Kd)彡 ΙμΜ、彡 ΙΟΟηΜ、彡 ΙΟηΜ、彡 InM 或彡 O.1nM。该用语“抗体片段”意指完整抗体的一部分以及意指完整抗体的抗原决定变异区域。抗体片段的例子包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2以及Fv片段、线性抗体、单链抗体，以及由抗体片段形成的多特异性性抗体。“单株抗体”意指涉及单一抗原决定物或抗原决定基的高度特异性辨识与结合的同源抗体族群。这与典型地包括以不同抗体针对不同抗原决定物的多株抗体相反。该用语“单株抗体”包括完整与全长两者的单株抗体以及抗体片段(例如Fab、Fab’、F (ab’)2、Fv)、单链(scFv)突变物、包含抗体部分的融合蛋白以及任何其它含有抗原辨识位置的经修饰的免疫球蛋白分子。此外，“单株抗体”意指此类以任意数种方式而制造的抗体，其方式包括但不限于通过融合瘤细胞、噬菌体筛选、重组表现以及基因转殖动物。该用语“人源化抗体”意指非人类(例如鼠类)抗体的形式，其为特异性的免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其包含最小的非人类(例如鼠类)序列的片段。典型地，人源化抗体是其中来自互补决定区(CDR)的残基被来自非人类物种(例如小鼠、大鼠、兔、仓鼠)的CDR残基所取代的人类免疫球蛋白，其具有希望的特异性性、亲和力与功能(Joneset al. , 1986, Nature, 321:522-525 ；Riechmann et al.,1988, Nature, 332:323-327 ；Verhoeyenet al. , 1988, Science, 239:1534-1536)。在一些例子中，人类免疫球蛋白的 Fv骨架区域(FR)残基被以相对应的来自非人类物种的抗体中的残基取代，其抗体具有希望的特异性性、亲和力与功能。人源化抗体可被进一步通过在Fv骨架区域和/或在被取代的非人类残基中的任一者的额外残基的取代作用而修饰，以改良并且最佳化抗体的特异性性、亲和力和/或功能。实质来说，人源化抗体将实质地包含其所有至少一个，以及典型地二或三个变异区，其包含全部或实质上全部的对应于非人类免疫球蛋白的CDR区域，而全部或实质上全部的 FR区域为那些人类免疫球蛋白的致序列。人源化抗体还可包含至少一部分的免疫球蛋白恒定区或域(Fe)，典型地为人类免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区或域(Fe)。用以生成人源化抗体的方法描述于美国专利5，225，539或5，639，641。抗体的“变异区”意指抗体轻链的变异区或抗体重链的变异区其单独或结合的任一者。每个重以及轻链的变异区皆由以三个还称为超变异区的互补决定区段(⑶R)所连接的四个骨架区(FR)组成。在每个链的CDR通过FR抓住靠近在一起，并且伴随来自其它链的CDR，促成抗体的抗原结合位置的生成。有至少两个技术用以测定CDR: (I)以跨物种序列变异性为基础的方法(即 Kabat et al. Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest, (5th ed.，1991，National Institutes of Health, Bethesda Md·));以及(2)以抗原-抗体复合物的晶体学研究为基础的方法(Al-lazikani et al(1997)J. Molec.Biol. 273:927-948)。此外，有时本领域使用这两个方法的结合以测定⑶R。Kabat编号系统一般用于意指在变异区域中的残基时(大约轻链的1-107残基以及重链的 1-113 残基)(例如 Kabat et al.，Sequences of Immunological Interest. 5thEd. Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesdaj Md. (1991))。如同在Kabat中氨基酸位置的编号，意指使用作为在Kabat et al.，Sequencesof Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md. (1991)中的抗体编译的重链变异区或轻链变异区的编号系统。使用此编号系统，实际线性氨基酸序列可包含较少或额外的氨基酸对应于减短或插入变异区的FR或CDR。举例来说，重链变异区可包括在H2的残基52之后的单一氨基酸插入(根据Kabat残基52a)以及在重链FR残基82之后的插入的残基(例如根据Kabat残基82a、82b以及82c等)。对于所给的抗体的残基的Kabat编号可通过与“标准”Kabat编号序列排列抗体的同源序列区域而决定。Chothia指出以结构环状的位置取代(Chothiaand Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。当使用 Kabat 编号惯例将 Chothia CDR-Hl环状的结尾编号时，依据环状的长度介于H32和H34间变化(此乃因为Kabat编号方案将插入置于H35A以及H35B ;若35A或35B皆不存在，此环结束于32 ;若只有35A存在，此环结束于33;若35A以及35B两者皆存在，此环结束于34)。AbM超变异区代表在Kabat CDR以及Chothia结构环间的折衷,并且通过OxfordMolecular’ s AbM抗体模型软件所而使用。
权利要求
1.一种特异性地结合人类叶酸受体I的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含:(a)包含GYFMN (SEQ ID NO:1)的重链 CDRl ;包含 RIHPYD⑶TFYNQXaa1FXaa2Xaa3 (SEQID N0:56)的重链 CDR2 ;以及包含 YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3)的重链 CDR3 ;以及(b)包含KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID N0:7)的轻链 CDRl ;包含 RASNLEA (SEQ ID N0:8)的轻链CDR2 ;以及包含QQSREYPYT (SEQID N0:9)的轻链CDR3 ；其中Xaa1选自K、Q、H以及R ；Xaa2选自Q、H、N以及R ;并且Xaa3选自G、E、T、S、A以及V。
2.如权利要求1所述的人源化抗体或其抗原结合片段，其以与抗体嵌合Movl9实质上相同的亲和力结合人类叶酸受体I。
