衍生自髓样细胞触发受体-1(trem-1)trem-样转录物1(tlt-1)的抑制肽及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及包含选自氨基酸序列SEQ ID NO :2的至少6个连续氨基酸的肽以及功 能保守变体。本发明还涉及用于治疗心血管病的包含选自氨基酸序列SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2的至少6个连续氨基酸的肽和功能保守变体。
【背景技术】
[0002] 心血管病是许多疾病的标志，是全世界死亡的主要原因。
[0003]心肌梗死或脑梗死是由有害和损伤的、持久或者短暂的心肌缺血引起的复杂的临 床表现的实例。这通常由冠状动脉/脑动脉闭塞引起，导致氧供求失衡。
[0004] 组织损伤取决于缺血持续时间。对于短至5分钟的缺血，缺血组织在再灌注后 最终会恢复，而没有梗死症状或者致命后果。然而，显著持续时间的缺血导致梗死和炎 症反应。的确，梗死与炎症反应有关，而炎症反应是愈合和瘢痕形成的先决条件[Entman M. L.等，1994和Mehta J. L.等，1999]。当缺血组织被再灌注时，该反应在强度和持续时间 方面被放大。
[0005]该反应是多相的：最初的缺血诱导坏死、自由基氧簇形成、补体活化、和通过 TNF-a释放启动的细胞因子级联。梗死区的再灌注期与负责募集白细胞于缺血部位的增强 的和加速的炎症反应有关。招募的白细胞还参与炎症介质的原位和全身释放，最终导致超 活化的炎症状态，造成梗死的病理生理结果。
[0006] 所有的炎症介质具有有争议的效应。的确，梗死病理生理学在它们的有益效果与 有害效果之间达到平衡。例如，TNF-a在心肌缺血过程中表现出细胞保护作用以及有害作 用[Harjot K Saini.等，2005]，这要取决于其表达和释放的时间、持续时间和水平。这可 以解释基于阻断此类炎症介质的治疗的复杂性。
[0007] 炎症介质（细胞因子、趋化因子、ROS等）的释放和大量白细胞募集在从因动脉闭 塞触发的早期损伤事件至构成缺血后组织恢复基础的后期再生过程的缺血级联的所有阶 段过程中起着重要的作用。靶向该炎症反应的诸多治疗策略未能证明具有任何功效。现在 似乎很明显，值得去对放大环路施加作用，而不是对个别的缺血诱导炎症介质施加作用。
[0008] 动脉粥样硬化通过动脉的缓慢进行性损伤形成和管腔狭窄引起脑血管病和冠状 动脉病。当斑块破裂和血栓形成时，这些最常见形式的心血管病表现为急性冠状动脉综合 征（ACS)、心肌梗死或者中风。对人和动物的研宄已经确定，动脉粥样硬化由动脉壁内的慢 性炎症过程驱动，所述的慢性炎症主要响应于内源改变的结构、特别是刺激先天性和适应 性免疫反应两者的氧化脂蛋白而被启动。先天性反应由血管细胞和单核细胞/巨噬细胞两 者的活化引起，随后，针对被抗原呈递细胞呈递至效应器T淋巴细胞的大量潜在抗原产生 获得性免疫反应[Ait-Oufella H等，2011]。遗传修饰的小鼠模型教导我们，循环的单核细 胞被趋化因子募集进入到血管壁内，然后变成巨噬细胞和荷脂泡沫细胞。内膜巨噬细胞促 进通过细胞因子释放导致的斑块形成、炎症放大和通过产生蛋白酶和凋亡积累而导致的斑 块去稳定化[Libby P. 2002]。
[0009] 单核细胞/巨噬细胞由与PRR(病原体识别受体的简称）相互作用的称作PAMP(病 原体相关分子模式的简称）的多种介质刺激。数种PRR是导致动脉粥样硬化的生理病理的 原因。例如，Toll样受体在人和动物动脉粥样硬化病变中表达。对TLR抑制降低了小鼠内的 动脉粥样硬化的形成，表明革G向此种通路可以对抗动脉粥样硬化[Bjorkbacka H等，2004]。
[0010] 最近，已经描述了一个新的在髓样细胞上表达的受体家族：髓样细胞触发受体 (Triggering Receptors Expressed on Myeloid cells, TREM) 〇 在该家族当中，TREM-1 表 达于单核细胞/巨噬细胞和中性粒细胞上。TREM-I活化导致细胞因子和趋化因子的产生 (TNF- a、IL-6、IL-8、MCP-1、MCP-3、MIP-I a ...)，同时伴随着快速的中性粒细胞脱粒和氧 化爆发（oxidative burst) [Radsak MP 等，2004 和 Hara H，等，2009] 〇
[0011] TREM-I的功能是通过与TLR协同触发旺盛的免疫反应而调整/放大炎症，而不是 活化/启动炎症。TREM-I的病理生理作用首先在感染疾病中鉴定。已知TREM-I在急性（肠 系膜缺血再灌注、出血性休克、胰腺炎等）和慢性（炎症性肠病、风湿性疾病等）两者的无 菌炎症中起着重要的作用。
[0012] TLT-UTREM-样转录物-1)是TREM家族的一个成员但是仅存在于巨核细胞和 血小板内。首先鉴定出TLT-I通过连接血纤蛋白原和稳定血小板聚集物在血小板聚集 过程中起作用。但是来自本发明人实验室的对TLT-1、可溶性TLT-I和sTLT-1衍生多肽 的新发现表明，TLT-I通过特异性地抑制TREM-I而在炎症中起作用[Derive M等，2012， W02010/124685]。
[0013]Washington等描述了 TLT-I在炎症中通过促进血管损伤部位的血小板聚集起保 护性作用（Washington 等 J Clin Invest. 2009)。
[0014] 由于已知血小板聚集与心血管病过程中的最坏结果（例如心肌梗死和动脉粥样 硬化）有关，因此令人惊奇地发现TLT-I-衍生肽对心血管病具有治疗作用。
[0015] 发明人在此描述了 TREM-I :1)由来自主动脉、肠系膜动脉的内皮细胞和微血管细 胞表达，2)由心肌组织表达，并且其表达在心肌缺血（持久心肌缺血和短暂心肌缺血）后的 梗死区上调，3)由招募到动脉粥样化斑内的巨噬细胞表达。
[0016] 他们还证明，TREM-I-衍生肽和TLT-I-衍生肽两者均能够特异性地抑制TREM-I， 和降低心肌梗死和动脉粥样硬化中的TREM-I相关炎症反应。
[0017] 结果，在两种不同模式的心肌缺血（持久缺血和短暂缺血）的急性期中施用这些 肽有助于调节原位炎症反应和随后的白细胞运输，因此限制了缺血后心脏重构和更后阶段 的疾病进展。的确，在持久缺血以及短暂缺血（缺血-再灌注）事件后6周心脏功能极大 改善。这导致存活增加。
[0018] 他们最终证明了 TREM-I衍生肽和TLT-I-衍生肽通过特异性地抑制TREM-I在降 低动脉粥样化斑块形成的程度中的作用。
[0019] 因此，本发明涉及包含选自氨基酸序列SEQ ID NO :2的至少6个连续氨基酸的肽 和功能保守变体。
[0020] 此外，本发明涉及用于治疗心血管病的包含选自氨基酸序列SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2的至少6个连续氨基酸的肽和功能保守变体，或者根据本发明的分离的核酸、表达 载体、宿主细胞。