3.如权利要求2所述的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该结合亲和力是通过流式细胞计数法、Biacore或放射性免析分析来测量。
4.如权利要求1-3中任一项所述的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该重链CDR2序列包含 RIHPYD⑶TFYNQKFQG (SEQ ID NO:2)。
5.一种特异性地结合人类叶酸受体I的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含(a)包含GYFMN(SEQ ID NO:1)的重链⑶Rl或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；包含RIHPYD⑶TFYNQKFQG (SEQ ID NO:2)的重链CDR2或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；以及包含YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3)的重链⑶R3或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；和/或(b)包含KASQSVSFAGTSLMH(SEQ ID NO:7)的轻链CDRl或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；包含RASNLEA (SEQ ID N0:8)的轻链⑶R2或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体；以及包含QQSREYPYT (SEQ ID N0:9)的轻链CDR3或其包含1、2、3或4个保守性氨基酸取代的变体。
6.一种特异性地结合人类叶酸受体I的人源化抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ IDNO:6的重链。
7.一种人源化抗体或其抗原结合片段，其由2010年4月7日保藏于ATCC并具有ATCC保藏编号PTA-10772、PTA-10773或10774的质粒DNA编码。
8.一种人源化抗体或其抗原结合片段，其与如权利要求1-7中任一项所述的抗体竞争以特异性地结合至人类叶酸受体I。
9.一种人源化抗体或其抗原结合片段，其包含与SEQ ID NO: 4至少约90%相同的重链变异区，以及与SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11至少约90%相同的轻链变异区。
10.如权利要求9所述的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该重链变异区为与SEQID N0:4至少约95%相同，以及该轻链变异区为与SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11至少约95%相同。
11.如权利要求10所述的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该重链变异区为与SEQID N0:4至少约99%相同，以及该轻链变异区为与SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11至少约99%相同。
12.如权利要求11所述的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该重链变异区为与SEQID N0:4相同，以及该轻链变异区为与SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11相同。
13.如权利要求1-12中任一项所述的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该抗体在真核细胞中以较chMovl9至少10倍高而表现。
14.如权利要求13所述的人源化抗体，其中该真核细胞为HEK-293T细胞。
15.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:4至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 10或SEQ ID NO: 11至少约90%序列一致性的多肽。
16.如权利要求15所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:4至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 10或SEQ ID NO: 11至少约95%序列一致性的多肽。
17.如权利要求16所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:4至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 10或SEQ ID NO: 11至少约99%序列一致性的多肽。
18.如权利要求17所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQID NO:4的多肽；和/或(b)该SEQ ID NO: 10 或 SEQ ID NO: 11 的多肽。
19.如权利要求18所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQID NO: 4的多肽；以及(b)该SEQ ID NO: 10 或 SEQ ID NO: 11 的多肽。
20.一种特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含(a)包含SSYGMS (SEQ ID N0:30)的重链 CDRl ;包含 TISSGGSYTY (SEQ ID N0:31)的重链 CDR2 ;和 / 或包含 DGEGGLYAMDY (SEQ IDNO:32)的重链 CDR3 ;和 / 或(b)包含KASDHINNWLA (SEQ ID NO:27)的轻链 CDRl ;包含 GATSLET (SEQ ID N0:28)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQYWSTPFT (SEQ ID NO: 29)的轻链 CDR3。
21.一种特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含(a)包含TNYWMQ (SEQ ID N0:60)的重链 CDRl ;包含 AIYPGNGDSR (SEQ ID N0:61)的重链CDR2 ;和/或包含RDGNYAAY (SEQ ID NO:62)的重链CDR3 ;和/或(b)包含RASENIYSNLA (SEQ ID NO:57)的轻链 CDRl ;包含 AATNLAD (SEQ ID N0:58)的轻链 CDR2 ;以及包含 QHFWASPYT (SEQID NO: 59)的轻链 CDR3。
22.—种特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含(a)包含TNYWMY (SEQ ID NO:66)的重链 CDRl ;包含 AIYPGNSDTT (SEQ ID NO:67)的重链CDR2 ;和/或包含RHDYGAMDY (SEQ ID NO:68)的重链CDR3 ;和/或(b)包含RASENIYTNLA (SEQ ID NO:63)的轻链 CDRl ;包含 TASNLAD (SEQ ID N0:64)的轻链 CDR2 ;以及包含 QHFWVSPYT (SEQID NO: 65)的轻链 CDR3。
23.一种特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含(a)包含SSFGMH (SEQ ID N0:72)的重链 CDRl ;包含 YISSGSSTIS (SEQ ID N0:73)的重链CDR2 ;和/或包含EAYGSSMEY (SEQ ID NO:74)的重链CDR3 ;和/或(b)包含RASQNINNNLH (SEQ ID NO:69)的轻链 CDRl ;包含 YVSQSVS (SEQ ID N0:70)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQSNSWPHYT (SEQID NO: 71)的轻链 CDR3。
24.一种特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含(a)包含TSYTMH (SEQ ID N0:78)的重链 CDRl ;包含 HNPISGYTN (SEQ ID N0:79)的重链 CDR2 ;和 / 或包含 GGAYGRKPMDY (SEQ IDNO:80)的重链 CDR3 ;和 / 或(b)包含KASQNVGPNVA (SEQ ID NO:75)的轻链 CDRl ;包含 SASYRYS (SEQ ID NO:76)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQYNSYPYT (SEQID NO: 77)的轻链 CDR3。
25.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:97至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID N0:96至少约90%序列一致性的多肽。
26.如权利要求25所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:97至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID N0:96至少约95%序列一致性的多肽。
27.如权利要求26所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:97至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID N0:96至少约99%序列一致性的多肽。
28.如权利要求27所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQID NO:97的多肽；和/或(b)该SEQ ID NO:96 的多肽。
29.如权利要求28所述的多肽，其中该多肽包含该SEQID NO:97的多肽以及该SEQ IDNO:96的多肽。
30.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:99至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID N0:98至少约90%序列一致性的多肽。
31.如权利要求30所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:99至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID N0:98至少约95%序列一致性的多肽。
32.如权利要求31所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO:99至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID N0:98至少约99%序列一致性的多肽。
33.如权利要求32所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQID NO:99的多肽；和/或(b)该SEQ ID NO:98 的多肽。
34.如权利要求33所述的多肽，其中该多肽包含该SEQID NO:99的多肽以及该SEQ IDNO:98的多肽。
35.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 101至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 100至少约90%序列一致性的多肽。
36.如权利要求35所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 101至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 100至少约95%序列一致性的多肽。
37.如权利要求36所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 101至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 100至少约99%序列一致性的多肽。
38.如权利要求37所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQID NO: 101的多肽；和/或(b)该 SEQ ID NO: 100 的多肽。
39.如权利要求38所述的多肽，其中该多肽包含该SEQID NO: 101的多肽以及该SEQID NO: 100的多肽。
40.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 103至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 102至少约90%序列一致性的多肽。
41.如权利要求40所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 103至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 102至少约95%序列一致性的多肽。
42.如权利要求41所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 103至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 102至少约99%序列一致性的多肽。
43.如权利要求42所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQIDNO: 103的多肽；和/或(b)该 SEQ ID NO: 102 的多肽。
44.如权利要求43所述的多肽，其中该多肽包含该SEQID NO: 103的多肽以及该SEQID NO: 102的多肽。
45.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 113至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 112至少约90%序列一致性的多肽。
46.如权利要求45所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 113至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 112至少约95%序列一致性的多肽。
47.如权利要求46所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 113至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 112至少约99%序列一致性的多肽。
48.如权利要求47所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQIDNO: 113的多肽；和/或(b)该 SEQ ID NO: 112 的多肽。
49.如权利要求48所述的多肽，其中该多肽包含该SEQID NO: 113的多肽以及该SEQID NO: 112的多肽。
50.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 115至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 114至少约90%序列一致性的多肽。
51.如权利要求50所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 115至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 114至少约95%序列一致性的多肽。
52.如权利要求51所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 115至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 114至少约99%序列一致性的多肽。
53.如权利要求52所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQIDNO: 115的多肽；和/或(b)该 SEQ ID NO: 114 的多肽。
54.如权利要求53所述的多肽，其中该多肽包含该SEQID NO: 115的多肽以及该SEQID NO: 114的多肽。
55.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 117至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 116至少约90%序列一致性的多肽。
56.如权利要求55所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 117至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 116至少约95%序列一致性的多肽。
57.如权利要求56所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 117至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 116至少约99%序列一致性的多肽。
58.如权利要求57所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQIDNO: 117的多肽；和/或(b)该 SEQ ID NO: 116 的多肽。
59.如权利要求58所述的多肽，其中该多肽包含该SEQID NO: 117的多肽以及该SEQID NO: 116的多肽。
60.一种特异性地结合人类叶酸受体I的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 119至少约90%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 118至少约90%序列一致性的多肽。
61.如权利要求60所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 119至少约95%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 118至少约95%序列一致性的多肽。
62.如权利要求61所述的多肽，其中该多肽包含(a)具有与SEQID NO: 119至少约99%序列一致性的多肽；和/或(b)具有与SEQID NO: 118至少约99%序列一致性的多肽。
63.如权利要求62所述的多肽，其中该多肽包含(a)该SEQIDNO: 119的多肽；和/或(b)该 SEQ ID NO: 118 的多肽。
64.如权利要求63所述的多肽，其中该多肽包含该SEQID NO: 119的多肽以及该SEQID NO: 118的多肽。
65.如权利要求25-65中任一项所述的多肽,其为抗体。
66.如权利要求1-24中任一项所述的抗体，其为全长抗体。
67.如权利要求1-24中任一项所述的抗体，其为抗原结合片段。
68.如权利要求67所述的抗体，其中该抗体或抗原结合片段包含Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、单链Fv或scFv、双硫化物连接的Fv、V NAR区域、IgNar、内抗体、IgG_CH2、微抗体、F (ab’) 3、四链体、三链体、双链体、单域抗体、DVD-1g、Fcab> mAb2、(scFv) 2 或 scFv-Fc。
69.如权利要求1-68中任一项所述的抗体或多肽，其以约1.O至约IOnM的Kd与人类叶酸受体I结合。
70.如权利要求1-69中任一项所述的抗体或多肽，其以约1.OnM或较佳的Kd与人类叶酸受体I结合。
71.如权利要求69或70所述的抗体，其中该结合亲和力是通过流式细胞计数法、Biacore或放射性免疫分析来测量。
72.—种制造如权利要求1-24中任一项所述的抗体的方法,其包含(a)培养表现该抗体的细胞；以及(b)从该培养的细胞中分离该抗体。
73.如权利要求72所述的方法，其中该细胞为真核细胞。
74.一种具有该结构式(A)-(L)-(C)的免疫缀合物，其中(A)为如权利要求1-71中任一项所述的抗体或抗原结合片段或多肽；(L)为连接子；以及(C)为细胞毒性剂。其中该连接子(L)连接㈧至(C)。
75.如权利要求74所述的免疫缀合物，其中该连接子选自可裂解连接子、不可裂解连接子、亲水性连接子以及二羧酸为基底的连接子所组成的群组。
76.如权利要求75所述的免疫缀合物，其中该连接子选自N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)戊酸酯(SPP)或N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)-2-磺酸基戊酸酯(磺酸基-SPP);N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)丁酸酯(STOB)或N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)-2_磺酸基丁酸酯(磺酸基-SH)B);N-琥珀酰亚胺4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸酯(SMCC) ;N-磺酸基琥珀酰亚胺4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸酯(磺酸基SMCC)；N-琥珀酰亚胺-4-(碘乙酰基)-胺基苯甲酸酯(SIAB)；以及N-琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)_四甘醇]酯(NHS-PEG4-马来亚酰胺)所组成的群组。
77.如权利要求75所述的免疫缀合物，其中该连接子为N-琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)_四甘醇]酯(NHS-PEG4-马来亚酰胺)。
78.如权利要求75所述的免疫缀合物，其中该连接子为N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)丁酸酯(SPDB )或N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)-2-磺酸基丁酸酯(磺酸基-SPDB )。
79.如权利要求74-78中任一项所述的免疫缀合物，其中该细胞毒性剂选自美登素衍生物、美登素衍生物类似物、苯并二氮呼、类紫杉醇、CC-1065、CC-1065类似物、倍癌霉素、倍癌霉素类似物、加利车霉素、多拉司他汀、多拉司他汀类似物、奥利斯汀、托美霉素衍生物以及细霉素衍生物所组成的群组或该剂的前药。
80.如权利要求79所述的免疫缀合物，其中该细胞毒性剂为美登素。
81.如权利要求80所述的免疫缀合物，其中该细胞毒性剂为N(2’)-去乙酰-N (2’) - (3-巯基-1-氧代丙基)-美登素或N (2’)-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)_美登素。
82.一种免疫缀合物，包含㈧人源化抗体，其包含SEQ ID N0:97、99、101或103的重链变异区以及SEQ IDNO:96、98、100或102的轻链变异区；(L)N-琥珀酰亚胺4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸酯(SMCC);以及(C) N (2，)-去乙酸-N (2，)-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
83.一种免疫缀合物，包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L) N-琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)-四甘醇]酯(NHS-PEG4-马来亚酰胺)；以及(C) N (2，)-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)_美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
84.一种免疫缀合物，包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID N0:4的重链变异区，以及SEQ IDN0:10或SEQ IDNO: 11的轻链变异区；(L)N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)丁酸酯(STOB);以及(C) N (2’)-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
85.一种免疫缀合物，包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L) N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)-2-磺酸基丁酸酯(磺酸基-SPDB)以及(C) N (2，)-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
86.一种免疫缀合物，包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L) N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)-2-磺酸基戊酸酯(磺酸基-SPP)；以及(C) N (2，)-去乙酸-N (2，)-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
87.一种免疫缀合物，包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L) N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)戊酸酯(SPP);以及(C) N (2，)-去乙酸-N (2，)-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
88.如权利要求74-87中任一项所述的免疫缀合物，其进一步包含第二个(C)。
89.如权利要求88所述的免疫缀合物，其进一步包含第三个(C)。
90.如权利要求89所述的免疫缀合物，其进一步包含第四个(C)。
91.如权利要求74-90中任一项所述的免疫缀合物，其包含2-6个(C)。
92.如权利要求74-90中任一项所述的免疫缀合物，其包含3-4个(C)。
93.一种药物组合物，其包含如权利要求1-71以及74-92中任一项所述的抗体、抗原结合片段、多肽或免疫缀合物以及药学上可接受的载体。
94.一种药物组合物，其包含如权利要求74-92中任一项所述的免疫缀合物，其中该免疫缀合物具有每(A)平均约3至约4个(C)。
95.如权利要求47所述的药物组合物，其中该免疫缀合物具有每(A)平均约3.5±0. 5个(C)。
96.如权利要求93-95中任一项所述的药物组合物，其进一步包含第二抗癌剂。
97.一种诊断试剂，其包含被标记的如权利要求1-71以及74-92中任一项所述的抗体、抗原结合片段、多肽或免疫缀合物。
98.如权利要求97所述的诊断试剂，其中该标记选自放射性标记、荧光团、发色团、造影剂以及金属离子所组成的群组。
99.一种试剂盒，其包含如权利要求1-71以及74-92中任一项所述的抗体、抗原结合片段、多肽或免疫缀合物。
100.一种抑制在受试者中肿瘤生长的方法，其包括施用该受试者治疗有效量的如权利要求1-71以及71-95中任一项所述的该抗体、抗原结合片段、多肽、免疫缀合物或药物组合物。
101.一种抑制在受试者中肿瘤生长的方法，其包括施用治疗有效量的具有结构式(A)-(L)-(C)的免疫缀合物，其中(A)为特异性地结合人类叶酸受体I的抗体或其抗原结合片段；(L)为连接子，以及(C)为选自美登素衍生物以及美登素衍生物类似物所组成的群组的细胞毒素；其中(L)连接(A)至(C)以及其中在KB异体移植模式中该免疫缀合物降低平均肿瘤体积至少2倍。
102.如权利要求101所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段包含(a)包含GYFMN (SEQ ID NO:1)的重链 CDRl ;包含 RIHPYD⑶TFYNQXaa1FXaa2Xaa3 (SEQID NO: 56)的重链 CDR2 ;以及包含 YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3)的重链 CDR3 ;以及(b)包含KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID N0:7)的轻链 CDRl ;包含 RASNLEA (SEQ ID N0:8)的轻链CDR2 ;以及包含QQSREYPYT (SEQID N0:9)的轻链CDR3 ；其中Xaa1选自K、Q、H以及R ；Xaa2选自Q、H、N以及R ;并且Xaa3选自G、E、T、S、A以及V。
103.如权利要求102所述的方法，其中该重链CDR2包含RIHPYD⑶TFYNQKFQG(SEQ IDN0:2)。
104.如权利要求101所述的方法，其中该抗体或其抗原结合片段由2010年4月7日保藏于ATCC并具有ATCC保藏编号PTA-10772、PTA-10773或10774的质粒DNA编码。
105.如权利要求101所述的方法，其中该免疫缀合物包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L) N-琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺基丙酰胺基)-四甘醇]酯(NHS-PEG4-马来亚酰胺)；以及(C) N (2’)-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素。
106.如权利要求101所述的方法，其中该免疫缀合物包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L)N-琥珀酰亚胺4-(2-吡啶二硫代)丁酸酯(STOB);以及(C) N (2，)-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
107.如权利要求101所述的方法，其中该免疫缀合物包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L) N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)-2-磺酸基丁酸酯(磺酸基-STOB)；以及(C) N (2')-去乙酰-N2- (4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
108.如权利要求101所述的方法，其中该免疫缀合物包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L) N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)-2-磺酸基戊酸酯(磺酸基-SPP)；以及(C)N (2，)-去乙酸-N (2，)-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
109.如权利要求101所述的方法，其中该免疫缀合物包含(A)人源化抗体，其包含SEQ ID NO: 4的重链变异区以及SEQ IDN0:10或SEQ ID N0:11的轻链变异区；(L) N-琥珀酰亚胺4- (2-吡啶二硫代)戊酸酯(SPP);以及(C)N (2，)-去乙酸-N (2，)-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素；其中(L)连接(A)至(C)。
110.如权利要求101所述的方法，其中该抗体为2010年4月7日保藏于ATCC并具有ATCC 保藏编号 PTA-10775 以及 PTA-10776 的 huFR_l_21 抗体。
111.如权利要求101所述的方法，其中该抗体为huFRl-21抗体，其中该抗体包含(a)包含SSYGMS (SEQ ID N0:30)的重链 CDRl ;包含 TISSGGSYTY (SEQ ID N0:31)的重链CDR2 ；以及包含DGEGGLYAMDY (SEQ IDNO: 32)的重链CDR3 ；以及(b)包含KASDHINNWLA (SEQ ID NO:27)的轻链 CDRl ;包含 GATSLET (SEQ ID N0:28)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQYWSTPFT (SEQID NO: 29)的轻链 CDR3。
112.如权利要求101所述的方法，其中该抗体为huFRl-48抗体，其中该抗体包含(a)包含TNYWMQ (SEQ ID NO: 60)的重链 CDRl ;包含 AIYPGNGDSR (SEQ ID N0:61)的重链CDR2 ；以及包含RDGNYAAY (SEQID NO: 62)的重链CDR3 ；以及(b)包含RASENIYSNLA (SEQ ID NO:57)的轻链 CDRl ;包含 AATNLAD (SEQ ID N0:58)的轻链 CDR2 ;以及包含 QHFWASPYT (SEQID NO: 59)的轻链 CDR3。
113.如权利要求101所述的方法，其中该抗体为huFRl-49抗体，其中该抗体包含(a)包含 TNYWMY (SEQ ID NO:66)的重链 CDRl ;包含 AIYPGNSDTT (SEQ ID NO:67)的重链CDR2 ;以及包含RHDYGAMDY (SEQ ID NO:68)的重链CDR3 ;以及(b)包含 RASENIYTNLA (SEQ ID NO:63)的轻链 CDRl ;包含 TASNLAD (SEQ ID N0:64)的轻链 CDR2 ;以及包含 QHFWVSPYT (SEQID NO: 65)的轻链 CDR3。
114.如权利要求101所述的方法，其中该抗体为huFRl-57抗体，其中该抗体包含(a)包含SSFGMH (SEQ ID N0:72)的重链 CDRl ;包含 YISSGSSTIS (SEQ ID N0:73)的重链CDR2 ;以及包含EAYGSSMEY (SEQ ID NO: 74)的重链CDR3 ;以及(b)包含RASQNINNNLH (SEQ ID NO:69)的轻链 CDRl ;包含 YVSQSVS (SEQ ID N0:70)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQSNSWPHYT (SEQID NO: 71)的轻链 CDR3。
115.如权利要求101所述的方法，其中该抗体为huFRl-65抗体，其中该抗体包含(a)包含TSYTMH (SEQ ID N0:78)的重链 CDRl ;包含 HNPISGYTN (SEQ ID N0:79)的重链CDR2 ；以及包含GGAYGRKPMDY (SEQ IDNO:80)的重链CDR3 ；以及(b)包含KASQNVGPNVA (SEQ ID NO:75)的轻链 CDRl ;包含 SASYRYS (SEQ ID NO:76)的轻链 CDR2 ;以及包含 QQYNSYPYT (SEQID NO: 77)的轻链 CDR3。
116.如权利要求100-115中任一项所述的方法，其中该肿瘤为选自卵巢肿瘤、脑肿瘤、乳房肿瘤、子宫肿瘤、子宫内膜肿瘤、胰腺肿瘤、肾肿瘤以及肺肿瘤所组成的群组的肿瘤。
117.如权利要求116所述的方法，其中该肿瘤为卵巢肿瘤。
118.如权利要求116所述的方法，其中该肿瘤为肺肿瘤。
119.如权利要求100-118中任一项所述的方法，其中抑制肿瘤生长以治疗癌症。
120.如权利要求119所述的方法，其进一步包含将第二抗癌剂施用该受试者。
121.如权利要求120所述的方法，其中该第二抗癌剂为化疗剂。
122.—种产生如权利要求1-71中任一项所述的抗体、抗原结合片段或多肽的经分离的细胞。
123.一种经分离的多核苷酸，其包含与选自SEQ ID N0:5、14、15、37、38、43、44、47、48以及120-127所组成的群组的序列至少90%相同的序列。
124.如权利要求123所述的经分离的多核苷酸，其中该序列为与选自SEQID N0:5、14、15、37、38、43、44、47、48以及120-127所组成的群组的序列至少95%相同。
125.如权利要求124所述的经分离的多核苷酸，其中该序列为与选自SEQID N0:5、14、15、37、38、43、44、47、48以及120-127所组成的群组的序列至少99%相同。
126.—种包含如权利要求123-125中任一项所述的多核苷酸的载体。
127.—种包含如权利要求126所述的载体的宿主细胞。
全文摘要
提供新颖的抗癌剂，其包括但不限于结合至人类叶酸受体1的抗体与免疫缀合物。进一步提供使用该药剂、抗体或免疫缀合物的方法，例如抑制肿瘤生长的方法。
文档编号A61K39/395GK103037900SQ201180019687
公开日2013年4月10日 申请日期2011年2月24日 优先权日2010年2月24日
发明者奥尔加·阿布, 丹尼尔·塔瓦雷斯, 芮玲云, 吉利恩·佩恩, 维克托·S·戈德马克 申请人:伊缪诺金公司